attività e ultrastrutturali cambiamenti antiossidanti in linee cellulari di cancro gastrico indotti dalla Northeastern impianto popolare commestibile Thai estratti

attività antiossidante e cambiamenti ultrastrutturali in linee cellulari di cancro gastrico indotti dalla Northeastern impianto popolare commestibile Thai estratti
Abstract
sfondo
prodotti Fitochimici hanno un ruolo fondamentale nel processo di scoperta di nuovi farmaci. Questa possibilità promettente, tuttavia, richiede la necessità di confermare la loro verifica scientifica prima dell'uso. Quindi, questo studio si propone di valutare (1) l'attività antiossidante, (2) il potenziale citotossicità, e (3) l'effetto sulle alterazioni ultrastrutturali nelle linee di cellule di cancro gastrico in caso di esposizione alle frazioni di tre Northeastern piante commestibili thailandesi locali.
Metodi
Piante, Syzygium gratum, Justicia gangetica Comprare e Limnocharis Flava
sono stati estratti con acetato di etile, e ogni estratto grezzo analizzati per il loro contenuto totale di composti fenolici con il metodo Folin-Ciocalteu. La loro attività antiossidante è stata valutata utilizzando il sistema di ABTS. Gli estratti sono stati poi analizzati per la citotossicità su due linee di cellule di cancro gastrico Kato-III e NUGC-4, e confrontati con fibroblasti Hs27 come controllo utilizzando il saggio MTT. La vitalità cellulare (%), IC 50 valori, nonché le alterazioni ultrastrutturali sono stati valutati dopo trattamento con analisi della varianza ad una via (ANOVA).
Risultati
I valori fenolici totali degli estratti in acetato di etile erano ben correlata con la capacità antiossidante, con il prodotto estratto di S. gratum
visualizzare, rispettivamente, il più alto livello di attività antiossidante (una volte maggiore risposta 10) su J. gangetica
e L. flava
. L'esposizione di S. gratum
e J. gangetica
estratti alle normali linee cellulari (Hs27) ha comportato effetti di citotossicità marginali. Tuttavia, attraverso una dose-dipendente saggio di S. gratum J. gangetica Comprare e vendere estratti prodotto effetti cytotoxicological in poco più di 75 per cento delle linee cellulari NUGC-4 Kato-III e. Inoltre, caratteristica apoptotico è stato mostrato in TEM in entrambe le linee cellulari tumorali con questi due estratti, mentre le caratteristiche di autofagia è stato trovato in linee cellulari dopo l'esposizione post per estratti di L. flava
. Conclusioni
Da queste tre impianti, S. gratum
avevano il più alto contenuto di composti fenolici e capacità antiossidante. Tutti loro rilevata la presenza di composti (s) con la citotossicità in vitro
sulle cellule tumorali, ma non su normali linee cellulari come deliberato nella coltura del tessuto e l'analisi ultrastrutturale. Questo è il primo rapporto per mostrare l'effetto sulle alterazioni cellulari come apoptosi di un estratto di acetato di etile di S. gratum
e J. gangetica.
Ulteriori studi sono ora concentrati su singoli isolati e la loro funzione, dando priorità su S. gratum
e J. gangetica
per lo sviluppo di nuove terapie e combattenti contro il cancro.
Parole
cancro gastrico Ultrastruttura cellulare citotossicità TEM Sfondo
cancro gastrico è il quarto tumore più frequentemente diagnosticato e la seconda causa principale di morte per cancro legati al mondo [1]. E 'stato stimato che ci sono stati circa 1 milione di nuovi casi di cancro gastrico registrati nel 2008, ma di quelli, la maggioranza (713.900) sono stati riportati nei paesi in via di sviluppo, con la maggiore incidenza di cancro gastrico si trovano in Asia Orientale, l'Europa centrale e orientale, e Sudamerica [1]. Nonostante l'intensificazione apparente della malattia, l'evidenza suggerisce che i tassi di cancro gastrico complessivi è l'andamento, con una diminuzione di casi di cancro gastrico trovato in molte parti del mondo occidentale [2].
Pazienti affetti da cancro gastrico Purtroppo la maggior parte sono spesso diagnosticato in fase avanzata quando una cura non è possibile e il trattamento è palliative con l'intento di migliorare la qualità e la quantità della vita. Anche se, ci sono linee guida di trattamento per il cancro gastrico, il tasso di sopravvivenza a cinque anni è inferiore al 50% [3, 4]; un tasso che è, ovviamente, non incoraggiare a uno oncologi o malati di cancro. Inoltre, gli effetti collaterali da trattamenti attuali cioè la chirurgia, la chemioterapia e le radiazioni non sono soddisfacenti. Quindi, sono necessarie terapie mirate per ridurre gli effetti collaterali e migliorare gli esiti clinici dei pazienti. Quindi, i ricercatori in questo nuovo millennio stanno prestando molta più attenzione allo sviluppo non solo di nuove linee guida terapeutiche, e le strategie di prevenzione precoce per il cancro gastrico [5, 6], ma anche sulla ricerca di nuovi e indirizzare gli agenti terapeutici specifici pure.
nel corso degli ultimi due decenni, prodotti fitochimici hanno svolto un ruolo dominante nella scoperta di nuovi farmaci a bersaglio il cancro [7], con oltre il 60% delle attualmente usati agenti anti-cancro sono derivati ​​da fonti naturali [8]. Esempi di agenti antitumorali in tutto il mondo clinicamente utili derivati ​​da piante selvatiche includono taxolo, vinblastina, vincristina, derivati ​​camptotecina, topotecan (un erba di grano), olivello spinoso, lingzhi, irinotecan, e etoposide, che è derivata da epipodophyllotoxin [9, 10]. Altri sono derivati ​​da frutta e verdura; non limitato a includere curcumina (curcuma), genisteina (soia), catechine (tè verde) [7], ma anche erbe come alcaloidi della vinca, Podophyllotoxin, berberina, oli erba limoni, flavonoidi e camptotecina; un altro gruppo di agenti antitumorali promettenti [11]. Anche se questi agenti anti-cancro sono stati impiegati per le vie meccanismo a base di mirate, il loro reale manipolazione della estrinseca e le vie di apoptosi intrinseche sono ancora in fase di studio [12-14]. Paclitaxel isolare dalla corteccia del tasso del Pacifico, Taxus brevifolia
è uno fitochimico che mostra la promessa. Si tratta di un farmaco approvato dalla FDA per essere usato per trattare AIDS-related sarcoma di Kaposi, il cancro al seno, il cancro del polmone non a piccole cellule e del cancro ovarico. Il suo effetto cellulari primario è quello di provocare la stabilizzazione anormale della polimerizzazione dei microtubuli dinamica, portando al fallimento della divisione cellulare conseguente apoptosi [15-17]. Tuttavia, il paclitaxel è anche in fase di studio come un trattamento alternativo per altri tipi di cancro tra cui il cancro gastrico. E 'attualmente in sperimentazione clinica di fase III [18, 19]. Indipendentemente dal fatto che siano stati approvati o no, l'ampio sostegno di raggiungere e la continuazione degli studi di estratti vegetali con implicazioni nel trattamento del cancro gastrico sono indicativi del ruolo costante che i prodotti naturali giocano nel processo di scoperta di nuovi farmaci.
Quando si considera un epidemiologia studio dei casi di cancro gastrico di nuova diagnosi in Thailandia, incidenze molto più bassi sono stati osservati nella regione nord-orientale [20]. Anche se, la prevalenza dell'Helicobacter pylori
infezioni, non sono diversi in tutta la regione settentrionale della Thailandia, nessun fattore geografica (ad esempio plateau, catena montuosa o un terreno giungla) era diverso sia [21]. Pertanto, ci deve essere qualcosa d'altro centrale per la popolazione della regione nord-orientale che riduce l'incidenza complessivo di cancro gastrico. Avendo tutti, ma esclusa la genetica e fattori ambientali, è stato suggerito che le piante commestibili popolari diete che di solito vengono consumati in questa regione, può tenere la risposta a questa discrepanza. Questi nuovi dati, e questo ha portato promettente ci sfida molto per esplorare il misterioso fenomeno, che è se i composti fitochimici all'interno del nord-est piante commestibili popolari thailandesi hanno un potenziale chemiopreventiva o citotossico per combattere il cancro gastrico, o altre proprietà. Per tale motivo, quindi, questo studio è stato intrapreso per valutare il potenziale citotossicità di queste piante commestibili locali. Di particolare interesse, piante S. gratum
, J. gangetica
e L. flava
, sono stati selezionati sulla base di dati epidemiologici che suggerisce che essi sono le verdure popolari più regolarmente commestibili nella regione nord-orientale.
Abbiamo postulato che queste piante potrebbero tenere entro proprietà nascoste che potrebbero essere sfruttati per combattere questo cancro, e il presente studio si propone di valutare il loro potenziale. Valutiamo gli estratti fenolici a base di greggio di queste piante, e indicano un alto livello di apoptosi cellulare e gli effetti citotossici in due linee di cellule di cancro gastrico comuni, e comparativi, Kato-III e NUGC-4.
Metodi
materiali pianta
Tre piante commestibili popolari locali; S. gratum
, J. gangetica
e L. flava
(Tabella 1) sono state acquistate da tre diversi mercati locali nella provincia di Khon Kaen, nella parte nord-est della Thailandia nel mese di ottobre a dicembre 2008. Queste piante erano selezionato sulla base delle informazioni ethnobotanical [22-26] e dati epidemiologici come sopra descritto. La corretta identificazione tassonomica delle specie vegetali utilizzate per questo studio è stato supervisionato dai botanici del Dipartimento di Botanica e Farmacologia, Facoltà di Farmacia, Università di Khon Kaen, Thailand.Table 1 I nomi dei tre estratti di piante e altri riferimenti di ricerca, l'uso terapeutico nel tradizionale tailandese medicina proiettato in questo studio
Specie [numero di voucher]
famiglia (nome comune inglese /Thai)
principali costituenti riportati
uso terapeutico nella medicina tradizionale tailandese

parte edibile
Rif.
Syzygium gratum
(Wight) SN Mitra var. Gratum
[Ch. Laongpol 6] A, C
Myrtaceae (Eugenia /Phak Mek, Samet Chun)
Non ancora chiaramente determinato nella struttura chimica, ma ha dimostrato di essere forte di antiossidanti e di prevenzione delle ossidativo e sollecitazioni nitrosativo
trattamento della dispepsia e indigestione
Foglie
22,23
Justicia gangetica
L. [TK-PSKKU-0066] b
Acanthaceae (viola cinese, primula tropicale /nome accettato: Asystasia gangetica
)
5,11-epoxymegastigmane glucoside (asysgangoside), salidroside, β-d-glucopiranoside benzilico, (6S
, 9R
) -roseoside, ajugol, apigenina 7-O
-β-d- glucopyranoside, apigenina 7-O
-neohesperidoside, e apigenina 7-O
-β-d-glucopiranosil (1 → 6) -β-d-glucopyranoside
trattamento del mal di stomaco, vermi allo stomaco, anti- asma
Foglie
24,25
Limnocharis flava
L. Buchenau [Patt. 173] c
Limnocharitaceae (velvetleaf giallo, giallo testa bava /Talabhat reusi)
definito
Antipasto
staminali
26
esemplari aVoucher depositati presso la Foresta Herbarium (BKF), Dipartimento di parco nazionale, della fauna selvatica e la conservazione delle piante, Ministero delle risorse naturali, BIl erbario della Facoltà di Scienze farmaceutiche, Università di Khon Kaen e cLa principe di erbario Songkla University (PSU), Dipartimento di Biologia, Facoltà di Scienze, principe di Songkla University, Thailandia
. Preparazione di estratti vegetali Parts commestibili di ogni singola varietà vegetali (Tabella 1) sono stati sciacquati con acqua distillata sterile per rimuovere detriti e essiccate in forno ad aria calda a 50 ° C per 7 giorni. Una volta essiccato, parti di piante sono state poi tagliate in piccoli pezzi e ridotti in polvere fine con un mortaio e pestello. Ogni materiale vegetale in polvere terreno è stato poi immerso con l'eccesso di solvente acetato di etile (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore) in una bottiglia di estrazione. Le miscele di acetato di etile sono state poi incubate in un incubatore shaker a temperatura ambiente per 72 h. Dopo questo processo, i sovranatanti sono stati poi trasferiti in un nuovo contenitore, e il processo di estrazione con acetato di etile è stato ripetuto altre tre volte, prima che i sovranatanti di queste estrazioni in triplicato sono stati combinati. Questi sono stati poi filtrati attraverso Whatman n ° 1 carta da filtro, ed evaporati da un evaporatore rotante. Questi estratti dei campioni sono stati poi impiegati in ulteriori esperimenti.
Determinazione fenolica composti totale
Totale composti fenolici nelle estratti vegetali sono stati determinati con il metodo di Folin-Ciocalteu come descritto da Sachindra [27]. In breve, 0,2 ml ciascuno estratto vegetale disciolto in 50% DMSO (Santa Cruz Biotechnology Inc., Bangkok, Thailandia) è stato ossidato con 1,0 mL 10 volte diluito reagente Folin-Ciocalteu (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore) e neutralizzato con 0,8 ml di soluzione al 6% di carbonato di sodio (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore). Dopo 1 h di incubazione, l'assorbanza della soluzione è stata misurata a 764 nm ed i risultati sono stati rappresentati come milligrammi di acido gallico equivalente per grammo di peso secco (mg GAE /g). Il saggio è stato condotto in triplicato per ciascuna concentrazione di esempio da 3 analisi separate.
Determinazione dell'attività antiossidante
attività antiossidante degli estratti vegetali è stata determinata spettrofotometricamente utilizzando il sistema ABTS secondo il metodo di Re e colleghi [28]. In breve, ABTS cazione radicale (ABTS • +) miscela è stata generata dalla ossidazione di 7 mm ABTS (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore) con 140 persolfato di potassio mm (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore), incubato per 16 ore a temperatura ambiente al buio. attività antiossidante è stata determinata con l'aggiunta di 0,2 ml di estratti vegetali con 1,8 ml ABTS • + miscela cazione radicale. Dopo incubazione la miscela per 6 minuti, è stata registrata l'assorbanza a 734 nm. ABTS • + capacità di lavaggio del radicale (%) di estratti di piante sono stati calcolati in base alla seguente equazione: ABTS • + radicale abilità di lavaggio (%) = [(campione Abs.control-Abs.test) /Abs. controllo] x100. Dove Abs.control è l'assorbanza della reazione di controllo (senza estratto vegetale) e il campione Abs.test è l'assorbanza in presenza di un estratto vegetale. I risultati sono stati confrontati con l'attività anti-scavenging di Trolox (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore) e rappresentati Trolox capacità antiossidante equivalente per grammo di peso secco (TEAC /g). Il test è stato condotto in triplicato per ogni concentrazione dei campioni da 3 test separati.
Cellulare cultura
Due linee di cellule di carcinoma gastrico umano Kato-III (ATCC No. HTB-103) da American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD, USA) e NUGC-4 (JCRB0834) dalla Health Science Research Resources Bank (Giappone Health Sciences Foundation) sono stati utilizzati per in vitro
test citotossici. Il prepuzio umano linea cellulare di fibroblasti Hs27 (ATCC No.1634) è stato utilizzato come controllo. Esse sono state coltivate in RPMI 1640 sterile contenente il 10% (v /v) di siero fetale bovino (Biochrom AG, Berlino) a 37 ° C fornito con 5% di CO 2 in un incubatore. Le cellule sono state coltivate in fiaschi di coltura dei tessuti normali e giunti 80% di confluenza sono stati diversi passaggi con una soluzione di 0,25% tripsina-EDTA (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore) ogni 3-4 giorni fino all'uso.
In vitro
citotossicità test
estratti vegetali sono stati valutati la sua attività citotossica contro linee cellulari NUGC-4 Kato-III e tramite il saggio colorimetrico MTT come prima descritto da Mosmann [29] con le modifiche suggerite da Denizot e Lang [30]. Le cellule coltivate (1 × 10 4 celle) in mezzi completi sono state trasferite in ciascun pozzetto di una TV 96 pozzetti e poi incubate a 37 ° C in atmosfera di aria umidificata arricchito con 5% (v /v) CO 2 per 24 ore in modo da permettere alle cellule attaccano al fondo di ciascun pozzetto. Le cellule in coltura sono state quindi trattate con l'estratto grezzo testato (pozzetti in triplicato per condizione) con l'aggiunta di 2 ml di diluizioni seriali di ogni estratto ad una concentrazione di 1,25, 2,5, 5, 10 e 20 mg /mL. Le cellule sono state poi coltivate come sopra per un altro 72 h prima dell'aggiunta di 10 ml di 5 mg /mL di soluzione di 3- (4, 5-dimethylthiazol-2-il) -2, 5-diphenyltetrazolium bromuro (MTT) ( Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore) in tutti i pozzetti. L'incubazione è stata continuata per altre 4 h prima il supporto è stato rimosso. Una miscela di DMSO (150 mL) e glicina (25 ml) è stato aggiunto a ciascun pozzetto e miscelata per assicurare la lisi cellulare e dissoluzione dei cristalli formasan, prima che l'assorbanza a 540 nm è stata misurata. Tre repliche di ogni esperimento sono stati eseguiti e la percentuale di conversione MTT alla sua derivata formazano per ogni (crescita cellulare per cento) e è stata calcolata dividendo la densità ottica a 540 nm dei pozzetti con il controllo sulla base della seguente equazione: crescita cellulare Percentuale = [Test A540 - A540 a zero] × 100 /[controllo A540 - A540 a zero]. Dove A540 zero = A540 della soluzione dopo che la cella è stata incubata per 24 h prima dell'aggiunta di estratti vegetali; Test A540 = A540 della soluzione dopo estratti vegetali aggiunta; e controllo A540 = A540 della soluzione senza estratti vegetali aggiunta. Inoltre, per l'assicurazione non tossico di estratti vegetali contro le cellule normali (linea cellulare di fibroblasti Hs27), una dose doppia (2 volte della IC 50 concentrazioni [10 ug /ml]) degli estratti sono stati impiegati e valutati dal MTT saggio. Il saggio è stato condotto in triplicato per ciascuna concentrazione di esempio da 3 analisi separate.
Tempo massima concentrazione inibente (IC50)
L'assorbanza ottenuto a 540 nm è stata utilizzata per determinare la percentuale di sopravvivenza cellulare che il 100% di sopravvivenza è stata ottenuta quando trattati con solventi solo come controlli, e che differenze nell'attività metabolica esistevano tra cellule sopravvissute in condizioni diverse. Sotto queste ipotesi, la sopravvivenza percentuale delle linee cellulari tumorali trattate e cellule normali in coltura è stato calcolato secondo la seguente formula: Percentuale di sopravvivenza = (A540 cellule trattate /controllo A540) × 100. La media ± 1 deviazione standard (SD) cellule la sopravvivenza (%) è stata tracciata con la corrispondente concentrazione di estratto vegetale e la retta di regressione è stato utilizzato per ricavare l'IC 50 valore stimato dalla concentrazione che potrebbe fornire il 50% della sopravvivenza cellulare.
le concentrazioni di estratti vegetali dare 50% di concentrazione inibente (IC 50) sono stati determinati da tre esperimenti separati. L'IC 50 di ogni estratti vegetali sono stati poi utilizzati come concentrazione trattata a 0 e 3 giorni contro Kato-III e NUGC-4, che sono stati valutati per l'apoptosi utilizzando un microscopio elettronico a trasmissione (TEM). Il test è stato condotto in triplicato per ogni concentrazione dei campioni da 3 test separati.
Preparazione del campione per le cellule di microscopia elettronica a trasmissione
Kato-III (1x10 6 celle) e NUGC-4 celle (1x10 6 cellule) trattati con ciascun estratto vegetale così come controllo negativo (colture non trattate), sono stati eseguiti separatamente. In breve, sono stati risciacquati con la soluzione di D-Hank (tecnologie della vita, Bangkok, Thailandia) due volte, e consegnati in provette da centrifuga con una spatola in plastica, seguita da centrifugazione a 2000 rpm per 15 minuti, con il surnatante rimosso. Il precipitato è stato fissato in una soluzione contenente 4% glutaraldeide (Electron Microscopy Scienze, Bangkok, Thailandia) e 2% paraformaldeide (Electron Microscopy Scienze, Bangkok, Thailandia) in 0.1 M tampone fosfato salino (PBS), pH 7,4, a 4 ° C per 1 h, quindi lavata con 0,1 M PBS per rimuovere il fissativo. I campioni sono stati postfissati in 1% tetrossido di osmio (Electron Microscopy Scienze, Bangkok, Thailandia) nello stesso tampone per 30 minuti, e disidratati in una serie graduata di etanolo per 10 minuti ciascuno. Sono stati poi eliminati con due cambi di ossido di propilene e immersi in miscele sequenziali di ossido di propilene e Araldite 502 resina (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore), con rapporto di 3: 1, 2: 1, 1: 2, e infine incorporato in puro Araldite. Le sezioni di 1 micron sono stati tagliati con una MT-2 Porter-Blum ultramicrotomo. Le sezioni sono state poi montate su griglie di rame, l'aria secca e contrastato in modo sequenziale con acetato di 2% di uranile (Electron Microscopy Scienze, Bangkok, Thailandia) nel 7% di alcol nel buio, e poi trattato con citrato di piombo (Electron Microscopy Scienze, Bangkok, Thailandia ). Sono stati esaminati al Philips CM 100 microscopio elettronico a trasmissione operante a 80 kV. Analisi statistica
I risultati sono stati espressi come media ± SD di repliche da 3 test separati. Confronto tra le serie di dati è stata effettuata utilizzando analisi della varianza ad una via (ANOVA) seguita da test t. Tutte le analisi statistiche sono state effettuate utilizzando SPSS19. Le differenze sono stati accettati come statisticamente significativo a p. ≪ 0,05
Risultati
totali contenuti fenolici estratti di piante
Tre piante commestibili popolari da regione nord-orientale della Thailandia (S. gratum
, J. gangetica
e L. flava
) sono stati estratti e il loro contenuto fenolico totale determinato con i risultati mostrati nella Tabella 2. Tra questi estratti vegetali, il massimo livello di contenuto fenolico totale è stato rilevato in S. gratum
a 149.789 ± 0,381 mg GAE /g. E 'stato 10 pieghe significativamente maggiore nei contenuti rispetto che è stato identificato in J. gangetica
e L. flava
(16,513 ± 0,130 e 14,334 ± 0,463 mg GAE /g, rispettivamente, p
< 0,05). Tabella 2 media contenuto fenolico totale di estratti vegetali espresso come GAE e anti-scavenging attività delle estratti vegetali rappresentati come TEAC
estratti vegetali
plenolics totali (mg GAE /g di peso secco)

attività anti-scavenging (mm TEAC /g di peso secco)
S. gratum
(Wight)
149,789 ± 0,381
2,823.521 ± 27,521
J.
. gangetica L
16,513 ± 0.130a
313,141 ± 39.713a
L. flava (L.)
14,334 ± 0.463a
900,845 ± 20.346a, b
I valori sono stati espressi come media ± SD di repliche da 3 test separati. ap
< 0,05 VS S. gratum
, BP
. < 0,05 VS J. gangetica
antiossidanti capacità di estratti vegetali attività
antiossidanti di acetato di etile estratti di S. gratum
, J. gangetica
e L. flava Quali sono riportati nella tabella 2. valori equivalenti TEAC per questi impianti sono stati significativamente diversi in ordine decrescente da S. gratum
> L. flava
> J. gangetica
(2,823.521 ± 27,521, 900,845 ± 20,346, 313,141 ± 39,713 rispettivamente, p
< 0,05). Notevolmente, circa 3-9 piega maggiore attività antiossidante di S. gratum
stato trovato rispetto agli altri due estratti specie. Questi sono stati correlati bene con contenuto totale fenolici. (Coefficiente di correlazione di R 2 = 0.935, Y = 16.64x + 324,5).
Cellulare crescita inibizione
linee di cellule di cancro gastrico Kato-III e NUGC-4 e la linea cellulare di fibroblasti umani (di controllo) sono stati esposto a ciascun estratto vegetale (concentrazione diluizioni seriali [1,25, 2,5, 5, 10 e 20 mg /ml]), per determinare l'effetto dell'attività di inibizione della crescita indotta da ogni pianta. Dopo 72 h, cellule vitali sono stati misurati mediante saggio MTT. Kato-III e NUGC-4 cellule esposte a S. gratum J. gangetica
estratti
e portato ad una diminuzione significativa in cellule vitali in modo dose-dipendente (Figura 1). A 20 mg /mL tutti indotti sulla morte cellulare 50% in entrambe le linee di cellule di cancro gastrico. Tuttavia, a 10 mg /ml gli estratti ottenuti da solo S. gratum
e J. gangetica
dimostrato notevole citotossicità potente (p
< 0,05) per indurre la morte delle cellule oltre il 70% a Kato-III e NUGC-4 quando si confronta con L. flava
(Figura 2). Inoltre, questi due estratti vegetali hanno mostrato alcun effetto sulla normale linea cellulare di fibroblasti umani prepuzio (Figura 2). Al contrario, L. Flava
's effetti diminuita. Conseguente circa il 25% di morte cellulare, senza alcuna differenza significativa tra cellule di cancro gastrico e normale fibroblasti (Figura 2). Figura 1 studi dose-risposta della pianta estratti su due linee di cellule di cancro gastrico: (A) Kato-III e (B) NUGC-4. Le cellule sono state trattate con varie concentrazioni (0, 1,25, 2,5, 5, 10 e 20 mg /mL) di S. gratum
, J. gangetica Comprare e L. flava
per 72 h. L'effetto antiproliferativo è stata misurata mediante saggio MTT. I risultati sono stati espressi come media ± SD di tre esperimenti indipendenti.
Figura 2 test di citotossicità contro Kato-III, NUGC-4 e Hs-27 dopo incubate con 10 ug /mL di acetato di etile estratto di S. gratum, J. gangetica e L. flava. L'effetto antiproliferativo è stata misurata mediante saggio MTT. I risultati sono stati espressi come media ± SD di tre esperimenti indipendenti. I risultati hanno mostrato entrambi S. gratum
e J. gangetica
fortemente inibita fino a la crescita delle cellule del cancro gastrico del 70%, mentre non distruggere le normali cellule di fibroblasti Hs 27 (differenza significativa [* p
< 0,05]). Ciò contrappone l'effetto di L. flava
, che ha dimostrato una quantità ridotta di crescita cellulare, non solo in cellule di cancro gastrico, ma anche sulle normali fibroblasti pure.
Il IC 50 (mg /ml ) I valori sono riassunti nella figura 3. l'J. gangetica
estratto aveva la disponibilità IC 50 valori di 5,45 mg /ml e 5,86 mg /ml rispettivamente Kato-III e NUGC-4,. Allo stesso modo, il S. gratum
estratto ha mostrato una maggiore citotossicità alle linee di cellule di cancro con IC 50 valori nel 7,24 mg /ml - gamma /ml 11,96 mg, mentre il più alto IC 50 era da L . flava
estrarre 17.20 mg /ml e 14,64 mg /ml per Kato-III e NUGC-4 rispettivamente. Questo era significativamente diverso (p
< 0,05) rispetto alle altre due estratti vegetali (Figura 3). Figura 3 citotossicità comparativa di IC 50 di S. gratum, J. gangetica e L. flava su Kato-III, NUGC-4 e Hs27 mediante saggio MTT. I risultati sono stati espressi come media ± SD di tre esperimenti indipendenti (* p
< 0.05) e rispetto alle cellule Hs27-trattati. J. gangetica
ha mostrato la IC50 più basso, mentre il più alto è stato di L. flava
differenze significative (p < 0,05). Tra
sono stati osservati tra le due cellule di cancro S. gratum
e L. flava linee.
Ultrastrutture alterazioni di Kato-III e linee cellulari NUGC-4 indotte da S. gratum, J. gangetica
e L. flava
al fine di determinare se l'inibizione della crescita da estratti vegetali sono stati associati con l'apoptosi, abbiamo esaminato ulteriormente i cambiamenti morfologici di NUGC-4 linee di cellule di cancro gastrico Kato-III e sotto microscopio elettronico a trasmissione. Le strutture nucleari cellule nei controlli intatto (Figura 4A: Kato-III, E: NUGC-4), mentre le cellule trattate con quelli degli estratti vegetali dimostrato cambiamenti ultrastrutturali in diversi modi (Figure 4B-4D: Kato-III, e 4 F-4H: NUGC-4, rispettivamente). In dettaglio, le cellule Kato III-trattati con S. gratum
visualizzato un nucleo condensato con condensazione della cromatina, la formazione del corpo apoptotico (Figura 4B), e disperdendo detriti granulare. Mentre per le cellule Kato-III trattati J. gangetica
, questi visualizzata la condensazione della cromatina, membrana legati corpi apoptotici e numerose vescicole (Figura 4C). Considerando che i cambiamenti morfologici si trovano in L. flava
trattati cellule Kato-III, mostrata nucleo rimpicciolito con condensazione della cromatina e numerose vescicole eterogenee, tra cui ampie caratteristiche di vacuolizzazione intracellulare (Figura 4D). microscopio Figura 4 Electron a confronto gli effetti di S. gratum, J. gangetica e L. flava su Kato-III (A-D) e NUGC-4 (E-H) 3 giorni dopo il trattamento. bar Scala 2 micron. A) non trattato cellule Kato-III mostra pochissime vescicole (v), una piuttosto uniforme forma arrotondata e cromatina sparsi per nucleo (N). B) S. gratum
trattata cellule Kato-III mostra cromatina condensata nel nucleo (N), apoptosi corpo formazione (punta di freccia) e molti vescicole. La cella viene disperdendo detriti granulare (*). Cell C) Kato-III trattati con J. gangetica
. Questa cella mostra condensazione della cromatina attorno alla periferia del nucleo, membrana vincolato organelli (freccia) e numerosi vacuoli (v). D) cell Kato-III dopo l'esposizione a L. flava
mostra un gran numero di vacuoli autofagici (v), e un nucleo restringimento (N) con cromatina condensata. E) greggia cellule NUGC-4 non mostra la condensazione della cromatina nel nucleo (N) e piuttosto uniforme forma arrotondata. F) delle cellule NUGC-4 trattati con S. gratum
mostra condensazione della cromatina nucleo, numerose vescicole (v) e molti organelli membrana legato (freccia). G) NUGC-4 cellulare dopo esposizione a J. gangetica
mostra un nucleo condensato cromatina, membrana organello vincolato (freccia) e vescicole (v). H) I cambiamenti morfologici osservati in L. flava
trattata cellule NUGC-4 sono stati composti con la condensazione della cromatina nel nucleo (N), e molti vescicole eterogenee di varie dimensioni (v). Zona S. gratum
trattati linee cellulari NUGC-4 hanno mostrato l'apoptosi con compattazione nucleo e produzione di membrana legati corpi apoptotici e numerose vescicole (Figura 4F). Tuttavia, in confronto, NUGC-4 cellule trattate con J. gangetica
, prodotti prime fasi di apoptosi con condensazione della cromatina e numerose vescicole (Figura 4G). Mentre le cellule trattate con L. flava
mostravano periferico nucleo di condensazione della cromatina con numerose vescicole eterogenei e blebbing (figura 4H)
. Discussione
osservazioni fortuita hanno dimostrato che le piante, erbe e tisane tradizionali possono essere sfruttate per potenzialmente vincere la lotta in lotta contro il cancro; un problema di salute in tutto il mondo. Tuttavia, non è fino a quando queste sostanze fitochimiche sono testati in vitro e in vivo

che possiamo sapere con certezza fino a che punto si può andare a mantenere questa malattia sotto controllo [31-34]. In Thailandia il cancro gastrico è una piaga, ma i insolitamente basse incidenze di cancro gastrico nella parte nord-est della Thailandia è di notevole interesse. Il fatto che S. gratum
, J. gangetica
e L. flava Quali sono originarie della zona e formano una parte importante del supplemento dietetico di routine nella popolazione locale, abbiamo quindi deciso di indagare se questi piante popolari sono potenziali candidati per il controllo sicuro e affidabile del cancro gastrico. Anche se ci sono molti rapporti di chiarire la loro attività anti-ossidante, questo studio fornisce la prima prova delle loro potenti effetti citotossici e induzione di apoptosi basate su caratteristiche ultrastrutural sul cancro gastrico.
Queste piante sono state in primo luogo estratta con acetato di etile e poi analizzati per il loro contenuto fenolici utilizzando il metodo di Folin-Ciocalteu.

• Xpert MTB /RIF test può essere utilizzato su archiviato aspirato gastrico e indotto campioni di espettorato per la diagnosi sensibile pediatrica tuberculosis
• presentazione di emergenza del cancro gastrico; la prognosi e le implicazioni per il servizio planning