atividade e ultra mudanças antioxidantes em linhas celulares de cancro gástrico induzidas pela planta popular comestível Thai Northeastern extratos

atividade antioxidante e alterações ultra-estruturais em linhas celulares de cancro gástrico induzidas pela planta popular comestível Thai Northeastern extrai da arte abstracta
Fundo
produtos fitoquímicos tem um papel fundamental no processo de descoberta de drogas. Esta possibilidade promissora, no entanto, implica a necessidade de confirmar a sua verificação científica antes do uso. Assim, este estudo tem como objetivo avaliar (1) a atividade antioxidante, (2) o potencial de citotoxicidade, e (3) o efeito sobre a alteração ultra-estrutural em linhas celulares de cancro gástrico através da exposição a frações de três plantas comestíveis tailandeses Nordeste locais.
Métodos
plantas, Syzygium gratum, Justicia gangetica Comprar e Limnocharis flava
foram extraídas com acetato de etilo, e cada extrato bruto analisados ​​pelo seu conteúdo de compostos fenólicos totais pelo método de Folin-Ciocalteu. Sua atividade antioxidante foi avaliada usando o sistema de ABTS. Os extractos foram, em seguida, ensaiados quanto a citotoxicidade em duas linhas celulares de cancro gástrico Kato-III e NUGC-4, e em comparação com os fibroblastos HS27 como um controlo utilizando o ensaio MTT. A viabilidade celular (%), IC 50 valores, bem como as alterações ultra-estruturais foram avaliadas após tratamento com uma análise de variância (ANOVA).

Resultados Os valores totais fenólicos dos extractos de acetato de etilo foram bem correlacionada com a capacidade antioxidante, com o produto extraído de S. gratum
exibindo o mais alto nível de atividade antioxidante (a 10 vezes maior de resposta) sobre J. gangetica Comprar e L. flava
respectivamente. Exposição de S. gratum Comprar e J. gangetica
extrai às linhas de células normais (HS27) resultou em efeitos de citotoxicidade marginais. No entanto, através de um ensaio de S. gratum
dose-dependente e J. gangetica
extratos produzidos efeitos cytotoxicological em pouco mais de 75 por cento das linhas celulares NUGC-4 Kato-III e. Além disso, a característica apoptótica foi mostrado sob TEM em ambas as linhas celulares de cancro com estes dois extratos, enquanto as características de autofagia foi encontrado em linhas celulares após pós exposição aos extractos de L. flava
.
Conclusões
Destes três plantas, S. gratum
tiveram os maiores teores de compostos fenólicos e capacidade antioxidante. Todos eles revelaram conter composto (s) com a citotoxicidade in vitro
em células cancerosas mas não em linhas celulares normais como resolvido em cultura de tecidos e análise ultra-estrutural. Este é o primeiro estudo a demonstrar o efeito sobre a alteração celular como apoptose de um extrato acetato de etila de S. gratum Comprar e J. gangetica.
Mais estudos estão agora concentrados na isolados individuais e sua função, priorizando em S. gratum Comprar e J. gangetica
para o desenvolvimento de novas terapias e combatentes contra o câncer.
Palavras-chave
gástrica câncer de Ultra-estrutura celular citotoxicidade TEM fundo
o câncer gástrico é o quarto tipo de câncer mais freqüentemente diagnosticado eo segunda causa mais líder de morte relacionada com câncer em todo o mundo [1]. Estima-se que havia cerca de 1 milhão de novos casos de câncer gástrico registrados em 2008, mas desses, a maioria (713.900) foram relatados em países em desenvolvimento, com as maiores incidências de câncer gástrico encontrados no leste da Ásia, a Europa Central e Oriental, e América do Sul [1]. Apesar da intensificação aparente da doença, as evidências sugerem que as taxas globais de câncer gástrico está contrariando a tendência, com uma diminuição de casos de câncer gástrico encontrado em muitas partes do mundo ocidental [2].
Pacientes com câncer gástrico Infelizmente, a maioria são muitas vezes diagnosticado em um estágio avançado, quando a cura não é possível, e o tratamento é paliativo com a intenção de melhorar a qualidade e quantidade de vida. Mesmo assim, existem diretrizes de tratamento para o câncer gástrico, a taxa de sobrevivência de cinco anos é inferior a 50% [3, 4]; uma taxa que é, obviamente, não encorajador tanto oncologistas ou doentes de câncer. Além disso, os efeitos secundários dos tratamentos correntes isto é a cirurgia, quimioterapia e radiação não são satisfatórios. Assim, terapias específicas são necessárias para diminuir os efeitos colaterais e melhorar os resultados clínicos dos pacientes. Por isso, os pesquisadores neste novo milênio estão a pagar muito mais atenção ao desenvolvimento não só de novas orientações terapêuticas e estratégias de prevenção precoce para câncer gástrico [5, 6], mas também em encontrar romance e alvo agentes terapêuticos específicos também.
Durante as duas últimas décadas, os produtos fitoquímicos têm desempenhado um papel dominante na descoberta de novas drogas para alvejar o cancro [7], com mais de 60% de agentes anti-câncer usados ​​atualmente são derivados de fontes naturais [8]. Exemplos de agentes anti-tumorais em todo o mundo clinicamente úteis derivados de plantas selvagens incluem o taxol, vinblastina, vincristina, derivados de camptotecina, topotecano (um grama de trigo), mar-espinheiro, Ganoderma, irinotecano, e et opôs ido, o qual é derivado a partir de epipodofilotoxina [9, 10]. Outros são derivados de frutas e vegetais; não se limitando a incluir a curcumina (cúrcuma), a genisteína (soja), catequinas (chá verde) [7], mas também ervas como alcalóides vinca, podofilotoxina, berberina, óleos grama limões, flavonóides e camptotecina; um outro grupo de agentes anti-cancerígenos promissores [11]. Embora estes agentes anti-cancro têm sido empregues para vias com base no mecanismo segmentados, a sua manipulação eficaz do extrínseca e as vias de apoptose intrínsecas estão ainda a ser exploradas [12-14]. Paclitaxel isolar a partir da casca do teixo do Pacífico, Taxus brevifolia
é um fitoquímico que mostra a promessa. É um fármaco aprovado da FDA para ser utilizado no tratamento relacionado com a SIDA sarcoma de Kaposi, cancro da mama, cancro do pulmão de células não pequenas e cancro do ovário. O seu efeito primário é celular para causar a estabilização anormal da polimerização de microtúbulos dinâmico, conduzindo à falha de divisão celular, resultando em apoptose [15-17]. No entanto, o paclitaxel também está sendo estudada como uma alternativa de tratamento para outros tipos de câncer, incluindo câncer gástrico. Ele está atualmente em ensaios clínicos de fase III [18, 19]. Independentemente de terem sido aprovadas ou não, o amplo apoio alcançar e continuação de estudos de extratos de plantas com implicações no tratamento do câncer gástrico são indicativos do papel continuado que os produtos naturais desempenham no processo de descoberta de drogas.
Ao considerar uma epidemiologia estudo de casos de cancro gástrico recém-diagnosticados na Tailândia, incidências muito mais baixas foram observadas na região Nordeste [20]. No entanto, a prevalência de infecções por Helicobacter pylori
, não são diferentes em toda a região norte da Tailândia, nenhum fator geográfico (por exemplo planalto, cadeia montanhosa ou terreno da selva) foi diferente quer [21]. Portanto, deve haver algo mais central para a população na região Nordeste, que reduz a incidência global de câncer gástrico. Tendo todos, mas descartou a genética e fatores ambientais, tem sido sugerido que comestíveis de plantas populares dietas que são geralmente consumidos nesta região, pode ter a resposta para esta discrepância. Estes novos dados, e essa liderança promissora nos desafia muito para explorar o misterioso fenômeno, ou seja, se os compostos fitoquímicos em plantas populares comestíveis tailandeses do Nordeste têm potencial quimiopreventivo ou citotóxica para combater o câncer gástrico, ou outras propriedades. Por essa razão, este estudo foi realizado, por conseguinte, para avaliar o potencial de citotoxicidade destas plantas comestíveis locais. De particular interesse, plantas S. gratum
, J. gangetica Comprar e L. flava
, foram selecionados com base em dados epidemiológicos que sugerem que eles são os vegetais populares mais regularmente comestíveis na região Nordeste.
postulamos que essas plantas poderiam realizar dentro de propriedades escondidas que poderiam ser exploradas para combater esse tipo de câncer, eo presente estudo busca avaliar o seu potencial. Avaliamos os extratos à base de fenólicos em bruto destas plantas, e demonstrar alta apoptótica celular e efeitos citotóxicos em duas linhas celulares de cancro gástrico comuns, e comparativos, Kato-III e NUGC-4.
Métodos
materiais de plantas
Três plantas populares comestíveis locais; S. gratum
, J. gangetica Comprar e L. flava
(Tabela 1) foram adquiridos a partir de três diferentes mercados locais na província de Khon Kaen na zona Nordeste da Tailândia durante outubro a dezembro de 2008. Estas plantas foram seleccionado com base em informações etnobotânicas [22-26] e dados epidemiológicos, como descrito acima. identificação taxonômica correta de espécies de plantas utilizadas para este estudo foi supervisionado por botânicos do Departamento de Botânica e Farmacologia da Faculdade de Farmácia da Universidade Khon Kaen, Thailand.Table 1 Os nomes dos três extratos de plantas e outras referências de pesquisa, uso terapêutico no tradicional tailandesa medicina rastreada neste estudo
Espécies [número do voucher]
Família (nome comum Inglês /tailandês)
relatados principais constituintes
O uso terapêutico na medicina tradicional Thai

parte comestível
Ref.
Syzygium gratum
(Wight) SN Mitra var. Gratum
[Ch. Laongpol 6] a, c
Myrtaceae (Eugenia /Phak Mek, Samet chun)
Ainda não claramente determinada em estrutura química, mas provou ser forte em antioxidantes e a prevenção da oxidação e tensões nitrosativo
tratamento da dispepsia e indigestão
Folhas
22,23
Justicia gangetica
L. [TK-PSKKU-0066] b
Acanthaceae (violeta chinês, prímula tropical /nome aceito: Asystasia gangetica
)
5,11 epoxymegastigmane-glucósido (asysgangoside), salidroside, β-d-glucopiranosido de benzilo, (6S
, 9R
) -roseoside, ajugol, apigenina-7 ó
-β-D- glucopiranósido, apigenina-7 ó
-neohesperidoside, apigenina e 7-O
-β-d-glucopiranosil (1 → 6) -β-d-glucopiranósido
Tratamento de dores de estômago, vermes estomacais, anti- asma
Deixa
24,25
Limnocharis flava
L. Buchenau [Patt. 173] c
limnocharitaceae (Alcotán amarelo, cabeça rebarba amarelo /reusi Talabhat)
Indeterminado
aperitivo
Stem
26
espécimes aVoucher depositados na Floresta Herbarium (BKF), Departamento de Parque nacional, Vida Selvagem e Conservação de Plantas, Ministério da Recursos Naturais, bthe herbário da Faculdade de Ciências Farmacêuticas, Kaen Universidade Khon e cO Prince of herbário Universidade Songkla (PSU), Departamento de Biologia, Faculdade de Ciências, Príncipe da Universidade Songkla, Tailândia .
Preparação de extractos de plantas
partes comestíveis de cada variedade de planta individual (Tabela 1) foram enxaguados com água destilada estéril para remover detritos e seco num forno de ar quente a 50 ° C durante 7 dias. Uma vez secos, partes de plantas foram então cortados em pedaços pequenos e terreno para um pó fino usando um almofariz e pilão. Cada material vegetal pó moído foi então imerso com o excesso do solvente acetato de etilo (Sigma-Aldrich Pte Ltd-, Singapura) em um frasco de extracção. As misturas de acetato de etilo foram, em seguida, incubadas num incubador com agitação a temperatura ambiente durante 72 h. Seguindo este processo, os sobrenadantes foram então transferidos para um novo recipiente, e o processo de extracção com acetato de etilo foi repetido mais três vezes, antes de os sobrenadantes destas extracções foram combinados em triplicado. Estes foram, em seguida, filtrada através de Whatman No.1 papel de filtro, e evaporou-se por um evaporador rotativo. Estes extractos de amostra foram então empregues em experiências adicionais.
Determinação do composto fenólico total
compostos fenólico total nos extractos de plantas foram determinados pelo método de Folin-Ciocalteu como descrito por Sachindra [27]. Em resumo, 0,2 mL cada extracto de planta dissolvido em 50% de DMSO (Santa Cruz Biotechnology Inc., Bangkok, Tailândia) foi oxidado com 1,0 mL de 10 vezes diluído reagente de Folin-Ciocalteu (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore) e neutralizado com 0,8 ml de solução a 6% de carbonato de sódio (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore). Após 1 h de incubação, a absorvância da solução foi medida a 764 nm e os resultados foram representados como miligramas de equivalentes de ácido gálico, por grama de peso seco (mg GAE /g). O ensaio foi realizado em triplicado para cada concentração de amostra a partir de 3 ensaios separados.
Determinação da actividade antioxidante
actividade antioxidante dos extractos de plantas foi determinada espectrofotometricamente utilizando o sistema de ABTS de acordo com o método de Re e colegas [28]. Resumidamente, ABTS catião radical (ABTS • +) mistura foi gerado pela oxidação de ABTS a 7 mM (Sigma-Aldrich Pte-LTD, Singapura) com persulfato de potássio mM 140 (Sigma-Aldrich Pte-LTD, Singapura), incubadas durante 16 h à temperatura ambiente no escuro. A atividade antioxidante foi determinada pela adição de 0,2 ml de extratos de plantas com 1,8 ml ABTS • + mistura cátion radical. Após incubação da mistura durante 6 min, a absorvância a 734 nm foi registada. ABTS • + capacidade de eliminação de radicais (%) de extratos vegetais foram calculados com base na seguinte equação: ABTS • + capacidade de eliminação de radicais (%) = [(amostra Abs.control-Abs.test) /Abs. controle] x100. Onde Abs.control é a absorvância da reacção de controlo (sem extracto de planta) e amostra Abs.test é a absorvância na presença de um extracto de planta. Os resultados foram então comparados com a actividade anti-eliminadora de Trolox (Sigma-Aldrich Pte Ltd-, Singapura) e representada como Trolox capacidade antioxidante equivalente por grama de peso seco (TEAC /g). O ensaio foi realizado em triplicado para cada concentração de amostra a partir de 3 ensaios separados.
Cultura celular
Duas linhas celulares de carcinoma gástrico humano Kato-III (ATCC No. HTB-103) da American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD, EUA) e NUGC-4 (JCRB0834) a partir da pesquisa da ciência Banco de Recursos de Saúde (Japão Health Sciences Foundation) foram usadas para ensaios citotóxicos in vitro
. O prepúcio humano linha celular de fibroblastos HS27 (ATCC No.1634) foi utilizada como um controlo. Elas foram cultivadas em meio RPMI 1640 estéril contendo 10% (v /v) de soro bovino fetal (Biochrom AG, Berlim, Alemanha) a 37 ° C, fornecido com 5% de CO 2 em uma incubadora. As células foram cultivadas em frascos de cultura de tecido padrão e ao atingir 80% de confluência foram passadas com uma solução de 0,25% de tripsina-EDTA (Sigma-Aldrich Pte Ltd-, Singapura) a cada 3-4 dias até à sua utilização.
In vitro
ensaio de citotoxicidade
extractos de plantas foram avaliadas sua actividade citotóxica contra as linhagens de células NUGC-4-Kato III e através do ensaio colorimétrico MTT como descrito por Mosmann primeiro [29] com modificações sugeridas pela Denizot e Lang [30]. As células cultivadas (1 x 10 4 células) em meio completo foram transferidos para cada cavidade de uma placa de 96 poços plana e, em seguida, incubadas a 37 ° C numa atmosfera de ar humidificado enriquecido com 5% (v /v) CO 2 durante 24 h, a fim de permitir que as células anexar ao fundo de cada poço. As células em cultura foram, em seguida, tratado com o extracto em bruto testado (poços em triplicado por condição) pela adição de 2 ul de diluições em série de cada extracto a uma concentração de 1,25, 2,5, 5, 10 e 20 ug /mL. As células foram então cultivadas como anteriormente durante mais 72 h antes da adição de 10 uL de 5 mg /mL de solução de 3- (4, 5-dimetiltiazol-2-il) -2, 5-difeniltetrazólio (MTT) ( Sigma-Aldrich Pte Ltd-, Singapura) em cada poço. A incubação foi continuada durante mais 4 h antes de os meios foram removidos. Uma mistura de DMSO (150 uL) e glicina (25 mL) foi adicionado a cada poço e misturou-se para assegurar a lise das células e dissolução dos cristais formasan, antes da absorvância a 540 nm foi medida. Três repetições de cada experiência foram realizadas e a percentagem de conversão de MTT para o seu derivado formazano para cada poço (crescimento celular por cento) foi calculada dividindo a DO a 540 nm dos poços com o controlo com base na equação seguinte: o crescimento de células por cento = [teste A540 - A540 ZERO] × 100 /[controle A540 - A540 ZERO]. Onde A540 = A540 de zero da solução após a célula foi incubada durante 24 h antes da adição de extractos de plantas; teste A540 = A540 da solução após extratos vegetais disso; e controle A540 = A540 da solução sem extratos vegetais disso. Além disso, para a garantia de não-tóxico de extractos de plantas contra as células normais (linha celular de fibroblastos HS27), uma dose dupla (2 vezes de IC 50 concentrações [10 ug /ml]) dos extractos foram empregues e avaliadas por MTT ensaio. O ensaio foi realizado em triplicado para cada concentração de amostra a partir de 3 ensaios separados.
Metade da concentração máxima inibitória (IC50)
A absorvância obtida a 540 nm foi utilizado para determinar a percentagem de sobrevivência celular assumindo que a sobrevivência de 100% foi obtido quando tratados com solventes apenas como controles, e que não há diferenças de actividade metabólica existiu entre células sobreviventes em condições diferentes. Partindo destes pressupostos, o índice de sobrevivência das linhas celulares de cancro e tratadas células de cultura normal foi calculado de acordo com a seguinte fórmula: Percentagem de sobrevivência = (A540 tratadas células /A540 controlo) × 100. A célula média ± 1 desvio padrão (SD) sobrevivência (%) foi representada graficamente contra a concentração de extracto de planta correspondente e a melhor linha de ajustamento foi utilizado para derivar a estimativa de IC 50 valor a partir da concentração que pode proporcionar 50% de sobrevivência das células.
as concentrações de extractos de plantas dando 50% de concentração inibidora (IC 50) foram determinadas a partir de três experiências separadas. A IC 50 de cada um dos extractos de plantas foram então usadas como a concentração tratada a 0 e de 3 dias contra-Kato III e NUGC-4, as quais foram avaliadas quanto a apoptose utilizando um microscopia electrónica de transmissão (TEM). O ensaio foi realizado em triplicado para cada concentração da amostra a partir de 3 ensaios separados. Preparação
amostras para microscopia eletrônica de transmissão
Kato-III células (1x10 6 células) e NUGC-4 células (1x10 6 células) tratadas com cada extracto de planta, assim como o controlo negativo (culturas não tratadas), foram realizadas separadamente. Resumidamente, foram lavadas com uma solução de D-Hank (Life technologies, Bangkok, Tailândia) duas vezes, e entregues em tubos de centrífuga com uma espátula de plástico, seguido de centrifugação a 2000 rpm durante 15 min, com o sobrenadante removido. O precipitado foi fixado em solução contendo 4% de glutaraldeído (Electron Microscopy Sciences, Bangkok, Tailândia) e 2% de paraformaldeído (Electron Microscopy Sciences, Bangkok, Tailândia) em 0,1 M tampão fosfato salino (PBS), pH 7,4, a 4 ° C durante 1 h, em seguida lavada com 0,1 M de PBS para remover o fixador. As amostras foram fixadas posteriormente em 1% de tetróxido de ósmio (Electron Microscopy Sciences, Bangkok, Tailândia) no mesmo tampão durante 30 minutos e desidratadas numa série de etanol graduada durante 10 min cada. Eles foram, em seguida, limpo com duas mudas de óxido de propileno e imerso em misturas sequencial de óxido de propileno e Araldite 502 resina (Sigma-Aldrich Pte-LTD, Singapura), em proporções de 3: 1, 2: 1, 1: 2, e finalmente incorporado em araldite pura. Secções de 1 uM foram cortados utilizando um TA-2-Porter Blum ultramicrótomo. Os cortes foram montados posteriormente em grades de cobre, secas ao ar e contrastados sequencialmente com 2% de acetato de uranilo (Electron Microscopy Sciences, Bangkok, Tailândia) em álcool 7% no escuro, e depois tratados com citrato de chumbo (Electron Microscopy Sciences, Bangkok, Tailândia ). Eles foram examinadas sob uma Philips CM 100 microscopia eletrônica de transmissão operando a 80 kV. Análise
Estatística
Os resultados foram expressos em média ± SD de réplicas a partir de 3 ensaios separados. A comparação entre os conjuntos de dados foi realizada utilizando uma análise de variância (ANOVA) seguida pelo teste t de Student. Todas as análises estatísticas foram realizadas utilizando SPSS19. As diferenças foram aceitos como estatisticamente significativos a p <. 0,05

Resultados Total de conteúdo de compostos fenólicos de plantas extrai
Três plantas populares comestíveis da região Nordeste da Tailândia (S. gratum
, J. gangetica
e L. flava
) foram extraídos e o seu conteúdo fenólico total determinada com os resultados mostrados na Tabela 2. Entre estes extractos de plantas, o maior nível de conteúdo fenólico total foi detectada em S. gratum
a 149.789 ± 0,381 mg GAE /g. Era 10 dobras significativamente maior no conteúdo do que foi identificado em J. gangetica Comprar e L. flava
(16,513 ± 0,130 e 14,334 ± 0,463 mg GAE /g, respectivamente, p Art < 0,05). tabela 2 conteúdo fenólico total médio de extratos de plantas expressa como atividade GAE e anti-limpeza dos extratos vegetais representados como TEAC
extratos vegetais
total de plenolics (mg GAE /g peso seco)

A actividade anti-limpeza (TEAC mM /g de peso seco)
S. gratum
(Wight)
149,789 ± 0,381
2,823.521 ± 27,521
J. gangetica L
.
16,513 ± 0.130a
313,141 ± 39.713a
L. flava (L.)
14,334 ± 0.463a
900,845 ± 20.346a, b
Os valores foram expressos em média ± SD de réplicas a partir de 3 ensaios separados. ap Art < 0,05 VS S. gratum
, bp
. < 0,05 VS J. gangetica
antioxidantes capacidades de extratos vegetais actividades
antioxidante de acetato de etilo extraídos de S. gratum
, J. gangetica Comprar e L. flava
são apresentados na Tabela 2. Os valores equivalentes TEAC para estas plantas foram significativamente diferentes em ordem decrescente de S. gratum Art > L. flava Art > J. gangetica
(2,823.521 ± 27,521, 900,845 ± 20,346, 313,141 ± 39,713, respectivamente, p Art < 0,05). Visivelmente, cerca de 3-9 dobras maior atividade antioxidante de S. gratum
foi encontrada em comparação com os outros dois extratos de espécies. Estes foram correlacionados bem com teor de fenólicos totais. (Coeficiente de correlação de R 2 = 0,935, Y = 16.64x + 324,5). Inibição do crescimento celular

linhas celulares de cancro gástrico Kato-III e NUGC-4 e a linha de células de fibroblastos humanos (controle) foram exposta a cada extracto de planta (concentração diluição em série [1,25, 2,5, 5, 10 e 20 ug /mL]), para determinar o efeito inibidor do crescimento induzida actividade de cada planta. Após 72 h, as células viáveis ​​foram medidos pelo ensaio de MTT. Kato-III e NUGC-4 células expostas a S. gratum
e J. gangetica
extractos resultou numa redução significativa em células viáveis ​​de um modo dependente da dose (Figura 1). A 20 ug /mL de todos eles induzida sobre a morte de células de 50% em ambas as linhas celulares de cancro gástrico. No entanto, a 10 ug /ml os extractos produzidos a partir de apenas S. gratum
e J. gangetica
demonstraram citotoxicidade potente significativa (p
< 0,05) para induzir a morte celular superior a 70% em Kato-III e NUGC-4 quando comparado com L. flava
(Figura 2). Além disso, estes dois extractos de plantas não mostrou qualquer efeito na linha celular de fibroblastos de prepúcio humano normal (Figura 2). Em contraste, L. flava
efeitos 's diminuída. Resultando em cerca de 25% de morte celular, sem diferença significativa entre as células de cancro gástrico e de células de fibroblastos normais (Figura 2). Figura 1 Os estudos de resposta dose dos extractos de plantas em duas linhas celulares de cancro gástrico: (A) Kato-III e (B) NUGC-4. As células foram tratadas com várias concentrações (0, 1,25, 2,5, 5, 10 e 20 ug /ml) de S. gratum
, J. e L. gangetica
flava
durante 72 h. O efeito antiproliferativo foi medida pelo ensaio de MTT. Os resultados foram expressos como a média ± DP de três experiências independentes.
Figura 2 Teste de citotoxicidade contra-Kato III, NUGC-4 e HS-27, depois incubadas com 10 ug /ml de acetato de etilo extraiu-se de S. gratum, J. gangetica e L. flava. O efeito antiproliferativo foi medida pelo ensaio de MTT. Os resultados foram expressos como a média ± DP de três experiências independentes. Os resultados mostraram ambos S. gratum
e J. gangetica
fortemente inibida até o crescimento de células de cancro gástrico 70%, enquanto não destruir as células de fibroblastos normais Hs 27 (diferença significativa [* P
< 0,05]). Isto contrasta com o efeito por L. flava
, que demonstraram possuir uma quantidade reduzida de crescimento de células, não só em células de cancro gástrico, mas também em células normais de fibroblasto bem.
A IC 50 (ig /mL valores) são resumidos na Figura 3. o J. gangetica
extracto tinha o menor IC 50 valores de 5,45 ug /mL e 5,86 ug /ml para Kato-III e NUGC-4, respectivamente. Da mesma forma, o S. gratum
extracto mostraram maior citotoxicidade para as linhas celulares de cancro com CI 50 valores do 7,24 ug /ml - 11,96 ug gama /mL, ao passo que, a maior IC 50 foi a partir de L . flava
extrair 17,20 ug /ml e 14,64 ng /mL para Kato-III e NUGC-4, respectivamente. Isto foi significativamente diferente (p
< 0,05) quando comparados com os outros dois extractos de plantas (Figura 3). Figura 3 citotoxicidade comparativa da IC50 de S. gratum, J. gangetica e L. flava em Kato-III, NUGC-4 e HS27 por ensaio MTT. Os resultados foram expressos como a média ± DP de três experiências independentes (* p
< 0,05) e em comparação com as células tratadas com HS27. J. gangetica
apresentou o menor IC50, enquanto que a mais alta era de L. flava
diferenças significativas (p < 0,05). Entre S. gratum Comprar e L. flava
foram observadas entre os dois célula cancerosa linhas.
alterações ultra-estrutura das Kato-III e linhas celulares NUGC-4 induzida por S. gratum, J. gangetica Comprar e L. flava
a fim de determinar se a inibição do crescimento por extractos de plantas foram associados com a apoptose, examinamos ainda mais as alterações morfológicas de NUGC-4 linhas celulares de cancro gástrico Kato-III e sob microscópio eletrônico de transmissão. As estruturas nucleares células de controlo apareceu intacta (Figura 4A: Kato-III, E: NUGC-4), enquanto que as células tratadas com os dos extractos de plantas demonstraram alterações ultra-estruturais de várias maneiras (figuras 4B-4D: Kato-III, e 4 F-4H: NUGC-4, respectivamente). Em detalhe, as células Kato III-tratado com S. gratum
exibido um núcleo condensado com a condensação da cromatina, formação de corpos apoptóticos (Figura 4B), e dispersar os detritos granular. Enquanto que para as células Kato-III tratados J. gangetica
, estes exibido condensação da cromatina, ligados à membrana corpos apoptóticos e numerosas vesículas (Figura 4C). Considerando que as alterações morfológicas encontradas em L. flava
tratados células Kato-III, exibido núcleo encolhido com a condensação da cromatina e numerosas vesículas heterogéneas, incluindo extensas características de vacuolização intracelular (Figura 4D). Figura 4 Micrografias de electrões comparando os efeitos de S. gratum, J. e L. gangetica flava em Kato-III (A-D) e NUGC-4 (E-H) 3 dias após o tratamento. A barra de escala de 2 um. A) não tratado de células Kato III mostra muito poucos vesículas (v), uma vez uniforme forma arredondada e cromatina dispersa ao longo do núcleo (N). B) S. gratum
tratada células Kato-III mostra cromatina condensada no núcleo (N), apoptótica corpo formação (seta) e muitas vesículas. A célula é dispersar os detritos como granular (*). célula C) Kato-III tratado com J. gangetica
. Esta célula mostra a condensação da cromatina em torno da periferia do núcleo, organelos ligados à membrana (seta) e numerosos vacúolos (v). D) de células Kato-III após exposição a L. flava
mostra um grande número de vacúolos autofágicos (v), e um núcleo encolhimento (N) com cromatina condensada. E) Não tratado NUGC-4 célula mostra nenhuma condensação da cromatina no núcleo (N) e uma vez uniforme forma arredondada. F) NUGC-4 de células tratadas com S. gratum
mostra cromatina núcleo de condensação, numerosas vesículas (v) e muitos organelos ligados à membrana (seta). G) NUGC-4 de células após exposição a J. gangetica
mostra um núcleo condensado cromatina, membrana organela ligado (seta) e vesículas (v). H) alterações morfológicas observadas em L. flava
tratada NUGC-4 células eram compostas com condensação da cromatina no núcleo (N), e muitas vesículas heterogéneas de tamanho variável (v).
S. gratum
tratada linhas celulares NUGC-4 apresentaram apoptose com compactação núcleo e produção de membrana ligada corpos apoptóticos e numerosas vesículas (Figura 4F). No entanto, em comparação, NUGC-4 células tratadas com J. gangetica
, produzidos estágios iniciais de apoptose com a condensação da cromatina e numerosas vesículas (Figura 4G). Enquanto as células tratadas com L. flava
mostraram núcleo de condensação da cromatina periférica com numerosas vesículas heterogéneas e formação de bolhas (Figura 4H).
Discussão
observações casuais mostraram que plantas, ervas e chás tradicionais pode ser aproveitada para potencialmente ganhar a luta na luta contra o cancro; um problema de saúde em todo o mundo. No entanto, não é até que esses fitoquímicos são testados in vitro e in vivo

que podemos saber com certeza o quão longe eles podem ir em manter esta doença sob controle [31-34]. No câncer gástrico Tailândia é um flagelo, porém a incidência de câncer gástrico anormalmente baixas na parte nordeste da Tailândia é de considerável interesse. O fato de que S. gratum
, J. gangetica Comprar e L. flava Quais são indígenas para a área e formam uma parte importante do suplemento dietético de rotina na população local, que, portanto, decidiu investigar se estes plantas populares são candidatos potenciais para o controle seguro e confiável do câncer gástrico. Embora existam muitos relatórios para esclarecer as suas actividades anti-oxidantes, este estudo fornece a primeira evidência de seus efeitos citotóxicos potentes e indução de apoptose com base na característica ultrastrutural sobre o câncer gástrico.
Estas plantas foram primeiramente extraída com acetato de etilo e em seguida analisadas para seu conteúdo fenólicos utilizando o método de Folin-Ciocalteu.

• Xpert MTB /RIF ensaio pode ser usado em aspirado gástrico arquivado e induziu amostras de escarro para o diagnóstico da tuberculose sensível pediátrica
• apresentação de emergência do câncer gástrico; prognóstico e implicações para planning