Antioksidantti ja Mikroskooppitutkimus muutokset mahasyövän solulinjoissa aiheuttama Northeastern Thai syötävä kansanmusiikin kasviuutteet

Antioksidantti ja Mikroskooppitutkimus muutokset mahasyövän solulinjoissa aiheuttama Northeastern Thai syötävä kansanmusiikin kasviuutteita
tiivistelmä
tausta
Phytochemical tuotteita on ratkaiseva rooli Lääkekehitysprosessi. Tämä lupaava mahdollisuus kuitenkin edellyttää, että on tarpeen vahvistaa niiden tieteellinen todentaminen ennen käyttöä. Näin ollen tämä tutkimus pyrkii arvioimaan (1) antioksidantti, (2) sytotoksisuutta potentiaalia, ja (3) vaikutus Mikroskooppitutkimus muutoksen mahasyövässä solulinjoissa altistumisen kautta murto kolme paikallista Northeastern Thai syötäviä kasveja. Tool Menetelmät
Kasvit, Syzygium gratum, Justicia gangetica
ja Limnocharis flava
uutettiin etyyliasetaatilla, ja jokainen raakauute analysoitiin niiden koko fenolien pitoisuus Folin-Ciocalteun menetelmällä. Heidän antioksidantti arvioitiin käyttäen ABTS järjestelmää. Sitten uutteet analysoitiin sytotoksisuuden kaksi mahalaukun syövän solulinjat Kato-III ja NUGC-4, ja verrataan HS27 fibroblastien kontrollina käyttäen MTT-määritystä. Solujen elinkelpoisuus (%), IC 50-arvot, samoin kuin Mikroskooppitutkimus muutokset arvioitiin käsittelyn jälkeen yksisuuntaisella varianssianalyysillä (ANOVA).
Tulokset
yhteensä fenolisten arvot etyyliasetaattiuutteet oli hyvin korreloi antioksidanttien, jossa uutettu tuote S. gratum
näytetään korkein antioksidantti (10 kertaa suurempi vaste) yli J. gangetica
ja L. flava
vastaavasti. Altistuminen S. gratum
ja J. gangetica
poimii normaaliin solulinjojen (HS27) johti marginaalinen sytotoksisuuden vaikutuksia. Kuitenkin kautta annoksesta riippuvainen määrityksen S. gratum
ja J. gangetica
otteiden cytotoxicological vaikutuksia vain yli 75 prosenttia Kato-III ja NUGC-4 solulinjat. Lisäksi apoptoottiset ominaisuus osoitettiin alle TEM molemmissa syöpäsolulinjoissa näitä kahta otetta, kun taas ominaisuudet autophagy löydettiin solulinjoissa post altistumisen otteita L. flava
.
Johtopäätökset
Näistä kolme tehdasta, S. gratum
oli korkein sisällön fenoliyhdisteitä ja antioksidantin kapasiteettia. Kaikki ne todettiin sisältävän yhdisteen (t) sytotoksisuutta in vitro
syöpäsoluihin mutta ei normaali solulinjoissa ratkaistuksi kudosviljelmässä ja Mikroskooppitutkimus analyysi. Tämä on ensimmäinen raportti osoittaa vaikutusta solujen muuttamisen apoptoosin sellaisen etyyliasetaattiuutetta S. gratum
ja J. gangetica.
Lisätutkimuksia nyt keskittynyt yksittäisiin isolaateista ja niiden toiminta, priorisoimalla S. gratum
ja J. gangetica
kehittämiseksi uusien terapeuttisten ja sotilaat syöpää vastaan.
avainsanat
Mahasyöpää ultrastruktuuri Cell sytotoksisuuden TEM tausta
Mahalaukun syöpä on neljänneksi yleisin diagnosoitu syöpä ja toiseksi yleisin syy syöpään liittyvät kuolemat maailmassa [1]. Arvioitiin, että siellä oli noin 1 miljoonaa uutta mahalaukun syöpätapausta kirjattiin vuonna 2008, mutta näistä suurin osa (713900) on raportoitu kehitysmaissa, joissa on korkein ilmaantuvuus mahasyövän löydetty Itä-Aasiassa, yli Keski- ja Itä-Euroopassa, ja Etelä-Amerikka [1]. Huolimatta näennäisestä tehostamista taudin, todisteet osoittavat, että kaiken kaikkiaan mahasyövän hinnat on katkonnan suuntausta, jossa laskua raportoitu maha- syöpä useimmissa osissa länsimaissa [2].
Valitettavasti useimmat mahasyövän potilaat ovat usein diagnosoitu pitkälle edenneessä vaiheessa, kun hoito ei ole mahdollista ja hoito on palliatiivinen jonka tarkoituksena on parantaa laadun ja määrän elämän. Vaikka on olemassa hoitosuositusten mahasyövän, viiden vuoden eloonjäämisaste on alle 50% [3, 4]; korko, joka ei tietenkään ole kannustaa joko onkologit tai syöpään sairastuneille. Lisäksi sivuvaikutuksia nykyiset hoidot eli leikkaus, kemoterapiaa ja säteily eivät ole tyydyttäviä. Joten, kohdennettuja hoitoja vähentämiseksi tarvitaan sivuvaikutuksia ja parantaa kliinisiä tuloksia potilaiden. Siksi tutkijat tällä uudella vuosituhannella kiinnittävät enemmän huomiota kehittämiseen paitsi uusia terapeuttisia ohjeita, ja ennalta ehkäisevinä mahasyövän [5, 6], mutta myös löytämään uusia ja kohdistaa tiettyihin terapeuttisia aineita samoin.
kahden viime vuosikymmenen aikana phytochemical tuotteita on ollut hallitseva asema löytämään uusia lääkkeitä kohdistaa syöpä [7], jossa on yli 60% nykyisin käytössä syöpälääkkeet ovat peräisin luonnollisista lähteistä [8]. Esimerkkejä maailmanlaajuisesti kliinisesti käyttökelpoisia kasvaimia estävinä aineina, jotka ovat peräisin luonnossa kasveista ovat taksoli, vinblastiini, vinkristiini, kamptotekiinijohdannaisten, topotekaani (vehnä grass), tyrni, lingzhi, irinotekaani, ja etoposidi, joka on peräisin epipodofyllotoksiini [9, 10]. Toiset ovat peräisin hedelmät ja vihannekset; ei rajoitu sisällyttää curcumin (kurkuma), genistein (soija), katekiinit (vihreä tee) [7], mutta myös yrtit kuten vinka, podophyllotoxin, berberiini, sitruunat ruoho öljyt, flavonoidi ja camptothecin; toinen ryhmä lupaava syövän vastaisten aineiden [11]. Vaikka nämä syöpälääkkeet on käytetty kohdistettuja mekanismiin perustuvia reittejä, niiden tehokas manipulointi ulkoisten ja luontaisten apoptoosin reittejä tutkitaan edelleen [12-14]. Paklitakseli eristää kuoresta Tyynenmeren marjakuusi, Taxus brevifolia
on yksi phytochemical joka osoittaa lupausta. Se on hyväksytty lääke, FDA: n, joita käytetään AIDS: iin liittyvä Kaposin sarkooma, rintasyöpä, ei-pienisoluinen keuhkosyöpä ja munasarjasyövän. Sen ensisijainen solu vaikutus on aiheuttaa epänormaalia vakauttamiseen dynaamisen mikrotubulusten polymeroitumisen, joka johtaa epäonnistumiseen solunjakautumisen johtaa apoptoosin [15-17]. Kuitenkin paklitakselia myös tutkittu vaihtoehtona hoito muiden syöpien kuten mahasyövän. Se on tällä hetkellä kliinisissä kokeissa vaiheen III [18, 19]. Riippumatta siitä, ovatko ne on hyväksytty tai ei, laajaa saavuttaa tuen ja jatkaminen tutkimusten kasviuutteita, joilla on vaikutusta mahalaukun syövän hoidossa ovat osoitus jatkuvasta roolia, luonnontuotteet pelata Lääkekehitysprosessi.
Harkittaessa epidemiologia tutkimus vasta diagnosoitu mahalaukun syöpätapausta Thaimaassa, paljon pienempi ilmaantuvuus on havaittu Koillis alueen [20]. Tosin esiintyvyys Helicobacter pylori
infektiot, eivät erilaiset pohjoisen alueen Thaimaassa, ilman maantieteellisiä tekijä (esimerkiksi tasanne, vuoristoinen alue tai viidakon maasto) oli erilainen joko [21]. Siksi on oltava jotakin muuta keskeinen väestön Koillis joka vähentää yleistä ilmaantuvuus mahalaukun syöpään. Kun kaikki, mutta sulkee pois genetiikka, ja ympäristötekijät, on ehdotettu, että syötävien folk kasveja ruokavalioita, jotka ovat yleensä kulutetaan tällä alueella, voi olla vastaus tähän ristiriita. Tämä uusi tieto, ja tämä lupaava johtaa suuresti haastaa meidät tutkimaan salaperäinen ilmiö, eli onko phytochemical yhdisteiden Northeastern Thai syötävät folk kasvit ovat chemopreventive tai sytotoksista potentiaalia torjua mahasyöpä, tai muita ominaisuuksia. Tästä syystä tämän tutkimuksen vuoksi tehtiin arvioimaan sytotoksisuuden mahdollisuuksia näiden paikallisten syötävien kasvien. Erityisen kiinnostavia, kasvit S. gratum
, J. gangetica
ja L. flava
, valittiin perustuvat epidemiologisten tietojen että viittaa siihen, että ne ovat kaikkein säännöllisesti syötäviä folk vihanneksia Koillis.
Oletamme, että nämä kasvit voivat pitää sisällä piilossa ominaisuuksia, joita voitaisiin käyttää torjumaan tämä syöpä, ja tässä tutkimuksessa pyritään arvioimaan niiden mahdollisia. Arvioimme raakaa fenolipohjaisia ​​uutteet näistä kasveista, ja osoittavat suurta solujen apoptoottisen ja sytotoksisten vaikutusten kaksi yhteistä, ja vertaileva mahasyövän solulinjoissa, Kato-III ja NUGC-4.
Menetelmät
Plant materiaalit
Kolme paikallista syötävät kansanmusiikkia kasveja; S. gratum
, J. gangetica
ja L. flava
(taulukko 1) hankittiin kolmesta eri paikallisilla markkinoilla Khon Kaen maakunnassa Koillis Thaimaan aikana lokakuu-joulukuu 2008. Nämä kasvit olivat valitaan perustuen ethnobotanical tietojen [22-26] ja epidemiologiset tiedot edellä kuvatulla tavalla. Oikein taksonominen tunnistaminen kasvilajien Tässä tutkimuksessa käytetään valvoi botanists osastolta kasvitieteen ja farmakologian, Farmasian tiedekunta, Khon Kaen yliopisto, Thailand.Table 1 nimet kolme kasviuutteiden ja muut tutkimuksen viitteitä, terapeuttiseen käyttöön thai perinteisten lääketiede seulotaan tässä tutkimuksessa
Laji [tositenumero]
perhettä (Yleisnimi Englanti /Thai)
Raportoitu tärkeimpien aineosien
terapeuttinen käyttö Thai perinteisen lääketieteen

Syötävä osa
Ref.
Syzygium gratum
(Wight) SN Mitra var. Gratum
[Ch. Laongpol 6] a, c
Myrtaceae (Eugenia /Phak Mek, Samet chun) B Ei vielä selvästi määritelty kemiallinen rakenne, mutta osoittautui vahva antioksidantteja ja ehkäisyssä oksidatiivisen ja nitrosative korostaa
Hoito dyspepsia ja ruoansulatushäiriöt
lehdet
22,23
Justicia gangetica
L. [TK-PSKKU-0066] b
akanttikasvit (kiinalainen violetti, trooppinen esikko /Hyväksytty nimi: Asystasia gangetica
)
5,11-epoxymegastigmane glukosidi (asysgangoside), salidroside, bentsyyli β-d-glukopyranosidi, (6S
, 9R
) -roseoside, ajugol, apigeniini-7-O
-β-d- glukopyranosidi, apigeniiniä 7-O
-neohesperidoside, ja apigeniiniä 7-O
-β-d-glukopyranosyyli (1 → 6) -β-d-glukopyranosidi
hoito vatsakipu, vatsa matoja, anti- astma
lehdet
24,25
Limnocharis flava
L. Buchenau [Patt. 173] c
Limnocharitaceae (keltainen auliota, keltainen hurina pää /Talabhat reusi) B määrätty
Alkusalaatti
Stem
26
aVoucher yksilöitä talletettu Forest Herbarium (BKF), Department of National Park, villieläinten ja kasvien suojelu, Ministry of Natural Resource, bthe Kasvimuseo tiedekunnan Pharmaceutical Sciences, Khon Kaen yliopisto ja cthe Prince of Songkla University kasvio (PSU), Department of Biology, Faculty of Science, Prince of Songkla University, Thaimaa .
valmistaminen kasviuutteita
syötävät kunkin yksittäisen kasvin lajikkeen (taulukko 1) huuhdottiin steriilillä tislatulla vedellä sora ja kuivattiin kuumalla ilmalla uunissa 50 ° C: ssa 7 päivää. Kun kuivattu, kasvinosia Sitten leikattiin pieniksi paloiksi ja jauhetaan hienoksi jauheeksi käyttämällä laastin ja survin. Jokainen maa jauhe kasviainesta upotettiin sitten kanssa ylittävät etyyliasetaattisysteemi (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore) kanssa louhinta pullossa. Etyyliasetaatti seoksia inkuboitiin sitten ravistelijaan inkubaattorissa huoneen lämpötilassa 72 tuntia. Tämän jälkeen prosessi, supernatantit siirrettiin sitten uuteen säiliöön, ja uuttoprosessi etyyliasetaatilla toistettiin kolme kertaa, ennen kuin supernatantit näistä kolmena kappaleena uutteet yhdistettiin. Nämä suodatettiin sitten Whatman suodatinpaperin nro 1, ja haihdutettiin pyöröhaihduttimella. Nämä näyteuutteita käytettiin sitten jatkokokeissa.
Kokonaismäärän määritys fenoliyhdisteiden
Yhteensä fenolisten yhdisteiden kasviuutteiden määritettiin Folin-Ciocalteu menetelmää kuten on kuvannut Sachindra [27]. Lyhyesti, 0,2 ml kutakin kasvin uutetta liuotetaan 50% DMSO (Santa Cruz Biotechnology Inc., Bangkok, Thaimaa) hapetettiin 1,0 ml 10-kertaisesti laimennettu Folin-Ciocalteu reagenssia (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore) ja neutraloidaan 0,8 ml 6%: isella natriumkarbonaattiliuoksella (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore). 1 h inkubaation jälkeen liuoksen absorbanssi mitattiin 764 nm: ssä ja tulokset olivat edustettuina milligramma gallushappona yhtä grammaa kohti kuiva-ainetta (mg GAE /g). Määritys suoritettiin kolmena rinnakkaisena kullekin näytteelle pitoisuus on 3 erillistä määrityksissä.
Määritys antioksidantti
Antioksidantti aktiivisuus kasviuutteiden määritettiin spektrofotometrisesti käyttäen ABTS mukainen järjestelmä menetelmän Re ja työtovereiden [28]. Lyhyesti, ABTS kationiradikaali (ABTS • +) seos hapetuksella 7 mM ABTS (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore) kanssa 140 mM kaliumpersulfaattia (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore), inkuboidaan 16 tuntia huoneen lämpötilassa pimeässä. Antioksidantti määritettiin lisäämällä 0,2 ml kasviuutteet kanssa 1,8 ml ABTS • + kationiradikaali seoksen. Inkuboinnin jälkeen seosta 6 min, absorbanssi 734 nm: ssä rekisteröitiin. ABTS • + radikaaleja kyky (%) kasviuutteiden laskettiin perustuu seuraavaan yhtälöön: ABTS • + radikaaleja kyky (%) = [(Abs.control-Abs.test näyte) /Abs. ohjaus] x100. Jossa Abs.control on absorbanssi ohjaus reaktio (ilman kasviuutetta) ja Abs.test näyte on absorbanssi läsnä ollessa kasviuutetta. Tuloksia verrattiin sitten anti-poistavaa aktiivisuutta Trolox (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore) ja edustettuina Trolox vastaava antioksidanttina kapasiteetti per gramma kuivapainoa (TEAC /g). Määritys suoritettiin kolmena rinnakkaisena kullekin näytteelle pitoisuus on 3 erillistä määrityksissä.
Soluviljely
Kaksi ihmisen mahalaukun sinoomasolulinjoja Kato-III (ATCC nro HTB-103) American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD, USA) ja NUGC-4 (JCRB0834) päässä Health Science Research Resources Bank (Japan Health Sciences Foundation) käytettiin in vitro
sytotoksiset määrityksiä. Ihmisen esinahan fibroblasti- solulinja HS27 (ATCC No.1634) käytettiin kontrollina. Ne viljeltiin steriilissä RPMI 1640, joka sisälsi 10% (v /v) naudan sikiön seerumia (Biochrom AG, Berliini) 37 ° C: ssa mukana 5% CO 2: ssa inkubaattorissa. Soluja kasvatettiin standardin kudosviljelmäpulloissa ja saavuttaessaan 80% konfluenssiin siirrostettiin liuoksella, jossa oli 0,25% trypsiiniä-EDTA: ta (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore) välein 3-4 päivää ennen käyttöä.
In vitro
sytotoksisuusanalyysin
Kasviuutteita arvioitiin sen sytotoksinen vaikutus Kato-III ja NUGC-4 solulinjat kautta MTT kolorimetristä ensimmäisenä kuvannut Mosmann [29] muutoksin ehdottamia Denizot ja Lang [30]. Viljeltyjä soluja (1 x 10 4-solut) täydellisessä media siirrettiin kuhunkin kuoppaan litteä 96-kuoppalevylle ja inkuboitiin sitten 37 ° C: ssa kosteutetussa ilmakehässä rikastettu 5% (v /v), CO 2 24 tunnin jotta antaa solut kiinnittyvät pohjaan jokaisen hyvin. Viljellyt solut käsiteltiin sitten testattu raakaa uutetta (kolmena rinnakkaisena olosuhdetta kohti) lisäämällä 2 ui sarjalaimennoksia kunkin uutteen pitoisuutena 1,25, 2,5, 5, 10 ja 20 ug /ml. Sitten solut viljeltiin, kuten edellä on vielä 72 tuntia ennen kuin lisättiin 10 ui 5 mg /ml liuosta, jossa oli 3- (4, 5-dimetyylitiatsol-2-yyli) -2, 5-difenyylitetratsoliumbromidi (MTT) ( Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore) kuhunkin kuoppaan. Inkubointia jatkettiin vielä 4 tuntia ennen kuin kasvatusliuos poistettiin. Seosta, jossa oli DMSO: ta (150 ui) ja glysiiniä (25 ui) lisättiin kuhunkin kuoppaan ja sekoitettiin sen varmistamiseksi, solulyysi ja liukenemista formasan kiteitä, ennen kuin absorbanssi 540 nm: ssä mitattiin. Kolme toistoista kunkin kokeen suoritettiin ja prosenttiosuus MTT muuntaminen sen formatsaanin johdannaisen kullekin kuopalle (prosenttia solujen kasvua) laskettiin jakamalla OD 540 nm: ssä kuopissa, joissa on säätö, joka perustuu seuraavan yhtälön: Prosentuaalinen solujen kasvun = [A540 testi - A540 nolla] x 100 /[A540 ohjaus - A540 nolla]. Jossa A540 nolla = A540 liuoksen jälkeen solujen inkuboitiin 24 tuntia, ennen kuin lisättiin kasviuutteet; A540 testi = A540 liuoksen jälkeen kasviuutteet lisäksi; ja A540 valvonta = A540 liuoksen ilman kasviuutteet lisäksi. Lisäksi sillä myrkytön varmuuden kasviuutteita normaaleja soluja (fibroblastisolulinjan HS27), kaksinkertaista annosta (2 kertaa IC 50 pitoisuuksia [10 ug /ml]) ja uutteet palveluksessa ja arvioitiin MTT määritys. Määritys suoritettiin kolmena rinnakkaisena kullekin näytteelle pitoisuus on 3 erillistä määrityksissä.
Puoliajan maksimaalinen estävä pitoisuus (IC50)
saatu absorbanssi 540 nm: ssä käytettiin määrittämään solujen prosentuaalinen määrä selviytymisen olettaen, että 100% eloonjääneitä saatiin hoidetuilla liuottimien vain verrokkeina, ja että mitään eroja aineenvaihdunnan aktiivisuuden välillä oli eloonjääneiden solujen eri ehdoin. Näiden oletusten prosenttiosuus selviytyminen käsitellyn syöpäsolulinjoissa ja normaalit viljellyt solut laskettiin seuraavalla kaavalla: prosentuaalinen osuus selviytymisen = (A540 käsiteltyjen solujen /A540-ohjattu) x 100. keskiarvo ± 1 keskihajonta (SD) solu eloonjääminen (%) piirrettiin vastaavaa kasviuutetta pitoisuutta ja parhaiten linjaa johtamiseen käytetty arvioitua IC 50 arvon pitoisuutena, että ne tarjoavat 50% solujen selviytymistä.
pitoisuudet kasviuutteita antaa 50% estävä pitoisuus (IC 50) määritettiin kolmesta erillisestä kokeesta. IC 50 kunkin laitoksen uutteet käytettiin sitten käsitellyn pitoisuus 0 ja 3 päivää vastaan ​​Kato-III ja NUGC-4, joka arvioitiin apoptoosin avulla transmissioelektronimikroskopia (TEM). Määritys suoritettiin kolmena rinnakkaisena kullekin näytteelle pitoisuus on 3 erillistä määrityksissä.
Näytteiden valmistus transmissioelektronimikroskopia
Kato-III-soluja (1x10 6 solua) ja NUGC-4-soluja (1x10 6 solut) käsiteltiin kunkin kasvin uutetta sekä negatiivinen kontrolli (käsittelemättömät viljelmät), tehtiin erikseen. Lyhyesti, ne huuhdeltiin D-Hanksin liuos (Life Technologies, Bangkok) kahdesti, ja toimitetaan sentrifugiputkiin muovinen kaavin, jota seurasi sentrifugointi nopeudella 2000 rpm 15 minuutin ajan, ja supernatantti poistettiin. Sakka vahvistettu liuoksessa, joka sisälsi 4% glutaraldehydiä (Electron Microscopy Sciences, Bangkok, Thaimaa) ja 2% paraformaldehydillä (Electron Microscopy Sciences, Bangkok, Thaimaa) 0,1 M fosfaattipuskurissa (PBS), pH 7,4, 4 ° C: ssa 1 h, pestiin sitten 0,1 M PBS: llä poistamaan kiinnitysainetta. Näytteet kiinnitettiin jälkikäteen 1% osmiumtetroksidilla (Electron Microscopy Sciences, Bangkok, Thaimaa) samassa puskurissa 30 minuutin ajan, ja dehydratoitiin arvostellaan etanolisarjassa 10 minuuttia kukin. Sitten ne poistetaan kahdella muutokset propyleenioksidin ja upotetaan juokseva seokset propyleenioksidin ja Araldite 502-hartsia (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore), suhteissa 3: 1, 2: 1, 1: 2, ja lopuksi upotettu puhdas Araldite. Jaksot 1 pm leikattiin käyttäen MT-2 Porter-Blum ultramikrotomilla. Leikkeitä myöhemmin asennettuna kupari verkkoihin, ilmakuivattua ja vastakkain peräkkäin 2% uranyyliasetaatilla (Electron Microscopy Sciences, Bangkok, Thaimaa) 7% alkoholia pimeässä, ja sitten käsiteltiin lyijyä sitraatti (Electron Microscopy Sciences, Bangkok, Thaimaa ). Ne tutkittiin Philips CM 100 transmissioelektronimikroskoopilla toimii 80 kV.
Tilastollinen analyysi
Tulokset ilmaistiin keskiarvoina ± SD toistojen 3 erotettu määrityksissä. Vertailu aineistoja suoritettiin yksisuuntaisella varianssianalyysillä (ANOVA), jota seurasi Studentin t-testi. Kaikki tilastolliset analyysit suoritettiin käyttäen SPSS19. Erot hyväksyttiin tilastollisesti merkitsevä p < 0,05.
Tulokset
Yhteensä fenoliset sisältö kasvien otteita
Kolme syötävät folk kasveja Koillis Thaimaa (S. gratum
, J. gangetica
ja L. flava
) poimittiin ja niiden kokonaisfenolipitoisuuden määritetään tulokset esitetään taulukossa 2. näistä kasviuutteiden, korkeimman kokonaisfenolipitoisuuden havaittiin S. gratum
at 149,789 ± 0,381 mg GAE /g. Se oli 10 taittuu merkittävästi suurempi pitoisuus kuin todettiin J. gangetica
ja L. flava
(16,513 ± 0,130 ja 14,334 ± 0,463 mg GAE /g, vastaavasti, p
< 0,05). Taulukko 2 Mean kokonaisfenolipitoisuuden kasviuutteiden ilmaistuna GAE ja anti-poistavaa aktiivisuutta kasviuutteiden edustettuina TEAC
kasviuutteet
Yhteensä plenolics (mg GAE /g kuivapaino) B
Anti-poistovaikutus (mM TEAC /g kuivapaino)
S. gratum
(Wight)
149,789 ± 0,381
2,823.521 ± 27,521
J. gangetica L
.
16,513 ± 0.130a
313,141 ± 39.713a
L. flava (L.)
14,334 ± 0.463a
900,845 ± 20.346a, b
Arvot ilmaistiin keskiarvoina ± SD toistojen 3 erotettu määrityksissä. ap
< 0,05 VS S. gratum
, kp
< 0,05 VS J. gangetica.
Antioksidantit kapasiteetit kasviuutteita
Antioksidantit toimintaa etyyliasetaattia uutettu S. gratum
, J. gangetica
ja L. flava
on esitetty taulukossa 2. TEAC ekvivalenttiarvoiksi nämä kasvit olivat merkittävästi erilaisia ​​laskevassa järjestyksessä S. gratum
> L. flava
> J. gangetica
(2,823.521 ± 27,521, 900,845 ± 20,346, 313,141 ± 39,713 vastaavasti p
< 0,05). Huomattavasti, noin 3-9 taittuu korkeampi antioksidanttinen vaikutus S. gratum
havaittiin verrattuna muihin kaksi lajia uutteet. Nämä korreloivat hyvin koko fenolisten sisällöstä. (Korrelaatiokerroin R 2 = 0,935, Y = 16.64x + 324,5).
Solujen kasvun estäminen
Mahasyöpää solulinjoissa Kato-III ja NUGC-4 ja ihmisen fibroblastisolulinjassa (kontrolli) oli alttiina kunkin kasvin uutetta (sarjalaimennosta pitoisuus [1,25, 2,5, 5, 10 ja 20 ug /ml]), määrittää kasvua estävä aktiivisuus aiheutuvaa kunkin kasvi. 72 tunnin jälkeen, elävät solut mitattiin MTT-määrityksellä. Kato-III ja NUGC-4-soluja altistettiin S. gratum
ja J. gangetica
uutteet tuloksena vähentynyt merkittävästi elävien solujen annoksesta riippuvalla tavalla (kuvio 1). 20 ug /ml ne kaikki indusoi yli 50% solukuoleman molemmissa mahasyövässä solulinjoissa. Kuitenkin, 10 ug /ml uutteet tuotetaan vain S. gratum
ja J. gangetica
osoitti merkittävää sytotoksisiksi (s
< 0,05), joilla on yli 70% solukuoleman Kato III ja NUGC-4 kun verrataan L. flava
(kuva 2). Lisäksi nämä kaksi kasviuutteita ei havaittu vaikutusta normaaleihin ihmisen esinahan fibroblastisolu- linja (kuvio 2). Sen sijaan, L. flava
n vaikutuksia vähentynyt. Jolloin noin 25% solukuoleman, joilla ei ole merkittävää eroa mahasyövän solujen ja normaalien fibroblastien solu (kuvio 2). Kuvio 1 Annosresponssitutkimukset kasviuutteet kaksi mahalaukun syövän solulinjat: (A) Kato-III ja (B) NUGC-4. Soluja käsiteltiin eri pitoisuuksilla (0, 1,25, 2,5, 5, 10 ja 20 ug /ml), S. gratum
, J. gangetica
ja L. flava
72 tuntia. Antiproliferatiivinen vaikutus mitattiin MTT-määrityksellä. Tulokset ilmaistiin keskiarvoina ± SD kolmesta itsenäisestä kokeesta.
Kuvio 2 Sytotoksisuus testi vastaan ​​Kato-III, NUGC-4 ja Hs-27 sen jälkeen, kun 10 ug /ml: lla etyyliasetaattia uutetaan S. gratum, J. gangetica ja L. flava. Antiproliferatiivinen vaikutus mitattiin MTT-määrityksellä. Tulokset ilmaistiin keskiarvoina ± SD kolmesta itsenäisestä kokeesta. Tulokset osoittivat, sekä S. gratum
ja J. gangetica
inhiboivat voimakkaasti jopa 70% mahalaukun syövän solujen kasvun, kun taas ei tuhoaa normaalit fibroblastisoluja Hs 27 (merkitsevä ero [* p
< 0,05]). Tämä vastakohtana vaikutuksesta L. flava
, joka osoitti heikentynyt määrä solujen kasvua, ei ainoastaan ​​mahalaukun syöpäsolujen lisäksi myös normaaleilla fibroblastisoluja samoin.
IC 50 (ig /ml ) arvot on esitetty yhteenvetona kuviossa 3. J. gangetica
uute oli alhaisin IC 50-arvot 5,45 ug /ml ja 5,86 ug /ml Kato III ja NUGC-4, vastaavasti. Samoin S. gratum
uute osoitti korkeampi sytotoksisuuden syöpäsolun linjat IC 50 arvot 7,24 ug /ml - 11,96 ug /ml alue, kun taas korkein IC 50 oli L . flava
poimia 17,20 ug /ml ja 14,64 ug /ml Kato III ja NUGC-4 vastaavasti. Tämä oli merkittävästi erilainen (p
< 0,05) verrattuna kahteen muuhun kasviuutteet (kuvio 3). Kuva 3 vertaileva sytotoksisuus IC 50 S. gratum, J. gangetica ja L. flava on Kato-III, NUGC-4 ja HS27 MTT: llä. Tulokset ilmaistiin keskiarvoina ± SD kolmesta itsenäisestä kokeesta (* p
< 0,05) ja verrattiin HS27-käsitellyt solut. J. gangetica
osoitti alimman IC 50, kun taas ylin L. flava.
Merkittäviä eroja (p < 0,05) välillä S. gratum
ja L. flava
havaittiin molempien syöpäsolun linjat.
hienorakenteet korjauksilla Kato-III ja NUGC-4 solulinjoissa aiheuttama S. gratum, J. gangetica
ja L. flava
sen määrittämiseksi, onko kasvun esto kasviuutteiden liittyi apoptoosin, me tutki vielä morfologiset muutokset Kato-III ja NUGC-4 mahasyövän solulinjojen lähetyksen elektronimikroskoopilla. Kontrollisoluihin ydin- rakenteita esiintyi ennallaan (kuvio 4A: Kato-III, E: NUGC-4), kun taas solut, joita käsiteltiin kuin kasviuutteiden osoitettu Mikroskooppitutkimus muutoksia useilla tavoilla (kuviot 4B-4D: Kato-III, ja 4 F-4H: NUGC-4, vastaavasti). Yksityiskohtaisesti, Kato III käsiteltyjen solujen S. gratum
näytetään tiivistetyssä ydin kromatiinin tiivistyminen, apoptoottiset kehon muodostumista (kuvio 4B), ja dispergoimalla rakeista roskia. Kun taas Kato-III käsiteltyjen solujen J. gangetica
, nämä näkyvät kromatiinin tiivistyminen, kalvoon sitoutunut apoptoottiset kappaleet ja lukuisat rakkulat (kuvio 4C). Kun taas morfologiset muutokset löytyy L. flava
käsitelty Kato-III soluihin, näyttöön kutistunut tuma kromatiinin tiivistyminen ja lukuisia heterogeenisiä rakkulat, mukaan lukien laajat ominaisuudet solunsisäisten vakuolisaatiota (kuvio 4D). Kuvio 4 Electron micrographs verrataan vaikutuksia S. gratum, J. gangetica ja L. flava on Kato-III (A-D) ja NUGC-4 (E-H) 3 päivää käsittelyn jälkeen. Mittakaava 2 um. A) Hoitamaton Kato-III solu osoittaa hyvin harvat rakkulat (v), melko yhtenäinen pyöristetty muoto ja chromatin hajallaan nucleus (N). B) S. gratum
käsitelty Kato-III näkyy solussa tiivistyneen chromatin nucleus (N), apoptoottinen body muodostuminen (nuolenkärki) ja monet rakkulat. Solu dispergoimalla Rakeisen roskat (*). C) Kato-III käsitelty solu J. gangetica
. Tämä näkyy solussa kromatiinin kondensaatio kehän ympärille ydin, kalvoon sitoutunut soluelimiin (nuoli) ja lukuisia onteloita (v). D) Kato-III solujen altistuksen jälkeen L. flava
esittää useita autophagic ontelot (v), ja kutistuu ydin (N) on tiivistetty kromatiinin. E) Käsittelemätön NUGC-4 näkyy solussa ei kondensoidu kromatiinin nucleus (N) ja melko yhtenäinen pyöristetty muoto. F) NUGC-4 käsitelty solu S. gratum
osoittaa kromatiinin kondensaatio ydin, useita vesikkelit (v), ja monet kalvoon sitoutunut organelles (nuoli). G) NUGC-4 solujen altistuksen jälkeen J. gangetica
esittää ytimen kondensoitu kromatiinin, kalvoon sitoutunut organelliin (nuoli) ja rakkulat (v). H) Morfologiset muutokset havaitaan L. flava
käsiteltiin NUGC-4-soluja, joka koostuu kromatiinin tiivistyminen tumassa (N), ja monet heterogeenisiä vesikkelit erikokoisia (v).
S. gratum
käsiteltiin NUGC-4 solulinjojen näytteillä apoptoosin tiivistäminen tuma ja tuotanto kalvoon sitoutuneiden apoptoottisten kappaleiden ja lukuisat rakkulat (kuvio 4F). Kuitenkin verrattuna, NUGC-4-solut käsiteltiin J. gangetica
, tuotetaan alkuvaiheessa apoptoosin kromatiinin kondensaatio ja lukuisia vesikkelit (kuvio 4G). Vaikka solujen käsitelty L. flava
osoitti oheislaitteiden kromatiinin tiivistyminen tuma lukuisia heterogeenisiä rakkulat ja kupliminen (Kuva 4H).
Keskustelu
Serendipitous havainnot ovat osoittaneet, että kasvit, perinteisiä yrttejä ja teetä voidaan valjastaa mahdollisesti voittaa taistelua taistelee syöpää; maailmanlaajuinen terveysongelma. Kuitenkin, se ei ole, ennen kuin nämä phytochemicals testataan in vitro
ja in vivo
että voimme tietää varmasti, miten pitkälle se voi mennä pitämään tätä tautia kuriin [31-34]. Thaimaassa mahasyöpä on vitsaus, mutta epätavallisen alempi mahasyövän ilmaantuvuus Northeastern osa Thaimaan on huomattavaa kiinnostusta. Se, että S. gratum
, J. gangetica
ja L. flava
ovat peräisin kyseiseltä alueelta ja muodostavat suuren osan rutiinia ravintolisä paikallisessa väestössä, siksi päätti tutkia, ovatko nämä folk kasvit ovat mahdollisia ehdokkaita turvallisen ja luotettavan hallinnan mahasyövän. Vaikka on olemassa monia raportteja selventämään antioksidantti toimintaa, tämä tutkimus tarjoaa ensimmäistä näyttöä niiden voimakas sytotoksinen vaikutus ja apoptoottista induktio perustuu ultrastrutural ominaisuuden päälle mahasyövässä.
Nämä kasvit olivat ensinnäkin uutetaan etyyliasetaatilla ja sitten analysoitiin niiden fenoliset sisältö käyttämällä Folin-Ciocalteu menetelmällä.

• Xpert MTB /RIF määritystä voidaan käyttää arkistoituja mahalaukun aspiraatista ja aiheuttama yskös näytteitä herkille diagnosointiin lapsipotilaiden tuberculosis
• Emergency esittely mahasyövän; ennuste ja vaikutukset palvelun planning