La actividad antioxidante y cambios ultraestructurales en líneas celulares de cáncer gástrico inducida por el noreste de la planta comestible popular tailandesa extracts

actividad antioxidante y cambios ultraestructurales en líneas celulares de cáncer gástrico inducida por el noreste de la planta comestible popular tailandesa extrae
Resumen Antecedentes

productos fitoquímicos tienen un papel crítico en el proceso de descubrimiento de fármacos. Esta posibilidad prometedora, sin embargo, requiere la necesidad de confirmar su verificación científica antes de su uso. Por lo tanto, este estudio tiene como objetivo evaluar (1) la actividad antioxidante, (2) la citotoxicidad potencial, y (3) el efecto sobre la alteración ultraestructural en líneas celulares de cáncer gástrico a través de la exposición a las fracciones de tres plantas comestibles del noreste de Tailandia locales.
Métodos
plantas, Syzygium gratum, Justicia gangetica
y Limnocharis flava
se extrajo con acetato de etilo, y cada extracto crudo analizadas por su contenido total de compuestos fenólicos por el método de Folin-Ciocalteu. Su actividad antioxidante se evaluó mediante el sistema ABTS. Los extractos se analizaron para detectar la citotoxicidad en dos líneas celulares de cáncer gástrico Kato-III y NUGC-4, y comparadas con los fibroblastos HS27 como un control usando el ensayo de MTT. La viabilidad celular (%), IC 50 valores, así como las alteraciones ultraestructurales se evaluaron después del tratamiento con un análisis de la varianza (ANOVA).
Resultados
Los valores fenólicos totales de los extractos de acetato de etilo estaban bien correlacionados con la capacidad antioxidante, con producto extraído de S. gratum
presentan el más alto nivel de actividad antioxidante (a veces 10 mayor respuesta) sobre J. gangetica
y L. flava
respectivamente. La exposición de S. y J. gratum
gangetica
extractos de líneas celulares normales (Hs27) dio lugar a efectos de citotoxicidad marginales. Sin embargo, a través de un ensayo de S. gratum
dependiente de la dosis y J. gangetica
extractos producidos efectos cytotoxicological en poco más de 75 por ciento de las líneas celulares NUGC-4-III y Kato. Además, característicos de apoptosis se demostró en virtud de TEM en las dos líneas celulares de cáncer con estos dos extractos, mientras que las características de la autofagia se encontró en líneas de células después de la exposición posterior a los extractos de L. flava
.
Conclusiones A partir de estos
tres plantas, S. gratum
tenían el mayor contenido de compuestos fenólicos y capacidad antioxidante. Todos ellos encontró que contienen el compuesto (s) con la citotoxicidad in vitro
en las células cancerosas pero no en líneas celulares normales como resuelto en el cultivo de tejidos y análisis ultraestructural. Este es el primer informe para mostrar el efecto de la alteración celular, la apoptosis de un extracto de acetato de etilo S. y J. gratum
gangetica.
Más estudios se centran ahora en aislamientos individuales y su función, dando prioridad sobre S. gratum
y J. gangetica
para el desarrollo de nuevas terapias contra el cáncer y los combatientes.
Palabras clave
cáncer gástrico Ultraestructura citotoxicidad celular TEM Antecedentes
el cáncer gástrico es el cuarto tipo de cáncer y el más frecuentemente diagnosticado segunda causa principal de muerte relacionada con el cáncer en el mundo [1]. Se estimó que había alrededor de 1 millón de nuevos casos de cáncer gástrico registrados en 2008, pero de los que, se informó que la mayoría (713.900) en los países en desarrollo, con los más altos índices de cáncer gástrico que se encuentran en el este de Asia, Europa central y oriental, y América del Sur [1]. A pesar de la aparente intensificación de la enfermedad, la evidencia sugiere que las tasas generales de cáncer gástrico es contra de la tendencia, con una disminución en los informes de cáncer gástrico que se encuentra en la mayor parte del mundo occidental [2].
Pacientes con cáncer gástrico Desgraciadamente, la mayoría son a menudo diagnosticados en una etapa avanzada cuando un cura no es posible y el tratamiento es paliativo con la intención de mejorar la calidad y cantidad de vida. A pesar de que existen pautas de tratamiento para el cáncer gástrico, la tasa de supervivencia a cinco años es inferior al 50% [3, 4]; una tasa que es, obviamente, no alentar a cualquiera de los oncólogos o los enfermos de cáncer. Además, los efectos secundarios de los tratamientos actuales es decir, la cirugía, la quimioterapia y la radiación no son satisfactorios. Por lo tanto, se necesitan terapias dirigidas a reducir los efectos secundarios y mejorar los resultados clínicos de los pacientes. Por lo tanto, los investigadores de este nuevo milenio están prestando mucha más atención al desarrollo de no sólo las nuevas directrices terapéuticas, y las estrategias de prevención temprana de cáncer gástrico [5, 6], sino también en la búsqueda de nuevas y apuntar a agentes terapéuticos específicos también.
durante las dos últimas décadas, los productos fitoquímicos han desempeñado un papel dominante en el descubrimiento de nuevos fármacos para atacar el cáncer [7], con más del 60% de los agentes anti-cáncer que se usan actualmente se derivan de fuentes naturales [8]. Los ejemplos de agentes antitumorales en todo el mundo clínicamente útiles derivados de plantas silvestres incluyen taxol, vinblastina, vincristina, derivados de camptotecina, topotecan (una hierba de trigo), espino cerval de mar, lingzhi, irinotecan, y etopósido, que se deriva de epipodofilotoxina [9, 10]. Otros son derivados de frutas y verduras; no limitado a incluir la curcumina (cúrcuma), la genisteína (soja), catequinas (té verde) [7], pero también hierbas como alcaloides de la vinca, la podofilotoxina, la berberina, aceites de pasto limón, flavonoide y camptotecina; otro grupo de agentes anticancerígenos prometedores [11]. Aunque estos agentes anti-cáncer se han empleado para vías basados ​​en el mecanismo específicos, su manipulación eficaz de la extrínseca y las vías de la apoptosis intrínsecas todavía se están explorando [12-14]. Paclitaxel aislado de la corteza del tejo del Pacífico, Taxus brevifolia
es un fitoquímico que se muestra prometedor. Es un fármaco aprobado de la FDA para ser usado para tratar el sarcoma de Kaposi relacionado con el SIDA, el cáncer de mama, cáncer de pulmón de células no pequeñas y cáncer de ovario. Su efecto celular primaria es causar la estabilización anormal de la polimerización de microtúbulos dinámica, que conduce a la insuficiencia de la división celular que resulta en apoptosis [15-17]. Sin embargo, el paclitaxel también está siendo estudiado como un tratamiento alternativo para otros tipos de cáncer, incluyendo el cáncer gástrico. Es actualmente en ensayos clínicos de fase III [18, 19]. Independientemente de si han sido o no aprobada, el amplio apoyo de alcanzar y continuación de estudios de extractos de plantas con implicaciones en el tratamiento del cáncer gástrico son indicativos del papel continuo que los productos naturales desempeñan en el proceso de descubrimiento de fármacos.
Al considerar una epidemiología estudio de casos de cáncer gástrico recién diagnosticados en Tailandia, incidencias mucho más bajas se han observado en la región Nordeste [20]. Sin embargo, la prevalencia de infecciones por Helicobacter pylori
, no son diferentes en toda la región del norte de Tailandia, ningún factor geográfico (por ejemplo meseta, cadena montañosa o terreno de la selva) era diferente, ya sea [21]. Por lo tanto, tiene que haber algo más central para la población en la región Nordeste, que reduce la incidencia global de cáncer gástrico. Tener todos, pero descartó la genética y los factores ambientales, se ha sugerido que las plantas comestibles populares dietas que se consumen normalmente en esta región, pueden tener la respuesta a esta discrepancia. Estos nuevos datos, y esta pista prometedora nos desafía en gran medida a explorar el misterioso fenómeno, es decir, si los compuestos fitoquímicos dentro del noreste de Tailandia plantas comestibles populares tienen un potencial quimiopreventivo o citotóxico para combatir el cáncer gástrico, u otras propiedades. Por esa razón, en este estudio, por tanto, se realizó para evaluar el potencial de la citotoxicidad de estas plantas comestibles locales. De particular interés, las plantas de S. gratum
, J. y L. gangetica
flava
, fueron seleccionados en base a datos epidemiológicos que sugiere que son las verduras más populares regularmente comestibles en la región Nordeste.
postulamos que estas plantas podrían contener dentro de propiedades ocultas que podrían ser explotadas para luchar contra este tipo de cáncer, y el presente estudio busca evaluar su potencial. Evaluamos los extractos fenólicos basada en crudos de estas plantas, y muestran un alto nivel de apoptosis celular y efectos citotóxicos en dos líneas celulares de cáncer gástrico comunes, y comparativos, Kato-III y NUGC-4.
Métodos Materiales vegetales

Tres plantas comestibles populares locales; S. gratum
, J. y L. gangetica
flava gratis (Tabla 1) fueron adquiridos a partir de tres diferentes mercados locales en la provincia de Khon Kaen, en el noreste de Tailandia durante octubre a diciembre de 2008. Estas plantas eran seleccionados en base a la información etnobotánica [22-26] y datos epidemiológicos como se describe anteriormente. correcta identificación taxonómica de las especies de plantas utilizadas para este estudio fue supervisado por los botánicos del Departamento de Botánica y Farmacología de la Facultad de Farmacia, Universidad de Khon Kaen, Thailand.Table 1 Los nombres de los tres extractos de plantas y otras referencias de investigación, uso terapéutico en tailandés tradicional medicina proyectado en este estudio
Especies [número de comprobante]
Familia (nombre común Inglés /tailandés) guía empresas constituyentes principales reportados
el uso terapéutico en la medicina tradicional tailandés

parte comestible
Ref.
Syzygium gratum gratis (Wight) SN Mitra var. Gratum
[Ch. Laongpol 6] a, c
Myrtaceae (Eugenia /Phak Mek, Samet Chun) Todavía no
claramente determinado en su estructura química, pero demostró ser fuerte en antioxidantes y la prevención de la oxidación y tensiones nitrosative
El tratamiento de la dispepsia y la indigestión
hojas
22,23
Justicia gangetica
L. [TK-PSKKU-0066] b
Acanthaceae (violeta china, la primavera tropical /nombre aceptado: Asystasia gangetica
)
5,11 epoxymegastigmane glucósido (asysgangoside), salidrosida, bencilo β-D-glucopiranósido, (6S
, 9R
) -roseoside, ajugol, apigenina 7-O
-β-D- glucopiranósido, apigenina 7-O
-neohesperidoside, y apigenina 7-O
-β-D-glucopiranosil (1 → 6) -β-D-glucopiranósido
Tratamiento de dolor de estómago, gusanos del estómago, anti- asma
Hojas
24,25
Limnocharis flava L.
Buchenau [Patt. 173] c
limnocharitaceae (hoja de terciopelo amarillo, cabeza rebabas amarillo /Reusi Talabhat)
Indeterminado Aperitivo

Stem
26
especímenes aVoucher depositados en el Herbario Forestal (BKF), Departamento de Parque nacional, Vida Silvestre y Conservación de Plantas, Ministerio de recursos Naturales, BLa herbario de la Facultad de Ciencias farmacéuticas de la Universidad de Khon Kaen y cEs Príncipe de herbario de la Universidad de Songkla (PSU), Departamento de Biología, Facultad de Ciencias, Universidad Príncipe de Songkla, Tailandia .
Preparación de extractos de plantas
partes comestibles de cada variedad de planta individual (Tabla 1) fueron enjuagados con agua destilada estéril para eliminar detritos y se seca en estufa de aire caliente a 50 ° C durante 7 días. Una vez seco, partes de las plantas fueron cortadas en trozos pequeños y se muele hasta obtener un polvo fino utilizando un mortero y una mano de mortero. A continuación, cada material vegetal polvo molido se sumergió con el exceso del disolvente acetato de etilo (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapur) en un frasco de extracción. Las mezclas de acetato de etilo fueron incubadas en un incubador con agitación a temperatura ambiente durante 72 h. Después de este proceso, los sobrenadantes se transfirieron a continuación a un nuevo recipiente, y el proceso de extracción con acetato de etilo se repitió tres veces más, antes de se combinaron los sobrenadantes de estas extracciones por triplicado. Estos se filtraron después a través de Whatman N ° 1 papel de filtro, y se evaporaron por un evaporador rotatorio. Estos extractos de muestras fueron entonces empleados en experimentos adicionales.
Determinación de compuesto fenólico total de
compuestos totales fenólicos en los extractos de plantas se determinó por el método de Folin-Ciocalteu como se describe por Sachindra [27]. En breve, 0,2 ml cada extracto vegetal disuelto en DMSO al 50% (Santa Cruz Biotechnology Inc., Bangkok, Tailandia) se oxida con diluido 10 veces 1,0 ml reactivo de Folin-Ciocalteu (Sigma-Aldrich Pte Ltd, Singapur) y se neutralizó con 0,8 ml de solución de carbonato de sodio al 6% (Sigma-Aldrich Pte Ltd, Singapur). Después de 1 h de incubación, la absorbancia de la solución se midió a 764 nm y los resultados fueron representados como miligramos equivalentes de ácido gálico por gramo de peso seco (mg GAE /g). El ensayo se realizó por triplicado para cada concentración de la muestra a partir de 3 ensayos separados.
Determinación de la actividad antioxidante
se determinó espectrofotométricamente la actividad antioxidante de los extractos de plantas usando el sistema de ABTS de acuerdo con el método de Re y colegas [28]. Brevemente, ABTS catión radical (ABTS • +) mezcla se genera por la oxidación de ABTS 7 mM (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapur) con persulfato de potasio 140 mM (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapur), se incubaron durante 16 h a temperatura ambiente en la oscuridad. La actividad antioxidante se determinó mediante la adición de 0,2 ml de extractos de plantas con 1,8 ml de ABTS + • mezcla de catión radical. Después de incubar la mezcla durante 6 min, se registró la absorbancia a 734 nm. ABTS + • capacidad de captación de radicales libres (%) de los extractos de la planta se calcula en base a la siguiente ecuación: ABTS + • capacidad de captación de radicales libres (%) = [(muestra Abs.control-Abs.test) /Abs. Control] x100. Cuando Abs.control es la absorbancia de la reacción de control (sin extracto de la planta) y la muestra Abs.test es la absorbancia en presencia de un extracto de planta. Los resultados se compararon con la actividad anti-compactación de Trolox (Sigma-Aldrich Pte Ltd, Singapur) y representados como Trolox capacidad antioxidante equivalente por gramo de peso seco (TEAC /g). El ensayo se realizó por triplicado para cada concentración de la muestra a partir de 3 ensayos separados. Cultivo celular
Dos líneas celulares de carcinoma gástrico humano Kato-III (ATCC No. HTB-103) de la American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD, EE.UU.) y NUGC-4 (JCRB0834) de la investigación de la ciencia Banco de Recursos de Salud (Japón Fundación Ciencias de la Salud) se utilizaron para los ensayos in vitro
citotóxicos. El prepucio humano línea celular de fibroblastos Hs27 (ATCC No.1634) se utilizó como control. Ellos fueron cultivadas en RPMI 1640 estéril que contiene 10% (v /v) de suero bovino fetal (Biochrom AG, Berlín) a 37 ° C se suministra con 5% de CO 2 en una incubadora. Las células se cultivaron en matraces de cultivo de tejido estándar y al llegar a 80% de confluencia fueron passaged con una solución de 0,25% de tripsina-EDTA (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapur) cada 3-4 días hasta su uso.
In vitro
ensayo de citotoxicidad
los extractos de plantas se evaluaron su actividad citotóxica frente a líneas celulares NUGC-4 Kato-III y a través del ensayo colorimétrico MTT como se ha descrito por primera vez por Mosmann [29], con modificaciones sugeridas por Denizot y Lang [30]. Las células cultivadas (1 x 10 4 células) en medio completo fueron transferidos en cada pocillo de una placa de piso 96 y después se incubaron a 37 ° C en una atmósfera de aire humidificado enriquecido con 5% (v /v) CO 2 durante 24 h con el fin de dejar que las células se adhieren a la parte inferior de cada pocillo. Las células cultivadas se trataron con el extracto crudo probado (pocillos por triplicado por condición) por la adición de 2 l de diluciones en serie de cada extracto a una concentración de 1,25, 2,5, 5, 10 y 20 mg /ml. Las células se cultivaron a continuación como anteriormente para otro 72 h antes de la adición de 10 l de una solución de 5 mg /mL de ácido 3- (4, 5-dimetiltiazol-2-il) -2, 5-difeniltetrazolio bromuro (MTT) ( Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapur) en cada pocillo. La incubación se continuó durante otras 4 h antes de que se retiró el medio. Se añadió una mezcla de DMSO (150 l) y glicina (25 l) a cada pocillo y se mezcló para asegurar la lisis celular y la disolución de los cristales formasan, antes de medir la absorbancia a 540 nm. Se realizaron tres repeticiones de cada experimento y el porcentaje de conversión de MTT a su derivado formazan para cada pocillo (el crecimiento celular por ciento) se calculó dividiendo la DO a 540 nm de los pocillos con el control basado en la siguiente ecuación: crecimiento celular Porcentaje = [prueba de A540 - A540 cero] × /100 [Control A540 - A540 cero]. Cuando A540 cero = A540 de la solución después de la célula se incubó durante 24 h antes de la adición de extractos de plantas; prueba de A540 = A540 de la solución después de extractos de plantas, además; y el control de A540 = A540 de la solución de extractos de plantas sin adición. Además, para la garantía de no tóxica de extractos de plantas contra las células normales (línea celular de fibroblastos Hs27), una dosis doble (2 veces de IC 50 concentraciones [10 mg /ml]) de los extractos fueron empleadas y evaluados por MTT ensayo. El ensayo se realizó por triplicado para cada concentración de la muestra a partir de 3 ensayos separados.
Mitad concentración inhibitoria máxima (IC50) México La absorbancia obtenida a 540 nm se utilizó para determinar el porcentaje de supervivencia de las células suponiendo que se obtuvo% de supervivencia 100 cuando se trata con disolventes sólo como controles, y que no hay diferencias en la actividad metabólica existían entre las células supervivientes bajo condiciones diferentes. Bajo estos supuestos, el porcentaje de supervivencia de las líneas celulares de cáncer tratadas y células cultivadas normales se calculó según la siguiente fórmula: Porcentaje de supervivencia = (tratado A540 células /control de A540) x 100. La media ± 1 desviación estándar de células (SD) la supervivencia (%) se representó frente a la concentración de extracto de la planta correspondiente y la mejor línea de ajuste se utilizó para derivar la estimación IC 50 el valor de la concentración que podría proporcionar el 50% de la supervivencia celular. México la concentraciones de extractos de plantas dando 50% de concentración inhibitoria (IC 50) se determina a partir de tres experimentos separados. El IC 50 de cada uno de los extractos de plantas se utiliza entonces como la concentración trató a 0 y 3 días contra Kato-III y NUGC-4, que fueron evaluados para la apoptosis usando un microscopio electrónico de transmisión (TEM). El ensayo se realizó por triplicado para cada concentración de la muestra a partir de 3 ensayos separados.
Preparación de la muestra para las células de microscopía electrónica de transmisión
Kato-III (1x10 6 células) y 4-NUGC células (1x10 6 células) tratadas con cada extracto de la planta, así como el control negativo (cultivos no tratados), se realizaron por separado. Brevemente, se enjuagaron con solución de D-Hank (tecnologías de la vida, Bangkok, Tailandia) dos veces, y se entregan en tubos de centrífuga con una espátula de plástico, seguido de centrifugación a 2000 rpm durante 15 min, con el sobrenadante eliminado. El precipitado se fijó en una solución que contiene un 4% de glutaraldehído (Microscopía Electrónica de Ciencias, Bangkok, Tailandia) y 2% de paraformaldehído (Microscopía Electrónica de Ciencias, Bangkok, Tailandia) en 0,1 M tampón fosfato salino (PBS), pH 7,4, a 4 ° C durante 1 h, después se lavó con 0,1 M de PBS para eliminar el fijador. Los especímenes se fijaron posteriormente en tetróxido de osmio al 1% (Microscopía Electrónica de Ciencias, Bangkok, Tailandia) en el mismo tampón durante 30 min, y se deshidrataron en una serie de etanol durante 10 minutos cada uno. Luego se limpiaron con dos cambios de óxido de propileno y se sumergieron en mezclas secuenciales de óxido de propileno y Araldite 502 resina (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapur), en relaciones de 3: 1, 2: 1, 1: 2, y finalmente incrustado en Araldite puro. Las secciones de 1 m se cortaron utilizando un MT-2-Porter Blum ultramicrotomo. Las secciones fueron montadas posteriormente en rejillas de cobre, se seca al aire y contrastada secuencialmente con acetato de 2% de uranilo (Microscopía Electrónica de Ciencias, Bangkok, Tailandia) en alcohol 7% en la oscuridad, y luego se trató con citrato de plomo (Microscopía Electrónica de Ciencias, Bangkok, Tailandia ). Ellos fueron examinadas bajo un microscopio electrónico de transmisión Philips CM 100 que funciona a 80 kV. Análisis estadístico
resultados se expresaron como media ± desviación estándar de repeticiones de 3 ensayos separados. La comparación entre los conjuntos de datos se realizó mediante análisis de varianza de una sola vía (ANOVA), seguido por la prueba t de Student. Todos los análisis estadísticos se realizaron con SPSS19. Las diferencias fueron aceptados como estadísticamente significativas a p <. 0.05
Resultados
contenidos fenólicos totales de extractos de plantas sobre Three plantas comestibles populares de la región noreste de Tailandia (S. gratum
, J. gangetica
y L. flava
) se extrajeron y su contenido de fenoles totales determinó con los resultados que se muestran en la Tabla 2. Entre estos extractos de plantas, se detectó un alto nivel de contenido de fenoles totales en S. gratum
a 149.789 ± 0.381 mg GAE /g. Era 10 pliegues significativamente mayor en el contenido de lo que fue identificado en J. gangetica
y L. flava gratis (16.513 ± 0.130 y 14.334 ± 0.463 mg GAE /g, respectivamente, p Hotel < 0,05). Tabla 2 contenido fenólico total media de extractos de plantas expresa como actividad anti-GAE y la compactación de los extractos de plantas representadas como Planta TEAC
extrae
plenolics totales (mg GAE /g de peso seco) guía
La actividad anti-barrido (TEAC mM /g de peso seco) guía empresas S. gratum gratis (Wight)
149.789 ± 0.381 ±
2,823.521 27.521
J. gangetica L
.
16.513 ± 0.130a
313.141 ± 39.713a
L. flava (L.)
14.334 ± 0.463a
900.845 ± 20.346a, b
Los valores se expresaron como media ± desviación estándar de repeticiones de 3 ensayos separados. ap Hotel < 0,05 frente a S. gratum
,
pb. < 0,05 frente J. gangetica
antioxidantes capacidades de los extractos de plantas
actividades antioxidantes de acetato de etilo extraídos de S. gratum
, J. y L. gangetica
flava
se muestran en la Tabla 2. Los valores equivalentes TEAC para estas plantas fueron significativamente diferentes en orden descendente a partir de S. gratum Hotel > L. flava Hotel > J. gangetica gratis (2,823.521 ± 27.521, 900.845 ± 20.346, 313.141 ± 39.713, respectivamente, p Hotel < 0,05). Notablemente, alrededor de 3-9 pliegues se encontró mayor actividad antioxidante de S. gratum
en comparación con los otros dos extractos de especies. Estos se correlacionaron bien con el contenido total de fenólicos. (Coeficiente de correlación de r 2 = 0,935, Y = 16.64x + 324,5). Inhibición del crecimiento celular

líneas celulares de cáncer gástrico Kato-III y NUGC-4 y la línea celular de fibroblastos humanos (control) fueron expuesto a cada extracto de la planta (concentración de dilución en serie [1.25, 2.5, 5, 10 y 20 mg /ml]), para determinar el efecto inhibidor del crecimiento inducida por la actividad de cada planta. Después de 72 h, las células viables se midieron mediante el ensayo de MTT. Kato-III y NUGC-4 células expuestas a S. gratum
y J. gangetica
extractos dieron como resultado una disminución significativa de células viables de una manera dependiente de la dosis (Figura 1). A 20 mg /ml que todos ellos inducen sobre la muerte de células 50% en las dos líneas celulares de cáncer gástrico. Sin embargo, en 10 mg /ml de los extractos producidos a partir de solamente S. gratum
y J. gangetica
demostraron significativa potente citotoxicidad (p
< 0,05) para inducir la muerte celular en 70% en Kato-III y NUGC-4 cuando se compara con L. flava gratis (Figura 2). Además, estos dos extractos de plantas no mostraron ningún efecto en la línea celular de fibroblastos de prepucio humano normal (Figura 2). Por el contrario, 's efectos disminuidos L. flava
. Resultando en alrededor de 25% de muerte celular, sin diferencia significativa entre células de cáncer gástrico y de células de fibroblasto normal (Figura 2). Figura 1 Estudios de respuesta a la dosis de la planta extrae en dos líneas celulares de cáncer gástrico: (A) Kato-III y (B) NUGC-4. Las células se trataron con diversas concentraciones (0, 1,25, 2,5, 5, 10 y 20 mg /ml) de S. gratum
, J. gangetica
y L. flava
para 72 h. El efecto antiproliferativo se midió mediante el ensayo de MTT. Los resultados se expresaron como la media ± SD de tres experimentos independientes.
Figura 2 prueba de citotoxicidad contra Kato-III, NUGC-4 y Hs-27 después se incubaron con 10 mg /ml de acetato de etilo se extrajo de S. gratum, J. gangetica y L. flava. El efecto antiproliferativo se midió mediante el ensayo de MTT. Los resultados se expresaron como la media ± SD de tres experimentos independientes. Los resultados mostraron ambas S. y J. gratum
gangetica
inhibió el crecimiento celular hasta cáncer gástrico 70% sin destruir las células de fibroblastos normales Hs 27 (diferencia significativa [p * Hotel < 0,05]). Esto contrasta con el efecto de L. flava
, lo que demuestra una cantidad disminuida de crecimiento celular, no sólo en células de cáncer gástrico, sino también en células de fibroblastos normales.
El IC 50 (g /ml valores) se resumen en la Figura 3. el J. gangetica
extracto tenía el más bajo IC 50 valores de 5,45 g /ml y 5,86 g /ml para Kato-III y NUGC-4, respectivamente. Del mismo modo, el extracto de S. gratum
mostró una mayor citotoxicidad para las líneas celulares de cáncer con CI 50 valores en el 7,24 mg /ml - 11,96 mg gama /ml, mientras que el más alto CI 50 fue a partir de L . flava
extraer 17.20 ug /mL y 14,64 mg /ml de Kato-III y NUGC-4, respectivamente. Esto fue significativamente diferente (p
< 0,05) en comparación con los otros dos extractos de plantas (Figura 3). Figura 3 citotoxicidad comparativo de IC50 de S. gratum, J. y L. gangetica flava en Kato-III, NUGC-4 y Hs27 mediante el ensayo de MTT. Los resultados se expresaron como la media ± SD de tres experimentos independientes (* p
< 0,05) y en comparación con las células tratadas con Hs27. J. gangetica
mostró la IC50 más bajo, mientras que la más alta fue de L. flava
diferencias significativas (p < 0,05). Gratum entre S. y L.
flava
se observaron entre ambos célula de cáncer líneas.
alteraciones ultraestructura de Kato-III y líneas celulares NUGC-4 inducida por S. gratum, J. y L. gangetica
flava
con el fin de determinar si la inhibición del crecimiento por extractos de plantas estaban asociados con la apoptosis, se examinaron adicionalmente los cambios morfológicos de NUGC-4 líneas celulares de cáncer gástrico Kato-III y bajo el microscopio electrónico de transmisión. Las células de control estructuras nucleares aparecieron intacta (Figura 4A: Kato-III, E: NUGC-4), mientras que las células tratadas con los de los extractos de plantas demostraron cambios ultraestructurales de varias maneras (figuras 4B-4D: Kato-III, y 4 F-4H: NUGC-4, respectivamente). En detalle, las células Kato-III tratados con S. gratum
muestra un núcleo condensado con condensación de la cromatina, formación de cuerpos apoptóticos (Figura 4B), y la dispersión de los residuos granular. Mientras que para las células Kato-III tratados J. gangetica
, éstos condensación de la cromatina que se muestra, unidas a la membrana cuerpos apoptóticos y numerosas vesículas (Figura 4C). Mientras que los cambios morfológicos que se encuentran en L. flava
células tratadas Kato-III, que se muestra núcleo contraído con la condensación de la cromatina y numerosas vesículas heterogéneos, incluyendo amplias características de vacuolización intracelular (Figura 4D). micrografías de electrones Figura 4 comparan los efectos de S. gratum, J. y L. gangetica flava en Kato-III (A-D) y NUGC-4 (E-H) 3 días después del tratamiento. Barra de escala 2 micras. A) Si no se trata de células Kato-III muestra muy pocas vesículas (v), una forma redondeada y no uniforme y la cromatina dispersa a lo largo del núcleo (N). B) S. gratum
tratada celular Kato-III muestra la cromatina condensada en el núcleo (N), de cuerpos apoptóticos formación (punta de flecha), y muchas vesículas. La célula está dispersando los desechos como granular (*). célula C) Kato-III tratado con J. gangetica
. Esta celda muestra condensación de la cromatina alrededor de la periferia del núcleo, unidas a la membrana orgánulos (flecha) y numerosas vacuolas (v). D) de células Kato-III después de la exposición a L. flava
muestra un gran número de vacuolas autofágicas (v), y un núcleo contracción (N) con la cromatina condensada. E) no tratada NUGC-4 de células no muestra la condensación de la cromatina en el núcleo (N) y una bastante uniforme forma redondeada. F) NUGC-4 de células tratadas con S. gratum
muestra la cromatina de núcleos de condensación, numerosas vesículas (v) y muchos orgánulos unidos a la membrana (flecha). G) de células NUGC-4 después de la exposición a J. gangetica
muestra una cromatina condensada núcleo, membrana orgánulo unido (flecha) y vesículas (v). H) Los cambios morfológicos observados en L. flava
tratada celular NUGC-4 estaban compuestos con la condensación de la cromatina en el núcleo (N), y muchas vesículas heterogéneas de tamaño variable (v).
S. gratum
tratados NUGC-4 líneas celulares exhibieron la apoptosis con la compactación del núcleo y la producción de cuerpos apoptóticos unidos a la membrana y numerosas vesículas (Figura 4F). Sin embargo, en comparación, NUGC-4 células tratadas con J. gangetica
, producidas las primeras etapas de la apoptosis con condensación de la cromatina y numerosas vesículas (Figura 4G). Mientras que las células tratadas con L. flava
mostraban núcleos de condensación de la cromatina periférica con numerosas vesículas heterogéneos y formación de vesículas (Figura 4H).
Discusión
observaciones fortuitos han demostrado que las plantas, hierbas y tés tradicionales pueden aprovecharse para ganar potencialmente la lucha en la lucha contra el cáncer; un problema de salud en todo el mundo. Sin embargo, no es hasta que estos fitoquímicos son probados in vitro e in vivo
Windows que podemos saber con certeza qué tan lejos pueden ir en mantener la enfermedad bajo control [31-34]. En Tailandia, el cáncer gástrico es un flagelo, sin embargo, la incidencia de cáncer gástrico inusualmente bajas en la parte noreste de Tailandia es de considerable interés. El hecho de que S. gratum
, J. y L. gangetica
flava ¿Cuáles son autóctonas de la zona y forman una parte importante de la rutina suplemento dietético en la población local, por lo que decidió investigar si estos plantas populares son candidatos potenciales para el control seguro y fiable de cáncer gástrico. Aunque hay muchos informes para aclarar sus actividades antioxidantes, este estudio proporciona la primera evidencia de sus potentes efectos citotóxicos y la inducción de apoptosis en base a características ultrastrutural sobre el cáncer gástrico.
Estas plantas fueron en primer lugar, se extrajo con acetato de etilo y después se analizan para sus contenidos fenólicos, utilizando el método de Folin-Ciocalteu.

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