Antioxidant aktivitet og ultrastrukturelle ændringer i gastrisk cancer cellelinjer induceret af Northeastern Thai spiselige folkemusik plante extracts

antioxidant aktivitet og ultrastrukturelle ændringer i gastrisk cancer cellelinjer induceret af Northeastern Thai spiselige folkemusik planteekstrakter
Abstract
Baggrund
phytochemical produkter har en kritisk rolle i lægemiddelopdagelsesprocessen. Denne lovende mulighed, men nødvendiggør behovet for at bekræfte deres videnskabelige kontrol før brug. Derfor denne undersøgelse har til formål at evaluere (1) antioxidant aktivitet, (2) cytotoksicitet potentiale, og (3) virkningen på ultrastrukturelle ændring i gastrisk cancer cellelinjer gennem udsættelse for brøkdele af tre lokale nordøstlige thailandske spiselige planter.
Metoder
Planter, Syzygium gratum, Justicia gangetica
og Limnocharis flava
ekstraheres med ethylacetat, og hver rå ekstrakt analyseret for deres samlede fenoler indhold ved Folin-Ciocalteu metoden. Deres antioxidant aktivitet blev vurderet ved hjælp af ABTS-systemet. Ekstrakterne blev derefter analyseret for cytotoksicitet på to gastriske cancercellelinier Kato-III og NUGC-4, og sammenlignet med HS27 fibroblaster som en kontrol under anvendelse af MTT-assayet. Den cellelevedygtighed (%), blev IC 50 værdier, samt de ultrastrukturelle ændringer evalueret efter behandling med envejs variansanalyse (ANOVA).
Resultater Salg De samlede phenoliske værdier af Ethylacetatekstrakterne var godt korreleret med antioxidant kapacitet, med ekstraheret produkt fra S. gratum
vise det højeste niveau af antioxidant aktivitet (en 10 gange større respons) i løbet J. gangetica
og L. flava
hhv. Eksponering af S. gratum
og J. gangetica
uddragene normale cellelinier (Hs27) resulterede i marginale cytotoksicitet effekter. Men gennem en dosisafhængig assay S. gratum
og J. gangetica
ekstrakter produceret cytotoxicological effekter i lidt over 75 procent af Kato-III og NUGC-4 cellelinjer. Endvidere blev apoptotiske karakteristik vises under TEM i begge kræft cellelinjer med disse to ekstrakter, mens karakteristika autofagi blev fundet i cellelinier efter post udsættelse for ekstrakter fra L. flava
.
Konklusioner
Fra disse tre planter, S. gratum
havde de højeste indhold phenolforbindelser og antioxidant kapacitet. Alle af dem viste sig at indeholde forbindelse (r) med cytotoksicitet in vitro
på cancerceller, men ikke på normale cellelinier som løst i vævskultur og ultrastrukturelle analyse. Dette er den første rapport, der viser effekten på cellulære ændringer som apoptose af en ethylacetat ekstrakt af S. gratum
og J. gangetica.
Yderligere undersøgelser er nu fokuseret på individuelle isolater og deres funktion, prioritering på S. gratum
og J. gangetica
for udvikling af nye lægemidler og kombattanter mod kræft.
Nøgleord
mavekræft ultrastruktur Cell cytotoksicitet TEM Baggrund
mavekræft er den fjerde hyppigst diagnosticeret kræft og næstmest hyppigste årsag til kræft dødsfald i verden [1]. Det blev anslået, at der var omkring 1 million nye gastrisk kræfttilfælde er optaget i 2008, men af ​​dem, blev størstedelen (713.900) rapporteret i udviklingslandene, med de højeste forekomster for mavekræft fundet i Østasien, i Central- og Østeuropa, og Sydamerika [1]. På trods af den tilsyneladende intensivering af sygdommen, tyder på, at de samlede gastrisk kræft satser er bucking tendensen, med et fald i rapporter om gastrisk kræft findes i de fleste dele af den vestlige verden [2].
Desværre mest gastrisk kræftpatienter er ofte diagnosticeret på et fremskredent stadium, når en kur er ikke muligt, og behandling er palliativ med den hensigt at forbedre kvaliteten og mængden af ​​liv. Selv om der er retningslinjer for behandling for mavekræft, de fem-års overlevelse er mindre end 50% [3, 4]; en sats, der er tydeligvis ikke opmuntrende til enten onkologer eller kræftpatienter. Derudover bivirkninger fra nuværende behandlinger dvs. kirurgi, kemoterapi og strålebehandling er ikke tilfredsstillende. Så er der behov målrettede behandlinger for at mindske bivirkninger og forbedre de kliniske resultater af patienter. Derfor er forskere i det nye årtusinde at betale meget mere vægt på udviklingen af ​​ikke kun nye terapeutiske retningslinjer, og tidlige forebyggelsesstrategier for mavekræft [5, 6], men også på at finde nye og målrette specifikke, terapeutiske midler så godt.
i løbet af de sidste to årtier, har fytokemiske produkter spillet en dominerende rolle i opdagelsen af ​​nye lægemidler til at målrette kræft [7], med over 60% af tiden anvendte anticancermidler stammer fra naturlige kilder [8]. Eksempler på verdensplan klinisk nyttige antitumormidler afledt fra vilde planter omfatter taxol, vinblastin, vincristin, camptothecinderivater, topotecan (en hvede græs), havtorn, lingzhi, irinotecan, og etoposid, som er afledt af epipodophyllotoxin [9, 10]. Andre er afledt fra frugter og grøntsager; ikke begrænset til at omfatte curcumin (gurkemeje), genistein (sojabønne), catechins (grøn te) [7], men også urter som vinca-alkaloider, podophyllotoxin, berberine, citroner græs olier, flavonoid og camptothecin; en anden gruppe af lovende anticancermidler [11]. Selv om disse anti-cancer midler er blevet anvendt til målrettede mekanisme-baserede veje, er deres effektive manipulation af ydre og de iboende apoptoseveje stadig at blive undersøgt [12-14]. Paclitaxel isolere fra barken af ​​Pacific taks, Taxus brevifolia
er en fytokemiske, der viser løfte. Det er et lægemiddel godkendt fra FDA, der skal anvendes til behandling af AIDS-relateret Kaposi sarcom, brystcancer, ikke-småcellet lungecancer og ovariecancer. Dens primære cellulære virkning er at forårsage unormal stabilisering af den dynamiske mikrotubulus polymerisation, hvilket fører til svigt af celledeling resulterer i apoptose [15-17]. Men paclitaxel også blive undersøgt som en alternativ behandling for andre former for kræft, herunder mavekræft. Det er i øjeblikket i kliniske forsøg fase III [18, 19]. Uanset om de er godkendt eller ej, den brede nå støtte og fortsættelse af studier af planteekstrakter med konsekvenser i mavekræft behandling er vejledende for den fortsatte rolle, naturlige produkter spille i drug discovery processen.
Når man overvejer en epidemiologi undersøgelse af nydiagnosticerede tilfælde mavekræft i Thailand, har meget lavere forekomst blevet observeret i det nordøstlige region [20]. Selvom forekomsten af ​​Helicobacter pylori
infektioner, er ikke forskellige i den nordlige del af Thailand, ingen geografisk faktor (fx plateau, bjergrige område eller jungle terræn) var anderledes enten [21]. Derfor skal der være noget andet centralt til befolkningen i det nordøstlige region, der reducerer den samlede forekomst af mavekræft. Under alle, men udelukket genetik og miljømæssige faktorer, er det blevet foreslået, at spiselige folkemusik planter kostvaner, der normalt forbruges i denne region, kan holde svaret på denne uoverensstemmelse. Denne nye data, og dette lovende bly i høj grad udfordrer os til at udforske den mystiske fænomen, der er, om de fytokemiske forbindelser inden nordøstlige thailandske spiselige folkemusik planter har kemoforebyggende eller cytotoksiske potentiale til at bekæmpe mavekræft, eller andre egenskaber. Af denne grund er denne undersøgelse derfor blev foretaget for at evaluere cytotoksiciteten potentiale i disse lokale spiselige planter. Af særlig interesse, planter S. gratum
, J. gangetica
og L. flava
, blev udvalgt på grundlag af epidemiologiske data, som tyder på, at de er de mest regelmæssigt spiselige folkemusik grøntsager i det nordøstlige region.
Vi postulerer, at disse planter kunne holde inden skjulte egenskaber, der kunne udnyttes til at bekæmpe denne kræft, og den nuværende undersøgelse søger at vurdere deres potentiale. Vi vurderer de rå fenolbaserede ekstrakter af disse planter, og demonstrere høj cellulær apoptotiske og cytotoksiske effekter i to almindelige og sammenlignende gastrisk cancer cellelinjer, Kato-III og NUGC-4.
Metoder
Plant materialer
Tre lokale spiselige folkemusik planter; S. gratum
blev J. gangetica
og L. flava
(tabel 1) købt fra tre forskellige lokale markeder i Khon Kaen provins i den nordøstlige del af Thailand i okt til dec 2008. Disse anlæg var vælges baseret på ethnobotanical oplysninger [22-26] og epidemiologiske data som beskrevet ovenfor. Korrekt taksonomisk identifikation af plantearter, der anvendes til dette studie blev overvåget af botanikere fra Institut for Botanik og Farmakologi, Det Farmaceutiske Fakultet, Khon Kaen Universitet, Thailand.Table 1 Navnene på tre planteekstrakter og andre forskningsinstitutioner referencer, terapeutisk brug i thailandsk traditionelle medicin screenet i denne undersøgelse
Arter [Voucher nummer]
Familie (Fællesnavn engelsk /Thai)
Rapporterede store bestanddele
Terapeutisk brug i Thai traditionel medicin

Spiselige del
Ref.
Syzygium gratum
(Wight) SN Mitra var. Gratum
[Ch. Laongpol 6] a, c
Myrtaceae (Eugenia /Phak Mek, Samet chun)
endnu klart fastlagt i den kemiske struktur, men viste sig at være stærk på antioxidanter og forebyggelse af oxidative og nitrosative spændinger
Behandling af dyspepsi og fordøjelsesbesvær
Leaves
22,23
Justicia gangetica
L. [TK-PSKKU-0066] b
Acanthaceae (kinesisk violet, tropisk primula /Accepteret navn: Asystasia gangetica
)
5,11-epoxymegastigmane glucosid (asysgangoside), salidroside, benzyl β-d-glucopyranosid, (6S Salg, 9R
) -roseoside, ajugol, apigenin 7-O
-β-d- glucopyranosid, apigenin 7-O
-neohesperidoside, og apigenin-7-O
-β-d-glucopyranosyl (1 → 6) -β-d-glucopyranosid
Behandling af mavesmerter, maveorm, anti- astma
Blade
24,25
Limnocharis flava
L. Buchenau [Patt. 173] c
Limnocharitaceae (gul velvetleaf, gul Burr hoved /Talabhat reusi)
Ikke bestemt
Appetizer
Stem
26
aVoucher prøver deponeret på Forest Herbarium (BKF), Institut for National Park, Wildlife og Plant Conservation, Ministeriet for Natural Resource, bden herbarium af Farmaceutiske Fakultet, Khon Kaen Universitet og C det Prince of Songkla University herbarium (PSU), Biologisk Institut, det Naturvidenskabelige Fakultet, Prince of Songkla University, Thailand .
Fremstilling af planteekstrakter Salg spiselige enkelte plantesort (tabel 1) blev skyllet med sterilt destilleret vand for at fjerne detritus og tørret i varmluftsovn ved 50 ° C i 7 dage. Når tørret, blev plantedele derefter skåret i små stykker og formalet til et fint pulver under anvendelse af morter og støder. Hver formalet pulver plantemateriale blev derefter nedsænket med overskud af ethylacetat opløsningsmiddel (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore) i en ekstraktion flaske. De ethylacetatblandinger blev derefter inkuberet på en rysteinkubator ved stuetemperatur i 72 timer. Efter denne proces blev supernatanterne derefter overført til en ny beholder, og ekstraktionsprocessen med ethylacetat blev gentaget tre gange, før supernatanterne af disse tredobbelte ekstraktioner blev kombineret. Disse blev derefter filtreret gennem Whatman filtrerpapir No.1 og inddampet ved en rotationsfordamper. Disse eksempler ekstrakter blev derefter anvendt i yderligere forsøg.
Bestemmelse af totalt phenolforbindelse
Total phenolforbindelser i planteekstrakter blev bestemt ved Folin-Ciocalteu-metoden som beskrevet af Sachindra [27]. Kort sagt, 0,2 ml hver plante-ekstrakt opløst i 50% DMSO (Santa Cruz Biotechnology Inc., Bangkok, Thailand) oxideret med 1,0 ml 10-fold-fortyndet Folin-Ciocalteu reagens (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore) og neutraliseret med 0,8 ml 6% natriumcarbonat-opløsning (Sigma-Aldrich Pte Ltd-, Singapore). Efter 1 times inkubering blev absorbansen af ​​opløsningen målt ved 764 nm, og resultaterne blev repræsenteret milligram gallussyre ækvivalent per gram tørvægt (mg GAE /g). Assayet blev udført i tre eksemplarer for hver koncentration prøve fra 3 adskilte assays.
Bestemmelse af antioxidant aktivitet
Antioxidant aktivitet af planteekstrakter blev bestemt spektrofotometrisk under anvendelse af ABTS-systemet ifølge fremgangsmåden ifølge Re og kolleger [28]. Kort fortalt ABTS radikal kation (ABTS • +) blanding blev genereret ved oxidation af 7 mM ABTS (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore) med 140 mM kalium persulfat (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore), inkuberes i 16 timer ved stuetemperatur i mørke. Antioxidant aktivitet blev bestemt ved at tilsætte 0,2 ml planteekstrakter med 1,8 ml ABTS • + radikalkation blanding. Efter inkubering af blandingen i 6 min, blev absorbansen ved 734 nm registreres. ABTS • + radikaler evne (%) af planteekstrakter blev beregnet på grundlag af følgende ligning: ABTS • + radikaler evne (%) = [(Abs.control-Abs.test prøve) /Abs. kontrol] x100. Hvor Abs.control er absorbansen af ​​kontrol reaktion (uden planteekstrakt) og Abs.test prøve er absorbansen i nærvær af et planteekstrakt. Resultaterne blev derefter sammenlignet med den anti-fjernende aktivitet af Trolox (Sigma-Aldrich Pte Ltd-, Singapore) og repræsenteret som Trolox tilsvarende antioxidant kapacitet per gram tørvægt (TEAC /g). Assayet blev udført i tre eksemplarer for hver koncentration prøve fra 3 adskilte assays.
Cellekultur
To humane gastrisk carcinoma cellelinier Kato-III (ATCC nr HTB-103) fra American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD, USA) og NUGC-4 (JCRB0834) fra Health Science Research Resources Bank (Japan Health Sciences Foundation) blev anvendt til in vitro
cytotoksiske analyser. Den humane forhudsfibroblast cellelinie Hs27 (ATCC No.1634) blev anvendt som kontrol. De blev dyrket i sterilt RPMI 1640 indeholdende 10% (vol /vol) føtalt bovint serum (Biochrom AG, Berlin) ved 37 ° C forsynet med 5% CO 2 i en inkubator. Celler blev dyrket i standard vævskulturkolber og efter at have nået 80% konfluens blev passeret med en opløsning af 0,25% trypsin-EDTA (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore) hver 3-4 dage indtil anvendelse. Salg In vitro
cytotoksicitet assay
planteekstrakter blev vurderet dets cytotoksiske aktivitet mod Kato-III og NUGC-4 cellelinjer via MTT kolorimetrisk analyse som først beskrevet af Mosmann [29] med modifikationer foreslået af Denizot og Lang [30]. Dyrkede celler (1 x 10 4 celler) i komplette medier blev overført til hver brønd af en flad plade med 96 brønde og derefter inkuberet ved 37 ° C i en fugtig atmosfære af luft beriget med 5% (v /v) CO 2 i 24 timer for at lade cellerne vedhæfte til bunden af ​​hver brønd. De dyrkede celler blev derefter behandlet med den afprøvede rå ekstrakt (tre brønde pr betingelse) ved tilsætning af 2 pi seriefortyndinger af hver ekstrakt ved en koncentration på 1,25, 2,5, 5, 10 og 20 ug /ml. Cellerne blev derefter dyrket som ovenfor i yderligere 72 timer før tilsætning af 10 pi af en 5 mg /ml opløsning af 3- (4, 5-dimethylthiazol-2-yl) -2, 5-diphenyltetrazoliumbromid (MTT) ( Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore) i hver brønd. Inkubationen blev fortsat i yderligere 4 timer før mediet blev fjernet. En blanding af DMSO (150 pi) og glycin (25 pi) blev tilsat til hver brønd og blandet for at sikre cellelyse og opløsning af de formasan krystaller, før absorbansen ved 540 nm blev målt. Tre gentagelser af hvert forsøg blev udført, og procentdelen af ​​MTT omdannelse til dets formazanderivat for hver brønd (procent cellevækst) blev beregnet ved at dividere OD ved 540 nm af brøndene med kontrollen baseret på den følgende ligning: Procent cellevækst = [A540 test - A540 nul] x 100 /[A540 kontrol - A540 nul]. Hvor A540 nul = A540 af opløsning efter cellen blev inkuberet i 24 timer før tilsætning af planteekstrakter; A540 test = A540 af opløsning efter planteekstrakter tilsætning; og A540 kontrol = A540 opløsning uden planteekstrakter tilsætning. Hertil kommer, for ikke-toksisk sikkerhed for planteekstrakter mod normale celler (fibroblast cellelinie Hs27), en dobbelt dosis (2 gange af IC 50 koncentrationer [10 ug /ml]) af ekstrakterne blev anvendt og vurderet ved MTT assay. Assayet blev udført i tre eksemplarer for hver koncentration prøve fra 3 adskilte assays.
Halvmaksimal inhiberende koncentration (IC50)
opnåede absorbans ved 540 nm blev anvendt til at bestemme procent af celleoverlevelse antages, at 100% overlevelse blev opnået når de behandles med opløsningsmidler kun som kontrol, og at der ikke forskelle i metaboliske aktivitet eksisterede mellem overlevende celler under forskellige betingelser. Under disse antagelser, blev den procentvise overlevelse af de behandlede cancercellelinier og normale dyrkede celler beregnes efter følgende formel: Procent af overlevelse = (A540 behandlede celler /A540-kontrol) x 100. Middelværdien ± 1 standardafvigelse (SD) celle overlevelse (%) blev plottet mod den tilsvarende plante-ekstrakt koncentration og den bedste pasform linje blev anvendt til at udlede den estimerede IC 50 værdi fra den koncentration, der kan give 50% af celle overlevelse.
koncentrationerne af planteekstrakter giver 50% hæmmende koncentration (IC 50) blev bestemt ud fra tre separate forsøg. IC 50 af hver plante ekstrakter blev derefter anvendt som den behandlede koncentration på 0 og 3 dage mod Kato-III og NUGC-4, som blev vurderet for apoptose ved anvendelse af et transmissionselektronmikroskopi (TEM). Analysen blev udført i tre eksemplarer for hver koncentration prøve fra 3 adskilte analyser.
Prøve forberedelse til transmissions elektron mikroskopi
Kato-III-celler (1x10 6 celler) og NUGC-4-celler (1x10 6 celler) behandlet med hver plante ekstrakt samt den negative kontrol (ubehandlede kulturer), blev udført separat. Kort fortalt blev de skyllet med D-Hanks opløsning (Life Technologies, Bangkok, Thailand) to gange, og afgives til centrifugerør med en plastik skraber, efterfulgt af centrifugering ved 2000 rpm i 15 min, med supernatanten fjernet. Bundfaldet blev fikseret i en opløsning indeholdende 4% glutaraldehyd (Electron Microscopy Sciences, Bangkok, Thailand) og 2% paraformaldehyd (Electron Microscopy Sciences, Bangkok, Thailand) i 0,1 M phosphatbuffer saltvand (PBS), pH 7,4, ved 4 ° C i 1 time, derefter vasket med 0,1 M PBS for at fjerne fikseringsmidlet. Prøver blev efterfikseret i 1% osmiumtetroxid (Electron Microscopy Sciences, Bangkok, Thailand) i den samme buffer i 30 minutter, og dehydreres i en gradueret ethanolserie i 10 minutter hver. De blev derefter blokerede med to skift af propylenoxid og nedsænket i sekventielle blandinger af propylenoxid og Araldite 502 harpiks (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore), i forhold på 3: 1, 2: 1, 1: 2, og endelig indlejret i ren Araldite. Dele af 1 um blev skåret ved hjælp af en MT-2 Porter-Blum ultramikrotom. Sektionerne blev efterfølgende monteret på kobbergitre, lufttørret og kontrast i rækkefølge med 2% uranylacetat (Electron Microscopy Sciences, Bangkok, Thailand) i 7% alkohol i mørke, og derefter behandlet med bly citrat (Electron Microscopy Sciences, Bangkok, Thailand ). De blev undersøgt under et Philips CM 100 transmissionselektromikroskop arbejder ved 80 kV.
Statistiske analyser
Resultater blev udtrykt som middelværdi ± SD af replikater fra 3 adskilte assays. Sammenligning mellem datasæt blev udført under anvendelse envejs variansanalyse (ANOVA) efterfulgt af t-test. Alle statistiske analyser blev udført ved anvendelse SPSS19. Forskelle blev accepteret som statistisk signifikant ved p. ≪ 0,05
Resultater
Total phenol indhold af planter ekstrakter
Tre spiselige folkemusik planter fra Northeastern region Thailand (S. gratum
, J. gangetica
og L. flava
) blev udtrukket, og deres samlede fenol indhold bestemmes med resultaterne vist i tabel 2. Blandt disse planteekstrakter, det højeste niveau af total phenol indhold blev påvist i S. gratum dele på 149.789 ± 0,381 mg GAE /g. Det var 10 folder signifikant større i indhold end der blev identificeret i J. gangetica
og L. flava
(16,513 ± 0,130 og 14,334 ± 0,463 mg GAE /g, s
< 0,05). tabel 2 gennemsnitlige totale indhold af planteekstrakter phenol udtrykt som GAE og anti-fjernelsesaktivitet af planteekstrakter repræsenteret TEAC
planteekstrakter
Total plenolics (mg GAE /g tørvægt)

Anti-fjernelsesaktivitet (mM TEAC /g tørvægt)
S. gratum
(Wight)
149,789 ± 0,381
2,823.521 ± 27,521
J. gangetica L
.
16,513 ± 0.130a
313,141 ± 39.713a
L. flava (L.)
14,334 ± 0.463a
900,845 ± 20.346a, b
Værdier blev udtrykt som middelværdi ± SD af replikater fra 3 adskilte assays. ap
< 0,05 VS S. gratum
, bp
. < 0,05 VS J. gangetica
Antioxidant kapacitet planteekstrakter
Antioxidant aktiviteter ethylacetat udvundet af S. gratum
, J. gangetica
og L. flava
er vist i tabel 2. TEAC tilsvarende værdier for disse anlæg var signifikant forskellig i faldende rækkefølge fra S. gratum
> L. flava
> J. gangetica
(2,823.521 ± 27,521, 900,845 ± 20,346, 313,141 ± 39,713 henholdsvis p
< 0,05). Mærkbart, omkring 3-9 folder højere antioxidant aktivitet af S. gratum
blev fundet i forhold til de to andre arter ekstrakter. Disse blev korrelerede godt med samlede phenoliske indhold. (Korrelationskoefficient på R 2 = 0,935, Y = 16.64x + 324,5).
Cell væksthæmning
mavekræft cellelinjer Kato-III og NUGC-4 og human fibroblast cellelinje (kontrol) var udsat for hver plante ekstrakt (seriefortynding koncentration [1,25, 2,5, 5, 10 og 20 ug /ml]), at bestemme den vækstinhiberende aktivitet virkning induceret af hver plante. Efter 72 timer blev levedygtige celler målt ved MTT-assayet. Kato-III og NUGC-4-celler udsat for S. gratum
og J. gangetica
ekstrakter resulterede i et signifikant fald i levedygtige celler på en dosisafhængig måde (figur 1). Ved 20 ug /mL de alle induceret over 50% celledød både gastriske cancercellelinier. Men på 10 ug /ml ekstrakterne er fremstillet af kun S. gratum
og J. gangetica
viste signifikant potent cytotoksicitet (p
< 0,05) for at fremkalde over 70% celledød i Kato-III og NUGC-4, når den sammenlignes med L. flava
(figur 2). Desuden viste disse to planteekstrakter ingen effekt på normal human forhud fibroblast cellelinje (figur 2). I modsætning hertil L. flava
's virkninger formindsket. Resulterer i omkring 25% af celledød, med ingen signifikant forskel mellem gastriske cancerceller og normale fibroblast celle (figur 2). Figur 1 dosisreaktionsundersøgelser af planteekstrakter på to gastriske cancercellelinier: (A) Kato-III og (B) NUGC-4. Cellerne blev behandlet med forskellige koncentrationer (0, 1,25, 2,5, 5, 10 og 20 ug /ml) af S. gratum
, J. gangetica
og L. flava
i 72 timer. Den antiproliferative virkning blev målt ved MTT-assayet. Resultater blev udtrykt som middel ± SD fra tre uafhængige forsøg.
Figur 2 cytotoksicitetstesten mod Kato-III, NUGC-4 og Hs-27 efter inkuberet med 10 pg /ml ethylacetat ekstraheret S. gratum, J. gangetica og L. flava. Den antiproliferative virkning blev målt ved MTT-assayet. Resultater blev udtrykt som middel ± SD fra tre uafhængige eksperimenter. Resultaterne viste både S. gratum
og J. gangetica
stærkt hæmmet op til 70% gastrisk cancercellevækst, mens ikke ødelægge normale fibroblastceller Hs 27 (signifikant forskel [* p
< 0,05]). Dette kontrasteres af virkningen af ​​L. flava
, som viste en formindsket mængde af cellevækst, ikke kun i gastriske kræftceller, men også på normale fibroblastceller samt.
IC 50 (ug /ml ) værdier er opsummeret i figur 3. J. gangetica
ekstrakt havde den laveste IC 50 værdier på 5,45 ug /ml og 5,86 pg /ml for Kato-III og NUGC-4. Tilsvarende S. gratum
ekstrakt viste højere cytotoksicitet til kræft cellelinjer med IC 50 værdier i 7,24 mikrogram /ml - 11,96 mg /ml interval, mens den højeste IC 50 var fra L . flava
udtrække 17.20 ug /ml og 14,64 pg /ml for Kato-III og NUGC-4. Dette var signifikant forskellige (p
< 0,05) sammenlignet med de to andre planteekstrakter (figur 3). Figur 3 Sammenlignende cytotoksicitet IC50 på S. gratum, J. gangetica og L. flava på Kato-III, NUGC-4 og Hs27 ved MTT-assayet. Resultater blev udtrykt som middel ± SD fra tre uafhængige eksperimenter (* p
< 0,05) og sammenlignet med Hs27-behandlede celler. J. gangetica
viste laveste IC50, mens den højeste var fra L. flava
Signifikante forskelle (p < 0,05). Mellem S. gratum
og L. flava
blev observeret mellem både kræftcellen linjer.
ultrastruktur ændringer af Kato-III og NUGC-4 cellelinjer induceret af S. gratum, J. gangetica
og L. flava
for at afgøre, om væksthæmning af planteekstrakter var forbundet med apoptose, vi undersøgte yderligere de morfologiske ændringer i Kato-III og NUGC-4 gastriske cancercellelinier under transmission elektronmikroskop. Kontrolcellerne nukleare strukturer optrådte intakt (figur 4A: Kato-III, E: NUGC-4), mens de celler der var behandlet med specifikationerne for de planteekstrakter demonstrerede ultrastrukturelle ændringer i flere måder (figur 4B-4D: Kato-III, og 4 F-4H: NUGC-4, henholdsvis). I detaljer Kato-III-celler behandlet med S. gratum
vises en kondenseret kerne med chromatinkondensering, apoptotisk legemers dannelse (figur 4B), og dispergering granulære debris. Mens for Kato-III celler behandlet J. gangetica
, disse viste kromatin kondensering, membranbundne apoptotiske legemer og talrige vesikler (Figur 4C). Ud fra følgende betragtninger morfologiske ændringer findes i L. flava
behandlet Kato-III celler, vises indskrumpet kerne med chromatinkondensation og talrige heterogene vesikler, herunder omfattende funktioner af intracellulære vakuolisering (figur 4D). Figur 4 Elektronmikrografer sammenlignede virkningerne af S. gratum, J. gangetica og L. flava på Kato-III (A-D) og NUGC-4 (E-H) 3 dage efter behandlingen. Målestokken 2 um. A) Ubehandlet Kato-III celle viser meget få vesikler (v), en temmelig ensartet afrundede form og chromatin spredt i hele kernen (N). B) S. gratum
behandlet Kato-III celle viser kondenseret kromatin i kernen (N), apoptotisk organ formation (pilespids) og mange vesikler. Cellen dispergere som granulært debris (*). C) Kato-III celle behandlet med J. gangetica
. Denne celle viser chromatinkondensering omkring periferien af ​​kernen, membranbundne organeller (pil) og talrige vakuoler (v). D) Kato-III cellen efter eksponering for L. flava
viser et stort antal autophagic vakuoler (v), og en skrumpende kerne (N) med kondenseret kromatin. E) Ubehandlet NUGC-4 celle viser ingen kondensering af kromatin i kernen (N) og en temmelig ensartet afrundet facon. F) NUGC-4 celle behandlet med S. gratum
viser chromatinkondensering kerne, talrige vesikler (v) og mange membranbundne organeller (pil). G) NUGC-4 celle efter udsættelse for J. gangetica
viser en kerne kondenseret kromatin, membranbundet organel (pil) og vesikler (v). H) Morfologiske ændringer, der observeres i L. flava
behandlet NUGC-4 celle bestod med chromatinkondensering i kernen (N), og mange heterogene vesikler af varierende størrelse (v).
S. gratum
behandlet NUGC-4 cellelinjer udviste apoptose med komprimering kerne og produktion af membranbundne apoptotiske legemer og talrige vesikler (Figur 4F). Men i sammenligning NUGC-4-celler behandlet med J. gangetica
, produceret tidlige stadier af apoptose med chromatinkondensation og talrige vesikler (figur 4G). Mens celler behandlet med L. flava
viste perifere chromatinkondensation kerne med mange heterogene vesikler og blæredannelse (Figur 4H).
Diskussion
serendipitous observationer har vist, at planter, kan traditionelle urter og te udnyttes til potentielt vinde kampen i kamp med kræft; et verdensomspændende sundhedsproblem. Men det er ikke før disse fytokemikalier er testet in vitro
og in vivo Hoteller, som vi kan vide med sikkerhed, hvor langt de kan gå i at holde denne sygdom under kontrol [31-34]. I Thailand mavekræft er en svøbe, men de usædvanligt lavere mavekræft forekomster i den nordøstlige del af Thailand er af betydelig interesse. Det faktum, at S. gratum
, J. gangetica
og L. flava
er hjemmehørende i området og udgør en væsentlig del af den rutinemæssige kosttilskud i den lokale befolkning, vi derfor besluttet at undersøge, om disse folkemusik planter er potentielle kandidater til en sikker og pålidelig styring af mavekræft. Selv om der er mange rapporter at afklare deres anti-oxidant aktiviteter, denne undersøgelse giver den første dokumentation for deres potente cytotoksiske virkninger og apoptotisk induktion baseret på ultrastrutural karakteristik på mavekræft.
Disse planter blev først ekstraheret med ethylacetat, og derefter analyseret for deres phenoliske indhold ved hjælp Folin-Ciocalteu-metoden.

• Xpert MTB /RIF assay kan bruges på arkiveret gastrisk aspirat og induceret spytprøver til følsom diagnose af pædiatrisk tuberkulose
• Emergency præsentation af mavekræft; prognose og konsekvenser for tjeneste planlægning