Uttrycket och kliniska betydelsen av MIR-132 i mag cancerpatienter

Uttrycket och kliniska betydelsen av MIR-132 i mag cancerpatienter Bild Sammanfattning
Bakgrund och objektiv
MIR-132 spelar en roll i regleringen av neuronal morfologi och cell retbarhet. Lite är känt om effekterna av MIR-132 i cancer. Syftet med denna studie är att utvärdera uttrycket av MIR-132 och dess kliniska betydelse i magcancer.
Metoder
cancervävnader och motsvarande normala vävnader från undersöktes med avseende på uttryck av MIR-132 79 patienter med magsäckscancer använder kvantitativ PCR och sambandet mellan mIR-132 uttrycksnivåer och kliniskt patologiska faktorer och prognos analyserades.
Resultat
79 kliniska prov av gastric cancerpatienter, mIR-132 expressionsnivåer i cancervävnader var betydligt högre än i de motsvarande normala vävnader (P
= 0,001). Högre expressionsnivåer av MIR-132 var associerade med mer frekvent lymfkörtel metastas (P
= 0,033), mer lymfatisk tumör emboli (P
= 0,007), och mer avancerat stadium (P
= 0,016). Dessutom, uttryck av MIR-132 var en oberoende prognostisk faktor för total överlevnad (P
= 0,020).
Slutsats
miR-132 skulle kunna fungera som en effektiv prognostisk faktor för gastric cancerpatienter. Review, Virtual diabilder
virtuella slide (s) för den här artikeln hittar du här: http:... diagnosticpathol nik diagnomx //www eu /vs /8168577241196050
Nyckelord
Gastric cancer Prognos biologiska markörer Inledning
Även förekomsten av magsäckscancer har väsentligt minskat under flera decennier, är det fortfarande den fjärde vanligaste cancerformen och den näst vanligaste dödsorsaken i cancer [1, 2]. En multipel av gener tycks bidra till den maligna biologiskt beteende för magcancer [3, 4]. Det är mycket viktigt att identifiera prognostiska faktorer för att maximera den terapeutiska effekten och att minimera de negativa effekterna vid behandling av cancerpatienter.
MicroRNAs är en klass av endogena små icke-kodande RNA som fungerar som gen regulatorer genom att reglera budbärar-RNA översättning och nedbrytning [5]. MicroRNAs spela en avgörande roll i regleringen de normala funktionerna såsom proliferation, differentiering och apoptos. Dessutom dysreglering av miRNA bidrar till carcinogenes och cancer progression [6, 7]. Som medlem i miRNA familj, MIR-132 spelar en viktig roll i inflammation, angiogenes, och neural utveckling [8-10]. Nyligen vissa studier visade att dysreglering av MIR-132 var relaterad till en mängd olika humana tumörer, såsom icke-småcellig lungcancer, osteosarkom, bröstcancer, hepatocellulär cancer, prostatacancer och cancer i bukspottskörteln [11-16]. Det finns dock inga rapporter om uttrycket och kliniska betydelsen av MIR-132 i magcancer.
I denna studie var Mir-132 uttryck i mag cancerpatienter undersökas och sambandet mellan MIR-132 och kliniskt patologiska parametrar analyserades . Dessutom utvärderade vi uttrycket av vissa proteiner som är involverade i cell-cykelkontroll (p21, p53), vävnadsproliferation och differentiering (c-myc). p21 och p53-proteiner är produkter av tumörsuppressorgener, som aktiveras genom att modulera cellproliferation via styrning av G1 uppehållkontrollpunkten av cellcykeln [17, 18]. c-myc-protein är en typ av transkriptionsfaktor.
Patienter och metoder
Human magsäckscancer och motsvarande normala vävnader erhölls från 79 patienter som genomgick gastrektomi vid institutionen för Gastric Cancer och mjukdelssarkom, Fudan University i Shanghai Cancer Center, mellan januari 2007 och december 2009. Partiell gastrektomi utfördes i 36 patienter, och total gastrektomi utfördes i de övriga 43 patienter. Minst 4 cm resektion marginaler från grov tumör garanterades för alla patienter. Totalt 71 patienter erhöll adjuvant kemoterapi. Efter resektion, proverna frystes omedelbart i flytande kväve och lagras sedan i -80 ° kylskåp. Inklusionskriterier för studien var adenokarcinom och fullständig patologiska data; Uteslutningskriterier var neoadjuvant behandling, peritoneal spridning och avlägsna metastaser. Data hämtas från sina operativa och patologiska rapporter och uppföljningsdata erhölls genom telefon poli och klinisk databas. Den skriftligt informerat samtycke hade erhållits från alla patienter, och denna studie godkändes av den etiska kommittén för Shanghai Cancer Center i Fudan University.
RNA-extraktion och kvantitativ realtids-PCR
totalt RNA från vävnad extraherades med TRIzol-reagens (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) enligt tillverkarens instruktioner. Kvantitativa realtids-PCR (QRT-PCR) analyser utfördes för att detektera endogent uttryck av MIR-132 enligt Applied Biosystems metoden. Kortfattat, cDNA transkriberades omvänt från total RNA-prov med användning av en miRNA specifik stam-ögla primer från TaqMan MicroRNA Assays och reagens från TaqMan MicroRNA Reverse Transcription Kit (ABI, Forest City, CA, USA). Därefter tillsattes PCR-produkter amplifierades från cDNA-prover med användning av de TaqMan-MicroRNA Analyser tillsammans med TaqMan Universal PCR Master Mix och mängden av PCR-produkt övervakades med användning av Applied Biosystems 7900 Sequence Detection System. U6 snrna användes som en intern kontroll. Den relativa mängden av MIR-132 beräknades med användning av två (-Delta deltac (T)) -metoden [19].
Immunohistokemisk färgning
p21, p53, och c-myc detekterades genom immunohistokemisk metod. Alla primära antikroppar och monoklonala antikroppar köptes från Dako (Hamburg. Tyskland). Immunhistokemisk färgning utfördes genom metoden förbättra märkta polymersystem (ELPS). Efter inkubation över natten vid 4 ° C med anti-p21, p53, och c-myc-antikroppen, var sektionerna behandlades enligt standard immunoperoxidas metoder med användning av ett streptavidin biotin peroxidise komplex kit (LSAB + Kit /HRP; Dako). Den peroxidise Reaktionen framkallades sedan med diaminobensidin (Dako). Negativa kontrollsektioner underkastades samma procedur med undantag för att den första antikroppen ersattes med fosfatbuffrad saltlösning (PBS) [20].
Immunohistokemisk färgning scoring
Alla skivorna bedömdes av två patologer utan kännedom om kliniskt resultat. Den procentuella andelen av immunoreaktiva celler och färgningsintensitet utvärderades i varje prov. Den procentuella andelen av immunreaktiva celler graderades på en skala från 0 till 4: ingen färgning poängsättes som 0, 1 till 10% av celler färgade scored som en, 11-50% som 2, 51-80% som 3, och 81- 100% som 4. färgnings~~POS=TRUNC intensiteter graderades från 0 till 3: 0 definieras som negativ, en så svag, 2 som modereras, och tre lika starka, respektive. Rådata omvandlades till immunhistokemisk poäng (IHS) genom att multiplicera kvantiteten och intensitet poäng. På den slutliga analysen, hade fall en poäng på mindre än 1 ansågs vara negativ, och ≥ 1 ansågs vara positivt [20].
Statistisk analys
Patienternas funktioner och kliniskt patologiska egenskaper analyserades med hjälp av två -tailed Students t
-test för kontinuerlig variabel och χ 2 test för kategoriska variabel. Generellt kurvor överlevnad beräknades av Kaplan-Meier-metoden, och skillnaderna mellan överlevnadskurvorna undersöktes med lång-rank test. De oberoende prognostiska faktorer undersöktes av multivariat överlevnadsanalys med hjälp av Cox proportional hazards modell. Den accepterade signifikansnivån var P Hotel < 0,05. Statistiska analyser och grafik utfördes med hjälp av SPSS 13,0 statistisk paket (SPSS, Inc., Chicago, IL) Review Resultat
kliniskt patologiska egenskaper
Det fanns 62 män och 17 kvinnor. (3,6: 1) med en genomsnittlig ålder av 58 år. Det fanns 7 (8,9%) början av gastric cancer och 72 (91,1%) avancerad magsäckscancer. Enligt histologisk typ, var väl differentierade tumörer observerades i 3 (3,8%) patienter, måttligt differentierade i 11 (13,9%) patienter och dåligt differentierade tumörer i resterande 65 (82,3%) patienter. Av 79 patienter, 25 (31,6%) hade tumörer som ligger i den övre tredjedelen, 15 (19,0%) hade tumörer i den mellersta tredje, 36 (45,6%) hade tumörer i den nedre tredjedelen av magen, och 3 (3,8%) hade tumörer ockuperade två tredjedelar eller mer av magen. Lymfkörtel metastas observerades hos 57 patienter, metastasen hastigheten var 72,2%. Fördelningen av patologiskt stadium var följande: 10 (12,6%) patienter hörde steg I, 24 (30,4%) II, och 45 (57%) III
expression och korrelationen av MIR-132, p21, p53. och c-myc
miR-132 nivåer i 79 cancer (T) och motsvarande normala vävnader (N) undersöktes av QRT-PCR. De flesta tumörvävnader (57/79, 72%) visade förhöjda halter av MIR-132 jämfört med motsvarande normala vävnader, med en medianökning av 2,3-faldigt. MIR-132 nivåer i cancervävnader (medelvärde ± SD, 0,35 ± 0,58) var betydligt högre än i motsvarande noncancerous vävnader (medelvärde ± SD, 0,15 ± 0,35, P Hotel < 0,05). Uttryck för p21, p53, och c-myc undersöktes genom immunhistokemisk färgning. p21 uttryck var positivt i 64,6% av alla magcancer vävnader. p21 färgning observerades i kärnan hos karcinomceller. p53-expression var positiv i 74,7% av alla magcancer vävnader. p53 färgning observerades i kärnan hos karcinomceller. c-myc uttryck var positivt i 44,3% av alla magcancer vävnader. c-myc-färgning observerades i cytoplasman hos karcinomceller. MIR-132-uttryck associeras med p53 och c-myc. Det fanns ingen korrelation med p21. Dessutom var p53expression samband med c-myc (tabell 1) .table 1 Positiva resultat av korrelationer mellan biologiska markörer
Biologiska markörer
Korrelationskoefficienter (r)
P value

miR-132
P53
0.274
0.015
miR-132
c-myc
0.228
0.044
P53
c-myc
0.235
0.038
Kliniska betydelsen av MIR-132 i magcancer
79 gastric cancerpatienter delades in i två grupper, inklusive MIR-21 med hög uttrycksgrupp (T /N > 0,5, n = 33) och låg uttrycks gruppen (T /N < 0,5, n = 46) enligt median T /N ranson av mIR-132 uttryck. Korrelationen mellan MIR-132 uttryck och patologiska parametrar analyserades. Resultaten visade att patienter med högt MIR-132 uttryck hade oftare lymfkörtelmetastaser (P
= 0,033), mer lymfatisk tumör emboli (P
= 0,007), och mer avancerat stadium (P
= 0,016 ). Men det fanns inga signifikanta skillnader om kön, ålder, histologisk typ, tumörplacering, tumörstorlek, nervös invasion och T fasen (tabell 2). I den totala överlevnaden, patienter med Mir-132 hög expression hade en betydligt sämre prognos än de med MIR-132 låg uttryck (P
= 0,000) (Figur 1). Univariat analys av total överlevnad visade att den relativa uttrycket av MIR-132, nervös invasion, lymfatisk tumör emboli, och patologiskt stadium var prognos prediktorer. Multivariat överlevnadsanalys, inklusive alla viktiga prognostiska faktorer som nämns i univariat analys utfördes för att bestämma de oberoende prognostiska faktorer för magcancer. Multivariat analys visade att Mir-132 uttryck nivå och patologisk skede var oberoende prognostiska faktorer (tabell 3) .table 2 MIR-132 uttryck och kliniskt patologiska faktorer
Variabler
Hög uttryck n = 33

Låg uttryck n = 46
P
Kön
0,618
Man
25 37
Kvinna
8
9
Ålder
0,556 Hotel < 60
18
22
≥60
15
24
Histologisk betygs
0,412
Dåligt -differentiated
28
36
måttligt differentierade
5
7
Väl differentierade
0 3
tumörlokalisation
0,467
övre tredje
10
15
USA tredje
8 7
Lägre tredje
15
21
Två tredjedel eller mer
0
3
Tumörstorlek storlek~~POS=HEADCOMP (cm) katalog 0,862 Hotel < 5
18
26
≥5
15
20
Nervous invasion
0,096
Ja
22
22
nr
11
24
lymfatiska tumör emboli
0,005
Ja
26
22
nr
7
24
T-steget
0,070
T1, T2
6
17
T3, T4
27
29
Lymfkörtel metastas
0,033
Ja
28
29
nr
5 17
Patologisk skede
0,016
I
2 Review 8
II
6 18
III
25 20
Figur 1 Jämförelse av överlevnads enligt uttrycket av mIR-132. Det fanns signifikanta skillnader mellan MIR-132 hög expression och MIR-132 låg uttryck (P
= 0,000).
Tabell 3 multivariat analys av patienter från Cox modell
Variabel
χ2
vid P
vale
RR
95% CI
miR-132 uttryck
5,447
0,020
2,414
1,152-5,059
Nervous invasion
1,918
0,166
1,890
0,768-4,655
lymfatiska tumör emboli
0,173
0,677
0,838
0,366-1,923
Patologisk skede
8,742
0,003
4,356
1,642-11,555
Diskussion
identifiera prognostiska faktorer i magcancer var nödvändigt för att förutsäga patienters överlevnad och bestämma optimala terapeutiska strategier . Djupet av invasionen och lymfkörtel metastas var de viktigaste prognostiska faktorer i magcancer. Som ett resultat av variationen i prognosen i samma patologiska stadiet av magcancer, har det varit en hel del forskning för specifika biologiska markörer för att identifiera patienter med prognos [21-28]. De biologiska markörer såsom mikroRNA, c-Met, L1CAM, endotelial lipasprotein, rörlig kopietalet av mitokondrie-DNA (mtDNA), TIMP3, hK6 och Ezrin har studerats ingående. Som en ny biomarkör, alltmer studerade potential miRNA i att förutsäga prognosen. MIR-132 är ett starkt konservativa miRNA transkribera från en intergenregion på människans kromosom 17 av transkriptionsfaktorn cAMP-responselementet bindande protein [29]. De flesta av rapporterna bout miR-132 reglering och biologiska funktioner fram ur de studier som gjorts i den neuronala sammanhang. Dessutom har miR-132 också beskrivits i en rad andra områden, såsom inflammation, celltransformation och tumörbildning. MIR-132 visade sig vara uppreglerad eller nedregleras i olika humana cancer [16, 30, 31]. Vissa studier har visat att MIR-132 kan främja celltillväxt [31]. Det finns dock fortfarande inga rapporter om MIR-132 i magcancer.
I denna studie undersökte vi miR-132 uttryck i magcancer och bestäms om det kunde förutsäga behandlingsresultat. Vi fann att MIR-132 uttryck var högre i cancervävnader jämfört med motsvarande normala vävnader. Den exakta orsaken till den miR-132 hög expression i magcancer är okänd. Park JK et al. rapporterats [31] att B2AR agonisten terbutalin ökar miR-132 uttryck. MIR-132 var transkription aktiveras av CREB i neuroner [32]. B2AR antagonister inhiberade aktivering av CREB [33]. Därför är det möjligt att simulera B2AR öka miR-132 uttryck efter aktivering av CREB.
Resultaten visade att höga MIR-132 uttryck i magcancer var signifikant korrelerad med aggressiva kliniskt patologiska egenskaper såsom oftare lymfkörtelmetastaser, mer lymfatisk tumör emboli, och mer avancerat stadium. Dessa resultat antydde att uppreglering av MIR-132 spelade en viktig roll vid gastrisk cancer progression. Intressant nog fann vi att MIR-132-uttryck associeras med p53 och c-myc. Vissa tidigare studier har visat att vissa mikroRNA kan medla och reglera tumör undertryckande utövas av p53 eller c-myc [34, 35]. Jiang L et al. [34] fann att has-MIR-125a-3p kan inducera apoptos via p53 vägen. Zhang N, et al. [35] fann att MIR-150 kan främja spridningen av lungcancerceller genom att rikta p53. Wang B et al. [36] fann att det var en dubbel negativ återkoppling mellan MIR-122 och c-myc i hepatocellulär cancer. Li X, et al. [37] fann att c-MYC främjade uttrycket av mogen MIR-23a, miR24-2 och miR27a och därefter främjas bröstcancer cell migration och invasion. Men, är det exakta sambandet mellan MIR-132 och p53 c-myc oklart och återstår att belysas i framtida studier. Vi undersökte sambandet mellan MIR-132 uttryck med prognosen för gastric cancerpatienter, fann att patienter med högt MIR-132 uttryck hade sämre total överlevnad att de med låg miR-132 uttryck. Ännu viktigare, visade multivariat analys att höga MIR-132 uttryck var oberoende prognosindikator. Det var kontrovers huruvida MIR-132 spelade samma prognostiskt värde i olika typer av tumörer. Parker et al. rapporterats [38] att högt uttryck av MIR-132 var associerat med dålig prognos hos patienter med primär glioblastoma multiforme. Emellertid Yang et al. [12] rapporterade att osteosarkom patienter med låg MIR-132 uttryck hade sämre övergripande och sjukdomsfri överlevnad. Det var möjligt att MIR-132 spelade olika funktioner i olika tumörer. Wang et al. [39] fann att överuttryck av MIR-132 undertryckte in vitro celltillväxt och in vivo tumörtillväxt. Li et al. [13] visade att överuttryck av MIR-132 kunde hämma proliferationen av bröstcancerceller. Omvänt, Park et al. [31] rapporterade att ökade den pankreatiska cancercelldelning överuttryck av MIR-132.
Sammantaget indikerade vår studie att miR-132 uppreglerades i gastrisk cancer och kan vara en oberoende molekyl biomarkör för att förutsäga prognosen för gastrisk cancer. Samtidigt som ett resultat av små forskningsurval, behövs ett stort fall forskning för att bekräfta prognostiska värdet av MIR-132 i magcancer.
Förklaringar
Authors 'ursprungliga inlämnade handlingarna Images of Nedan finns länkar till författarnas ursprungliga inlämnade filer för bilder. 13000_2014_947_MOESM1_ESM.tif Författaroriginalfilen för figur 1 Konkurrerande intressen
Författarna har förklarat att inga konkurrerande intressen finns
Författare. Bidrag
utformats och experimenten: XWL HMY HC YNW. Utförde experiment: XWL. Analyserade data: XWL HMY. Bidrog reagens /material /analysverktyg: HC YNW. Skrev tidningen: XWL. Alla författare läst och godkänt den slutliga manuskriptet.

• Jämförelse av effekten av olika administrerings av kemoterapi på inoperabel, avancerad magsäcks cancer
• Blandad adeno (neuro) endokrina karcinom som härrör från ektopisk magslemhinnan av den övre bröst matstrupen