La expresión y la importancia clínica de miR-132 en pacientes con cáncer gástrico

La expresión y la importancia clínica de miR-132 en pacientes con cáncer gástrico
Resumen
Fundamento y objetivo
miR-132 juega un papel en la regulación de la excitabilidad neuronal y la morfología celular. Poco se sabe sobre los efectos de miR-132 en el cáncer. El objetivo de este estudio es evaluar la expresión de miR-132 y su importancia clínica en el cáncer gástrico.
Métodos
tejidos cancerosos y tejidos normales correspondientes a partir de 79 pacientes con cáncer gástrico fueron examinados para detectar la expresión de miR-132 se analizaron utilizando PCR cuantitativa y la asociación entre los niveles de expresión de miR-132 y los factores clínico-patológicos y pronóstico.
: resultados de la en 79 muestras clínicas de pacientes con cáncer gástrico, el miR-132 niveles de expresión en tejidos de cáncer fueron significativamente superiores a los de los tejidos normales correspondientes (P
= 0,001). Altos niveles de expresión de miR-132 se asociaron con mayor frecuencia metástasis en los ganglios linfáticos (P = 0,033
), émbolos tumorales más linfática (P = 0,007
) y un estadio más avanzado (P = 0,016
). Además, la expresión de miR-132 fue un factor pronóstico independiente de supervivencia global (p = 0,020
).
Conclusión
miR-132 podría servir como un factor pronóstico eficaz para los pacientes con cáncer gástrico.
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Palabras clave
gástrico el pronóstico del cáncer de marcadores Biológicos Introducción
Aunque la incidencia de cáncer gástrico ha sido sustancialmente disminuyendo desde hace varias décadas, todavía es el cuarto cáncer más común y la segunda causa más frecuente de muerte por cáncer [1, 2]. Un múltiplo de genes parece contribuir al comportamiento biológico maligno del cáncer gástrico [3, 4]. Es muy importante identificar los factores de pronóstico con el fin de maximizar el efecto terapéutico y para minimizar los efectos adversos en el tratamiento de pacientes con cáncer.
MicroARNs son una clase de pequeños ARN no codificantes endógenas que funcionan como reguladores de genes mediante la regulación de ARN mensajero traducción y la degradación de [5]. Los microARN juegan un papel crucial en la regulación de las funciones normales, como la proliferación, diferenciación y apoptosis. Por otra parte, la desregulación de miRNAs contribuyen a la carcinogénesis y la progresión del cáncer [6, 7]. Como miembro de la familia miRNAs, MIR-132 juega un papel importante en la inflamación, angiogénesis, y el desarrollo neuronal [8-10]. Recientemente, algunos estudios demostraron que la desregulación de miR-132 estaba relacionada con una variedad de tumores humanos, tales como el cáncer no microcítico de pulmón de células, osteosarcoma, cáncer de mama, carcinoma hepatocelular, cáncer de próstata, y cáncer de páncreas [11-16]. Sin embargo, no existen informes sobre la expresión y la importancia clínica de miR-132 en el cáncer gástrico.
En este estudio, la expresión de miR-132 en pacientes con cáncer gástrico fue examinado y se analizó la asociación entre el miR-132 y los parámetros clínico-patológicos . Además, se evaluó la expresión de algunas proteínas implicadas en el control del ciclo celular (p21, p53), la proliferación de tejido y diferenciación (c-myc). proteínas p21 y p53 son los productos de genes supresores de tumores, que se activan mediante la modulación de la proliferación celular a través de control del puesto de control de detención G1 del ciclo celular [17, 18]. proteína c-myc es un tipo de factor de transcripción.
Pacientes y métodos
cáncer gástrico humano y se obtuvieron de 79 pacientes que fueron sometidos a una gastrectomía en el Departamento de cáncer gástrico y el sarcoma de tejidos blandos, cáncer de la Universidad de Fudan de Shanghai tejidos normales correspondientes centro, entre enero de 2007 y diciembre de 2009. la gastrectomía parcial se realizó en 36 pacientes, y la gastrectomía total se llevó a cabo en los otros 43 pacientes. Al menos 4 cm de márgenes de resección de tumor macroscópico estaban garantizadas para todos los pacientes. Un total de 71 pacientes recibieron quimioterapia adyuvante. Después de la resección, las muestras se congelaron inmediatamente en nitrógeno líquido y después se almacenan en -80 ° refrigerador. Los criterios de inclusión para este estudio fueron el adenocarcinoma y datos patológica completa; Los criterios de exclusión fueron la terapia neoadyuvante, diseminación peritoneal y metástasis a distancia. Los datos fueron recuperados de sus informes quirúrgicos y patológicos, y los datos de seguimiento se obtuvieron mediante ambulatorio teléfono y base de datos clínicos. El consentimiento informado por escrito había sido obtenida de todos los pacientes, y este estudio fue aprobado por el Comité Ético del Centro de Cáncer de Shanghai de la Universidad de Fudan.
Extracción de RNA y cuantitativa en tiempo real PCR comentario El ARN total de tejido se extrajo con el reactivo Trizol (Invitrogen, Carlsbad, CA, EE.UU.) siguiendo las instrucciones del fabricante. PCR (QRT-PCR) cuantitativa en tiempo real se llevaron a cabo para detectar la expresión endógena de miR-132 de acuerdo con el método de Applied Biosystems. En pocas palabras, cDNA se transcribe de forma inversa a partir de muestras de ARN total usando un cebador de tallo-bucle-miARN específica de los ensayos Taqman microARN y los reactivos de la transcripción inversa TaqMan ® Micro RNA Kit (ABI, Forest City, CA, EE.UU.). Entonces, los productos PCR fueron amplificados a partir de muestras de ADNc utilizando los TaqMan microARN ensayos junto con el TaqMan® PCR Universal Master Mix y la cantidad de producto de la PCR se controlaron usando Applied Biosystems Sistema de Detección de Secuencia 7900. U6 pequeños ARN nuclear se utilizó como control interno. La cantidad relativa de miR-132 se calculó mediante el uso de (-Delta deltaC (T)) Método 2 [19].
Tinción inmunohistoquímica
p21, p53, y c-myc fueron detectados por el método inmunohistoquímico. Todos los anticuerpos primarios y anticuerpos monoclonales de ratón se adquirieron de Dako (Hamburgo. Alemania). La tinción inmunohistoquímica se realizó por el método de mejorar el sistema de polímero marcado (ELPS). Después de la incubación durante la noche a 4 ° C con anti-p21, p53, y el anticuerpo c-myc, las secciones se trataron de acuerdo con los métodos de inmunoperoxidasa estándar usando una biotina estreptavidina peroxidasa kit complejo (LSAB + Kit /HRP; Dako). Después, la reacción peroxidasa se reveló con diaminobencidina (Dako). secciones de control negativo se sometieron al mismo procedimiento, excepto que el primer anticuerpo se sustituyó por solución salina tampón fosfato (PBS) [20].
puntuación tinción inmunohistoquímica
Todas las rodajas fueron evaluados por dos patólogos sin conocimiento de los resultados clínicos. El porcentaje de células y intensidades de tinción inmunorreactivas se evaluó en cada muestra. El porcentaje de células inmunorreactivas se clasificó en una escala de 0 a 4: no tinción se puntuó como 0, 1 a 10% de células teñidas obtuvieron como 1, 11 a 50% como 2, 51 a 80% como 3, y 81- 100% como 4. Las intensidades de tinción se calificaron de 0 a 3: 0 se define como negativo, 1 como débil, 2 como moderado, y 3 tan fuerte, respectivamente. Los datos brutos se convirtieron en el marcador inmunohistoquímico (IHS), multiplicando las puntuaciones cantidad e intensidad. En el análisis final, los casos tenían una puntuación inferior a 1 se consideraron como negativos, y ≥ 1 era considerado como [20] El análisis estadístico positivo.
Características de los pacientes y las características clinicopatológicas fueron analizados utilizando los dos -tailed de Student t-test para
variable continua y χ 2 test para la variable categórica. curvas de supervivencia global se calcularon por el método de Kaplan-Meier, y las diferencias entre las curvas de supervivencia fueron examinados con log-rank test. Los factores pronósticos independientes fueron examinados por el análisis de supervivencia multivariante mediante regresión de Cox de riesgos proporcionales. El nivel aceptado de significación fue P Hotel < 0,05. Los análisis estadísticos y gráficos se realizaron con el programa SPSS 13.0 (SPSS, Inc., Chicago, IL)
Resultados
características clinicopatológicas
Había 62 varones y 17 mujeres. (3,6: 1), con una media edad de 58 años. Hubo 7 (8,9%) primeras cánceres gástricos y 72 (91,1%) avanzó el cáncer gástrico. De acuerdo con el tipo histológico, se observaron tumores bien diferenciados en 3 (3,8%) pacientes, moderadamente diferenciado en 11 (13,9%) pacientes, y los tumores pobremente diferenciados en restante 65 (82,3%) pacientes. De 79 pacientes, 25 (31,6%) habían tumores localizados en el tercio superior, 15 (19,0%) tenían tumores en el tercio medio, 36 (45,6%) tenían tumores en el tercio inferior del estómago, y 3 (3,8%) tumores habían ocupado dos tercios o más de estómago. Metástasis en los ganglios linfáticos se observó en 57 pacientes, la tasa de metástasis fue del 72,2%. La distribución de estadio patológico fue la siguiente: 10 (12,6%) pacientes pertenecían a la etapa I, 24 (30,4%) II, y 45 (57%) III
La expresión y la correlación de miR-132, p21, p53. y c-myc
miR-132 niveles en 79 cancerosa (T) y los correspondientes tejidos normales (N) fueron examinados por QRT-PCR. La mayoría de los tejidos tumorales (57/79, 72%) mostraron niveles elevados de miR-132 en comparación con los tejidos normales correspondientes, con un incremento medio de 2,3 veces. miR-132 niveles en los tejidos cancerosos (media ± DE, 0,35 ± 0,58) fueron significativamente superiores a los de los tejidos cancerosos correspondientes (media ± DE, 0,15 ± 0,35, P Hotel < 0,05). Las expresiones de p21, p53, y c-myc se examinaron por tinción inmunohistoquímica. expresión de p21 fue positiva en el 64,6% de todos los tejidos de cáncer gástrico. Se observó tinción de p21 en el núcleo de células de carcinoma. la expresión de p53 fue positiva en el 74,7% de todos los tejidos de cáncer gástrico. Se observó tinción de p53 en el núcleo de células de carcinoma. la expresión de c-myc fue positivo en el 44,3% de todos los tejidos de cáncer gástrico. Se observó tinción de c-myc en el citoplasma de las células de carcinoma. expresión de miR-132 se asoció con p53 y c-myc. No hubo correlación con p21. Además, p53expression se asoció con c-myc (Tabla 1) .table 1 resultados positivos de las correlaciones entre los marcadores biológicos
marcadores biológicos
Los coeficientes de correlación (r
)
P value

miR-132
P53
0.274
0.015
miR-132
c-myc
0.228
0.044
P53
c-myc
0.235
0.038
Significado clínico de miR-132 en el cáncer gástrico
79 pacientes con cáncer gástrico se dividieron en dos grupos, entre ellos el miR-21 grupo de alto expresión (T /N > 0,5, n = 33) y el grupo de baja expresión (T /N < 0,5, n = 46) de acuerdo con la T mediana N ración /de miR-132 expresión. Se analizó la correlación entre la expresión de miR-132 y los parámetros patológicos. Los resultados mostraron que los pacientes con alta expresión de miR-132 tenían mayor incidencia de metástasis en los ganglios linfáticos (P = 0,033
), embolias más linfáticos del tumor (P = 0,007
) y un estadio más avanzado (P = 0,016
). Sin embargo, no hubo diferencias significativas sobre el género, la edad, el tipo histológico, localización del tumor, el tamaño del tumor, la invasión nerviosa, y la etapa de T (Tabla 2). En la supervivencia general, los pacientes con la alta expresión de miR-132 tenían un pronóstico significativamente peor que aquellos con miR-132 baja expresión (P
= 0,000) (Figura 1). El análisis univariante de supervivencia global mostró que la expresión relativa de miR-132, la invasión nerviosa, embolia tumoral linfática, y el estadio patológico fueron predictores de pronóstico. El análisis multivariado de la supervivencia, incluyendo todos los factores pronósticos significativos mencionados en el análisis univariado, se llevó a cabo para determinar los factores pronósticos independientes para el cáncer gástrico. El análisis multivariado mostró que el nivel de expresión de miR-132 y el estadio patológico fueron factores pronósticos independientes (Tabla 3) .Tabla 2 miR-132 expresión y clinicopathological factores variables

alta expresión n = 33

bajo la expresión n = 46
P
Sexo Masculino
0.618

25
37
Mujer página 8
9
Edad
0,556 Hotel < 60
18
22
≥60
15
24
clasificación histológica
0,412
mal -differentiated
28
36
5 página 7
bien diferenciado
moderadamente diferenciado 0 página 3
Localización del tumor
0,467
Alta de terceros 10
15
medio de terceros 8 página 7
inferior de terceros 15
21
Dos tercios o más
0
3
El tamaño del tumor (cm)
0,862 Hotel < 5
18 26
invasión
≥5
15
20
nervioso
0,096 Sí

22
22
Sin
página 11 24
linfático émbolos tumorales
0,005
Sí
26
22
n página 7
24
estadio T
0.070
T1, T2 página 6
17
T3, T4
nodo 27
29
linfa metástasis
0,033
Sí
28
29
Sin
página 5 17
estadio patológico
0,016
I
2 8
II página 6
18
III
25
20
Figura 1 Comparación de la supervivencia según la expresión de miR-132. No hubo diferencias significativas entre el miR-132 y miR alta expresión-132 baja expresión (P = 0,000
).
Tabla 3 Análisis multivariado de los pacientes por el modelo de Cox
variable
χ2

P
Vale
RR
95% IC
miR-132 expresión
5.447
0.020 2.414

1,152-5,059 invasión
nervioso
1.918
0,166
1.890
0,768-4,655
émbolos tumorales linfático
0,173 0,677

0,838 0,366-1,923

estadio patológico
8.742 0.003

4.356
1,642 a 11,555
Discusión
La identificación de factores pronósticos en el cáncer gástrico es esencial para predecir la supervivencia de los pacientes y determinar las estrategias terapéuticas óptimas . La profundidad de la invasión y la metástasis de los ganglios linfáticos fueron los factores pronósticos más importantes en el cáncer gástrico. Como resultado de la variabilidad de pronóstico dentro del mismo estadio patológico de cáncer gástrico, ha habido una gran cantidad de investigaciones para marcadores biológicos específicos para identificar a los pacientes con pronóstico [21-28]. Los marcadores biológicos tales como microARN, c-Met, L1CAM, la proteína de la lipasa endotelial, el número de copias variable del ADN mitocondrial (ADNmt), TIMP3, hK6, y Ezrin se han estudiado ampliamente. Como nuevo marcador biológico, el potencial de miRNAs en predecir el pronóstico se estudió cada vez. miR-132 es un miARN altamente conservada transcribir a partir de una región intergénica en el cromosoma humano 17 por la proteína de unión al elemento de respuesta cAMP factor de transcripción [29]. La mayoría de los informes de combate regulación de miR-132 y las funciones biológicas surgieron de los estudios realizados en el contexto neuronal. Además, miR-132 también se ha descrito en un número de otros campos, tales como la inflamación, la transformación celular y la génesis tumoral. miR-132 ha demostrado ser regulada de manera ascendente o hacia abajo-regulada en diferentes cánceres humanos [16, 30, 31]. Algunos estudios mostraron que miR-132 podría promover la proliferación celular [31]. Sin embargo, todavía no hay informes sobre el miR-132 en el cáncer gástrico.
En este estudio, se determinó la expresión de miR-132 en el cáncer gástrico y determinamos si se pudiera predecir resultados de los pacientes. Hemos encontrado que la expresión de miR-132 fue mayor en los tejidos cancerosos en comparación con los tejidos normales correspondientes. La causa exacta de la alta expresión de miR-132 en el cáncer gástrico es desconocido. Parque JK et al. informado [31] que el agonista terbutalina B2AR aumenta la expresión de miR-132. miR-132 se transcripcionalmente activa por CREB en las neuronas [32]. antagonistas B2AR inhibieron la activación de CREB [33]. Por lo tanto, es posible que la simulación de B2AR aumentar la expresión de miR-132 tras la activación de CREB.
Los resultados mostraron que la alta expresión de miR-132 en el cáncer gástrico se correlacionó significativamente con las características clínico-agresivos, como más frecuente de metástasis de los ganglios linfáticos, más émbolos tumor linfático, y la etapa más avanzada. Estos resultados sugieren que la regulación al alza de miR-132 juega un papel importante en la progresión del cáncer gástrico. Curiosamente, se encontró que la expresión de miR-132 se asoció con p53 y c-myc. Algunos estudios anteriores mostraron que algunos microRNAs podría mediar y regular la supresión de tumores ejercida por p53 o c-myc [34, 35]. Jiang L et al. [34] encontró que tiene-miR-125a-3p podría inducir la apoptosis a través de la vía de p53. Zhang N, et al. [35] encontró que el miR-150 podría promover la proliferación de células de cáncer de pulmón por la orientación de p53. Wang B et al. [36] encontró que había un doble bucle de retroalimentación negativa entre miR-122 y c-myc en el cáncer hepatocelular. Li X, et al. [37] encontró que el c-MYC promovió la expresión de miR-23a madura, miR24-2, y miR27a y posteriormente promovió la migración de células de carcinoma de mama y la invasión. Sin embargo, la correlación exacta entre el miR-132 y p53, c-myc es poco clara y habrá de ser estudiada en futuros estudios. Se investigó la correlación entre la expresión de miR-132 con el pronóstico de los pacientes con cáncer gástrico, encontró que los pacientes con alta expresión de miR-132 tenían peor supervivencia global que aquellos con baja expresión de miR-132. Más importante aún, el análisis multivariado reveló que la alta expresión de miR-132 era indicador pronóstico independiente. Fue controversia sobre si el miR-132 desempeñado mismo valor pronóstico en diferentes tipos de tumores. Parker et al. informado [38] que la alta expresión de miR-132 se asocia con un mal pronóstico en pacientes con glioblastoma multiforme primario. Sin embargo, Yang et al. [12] informó de que los pacientes de osteosarcoma con baja expresión de miR-132 tuvieron una supervivencia global y libre de enfermedad más pobre. Era posible que miR-132 desempeñado diferentes funciones en diferentes tumores. Wang et al. [39] encontró que la sobreexpresión de miR-132 suprimido en la proliferación celular in vitro y el crecimiento tumoral in vivo. Li et al. [13] mostró que la sobreexpresión de miR-132 podría inhibir la proliferación de células de cáncer de mama. A la inversa, Park et al. [31] informaron de que la sobre expresión de miR-132 aumentó la proliferación de células de cáncer de páncreas.
En conjunto, nuestro estudio indicó que miR-132 se upregulated en el cáncer gástrico y podría ser un biomarcador molecular independiente para predecir el pronóstico de gástrico cáncer. 'Original presentado archivos de imágenes
A continuación se presentan los enlaces Mientras tanto, como resultado de la investigación de la muestra, se necesita una gran investigación de casos para confirmar el valor pronóstico de miR-132 en el cáncer gástrico.
Declaraciones
Autores a los archivos originales presentados los autores de las imágenes. 13000_2014_947_MOESM1_ESM.tif autores archivo original de la figura 1 Conflicto de intereses
Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
autores. 'Contribuciones
concebido y diseñado los experimentos: XWL HMY HC YNW. Realizado los experimentos: XWL. Analizados los datos: XWL HMY. Contribuido reactivos /materiales /herramientas de análisis: HC YNW. Escribió el documento: XWL. Todos los autores leído y aprobado el manuscrito final.

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