activité et ultrastructurales changements Antioxydant dans des lignées cellulaires de cancer gastrique induits par les plantes Northeastern folk comestibles Thai extraits

L'activité antioxydante et les changements ultrastructuraux dans des lignées cellulaires de cancer gastrique induits par les plantes Northeastern folk comestibles Thai extrait
Résumé
fond
produits phytochimiques ont un rôle essentiel dans le processus de découverte de médicaments. Cette possibilité prometteuse, cependant, nécessite la nécessité de confirmer leur vérification scientifique avant utilisation. Par conséquent, cette étude vise à évaluer (1) l'activité antioxydante, (2) le potentiel de cytotoxicité, et (3) l'effet sur l'altération ultrastructurale dans les lignes gastriques de cellules cancéreuses par le biais de l'exposition à des fractions de trois plantes comestibles thaïlandais du Nord-locales.
Méthodes
Plantes, Syzygium gratum, Justicia gangetica
et Limnocharis flava
été extrait avec de l'acétate d'éthyle, et chaque extrait brut analysées pour leur teneur totale en composés phénoliques par la méthode de Folin-Ciocalteu. Leur activité antioxydante a été évaluée en utilisant le système ABTS. Les extraits ont ensuite été analysés pour déterminer la cytotoxicité sur deux lignées cellulaires de cancer gastrique Kato-III et NUGC-4, et on les compare avec des fibroblastes Hs27 comme témoin en utilisant le test MTT. Résultats de la viabilité cellulaire (%), IC 50 valeurs, ainsi que les modifications ultrastructurales ont été évalués après le traitement avec une analyse de variance (ANOVA).
Les valeurs totales phénoliques des extraits d'acétate d'éthyle étaient bien en corrélation avec la capacité antioxydante, avec le produit extrait de S. gratum
affichant le plus haut niveau d'activité antioxydante (10 fois plus de réponse) sur J. gangetica
et L. flava
respectivement. L'exposition de S. gratum
et J. gangetica
extraits de lignées cellulaires normales (HS27) a entraîné des effets de cytotoxicité marginaux. Cependant, grâce à un essai de S. gratum
dose-dépendante et J. gangetica
extraits produits effets cytotoxicological dans un peu plus de 75 pour cent de Kato-III et NUGC-4 lignées cellulaires. En outre, caractéristique apoptotique a été montré sous TEM dans les deux lignées de cellules cancéreuses avec ces deux extraits, alors que les caractéristiques de l'autophagie a été trouvé dans des lignées cellulaires après post exposition à des extraits de L. flava
. Conclusions
A partir de ces trois usines, S. gratum
avaient les plus fortes teneurs en composés phénoliques et la capacité antioxydante. Tous révélés contenir des composé (s) avec
cytotoxicité in vitro sur des cellules cancéreuses, mais pas sur des lignées cellulaires normales résolus dans une culture tissulaire et l'analyse ultrastructurale. Ce rapport est le premier à montrer l'effet sur l'altération cellulaire apoptose d'un extrait d'acétate d'éthyle de S. gratum
et J. gangetica.
D'autres études se concentrent maintenant sur les isolats individuels et de leur fonction, la priorité sur S. gratum
et J. gangetica
pour le développement de nouveaux produits thérapeutiques et des combattants contre le cancer.
Mots-clés
cancer gastrique Ultrastructure cellulaire cytotoxicité TEM Contexte
le cancer gastrique est le quatrième cancer le plus fréquemment diagnostiqué et la deuxième cause de premier plan de cancer liés à la mort dans le monde [1]. Il a été estimé qu'il y avait environ 1 million de nouveaux cas de cancer gastrique enregistrés en 2008, mais de ceux, la majorité (713.900) ont été signalés dans les pays en développement, avec les incidences les plus élevées pour le cancer gastrique trouvés en Asie de l'Est, l'Europe centrale et orientale, et Amérique du Sud [1]. Malgré l'intensification apparente de la maladie, il semble que les taux globaux de cancer gastrique est à la tendance, avec une baisse dans les rapports de cancer gastrique dans la plupart des régions du monde occidental [2].
Patients atteints de cancer Malheureusement, la plupart gastriques sont souvent diagnostiqué à un stade avancé lorsque la guérison est impossible et le traitement est palliatif dans le but d'améliorer la qualité et la quantité de la vie. Même si, il existe des directives de traitement pour le cancer gastrique, le taux de survie à cinq ans est inférieure à 50% [3, 4]; un taux qui est évidemment pas encourageant soit à des oncologues ou souffrant d'un cancer. En outre, les effets secondaires des traitements actuels à-dire la chirurgie, la chimiothérapie et la radiothérapie ne sont pas satisfaisants. Ainsi, les thérapies ciblées sont nécessaires pour réduire les effets secondaires et améliorer les résultats cliniques des patients. Par conséquent, les chercheurs dans ce nouveau millénaire paient beaucoup plus d'attention au développement non seulement de nouvelles directives thérapeutiques et les stratégies de prévention précoce de cancer gastrique [5, 6], mais aussi sur la recherche de nouveaux et cibler des agents thérapeutiques spécifiques ainsi.
au cours des deux dernières décennies, les produits phytochimiques ont joué un rôle dominant dans la découverte de nouveaux médicaments pour le traitement du cancer [7], avec plus de 60% des agents anti-cancéreux utilisés actuellement sont dérivés de sources naturelles [8]. Des exemples d'agents anti-tumoraux dans le monde entier cliniquement utiles dérivées de plantes sauvages comprennent le taxol, la vinblastine, la vincristine, les dérivés de la camptothécine, le topotécan (herbe de blé), l'argousier, lingzhi, l'irinotécan et l'étoposide, qui est dérivé d'épipodophyllotoxine [9, 10]. D'autres sont dérivées de fruits et légumes; ne se limite pas à inclure curcumine (curcuma), la génistéine (soja), la catéchine (thé vert) [7], mais aussi des herbes comme les vinca-alcaloïdes, la podophyllotoxine, la berbérine, des huiles d'herbes, de citrons flavonoïde et la camptothécine; un autre groupe d'agents anti-cancéreux prometteurs [11]. Bien que ces agents anticancéreux ont été utilisées pour les voies sur la base de mécanismes ciblés, leur manipulation efficace du extrinsèque et les voies de l'apoptose intrinsèques sont encore à l'étude [12 à 14]. Paclitaxel isoler de l'écorce de l'if du Pacifique, Taxus brevifolia
est un phytochimique qui semble prometteuse. Il est un médicament approuvé par la FDA pour être utilisé pour traiter le sarcome de Kaposi lié au SIDA, le cancer du sein, le cancer non à petites cellules du poumon et le cancer de l'ovaire. Son effet cellulaire primaire est de provoquer la stabilisation anormale de la polymérisation des microtubules dynamiques, ce qui conduit à l'échec de la division cellulaire résultant de l'apoptose [15-17]. Cependant, le paclitaxel est également étudié comme un traitement alternatif pour les autres types de cancer, notamment le cancer gastrique. Il est actuellement en essais cliniques de phase III [18, 19]. Peu importe si elles ont été approuvées ou non, le soutien atteignant large et la poursuite des études extraits de plantes avec des implications dans le traitement du cancer gastrique sont révélateurs du rôle continu que les produits naturels jouent dans le processus de découverte de médicaments.
Lorsque l'on considère une épidémiologie étude des cas de cancer gastrique nouvellement diagnostiqués en Thaïlande, les incidences beaucoup plus faibles ont été observés dans la région du Nord [20]. Bien que, la prévalence des infections de Helicobacter pylori, ne sont pas différents dans la région nord de la Thaïlande, aucun facteur géographique (par exemple plateau, gamme montagneux ou jungle) était différent soit [21]. Par conséquent, il doit y avoir quelque chose au cœur de la population dans la région du Nord-Est, qui réduit l'incidence globale du cancer gastrique. Ayant tout mais a exclu la génétique et les facteurs environnementaux, il a été suggéré que les plantes comestibles folkloriques régimes qui sont généralement consommés dans cette région, peuvent détenir la réponse à cet écart. Ces nouvelles données, et ce plomb prometteur nous interpelle grandement à explorer le mystérieux phénomène, qui est de savoir si les composés phytochimiques dans les usines du Nord-folk comestibles thaïlandais ont un potentiel chimioprévention ou cytotoxique pour lutter contre le cancer de l'estomac, ou d'autres propriétés. Pour cette raison, cette étude a donc été entreprise pour évaluer le potentiel de cytotoxicité de ces plantes comestibles locales. D'un intérêt particulier, les plantes S. gratum
, J. gangetica
et L. flava
, ont été sélectionnés sur la base des données épidémiologiques qui suggère qu'ils sont les légumes populaires les plus régulièrement comestibles dans la région du Nord.
Nous postulons que ces plantes pouvaient tenir dans les propriétés cachées qui pourraient être exploitées pour lutter contre ce cancer, et la présente étude vise à évaluer leur potentiel. Nous évaluons les extraits à base de phénoliques bruts de ces plantes, et de démontrer apoptotique cellulaire élevée et des effets cytotoxiques dans deux lignées cellulaires de cancer gastrique communs et comparatifs, Kato-III et NUGC-4.
Méthodes de les matières végétales
Trois plantes comestibles folkloriques locales; S. gratum
, J. gangetica
et L. flava
(tableau 1) ont été achetés à partir de trois marchés locaux différents dans la province de Khon Kaen dans la partie nord-est de la Thaïlande en Octobre à Décembre 2008. Ces plantes étaient sélectionné sur la base des informations ethnobotanical [22-26] et des données épidémiologiques telles que décrites ci-dessus. identification taxonomique correcte des espèces végétales utilisées pour cette étude a été supervisée par les botanistes du Département de botanique et de pharmacologie, Faculté de Pharmacie, Université de Khon Kaen, Thailand.Table 1 Les noms de trois extraits de plantes et d'autres références de recherche, l'utilisation thérapeutique en thaï traditionnel médecine projeté dans cette étude
espèces [numéro Bon]
famille (nom commun anglais /thaï)
constituants majeurs signalés thérapeutique
dans la médecine traditionnelle thaïlandaise

partie comestible
Ref.
Syzygium gratum
(Wight) SN var Mitra. [Ch de Gratum. Laongpol 6] a, c
Myrtaceae (Eugenia /Phak Mek, Samet chun)
Pas encore clairement déterminée dans la structure chimique, mais avéré être forte en antioxydants et la prévention de l'oxydation et le traitement des contraintes nitrosatif de la dyspepsie et l'indigestion
Leaves
22,23
Justicia gangetica
L. [TK-PSKKU-0066] b
Acanthaceae (violette chinois, primevère tropical /nom: Asystasia gangetica
)
5,11-epoxymegastigmane glucoside (asysgangoside), salidroside, benzyle β-D-glucopyranoside, (6S
, 9R
) -roseoside, ajugol, apigénine 7-O
-β-d- glucopyranoside, apigénine 7-O
-neohesperidoside et apigénine 7-O
-β-d-glucopyranosyl (1 → 6) -β-d-glucopyranoside
traitement des douleurs à l'estomac, les vers de l'estomac, anti- asthme
Feuilles
24,25
Limnocharis flava
L. Buchenau [Patt. 173] c
limnocharitaceae (abutilon jaune, tête de ronce jaune /Reusi Talabhat)
Indéterminée
Appetizer
Stem
26
spécimens de aVoucher déposés à la forêt Herbier (BKF), ministère de la Parc national, de la faune et de la conservation des plantes, Ministère des ressources naturelles, bthe herbier de la Faculté des sciences pharmaceutiques, Université de Khon Kaen et CLe prince of herbarium Songkla University (PSU), Département de biologie, Faculté des Sciences, Université prince of Songkla, Thaïlande de. Préparation d'extraits de plantes
parties comestibles de chaque variété de plantes individuelles (tableau 1) ont été rincées avec de l'eau distillée stérile pour éliminer les détritus et séchées dans un four à air chaud à 50 ° C pendant 7 jours. Une fois séchées, les parties de plantes ont ensuite été découpés en petits morceaux et le sol à une poudre fine en utilisant un mortier et un pilon. Chaque matériel végétal de poudre broyée a été ensuite immergé avec l'excès de solvant d'acétate d'éthyle (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapour) dans un flacon d'extraction. Les mélanges d'acétate d'éthyle ont été ensuite mis en incubation sur un incubateur secoueur à température ambiante pendant 72 h. À la suite de ce processus, les surnageants ont ensuite été transférés dans un nouveau récipient, et le procédé d'extraction avec de l'acétate d'éthyle a été répété trois fois de plus, avant que les surnageants de ces extractions ont été combinées en triple. Ceux-ci ont ensuite été filtrés à travers un papier filtre Whatman n ° 1 et évaporés dans un évaporateur rotatif. Ces extraits d'échantillons ont ensuite été utilisés dans d'autres expériences.
Détermination de composés de composés phénoliques totaux au total des composés phénoliques dans les extraits de plantes ont été déterminées par la méthode de Folin-Ciocalteu comme décrit par Sachindra [27]. En bref, 0,2 ml de chaque extrait de plante dissous dans 50% de DMSO (Santa cruz biotechnologie Inc., Bangkok, Thaïlande) a été oxydée avec ml 1,0 10 fois dilué réactif de Folin-Ciocalteu (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapour) et neutralisé avec 0,8 ml de solution de carbonate de sodium à 6% (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapour). Après 1 h d'incubation, l'absorbance de la solution a été mesurée à 764 nm et les résultats étaient représentés comme milligramme d'équivalent d'acide gallique par gramme de poids sec (mg GAE /g). L'essai a été réalisé en trois exemplaires pour chaque concentration d'échantillon à partir de 3 essais séparés.
Détermination de l'activité anti-oxydante
L'activité antioxydante des extraits de plantes a été déterminée par spectrophotométrie en utilisant le système d'ABTS selon le procédé de Re et de ses collègues [28]. En bref, l'ABTS cation radicalaire (ABTS • +) mélange a été généré par l'oxydation du mM de ABTS 7 (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapour) avec 140 mM de persulfate de potassium (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapour), incubée pendant 16 h à température ambiante dans l'obscurité. L'activité antioxydante a été déterminée en ajoutant 0,2 ml d'extraits de plantes avec 1,8 ml ABTS • + de mélange de cation radicalaire. Après incubation du mélange pendant 6 minutes, l'absorbance à 734 nm a été enregistrée. ABTS • + capacité de piégeage des radicaux (%) des extraits de plantes ont été calculées sur la base de l'équation suivante: ABTS • + capacité de piégeage des radicaux (%) = [(échantillon Abs.control-Abs.test) /Abs. commande] x100. Où Abs.control est l'absorbance de la réaction de contrôle (sans extrait de plante) et de l'échantillon Abs.test est l'absorbance en présence d'un extrait de plante. Les résultats ont ensuite été comparés à l'activité anti-balayage de Trolox (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapour) et représentés comme Trolox capacité antioxydante équivalent par gramme de poids sec (TEAC /g). L'essai a été réalisé en trois exemplaires pour chaque concentration d'échantillon à partir de 3 essais séparés. La culture cellulaire
Deux lignées cellulaires de cancer gastrique humain Kato III (ATCC n ° HTB-103) à partir de l'American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD, USA) et NUGC-4 (JCRB0834) de la recherche en sciences de la santé Ressources Bank (Japon Health Sciences Foundation) ont été utilisés pour in vitro
dosages cytotoxiques. Le prépuce humain lignée cellulaire de fibroblaste HS27 (ATCC No.1634) a été utilisé comme témoin. Ils ont été cultivés dans du RPMI 1640 contenant stérile à 10% (v /v) de sérum fœtal bovin (Biochrom AG, Berlin) à 37 ° C, fourni avec 5% de CO 2 dans un incubateur. Les cellules ont été cultivées dans des flacons classiques de culture de tissu et après avoir atteint 80% de confluence ont été repiquées à une solution de 0,25% de trypsine-EDTA (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapour) tous les 3-4 jours jusqu'à son utilisation.
In vitro
les extraits de plantes test de cytotoxicité ont été évaluées son activité cytotoxique contre Kato-III et NUGC-4 lignées cellulaires via le test colorimétrique MTT comme décrit d'abord par Mosmann [29] avec les modifications suggérées par Denizot et Lang [30]. Les cellules cultivées (1 x 10 4 cellules) dans des milieux complets ont été transférés dans chaque puits d'une plaque à 96 puits plat et ensuite incubées à 37 ° C dans une atmosphère d'air humidifié enrichi avec 5% (v /v) CO 2 pour 24 h, afin de laisser les cellules se fixent au fond de chaque puits. Les cellules cultivées ont ensuite été traitées avec l'extrait brut testé (puits en triple par condition) par l'addition de 2 ul de dilutions successives de chaque extrait à une concentration de 1,25, 2,5, 5, 10 et 20 pg /ml. Les cellules ont ensuite été cultivées comme ci-dessus pour un autre 72 h avant l'addition de 10 ul d'une solution à 5 mg /ml d'acide 3- (4, 5-diméthylthiazol-2-yl) -2, 5-diphényltétrazolium (MTT) ( Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapour) dans chaque puits. L'incubation a été poursuivie pendant encore 4 heures avant le milieu a été retiré. Un mélange de DMSO (150 pl) et de glycine (25 ul) ont été ajoutés à chaque puits et mélangés pour assurer la lyse des cellules et la dissolution des cristaux formasan, avant que l'absorbance à 540 nm a été mesurée. Trois répétitions de chaque essai ont été effectuées et le pourcentage de conversion de MTT en son dérivé formazan pour chaque (croissance cellulaire pour cent) et a été calculée en divisant la DO à 540 nm de puits avec la commande sur la base de l'équation suivante: la croissance des cellules Pourcentage = [test A540 - A540 zéro] x 100 /[contrôle A540 - A540 zéro]. Où A540 A540 = zéro de la solution après que la cellule a été incubée pendant 24 h avant l'addition d'extraits végétaux; test A540 = A540 de solution après des extraits de plantes addition; et le contrôle de A540 = A540 de solution sans extraits de plantes plus. En outre, pour l'assurance non-toxiques d'extraits de plantes contre les cellules normales (lignée cellulaire fibroblaste HS27), une double dose (2 fois de IC 50 concentrations [10 pg /ml]) des extraits ont été utilisés et évalués par MTT essai. L'essai a été réalisé en trois exemplaires pour chaque concentration d'échantillon à partir de 3 essais séparés.
Demi-concentration inhibitrice maximale (IC50)
l'absorbance obtenue à 540 nm a été utilisé pour déterminer le pourcentage de survie des cellules en supposant que 100% de survie a été obtenu lorsqu'ils sont traités avec des solvants uniquement en tant que témoins, et aucune différence dans l'activité métabolique existent entre les cellules survivantes dans des conditions différentes. Sous ces hypothèses, le pourcentage de survie des lignées de cellules cancéreuses traitées et les cellules mises en culture normale a été calculée selon la formule suivante: Pourcentage de survie = (A540 cellules traitées /contrôle A540) x 100. La moyenne ± 1 écart-type (SD) Cellule survie (%) a été tracée en fonction de la concentration en extrait de plante correspondante et la meilleure ligne d'ajustement a été utilisé pour calculer le IC 50 valeur estimée de la concentration qui pourrait fournir 50% de la survie cellulaire.
les concentrations d'extraits de plantes donnant concentration inhibitrice 50% (CI 50) ont été déterminées à partir de trois expériences séparées. Le circuit intégré 50 de chacun des extraits de plantes ont ensuite été utilisées comme la concentration traitée à 0 et 3 jours contre Kato-III et NUGC-4, qui ont été évalués pour l'apoptose en utilisant une microscopie électronique à transmission (MET). L'essai a été réalisé en triple pour chaque concentration de l'échantillon à partir de 3 essais séparés.
La préparation des échantillons pour les cellules de microscopie électronique à transmission
Kato-III (1x10 6 cellules) et NUGC-4 cellules (1x10 6 des cellules traitées) avec chaque extrait de plante ainsi que le témoin négatif (cultures non traitées) ont été réalisées séparément. En bref, ils ont été rincés avec une solution de D-Hank (Life Technologies, Bangkok, Thaïlande) deux fois, et livrés dans des tubes de centrifugeuse avec une spatule en plastique, suivie d'une centrifugation à 2000 rpm pendant 15 min, le surnageant a été éliminé. Le précipité a été fixé dans une solution contenant 4% de glutaraldéhyde (Electron Microscopy Sciences, Bangkok, Thaïlande) et 2% de paraformaldehyde (Electron Microscopy Sciences, Bangkok, Thaïlande) dans 0,1 M de tampon phosphate salin (PBS), pH 7,4, à 4 ° C pendant 1 h, puis on l'a lavé avec 0,1 M de PBS pour éliminer le fixatif. Spécimens ont été post dans 1% de tétroxyde d'osmium (Electron Microscopy Sciences, Bangkok, Thaïlande) dans le même tampon pendant 30 min, et déshydraté dans une série d'éthanol à 10 min chacune. Ils ont ensuite été effacés avec deux changements d'oxyde de propylène et immergés dans des mélanges séquentielle d'oxyde de propylène et d'Araldite 502 résine (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapour), à des rapports de 3: 1, 2: 1, 1: 2, et enfin noyée dans Araldite pur. Les articles de 1 um ont été découpées à l'aide d'une MT-2 Porter-Blum ultramicrotome. Les sections ont été montées par la suite sur des grilles de cuivre, séché à l'air et contrasté séquentiellement avec 2% d'acétate d'uranyle (Electron Microscopy Sciences, Bangkok, Thaïlande) dans 7% d'alcool dans l'obscurité, puis traitée avec du citrate de plomb (Electron Microscopy Sciences, Bangkok, Thaïlande ). Ils ont été examinés sous un microscope électronique 100 de transmission Philips CM fonctionnant à 80 kV. Analyse statistique
Résultats de ont été exprimés en tant que moyen SD ± de répétitions à partir de 3 essais séparés. La comparaison entre les ensembles de données a été effectuée en utilisant analyse de la variance à un facteur (ANOVA) suivie d'un test t de Student. Toutes les analyses statistiques ont été effectuées en utilisant SPSS19. Des différences ont été acceptées comme statistiquement significatives à p <. 0.05
Total des contenus phénoliques des résultats de plantes extraits
Trois plantes comestibles folkloriques de la région du Nord-Est de la Thaïlande (S. gratum
, J. gangetica
et L. flava
) ont été extraits et leur teneur en composés phénoliques totaux déterminé avec les résultats présentés dans le tableau 2. Parmi ces extraits de plantes, le plus haut niveau de contenu phénolique total a été détecté dans S. gratum
à 149.789 ± 0,381 mg GAE /g. Il était de 10 plis significativement plus importante dans le contenu que celui a été identifié dans J. gangetica
et L. flava
(16,513 ± 0,130 et 14,334 ± 0,463 mg GAE /g, respectivement, p
< 0,05). Tableau 2 moyenne teneur totale en phénolique d'extraits de plantes exprimée en GAE et anti-balayage activité des extraits de plantes représentées comme TEAC s extraits de plantes
total plenolics (mg GAE /g de poids sec)

activité anti-balayage (mM TEAC /g de poids sec)
S. gratum
(Wight)
149,789 ± 0,381
2,823.521 ± 27,521
J. gangetica L
.
16,513 ± 0.130a
313,141 ± 39.713a
L. flava (L.)
14,334 ± 0.463a
900,845 ± 20.346a, b
Les valeurs ont été exprimées en moyenne ± SD à partir de 3 échantillons répétés de dosages séparés. ap
< 0,05 VS S. gratum
, pb
<. 0,05 J. VS gangetica
Antioxydant capacités des extraits de plantes activités
Antioxydant d'acétate d'éthyle extraits de S. gratum
, J. gangetica
et L. flava
sont présentés au tableau 2. les valeurs équivalentes TEAC pour ces plantes étaient significativement différentes dans l'ordre décroissant de S. gratum
> L. flava
> J. gangetica
(2,823.521 ± 27,521, 900,845 ± 20,346, 313,141 ± 39,713, respectivement, p
< 0,05). Sensiblement autour 3-9 plis activité antioxydante élevée de S. gratum
a été trouvé par rapport aux deux autres extraits d'espèces. Ceux-ci étaient bien corrélées avec des teneurs totales phénoliques. (Coefficient de corrélation R 2 = 0,935, Y = 16.64x + 324,5). Inhibition de la croissance
cellulaire
lignées cellulaires de cancer gastrique Kato-III et NUGC-4 et la lignée cellulaire de fibroblaste humain (témoin) exposée à l'extrait de plante (concentration de dilution en série [1,25, 2,5, 5, 10 et 20 pg /ml]), pour déterminer l'effet de l'activité d'inhibition de la croissance induite par chaque plante. Après 72 h, les cellules viables ont été mesurées par un test MTT. Kato-III et NUGC-4, les cellules exposées à S. gratum
et des extraits de J. gangetica a entraîné une diminution significative des cellules viables d'une manière dose-dépendante (Figure 1). À 20 pg /ml, ils ont tous provoqué plus de 50% de mort cellulaire dans les deux lignées cellulaires de cancer gastrique. Cependant, à 10 pg /mL les extraits produits à partir de seulement S. gratum
et J. gangetica
démontré cytotoxicité puissante significative (p
< 0,05) pour induire plus de 70% de mort cellulaire à Kato-III et NUGC-4 lorsque comparer avec L. flava
(Figure 2). En outre, ces deux extraits végétaux ont montré aucun effet sur la lignée cellulaire de fibroblaste humain de prépuce normal (figure 2). En revanche, L. flava
'de ses effets diminués. Résultant en environ 25% de la mort cellulaire, sans différence significative entre les cellules de cancer gastrique et cellules de fibroblaste normale (Figure 2). Figure 1 des études de l'usine de réponse Dose extrait sur deux lignes gastriques de cellules cancéreuses: (A) Kato-III et (B) NUGC-4. Les cellules ont été traitées avec différentes concentrations (0, 1,25, 2,5, 5, 10 et 20 pg /ml) de S. gratum
, J. gangetica
et L. flava
pendant 72 h. L'effet anti-prolifératif a été mesurée par un test MTT. Les résultats ont été exprimés en moyenne ± SD de trois expériences indépendantes.
Figure 2: Test de cytotoxicité à l'encontre de Kato-III-4 et NUGC Hs-27 après incubée avec de l'acétate d'éthyle /ml 10 pg extrait de S. gratum, J. gangetica et L. flava. L'effet anti-prolifératif a été mesurée par un test MTT. Les résultats ont été exprimés en moyenne ± SD de trois expériences indépendantes. Les résultats ont montré à la fois S. et J.
gratum gangetica
fortement inhibée jusqu'à 70% de la croissance de cellules de cancer de l'estomac tandis que la destruction des cellules non fibroblastiques normales Hs 27 (différence significative [* p
< 0,05]). Ce résultat contraste par l'effet de L.
flava, qui fait preuve d'une quantité réduite de la croissance cellulaire, non seulement dans les cellules de cancer de l'estomac, mais aussi sur des cellules fibroblastiques normales aussi bien.
Le circuit intégré 50 (pg /ml ) les valeurs sont résumées dans la figure 3. le gangetica J.
extrait avait le plus faible IC 50 valeurs de 5,45 pg /mL et 5,86 pg /ml pour Kato-III et NUGC-4, respectivement. De même, le S. extrait gratum
a montré une cytotoxicité plus élevée pour les lignées cellulaires de cancer avec IC 50 valeurs dans le 7,24 pg /ml - 11,96 pg gamme /mL, alors que, le plus élevé IC 50 était de L . flava
extraire 17,20 pg /ml et 14,64 ng /ml pour Kato-III et NUGC-4, respectivement. Ceci était significativement différent (p
< 0,05) par rapport aux deux autres extraits de plantes (figure 3). Figure 3 cytotoxicité comparative des IC 50 de S. gratum, J. gangetica et L. flava sur Kato-III, NUGC-4 et HS27 par test MTT. Les résultats ont été exprimés en moyenne ± SD de trois expériences indépendantes (* p
< 0,05) par rapport aux cellules traitées HS27. J. gangetica
a montré la CI50 plus faible, alors que la plus élevée était de L. flava
différences significatives (p < 0,05). Entre S. gratum
et L. flava
ont été observées entre les deux cellules cancéreuses lignes.
modifications ultrastructure de Kato-III et NUGC-4 lignées cellulaires induites par S. gratum, J. gangetica
et L. flava
afin de déterminer si l'inhibition de la croissance par des extraits de plantes ont été associés à l'apoptose, nous avons en outre étudié les modifications morphologiques de Kato-III et NUGC-4 lignées cellulaires de cancer gastrique au microscope électronique à transmission. Les cellules de contrôle des structures nucléaires sont apparues intacte (figure 4A: Kato-III, E: NUGC-4), tandis que les cellules traitées avec celles des extraits de plantes ont montré des changements ultrastructuraux de plusieurs manières (Figures 4B à 4D: Kato-III et 4 F-4H: NUGC-4, respectivement). Dans le détail, les cellules Kato-III traités avec S. gratum
affiché un noyau condensé avec condensation de la chromatine, la formation de corps apoptotiques (figure 4B), et la dispersion des débris granulaires. Alors que pour les cellules Kato-III traités J. gangetica
, ces condensation de la chromatine affichée, liés à la membrane de corps apoptotiques et de nombreuses vésicules (figure 4C). Considérant que les modifications morphologiques trouvées dans L. flava
traités cellules Kato-III, affiché noyau rétréci avec la condensation de la chromatine et de nombreuses vésicules hétérogènes, y compris de nombreuses caractéristiques de vacuolisation intracellulaire (figure 4D). La figure 4 micrographies Electron comparant les effets de S. gratum, J. L. et gangetica flava Kato III (A-D) et NUGC-4 (E-H) 3 jours après le traitement. Barre d'échelle 2 um. A) cellules Kato-III montre non traitée très peu vésicules (v), une assez uniforme forme et chromatine dispersés à travers le noyau (N) arrondis. B) S. gratum
traité cellule Kato-III montre chromatine condensée dans le noyau (N), apoptotique corps formation (flèche) et de nombreuses vésicules. La cellule se disperse débris granulaires (*). cellule C) Kato-III traités par J. gangetica
. Cette cellule présente une condensation de la chromatine autour de la périphérie du noyau, organelles liées à la membrane (flèche) et de nombreuses vacuoles (v). D) des cellules Kato III après une exposition à L. flava
montre un grand nombre de vacuoles autophagiques (v), et un noyau de rétraction (N) avec une chromatine condensée. E) non traitée NUGC-4 cellules montre pas de condensation de la chromatine dans le noyau (N) et une assez uniforme forme arrondie. F) NUGC-4 cellules traitées avec S. gratum
montre chromatine de noyaux de condensation, de nombreuses vésicules (v) et de nombreux organites liés à la membrane (flèche). G) NUGC-4 cellule après exposition à J. gangetica
montre un noyau condensé chromatine, membrane organite lié (flèche) et des vésicules (v). H) Les modifications morphologiques observées dans L. flava
traité NUGC-4 cellules ont été constituées avec condensation de la chromatine dans le noyau (N), et de nombreuses vésicules hétérogènes de taille variable (v).
S. gratum
traités NUGC-4 lignées cellulaires présentaient l'apoptose avec compactage noyau et production de membranaires corps apoptotiques et de nombreuses vésicules (figure 4F). Cependant, en comparaison, NUGC-4 cellules traitées avec J. gangetica
, produits premiers stades de l'apoptose par la condensation de la chromatine et de nombreuses vésicules (figure 4G). Alors que les cellules traitées avec L. flava
montré périphérique noyau chromatine de condensation avec de nombreuses vésicules hétérogènes et bourgeonnement (Figure 4H) Rapport
observations fortuites de. Ont montré que les plantes, les herbes et les thés traditionnels peuvent être exploitées pour potentiellement gagner la lutte dans la lutte contre le cancer; un problème de santé dans le monde entier. Cependant, ce n'est que ces composés phytochimiques sont testés in vitro et in vivo

que nous pouvons savoir avec certitude dans quelle mesure ils peuvent aller à garder cette maladie sous contrôle [31-34]. Dans le cancer gastrique Thaïlande est un fléau, mais les incidences de cancer gastrique anormalement faibles dans la partie nord-est de la Thaïlande est d'un intérêt considérable. Le fait que S. gratum
, J. gangetica
et L. flava
sont indigènes à la région et forment une partie importante du complément alimentaire de routine dans la population locale, nous avons donc décidé d'étudier si ces plantes folkloriques sont des candidats potentiels pour le contrôle sûr et fiable du cancer gastrique. Bien qu'il existe de nombreux rapports pour clarifier leurs activités anti-oxydantes, cette étude fournit la première preuve de leurs effets cytotoxiques puissants et induction apoptotique sur la base caractéristique ultrastrutural sur le cancer gastrique.
Ces plantes ont été tout d'abord extrait avec de l'acétate d'éthyle, puis analysés pour leur contenu phénolique en utilisant la méthode de Folin-Ciocalteu.

• Xpert MTB /RIF d'essai peut être utilisé sur l'aspiration gastrique archivé et des échantillons d'expectoration induite pour le diagnostic de la tuberculose sensible pédiatrique
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