Antioksidacinis aktyvumas ir ULTRASTRUKTŪRINIAI pokyčiai skrandžio vėžio ląstelių linijų, kurias sukelia šiaurės rytų Tailando valgomųjų liaudies augalų extracts

antioksidacinis aktyvumas ir ULTRASTRUKTŪRINIAI pokyčius skrandžio vėžio ląstelių linijų sukeltas šiaurės rytų Tailando valgomųjų liaudies augalų ekstraktų
tezės
Background
phytochemical produktai kritinis vaidmuo narkotikų atradimų proceso. Tai perspektyvi galimybė, tačiau reikalauja, kad reikia patvirtinti savo mokslinį patikrinimą prieš naudojimą. Taigi, šis tyrimas siekiama įvertinti (1) antioksidacinis aktyvumas (2), citotoksiškumas potencialą, ir (3) apie ULTRASTRUKTŪRINIAI pakeitimo skrandžio vėžio ląstelių linijomis per sąlyčio su frakcijų trijų vietos šiaurės rytų Tailando valgomųjų augalų poveikį.
Būdai
Augalai, Syzygium gratum, Justicia gangetica parsisiųsti ir Limnocharis flava
buvo ekstrahuojamas etilo acetato, ir kiekvienas žalios ekstraktas analizuojamas jų fenolinių junginių kiekio nustatymas Folin-Ciocalteu metodą. Jų antioksidacinis aktyvumas buvo įvertintas naudojant ABTS sistemą. tada ekstraktai uogoms citotoksiškumo dviem skrandžio vėžio ląstelių linijų Kato-III ir NUGC-4, ir, palyginti su Hs27 fibroblastų kaip kontrolės, naudojant MTT. Ląstelių gyvybingumas (%), IC 50 vertės, taip pat ULTRASTRUKTŪRINIAI pakitimai buvo tirta po gydymo su į vieną pusę dispersinė analizė (ANOVA).
Rezultatai
Iš viso fenolio verčių etilo acetato ekstraktų buvo gerai koreliuoja su antioksidanto talpos, su išgaunamas produktas S. gratum pervežimas rodyti aukščiausio lygio antioksidacinis aktyvumas (10 kartų didesnė atsakas) per J. gangetica
ir L. flava
atitinkamai. Ekspozicijos S. gratum
ir J. gangetica
ekstraktai normalių ląstelių linijas (Hs27) lėmė ribinių citotoksiškumo poveikį. Tačiau per dozės priklausomas bandymo S. gratum
ir J. gangetica pervežimas ekstraktų pagamintų cytotoxicological poveikį tik per 75 proc Kato-III ir NUGC-4 ląstelių linijų. Be to, aprotoninis savybė buvo parodyta pagal TEM tiek vėžio ląstelių linijų su šių dviejų ekstraktų, o charakteristikos autofagija buvo rastas ląstelių linijas po post poveikio ištraukos iš L. flava
.
Išvadas
Iš šių trys augalai, S. gratum
turėjo aukščiausius turinį fenolinių junginių ir antioksidantų talpos. Visi jie randama junginys (-ams) citotoksiškumo in vitro
apie vėžinių ląstelių, bet ne normalių ląstelių linijų, kaip išspręsti audinių kultūroje ir ULTRASTRUKTŪRINIAI analizė. Tai pirmoji ataskaita parodyti apie ląstelių pakeitimo kaip apoptozės etilo acetato ekstraktas S. gratum
ir J. gangetica poveikį.
Tolesni tyrimai dabar sutelktas į atskirų izoliatų ir jų funkcijos, pirmenybę ant S. gratum
ir J. gangetica
už naujų terapijos ir kovotojų prieš vėžio vystymąsi.
Raktiniai žodžiai
Skrandžio vėžys ultrastruktūra ląstelių citotoksiškumo SER faktai
Skrandžio vėžys yra ketvirtas dažniausiai diagnozuojamas vėžys ir antra labiausiai pagrindinė priežastis, dėl vėžio susijusių mirčių pasaulyje [1]. Buvo apskaičiuota, kad ten buvo apie 1 mln naujos įrašyti 2008 skrandžio vėžio atvejų, tačiau tie, dauguma (713.900) buvo pranešta besivystančiose šalyse, labiausiai paplitęs skrandžio vėžio randama Rytų Azijoje, per Vidurio ir Rytų Europoje, Pietų Amerika [1]. Nepaisant tariamas intensyvinimo ligos, duomenys rodo, kad bendras skrandžio vėžio rodikliai yra atvirkštinė tendencija, su pranešimų apie skrandžio vėžio randama daugelyje Vakarų pasaulyje sumažėjo [2].
Deja, dauguma skrandžio vėžiu sergantiems pacientams dažnai diagnozuojama vėlyvos stadijos, kai gydymas nėra įmanoma ir gydymas yra paliatyvioji siekiant pagerinti kokybę ir kiekybę gyvenimo ketinimų. Nors, yra gydymo gairės skrandžio vėžiu, penkerių metų išgyvenamumas yra mažesnis nei 50% [3, 4]; kursas, žinoma, nėra vilčių Bet onkologai ar sergantiesiems vėžiu. Be to, šalutinis poveikis nuo dabartinio gydymo t.y. chirurgija, chemoterapija ir radiacija yra nepatenkinami. Taigi, tikslinės terapijos reikia sumažinti šalutinį poveikį ir pagerinti klinikinius rezultatus pacientams. Taigi, mokslininkai šioje naujojo tūkstantmečio moka daug daugiau dėmesio ne tik naujų terapinių gaires, ir ankstyvosios prevencijos strategijas skrandžio vėžio [5, 6], tačiau taip pat rasti naujų ir taikyti konkrečias gydomąsias medžiagas, taip pat.
per pastaruosius du dešimtmečius, fitonutrinas produktai suvaidino svarbiausią vaidmenį naujų vaistų atradimo nukreipti vėžį [7], su daugiau nei 60% šiuo metu naudojamų priešvėžinių agentų yra gaunami iš natūralių šaltinių [8]. Pavyzdžiai visame pasaulyje kliniškai naudingus priešvėžiniai agentai, gautų iš laukinių augalų yra Taxol, vinblastinas, Vinkristinas, kamptotecino darinių Topotecan (kviečių žolė), šaltalankių, Lingzhi, irinotekano ir etopozido, kuris yra kilęs iš epipodophyllotoxin [9, 10]. Kiti kilęs iš vaisių ir daržovių; neapsiribojant įtraukti kurkuminas (ciberžolė), genisteinas (sojų), katechinų (Žalioji arbata) [7], tačiau taip pat žolės, kaip vinca alkaloidų, podofilotoksino, Berberinas, citrinos žolės aliejų, flavonoidų ir kamptotecino; Kitas perspektyviausių vaistais nuo vėžio [11] grupė. Nors šie priešvėžinių agentų buvo įdarbinti tikslinėms mechanizmas pagrįstas kelius, veiksmingą jų manipuliavimas išorinė ir savieji Apoptozė keliai vis dar tiriamos [12-14]. Paklitakselis izoliuoti nuo Ramiojo vandenyno kukmedis žievės, Taxus brevifolia
yra vienas phytochemical, kuris rodo, kas pažadėta. Ji yra vaistas patvirtintas nuo FDA būti naudojamas gydyti AIDS susijusi Kapoši sarkoma, krūties vėžio, nesmulkiųjų ląstelių plaučių vėžio ir kiaušidžių vėžio. Jos pagrindinis ląstelių poveikis gali sukelti nenormalų stabilizavimą dinaminės mikrovamzdelių polimerizacijos, todėl ląstelių dalijimąsi, kurio metu apoptozės [15-17] nepakankamumas. Tačiau, paklitakselis yra taip pat buvo tiriamas kaip alternatyvus gydymas nuo kitų vėžio rūšių, įskaitant skrandžio vėžio. Šiuo metu yra klinikinių tyrimų metu III fazės [18, 19]. Nepriklausomai nuo to, ar jie buvo patvirtinti, ar ne, platus pasiekti paramos ir tęsinys studijų augalų ekstraktų su poveikis skrandžio vėžio gydymo yra orientaciniai iš toliau vaidmenį, natūralūs produktai žaisti vaistų atradimo procesas.
Svarstant epidemiologiją tyrimas naujai diagnozuotų skrandžio vėžio atvejų Tailandas, daug mažesnės dažnis buvo stebėtas šiaurės rytų regione [20]. Nors, Helicobacter pylori
infekcijų paplitimas, nesiskiria visoje šiaurės regione Tailando, ne geografinė faktorius (pvz plynaukštėje, kalnų diapazonas arba džiunglių vietovės) buvo kitoks nei [21]. Todėl ten turi būti kažkas kita svarbi gyventojų šiaurės rytų regione, sumažina bendrą sutrikimus skrandžio vėžio. Atsižvelgdama visi, bet atmesti genetiką, ir aplinkos veiksniai, buvo pasiūlyta, kad valgomieji liaudies augalai dietos, kurios paprastai suvartojami šiame regione, gali eiti į šį neatitikimą atsakymą. Tai nauji duomenys, ir tai perspektyvus švinas labai verčia mus ištirti paslaptingą reiškinį, tai yra, ar fitonutrinas junginiai per šiaurės rytų Tailando valgomųjų liaudies augalų turi cheminių profilaktikos arba citotoksiniais potencialą kovojant su skrandžio vėžiu, ar kitas savybes. Dėl šios priežasties šis tyrimas, todėl buvo imtasi siekiant įvertinti citotoksiškumas potencialą šiose vietos valgomuosius augalus. Ypač įdomūs, augalai S. gratum
, J. gangetica parsisiųsti ir L. flava
, buvo atrinkti remiantis epidemiologiniais duomenimis teigiama, jog jie yra labiausiai reguliariai valgomieji liaudies daržovės šiaurės rytų regione.
Mes teigiame, kad šie augalai gali turėti per paslėptų savybių, kurios gali būti panaudotos kovojant su šiuo vėžiu, ir ši studija siekiama įvertinti savo galimybes. Mes vertiname žalios fenolio pagrindu ekstraktai šių augalų, ir parodyti aukštą ląstelių apoptozės ir citotoksinių poveikį dviem bendrais, ir lyginamųjų skrandžio vėžio ląstelių linijų, Kato-III ir NUGC-4.
Metodai
augalinės medžiagos
Trys vietos valgomieji liaudies augalai; S. gratum
J. gangetica
ir L. flava
(1 lentelė) buvo nupirkta iš trijų skirtingų vietinių rinkų Khon Kaen provincijos šiaurės rytų Tailando per spalio iki 2008 metų gruodžio Šie augalai buvo parinkta, priklausomai nuo ethnobotanical informacija [22-26] ir epidemiologiniais duomenimis, kaip aprašyta aukščiau. Teisingas taksonominė identifikavimas augalų rūšių, naudojamų šiame tyrime buvo prižiūrimas botanikai Botanikos ir farmakologijos fakulteto Farmacijos, Khon Kaen universitetas, Thailand.Table 1 trijų augalų ekstraktų ir kitų mokslinių tyrimų nuorodomis pavadinimai, terapinis panaudojimas tajų tradicinės departamento Medicina tikrinami šiame tyrime pervežimas rūšys [kupono numeris]
šeima (Bendrinis pavadinimas anglų /Tailandiečių)
pastebėtos pagrindinės sudedamosios
terapiniam vartojimui tajų tradicinės medicinos

Valgomoji dalis

ref.
Syzygium gratum
(Wight) S. Mitra var. Gratum
[sk. Laongpol 6] A, C
mirtiniai (Eugenia /Phak Mek, Samet Chun)
Dar aiškiai nustatoma cheminės struktūros, bet pasirodė esąs stiprus antioksidantų ir oksidacinio prevencijos ir nitrosative pabrėžia,
gydymas dispepsija ir nevirškinimas
Lapai
22,23
Justicia gangetica
L. [TK-PSKKU-0066] b
Acanthaceae (kinų violetinė, atogrąžų raktažolė /Priėmė pavadinimas: Asystasia gangetica
)
5,11-epoxymegastigmane gliukozidas (asysgangoside), salidroside, benzilo β-d-gliukopiranozid (6S
, 9R
) -roseoside, ajugol, apigenin 7-O
-β-D- gliukopiranozid apigeninas 7-o
-neohesperidoside ir apigeninas 7-o
-β-d-gliukopiranozė (1 → 6) -β-d-gliukopiranozid
gydymas skrandžio skausmas, skrandžio kirminų, anti astma
Lapai
24,25 pervežimas Limnocharis flava pervežimas L. Buchenau [patt. 173] c
Limnocharitaceae (geltona velvetleaf, geltona Burr vadovas /Talabhat reusi)
Nenustatyta pervežimas užkandis
Kamieninių
26
aVoucher pavyzdžius deponuoto Forest herbariumo (BKF) katedra nacionalinis parkas, laukinės gamtos ir augalų apsaugos ministerijos gamtos išteklių, bthe iš farmacijos mokslų fakulteto, Khon Kaen universitetas ir CMygtukas princas Songkla universiteto herbariumo (PSU), biologijos katedra, gamtos mokslų fakulteto, Prince of Songkla universitetas, Tailandas herbariumas .
paruošimas augalų ekstraktų
valgomųjų dalių kiekvieno atskiro augalų veislių (1 lentelė) buvo praplautas su steriliu distiliuotu vandeniu, kad pašalinti detritą ir džiovinama karšto oro džiovinimo spintoje, esant 50 ° C temperatūroje 7 dienas. Baigus džiovinti, augalų dalys buvo tada supjaustoma smulkiais gabaliukais ir pagrindo smulkių miltelių, naudojant Piesta. tada kiekvienas žemės milteliai augalinė medžiaga buvo panardintas su etilo acetato tirpiklio (Sigma-Aldrich Pte-LTD, Singapūras) perteklius ekstrahavimo butelį. tada etilo acetato mišiniai buvo inkubuojami ant kratytuvo inkubatoriuje kambario temperatūroje 72 val. Taip Šio proceso metu supernatantų, buvo tada perkelti į naują konteinerį, o ekstrahavimo procesas su etilo acetato buvo pakartotas dar tris kartus, prieš buvo sujungti šių ekstrakcijos arba trijų dalių supernatantų. Tai tada buvo filtruojamas per Whatman filtras popieriaus Nr.1, ir išgarinamas rotaciniame garintuve. tada šių mėginių ekstraktai buvo naudojami tolimesniuose eksperimentuose.
Suminio fenolio junginio
Total fenolinių junginių augalų ekstraktų lėmė Folin-Ciocalteu metodu, kaip aprašyta Sachindra [27]. Trumpai tariant, 0,2 ml kiekvieno augalų ekstraktas ištirpinama 50% DMSO (Santa Cruz biotechnologijų Inc., Bankokas, Tailandas) buvo oksiduojasi su 1,0 ml 10 kartų praskiesto Folin-Ciocalteu reagentas (Sigma-Aldrich Pte-Ltd. ", Singapūras) ir neutralizuoti su 0,8 ml 6% natrio karbonato tirpalo (Sigma-Aldrich Pte-LTD, Singapūras). Po to, kai 1 h inkubacijos, tirpalo optinis tankis buvo matuojamas 764 nm ir rezultatai buvo atstovaujama kaip miligramų galo rūgšties ekvivalentu vienam gramui sausos masės (mg GAE /g). Tyrimas buvo atliktas trimis egzemplioriais kiekvieno mėginio koncentracija nuo 3 atskirtų tyrimus.
Nustatymas antioksidacinis aktyvumas
antioksidacinis aktyvumas augalų ekstraktų lėmė spektrofotometru naudojant ABTS sistemą pagal Re metodą ir kolegų [28]. Trumpai tariant, ABTS radikalų katijonas (ABTS • +), mišinys buvo sukurtas pagal 7 mm ABTS (Sigma-Aldrich Pte-LTD, Singapūras) 140 mM kalio persulfatas (Sigma-Aldrich Pte-LTD, Singapūras) oksidacijos, inkubuojami 16 valandas kambario temperatūroje, tamsoje. Antioksidacinis aktyvumas buvo nustatomas pridedant 0,2 ml augalų ekstraktų su 1,8 ml ABTS • + radikaliai katijonų mišiniu. Po to, kai inkubavimą mišinį 6 min, buvo registruojama ne 734 nm absorbcija. ABTS • + radikalų prapūtimo gebėjimas (%) augalų ekstraktų buvo apskaičiuotos remiantis pagal šią lygtį: ABTS • + radikalų prapūtimo gebėjimai (%) = [(Abs.control-Abs.test mėginys) /ABS. CONTROL] X100. Kur Abs.control yra kontrolės reakcija (be augalų ekstraktas) ir Abs.test mėginio sugeriamumo yra į augalo ekstrakto akivaizdoje absorbcija. Gauti rezultatai buvo palyginti su anti-oro kondicionavimo veiklos Trolox (Sigma-Aldrich Pte-LTD, Singapūras) ir atstovavo Trolox lygiavertį antioksidantas talpa viename grame sausos masės (TEAC /g). Tyrimas buvo atliktas tris kartus, kiekvieno mėginio koncentracija yra nuo 3 atskirtų tyrimus.
Ląstelių kultūros
Dvi žmogaus skrandžio karcinoma ląstelių linijos Kato III (ATCC Nr HTB-103) iš Amerikos tipas kultūros kolekcija (ATCC, Rokvilis, MD, JAV) ir NUGC-4 (JCRB0834) iš sveikatos mokslų tyrimų išteklių banko (Japonija sveikatos mokslų fondas) buvo naudojamas in vitro
citotoksinių tyrimus. Žmogaus apyvarpės fibroblastų ląstelių linijos Hs27 (ATCC No.1634) buvo naudojamas kaip kontrolės. Jie buvo auginamos steriliame RPMI 1640, kurių sudėtyje yra 10% (v /v) vaisiaus galvijų serumo (Biochrom AG, Berlin) 37 ° C temperatūroje tiekiamas su 5% CO 2 inkubatoriuje. Ląstelės buvo auginamos standartinių audinių kultūros kolbų, o sulaukę 80% santakoje buvo passaged su 0,25% tripsino-EDTA (Sigma-Aldrich Pte-Ltd ", Singapūras) kas 3-4 dienas, kol naudojimo sprendimas.
In vitro
citotoksiškumo Analizės
Augalų ekstraktai buvo vertinami citotoksinio aktyvumą prieš Kato-III ir NUGC-4 ląstelių linijas per MTT kolorimetrinę tyrimą, kaip pirmą kartą aprašyta Mosmann [29] su pakeitimais pasiūlytų Denizot ir lang [30]. Išauginti ląstelės (1 × 10 4 ląsteles) visai žiniasklaidai buvo perkelti į kiekvieną plokščio 96 šulinėlių plokštelės šulinėlį ir tada inkubuojami 37 ° C temperatūroje drėgnoje atmosferos orą praturtintas 5% (t /t) CO 2 už 24 h greičiu ir užtikrinti, kad už ląstelės pridėti prie kiekvienos apačioje gerai. tada išauginti ląstelės buvo gydomi bandytoms žalios ekstrakto (arba trijų dalių gręžinių per sąlyga) pagal 2 įxL serijiniu būdu atskiedus kiekvienos ekstrakto Be to, esant 1,25, 2,5, 5, 10 ir 20 g /ml koncentracijos. Ląstelės buvo tada kultivuojamos, kaip anksčiau nurodyta kitoje 72 valandų prieš skiriant 10 pL pridedant 5 mg /ml koncentracijos tirpalo 3- (4, 5-dimetiltiazol-2-il) -2, 5-diphenyltetrazolium bromidas (MTT) ( Sigma-Aldrich Pte-Ltd ", Singapūras) į kiekvieną duobutę. Inkubacinis buvo tęsiamas dar 4 h prieš laikmenos buvo pašalintas. A DMSO mišinys (150 pL) ir glicino (25 pL) buvo įtraukta į kiekvieną šulinėlį ir sumaišyti, kad jie užtikrina ląstelių lizę ir tirpinimą iš formasan kristalai, prieš 540 nm bangos ilgiui, absorbcija, buvo matuojamas. Buvo atlikti trys atkartojimai kiekvienos eksperimentą, o iš MTT konversijos procentinė dalis jos formazano darinio už kiekvieną šulinėlį (proc ląstelių augimo) buvo apskaičiuotas dalijant OD 540 nm bangos ilgiui šulinių su kontrolės remiantis sekančia lygtimi: Procentas ląstelių augimo = [A540 testas - A540 nulis] × 100 /[A540 kontrolė - A540 nulis]. Kur A540 nulis = A540 tirpalo po to, kai ląstelių buvo inkubuojamos 24 h iki augalų ekstraktų to; A540 bandymas = A540 tirpalo po augalų ekstraktų papildymą; ir A540 kontrolė = A540 tirpalo be augalų ekstraktų papildymas. Be to, netoksišką užtikrinimo augalų ekstraktų prieš normalios ląstelės (fibroblastų ląstelių linija Hs27), dvigubos dozės (2 kartus DK 50 koncentracijos [10 mikrogramų /ml]), iš ekstraktai dirbančių ir įvertino MTT tyrimas. Tyrimas buvo atliktas tris kartus, kiekvieno mėginio koncentracija yra nuo 3 atskirtų tyrimų.
Pusė maksimalus inhibitorių koncentracija (IC50)
gauti sugertis 540 nm buvo naudojamas, norint nustatyti ląstelių išgyvenimo procentą darant prielaidą, kad buvo gautas 100% išlikimo gydomiems tirpiklių tik kaip kontrolės, ir kad jokių metabolinio aktyvumo skirtumų tarp išlikusių ląsteles pagal skirtingas sąlygas. Tokiomis prielaidomis, procentas išlikimo gydytų vėžio ląstelių linijas ir normalių išaugintų ląstelių buvo apskaičiuojamas pagal šią formulę: procentas išlikimo = (A540 elgiamasi ląstelių /A540 kontrolė) × 100. vidurkis ± 1 standartinis nuokrypis (SN) ląstelių išgyvenamumas (%) buvo brėžiamas prieš atitinkamą augalų ekstrakto koncentracijos ir geriausiai tinka linija buvo naudojama siekiant gauti numatomą IC 50 vertė nuo koncentracijos, kad galėtų suteikti 50% ląstelių išlikimo.
koncentracijos augalų ekstraktai suteikia 50% slopinanti koncentracija (SSD 50) buvo nustatytas iš trijų atskirų eksperimentų. IC 50 kiekvieno augalų ekstraktų tada buvo naudojami kaip apdorotų koncentraciją nuo 0 ir 3 dienas prieš Kato-III ir NUGC-4, kuris buvo vertinamas apoptozės naudojant perdavimo elektroninės mikroskopijos (TEM). Tyrimas buvo atliktas trimis egzemplioriais kiekvieno mėginio koncentracija nuo 3 atskirtų tyrimus.
Mėginio paruošimas perdavimo elektronų mikroskopijos
Kato-III ląstelių (1x10 6 ląstelių) ir NUGC-4 ląstelių (1x10 6 ląstelės), gydytiems su kiekvieno augalų ekstrakto, taip pat, kaip neigiama kontrole (neapdorotas kultūrose), buvo atliekamas atskirai. Trumpai, jie buvo praplautos D-Hank tirpalo (Life "technologijas, Bangkok, Thailand) du kartus, ir pristatyti į centrifugavimo mėgintuvėlius su plastikiniu grandiklis, o po to centrifuguojant, esant 2000 apsisukimų per minutę 15 min, su supernatanto pašalintas. Nuosėdos buvo nustatyta tirpale, kuriame yra 4% glutaraldehidą (elektroniniu mikroskopu mokslai, Bangkok, Thailand) ir 2% paraformaldehidus (elektroniniu mikroskopu mokslai, Bankokas, Tailandas) 0,1 M fosfatinio buferio druskų tirpalu (PBS), pH 7,4, esant 4 ° C 1 valandą, o, tada plaunamas 0,1 M PBS, kad pašalinti Fiksatyvas. Mėginiai buvo pinigų skaičiaus į 1% Osmio Tetraoksidas (elektroniniu mikroskopu mokslų, Bankokas, Tailandas) tame pačiame buferyje 30 min ir dehidratuotas rūšiavo etanolio serijos po 10 min. tada jie buvo vartų su dviem pokyčių propileno oksido ir panardintas į vienas po kito einančių mišinių propileno oksido ir Araldite 502 dervos (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapūras), bent santykį 3: 1, 2: 1, 1: 2, ir, galiausiai, įdėta į gryno Araldite. Profiliai 1 mkm buvo sumažinti naudojant MT-2 Porterio-Blum ultramicrotome. Skyriai vėliau buvo sumontuotas ant vario tinklų, džiovinami ore ir kontrastas paeiliui su 2% uranilo acetato (elektroniniu mikroskopu mokslų, Bankokas, Tailandas) 7% alkoholio tamsoje, tada gydomi švino citrato (elektroniniu mikroskopu mokslai, Bankokas, Tailandas ). Jie buvo tiriamas "Philips CM 100 perdavimo elektroniniu mikroskopu, veikianti 80 kV. Buvo išreikštas
statistinė analizė
rezultatai, kaip tai ± SD kartotinių nuo 3 atskirtų tyrimus. Palyginimas tarp duomenų rinkinių buvo atliekama naudojant vieną pusę dispersinė analizė (ANOVA), po Stjudento t-testą. Visi statistinės analizės buvo atliekamos naudojant SPSS19. Skirtumai buvo priimta kaip statistiškai reikšmingas, kai p <. 0,05
rezultatai
viso fenolio kiekis augalų ekstraktai
Trys valgomieji liaudies augalai iš šiaurės rytų regione Tailandas (S. gratum pervežimas, J. gangetica
ir L. flava
) buvo paimti ir jų bendra fenolio kiekis, nustatytas su rezultatais parodyta 2 lentelėje Tarp šių augalų ekstraktų, aukščiausio lygio bendro fenolio kiekis buvo aptiktas S. gratum
čia 149.789 ± 0,381 mg GAE /g. Tai buvo 10 raukšlės žymiai didesnis kiekis, nei buvo nustatyta J. gangetica
ir L. flava
(16,513 ± 0,130 ir 14,334 ± 0,463 mg GAE /g atitinkamai, p pervežimas < 0,05). 2 lentelė Vidutinis bendras fenolio kiekis augalų ekstraktų išreikštas GAE ir anti-prapūtimo aktyvumas augalų ekstraktų atstovaujama kaip TEAC
augalų ekstraktų

viso plenolics (mg GAE /g sausos masės)

Anti-prapūtimo veikla (mm TEAC /g sauso svorio)
S. gratum
(Wight)
149.789 ± 0,381
27,521
2,823.521 ± J. gangetica L
.
16,513 ± 0.130a
313.141 ± 39.713a
L. flava (L.)
14,334 ± 0.463a
900.845 ± 20.346a b
buvo išreikštas vertybes, reiškia ± SD kartotinių nuo 3 atskirtų tyrimus. AP
< 0,05 vs S. gratum
, BP
. < 0,05 vs J. gangetica
Antioksidantai pajėgumai augalų ekstraktų
antioksidantas veiklą etilo acetato išgauti S. gratum
J. gangetica
ir L. flava
rodomi 2 lentelėje TEAC verčių šių augalų buvo gerokai skiriasi mažėjančia tvarka nuo S. gratum
> L. flava
> J. gangetica
(2,823.521 ± 27,521, 900,845 ± 20,346, 313,141 ± 39,713, atitinkamai, p
< 0,05). Pastebimai, aplink 3-9 raukšlės buvo nustatyta didesnė antioksidacinis aktyvumas S. gratum
palyginti su kitų dviejų rūšių ekstraktus. Tai buvo gerai koreliuoja su visų fenolio turinį. (Koreliacijos koeficientas R 2 = 0,935, Y = 16.64x + 324.5).
Ląstelių augimo slopinimą
skrandžio vėžio ląstelių linijas Kato-III ir NUGC-4 ir žmogaus fibroblastų ląstelių linija (kontrolė) buvo veikiami kiekvieno augalų ekstrakto (serijos praskiedimo koncentracija [1,25, 2,5, 5, 10 ir 20 mikrogramų /ml]), siekiant nustatyti augimas slopinantį aktyvumą, kurį sukelia iš kiekvieno augalo. Po 72 h, gyvybingos ląstelės buvo matuojamas MTT. Kato-III ir NUGC-4 ląstelės veikiamos S. gratum
ir J. gangetica
ekstraktų lėmė ženkliai sumažėjo gyvybingų ląstelių dozės priklausomu būdu (1 paveikslas). 20 mikrogramai /ml visi jie sukeltų daugiau nei 50% ląstelių mirties abiejų skrandžio vėžio ląstelių linijas. Tačiau 10 mikrogramų /ml ekstraktai, pagaminti iš tik S. gratum
ir J. gangetica
stebėtas reikšmingas stiprus citotoksiškumo (psl
< 0,05), kad paskatintų daugiau kaip 70% ląstelių žūtį Kato-III ir NUGC-4, kai palyginti su L. flava
(2 pav.) Be to, šios dvi augalų ekstraktų parodė, jokios įtakos normalus žmogaus apyvarpės fibroblastų ląstelių linijos (2 pav) poveikį. Priešingai, L. flava
's poveikis sumažėja. Todėl apie 25% ląstelių žūtį, be reikšmingo skirtumo tarp skrandžio vėžio ląsteles ir normalaus fibroblastų ląstelių (2 paveikslas). 1 pav Dozė reagavimo studijos augalų ekstraktų dviem skrandžio vėžio ląstelių linijų: (a) Kato-III ir (B) NUGC-4. Ląstelės buvo gydomi įvairių koncentracijų (0, 1,25, 2,5, 5, 10 ir 20 mikrogramų /ml) S. gratum
, J. gangetica
ir L. flava
72 h. Antiproliferacinio poveikis buvo matuojamas pagal MTT. Rezultatai buvo išreikštas priemonėmis ± SD nuo trijų nepriklausomų eksperimentų.
2 paveikslas citotoksiškumo tyrimas prieš Kato-III, NUGC-4 ir HS-27 po inkubuojami su 10 mikrogramų /ml etilo acetato išgauti S. gratum J. gangetica ir L. flava. Antiproliferacinio poveikis buvo matuojamas pagal MTT. Rezultatai buvo išreikštas priemonėmis ± SD nuo trijų nepriklausomų eksperimentų. Rezultatai parodė, tiek S. gratum
ir J. gangetica
stipriai slopinamas iki 70% skrandžio vėžio ląstelių augimą, o ne sunaikinti normalus fibroblastų ląstelių Hs 27 (didelis skirtumas [* p
< 0,05]). Tai kontrastuoja pagal L. flava
, kuris parodė paplonintu sumą ląstelių augimą, ne tik skrandžio vėžio ląsteles, bet taip pat dėl ​​įprastoms fibroblastus ląstelių, taip pat poveikio.
IC 50 (g /ml ) vertės yra apibendrintos 3 paveiksle J. gangetica
ekstraktas buvo mažiausias SSD 50 vertės 5,45 mikrogramai /ml ir 5.86 g /ml Kato-III ir NUGC-4, atitinkamai. Be to, S. gratum
ekstraktas parodė didesnį toksiškumą su vėžio ląstelių linijų su IC 50 vertybių 7,24 g /ml - 11,96 mikrogramų /ml, kadangi didžiausias IC 50 buvo iš L . flava
išgauti 17.20 mikrogramai /ml ir 14,64 mikrogramo /ml Kato-III ir NUGC-4 dalimis. Tai buvo labai skiriasi (p
< 0,05), lyginant su kitų dviejų augalų ekstraktų (3 paveikslas). 3 pav Lyginamoji citotoksiškumo IC 50 S. gratum, J. gangetica ir L. flava apie Kato-III, NUGC-4 ir Hs27 iki MTT. Rezultatai buvo pateikti kaip priemonėmis ± SD iš trijų nepriklausomų eksperimentų (* p
< 0,05) ir, palyginti su Hs27-paveiktų ląstelių. J. gangetica
parodė mažiausią IC50, kadangi didžiausias buvo iš L. flava
Reikšmingi skirtumai (p < 0,05). Tarp S. gratum
ir L. flava
buvo pastebėtas tarp abiejų vėžio ląstelių linijos.
ultrastruktūra pakeitimus Kato-III ir NUGC-4 ląstelių linijas, atsirandančias dėl S. gratum, J. gangetica
ir L. flava pervežimas pervežimas siekiant nustatyti, ar augimo slopinimas augalų ekstraktų buvo susijęs su apoptozės, mes toliau nagrinėjo morfologinius pokyčius Kato-III ir NUGC-4 skrandžio vėžio ląstelių linijas pagal perdavimo elektroniniu mikroskopu. Ir kontrolinėse duobutėse branduolinės struktūros atsirado sveika (4a pav Kato-III, E: NUGC-4), o ląstelės gydomi tie iš augalų ekstraktų parodė ULTRASTRUKTŪRINIAI pokyčius keletą manierų (duomenys 4B-4D: Kato-III, 4 F-4H: NUGC-4, atitinkamai). Išsamiai, Kato-III ląstelės gydomi S. gratum
rodomas sutirštintas branduolį su chromatino kondensacija, apoptozės kūno formavimo (4b paveikslas) ir paskleisti grūdėta šiukšles. Nors už Kato-III ląstelės elgiamasi J. gangetica
, šie rodomas chromatino kondensaciją, membranos jungiasi apoptozinių įstaigas ir daug pūslelės (4c paveikslą). Kadangi morfologinių pokyčių rasti L. flava
gydytų Kato-III ląsteles, rodomas sudžiūvę branduolį su chromatino kondensacija ir daug Innogatunkowy pūslelių, įskaitant platų funkcijų ląstelėje vakuolizaciją (4d pav.) 4 pav Electron mikrografijos lyginant S. gratum, J. gangetica ir L. flava apie Kato-III (A-D) ir NUGC-4 (E-H) poveikį 3 dienas po gydymo. Mastelio juosta 2 mkm. A), Neapdorotos Kato III mobilųjį rodo labai mažai pūslelės (V), gana vienoda suapvalintos formos ir chromatiną išsklaidytą visoje branduolys (N). B), S. gratum
elgiamasi Kato-III ląstelę rodo sutirštintas chromatiną į branduolys (N), aprotoninis kūno formavimas (Arrowhead) ir daugelis pūslelės. Ląstelių yra paskleisti kaip grūdėta šiukšles (*). C), Kata III ląstelių gydomi J. gangetica
. Ši ląstelė rodo chromatino kondensaciją aplink branduolio membrana jungiasi organoidus (rodyklė) periferijoje ir daug Vakuolė (V). D) Kato-III ląstelių po kontakto su L. flava
rodo daug autophagic vakuolėmis (v), ir mažėja branduolys (N), kondensuotas chromatino. E), Neapdorotos NUGC-4 ląstelių nerodo chromatino kondensacija branduolys (N) ir gana vienodas apvalios formos. F) NUGC-4 ląstelių gydomi S. gratum
rodo chromatino kondensacijos branduolius, daug pūslelės (V) ir daugelis membrana jungiasi organoidus (rodyklė). G), NUGC-4 ląstelių po kontakto su J. gangetica
rodo branduolys kondensuotas chromatiną, membrana jungiasi Organelės (rodyklė) ir pūslelės (V). H) morfologiniai pokyčiai pastebėti L. flava
apdorotą NUGC-4 ląstelių buvo sudaryta su chromatino kondensacija į branduolį (N), ir daugelis Innogatunkowy pūslelių įvairaus dydžio (V).
S. gratum
elgiamasi NUGC-4 ląstelių linijos eksponuojami apoptozę su sutankinimo branduolį ir gamyba membranos jungiasi apoptozinių organų ir daug pūslelių (4f pav). Tačiau lyginant, NUGC-4 ląstelių, gydomiems J. gangetica
, pagaminti ankstyvosiose stadijose apoptozės su chromatino kondensacija ir daug pūslelių (4G pav). Nors ląstelės gydomi L. flava
parodė periferinę chromatino kondensacijos branduolius su daugybe Innogatunkowy pūslelių ir blebbing (4H pav.)
Diskusija pervežimas Lemtinga pastabas parodė, kad augalai, tradicinių žolelių ir arbatas galima panaudoti potencialiai laimėti į kovoja su vėžio kova; pasaulinė sveikatos problema. Tačiau, tai nėra, kol šie fitocheminių yra išbandyti in vitro, parsisiųsti ir in vivo,
, kad mes galime žinoti, kaip toli jie gali eiti palaikyti šią ligą kontroliuoti [31-34]. Tailande skrandžio vėžys yra rykštė, tačiau neįprastai mažesnės skrandžio vėžio dažnis šiaurės rytų dalyje, Tailande yra labai įdomus. Tas faktas, kad S. gratum
J. gangetica
ir L. flava
yra gimusios srityje ir sudaro didžiąją dalį įprasto maisto papildas vietos gyventojų, todėl mes nusprendėme ištirti, ar šie liaudies augalai yra potencialūs kandidatai į saugią ir patikimą kontrolę skrandžio vėžio. Nors yra daug pranešimų, kad išaiškintų savo antioksidacinių veiklą, šis tyrimas suteikia pirmą įrodymų savo stipriais citotoksinių efektų ir apoptozės indukcija remiantis ultrastrutural charakteristika skrandžio vėžio.
Šie augalai pirmiausiai buvo ekstrahuojamas etilo acetato ir tada analizuojami jų fenolio kiekis naudojant Folin-Ciocalteu metodą.

• Xpert MTB /rifas tyrimas gali būti naudojamas ant archyvą skrandžio išsiurbimo ir sukeliama skreplių mėginius jautriai diagnozuoti vaikų tuberkuliozės
• Avarinis pristatymas skrandžio vėžio; prognozės ir pasekmės paslaugų planavimas