L'espressione e significato clinico di miR-132 nel carcinoma gastrico patients

L'espressione clinica e il significato di miR-132 in pazienti affetti da cancro gastrico
Abstract
sfondo e
obiettivo miR-132 gioca un ruolo nella regolazione della morfologia neuronale e eccitabilità cellulare. Poco si sa circa gli effetti del miR-132 nel cancro. Lo scopo di questo studio è quello di valutare l'espressione di miR-132 e il suo significato clinico nel carcinoma gastrico.
Metodi
tessuti cancerosi e corrispondenti tessuti normali da 79 pazienti con cancro gastrico sono stati esaminati per l'espressione di miR-132 utilizzando la PCR quantitativa e l'associazione tra i livelli di espressione di miR-132 e fattori clinico-patologici e la prognosi è stato analizzato.
Risultati
in 79 campioni clinici di pazienti affetti da cancro gastrico, miR-132 livelli di espressione nei tessuti tumorali erano significativamente più alti rispetto a quelli i corrispondenti tessuti normali (P = 0.001)
. Alti livelli di espressione di miR-132 sono stati associati con più frequenti metastasi linfonodali (P = 0,033
), emboli tumorali più linfatico (P = 0.007
), e lo stadio più avanzato (P = 0,016
). Inoltre, l'espressione di miR-132 è stato un fattore prognostico indipendente per la sopravvivenza globale (P = 0,020
).
Conclusione
miR-132 potrebbe servire come un fattore prognostico efficiente per i pazienti di cancro gastrico.
Virtuale scivoli
La slitta virtuale (s) per questo articolo può essere trovato qui: http:... //www diagnosticpathol gia diagnomx eu /vs /8168577241196050
Parole
gastrico marcatori del cancro Prognosi biologica Introduzione
Sebbene l'incidenza di cancro gastrico è stato sostanzialmente in calo da diversi decenni, è ancora il quarto cancro più comune e la seconda causa più frequente di morte per cancro [1, 2]. Un multiplo di geni sembrano contribuire al comportamento biologico maligna di cancro gastrico [3, 4]. E 'molto importante identificare i fattori prognostici per massimizzare l'effetto terapeutico e minimizzare gli effetti avversi nel trattamento di pazienti affetti da cancro.
MicroRNAs sono una classe di piccoli RNA non codificanti endogeni che funzionano come regolatori genici regolando RNA messaggero traduzione e degradazione [5]. I microRNA svolgono un ruolo cruciale nella regolazione delle normali funzioni quali la proliferazione, la differenziazione e l'apoptosi. Inoltre, disregolazione dei miRNA contribuiscono alla cancerogenesi e progressione del cancro [6, 7]. Come membro della famiglia di miRNA, miR-132 svolge un ruolo importante nel processo infiammatorio, angiogenesi e lo sviluppo neurale [8-10]. Di recente, alcuni studi hanno dimostrato che la disregolazione di miR-132 era legato a una varietà di tumori umani, come il cancro polmonare non a piccole cellule, osteosarcoma, tumore della mammella, carcinoma epatocellulare, il cancro alla prostata, cancro al pancreas e [11-16]. Tuttavia, non ci sono rapporti circa l'espressione e significato clinico di miR-132 nel carcinoma gastrico.
In questo studio, l'espressione di miR-132 in pazienti affetti da cancro gastrico è stata esaminata e l'associazione tra i parametri clinico-patologici miR-132 e è stato analizzato . Inoltre, abbiamo valutato l'espressione di alcune proteine ​​coinvolte nel controllo del ciclo cellulare (p21, p53), la proliferazione e la differenziazione dei tessuti (c-myc). p21 e p53 proteine ​​sono i prodotti di geni oncosoppressori, che vengono attivati ​​modulando proliferazione cellulare tramite il controllo del punto di controllo G1 arresto del ciclo cellulare [17, 18]. la proteina c-myc è un tipo di fattore di trascrizione.
Pazienti e metodi
cancro gastrico umano e corrispondenti tessuti normali sono stati ottenuti da 79 pazienti sottoposti a gastrectomia presso il Dipartimento di cancro gastrico e sarcomi dei tessuti molli, Fudan University di Shanghai Cancer centro, tra gennaio 2007 e dicembre 2009. gastrectomia parziale è stata eseguita in 36 pazienti, e gastrectomia totale è stata eseguita negli altri 43 pazienti. Almeno 4 cm margini di resezione di tumore lordo sono stati garantiti per tutti i pazienti. Un totale di 71 pazienti ha ricevuto chemioterapia adiuvante. Dopo la resezione, i campioni sono stati immediatamente congelati in azoto liquido e quindi conservati in -80 ° frigorifero. I criteri di inclusione per questo studio sono stati adenocarcinoma e dei dati patologici completa; I criteri di esclusione erano la terapia neoadiuvante, la diffusione peritoneale e metastasi a distanza. I dati sono stati recuperati dai loro rapporti attivi e patologici, e dati di follow-up sono stati ottenuti per telefono ambulatoriale e database clinico. Il consenso informato scritto è stato ottenuto da tutti i pazienti, e questo studio è stato approvato dal Comitato Etico di Shanghai Cancer Center della Fudan University. Estrazione
RNA e real-time PCR quantitativa
Il RNA totale dal tessuto è stato estratto con il reagente TRIzol (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) seguendo le istruzioni del produttore. Real-time PCR (qRT-PCR) analisi quantitative sono state effettuate per rilevare l'espressione endogena di miR-132 secondo il metodo Applied Biosystems. In breve, cDNA è stato inverso trascritto da campioni totali di RNA utilizzando uno specifico miRNA-stem-loop primer della Taqman microRNA saggi e reagenti dalla TaqMan® MicroRNA trascrizione inversa Kit (ABI, Forest City, CA, USA). Poi, prodotti di PCR sono stati amplificati da campioni di cDNA utilizzando i TaqMan microRNA saggi insieme al TaqMan® Universal PCR Master Mix e la quantità di prodotto di PCR sono stati monitorati utilizzando Applied Biosystems 7900 Sequence Detection System. U6 piccolo RNA nucleare è stato utilizzato come controllo interno. La quantità relativa di miR-132 è stato calcolato utilizzando il metodo (-Delta Deltac (T)) [19] 2.
Colorazione immunoistochimica
p21, p53 e c-myc sono stati rilevati con il metodo di immunoistochimica. Tutti gli anticorpi primari e gli anticorpi monoclonali murini sono stati acquistati da Dako (Hamburg. Germania). La colorazione immunoistochimica è stata eseguita con il metodo migliorare sistema polimerico etichettato (ELPS). Dopo incubazione per una notte a 4 ° C con anti-p21, p53, e l'anticorpo c-myc, sezioni sono stati trattati secondo metodi immunoperossidasi standard usando un biotina streptavidina perossidasi kit complessa (LSAB + Kit /HRP; Dako). La reazione perossidasi è stato poi sviluppato con diaminobenzidina (Dako). sezioni di controllo negativi sono stati sottoposti alla stessa procedura, tranne che il primo anticorpo è stato sostituito con soluzione salina tampone fosfato (PBS) [20].
immunoistochimica per segnare colorazione impara tutte le fette sono stati valutati da due patologi senza conoscenza del risultato clinico. La percentuale di cellule e intensità di colorazione immunoreattiva sono stati valutati in ciascun campione. La percentuale di cellule immunoreattive è stata classificata su una scala da 0 a 4: nessuna colorazione viene ottenuto come 0, 1-10% di cellule marcate ottenuto come 1, 11-50% come 2, 51-80% come 3 e 81- 100% come 4. Le intensità di colorazione sono stati classificati da 0 a 3: 0 è definito come negativo, 1 debole, 2 come moderato, e 3 come forte rispettivamente. I dati grezzi sono stati convertiti al punteggio immunoistochimica (IHS) moltiplicando i punteggi quantità e intensità. Sul ultima analisi, i casi hanno avuto un punteggio inferiore a 1 sono stati considerati come negativi, e ≥ 1 è stato considerato come l'analisi statistica positiva [20]
.
Caratteristiche dei pazienti e le caratteristiche clinico-patologici sono stati analizzati utilizzando i due t di Student-tailed
-test per la variabile continua e χ 2 test per la variabile categoriale. le curve di sopravvivenza globale sono state calcolate con il metodo di Kaplan-Meier e le differenze tra le curve di sopravvivenza sono stati esaminati con la prova a lungo rango. I fattori prognostici indipendenti sono stati esaminati con l'analisi di sopravvivenza multivariata utilizzando rischi proporzionali di Cox modello. Il livello di significatività è stato accettato P
< 0.05. Le analisi statistiche e grafici sono stati eseguiti utilizzando il pacchetto statistico SPSS 13.0 (SPSS, Inc., Chicago, IL): Risultati
caratteristiche clinico-patologiche
C'erano 62 maschi e 17 femmine. (3,6: 1), con una media all'età di 58 anni. C'era 7 (8,9%) precoce dei tumori gastrici e 72 (91,1%) avanzata tumori gastrici. Secondo il tipo istologico, tumori ben differenziati sono stati osservati in 3 (3,8%) pazienti, moderatamente differenziato in 11 (13,9%) pazienti, e tumori scarsamente differenziati in rimanente 65 (82,3%) pazienti. Dei 79 pazienti, 25 (31,6%) avevano tumori situati nel terzo superiore, 15 (19,0%) hanno avuto tumori nel terzo medio, 36 (45,6%) avevano tumori nel terzo inferiore dello stomaco, e 3 (3,8%) tumori aveva occupato due terzi o più di stomaco. Metastasi linfonodali è stata osservata in 57 pazienti, il tasso di metastasi è stata del 72,2%. La distribuzione dei stadio patologico è stato il seguente: 10 (12,6%) pazienti appartenevano a stadio I, 24 (30,4%) II, e 45 (57%) III
L'espressione e la correlazione di miR-132, p21, p53. e c-myc
miR-132 livelli in 79 canceroso (T) e corrispondenti tessuti normali (N) sono stati esaminati da qRT-PCR. La maggior parte dei tessuti tumorali (57/79, 72%) hanno mostrato livelli elevati di miR-132 rispetto ai corrispondenti tessuti normali, con un incremento mediano di 2,3 volte. i livelli di miR-132 nei tessuti cancerosi (media ± SD, 0.35 ± 0.58) erano significativamente più alti rispetto a quelli dei corrispondenti tessuti non tumorali (media ± SD, 0,15 ± 0,35, P
< 0,05). Le espressioni di p21, p53 e c-myc sono state esaminate mediante colorazione immunoistochimica. espressione di p21 è stata positiva nel 64,6% di tutti i tessuti di cancro gastrico. p21 colorazione è stata osservata nel nucleo delle cellule di carcinoma. espressione di p53 è stata positiva nel 74,7% di tutti i tessuti di cancro gastrico. p53 colorazione è stata osservata nel nucleo delle cellule di carcinoma. l'espressione di c-myc è stato positivo nel 44,3% di tutti i tessuti di cancro gastrico. c-myc colorazione è stata osservata nel citoplasma delle cellule di carcinoma. espressione di miR-132 è stata associata con p53 e c-myc. Non c'era alcuna correlazione con p21. Inoltre, p53expression è stata associata con c-myc (Tabella 1) .table 1 risultati positivi della correlazioni tra marcatori biologici
marcatori biologici

coefficienti di correlazione (r)
P value

miR-132
P53
0.274
0.015
miR-132
c-myc
0.228
0.044
P53
c-myc
0.235
0.038
significato clinico di miR-132 nel carcinoma gastrico
79 pazienti affetti da cancro gastrico sono stati divisi in due gruppi, tra cui miR-21 del gruppo di alta espressione (T /N > 0.5, n = 33) e il gruppo a bassa espressione (T /N < 0.5, n = 46) secondo la mediana T /n razione di miR-132 espressione. La correlazione tra l'espressione di miR-132 e dei parametri patologici è stata analizzata. I risultati hanno mostrato che i pazienti con alta miR-132 espressione era più frequenti metastasi linfonodali (P = 0,033
), emboli più linfatica del tumore (P = 0.007
), e più avanzato stadio (P = 0,016
). Tuttavia, non vi erano differenze significative su sesso, età, tipo istologico, localizzazione del tumore, le dimensioni del tumore, l'invasione nervoso, e lo stadio T (Tabella 2). Nel sopravvivenza globale, i pazienti con elevata espressione di miR-132 hanno avuto una prognosi significativamente peggiore rispetto a quelli con miR-132 bassa espressione (P = 0.000
) (Figura 1). L'analisi univariata della sopravvivenza globale ha evidenziato che l'espressione relativa di miR-132, l'invasione nervoso, emboli tumorali linfatica, e lo stadio patologico erano predittori prognostici. analisi di sopravvivenza multivariata, tra cui tutti i fattori prognostici significativi menzionati nell'analisi univariata, è stata effettuata per determinare i fattori prognostici indipendenti per il cancro gastrico. L'analisi multivariata ha mostrato che il livello di espressione di miR-132 e lo stadio patologico sono stati fattori prognostici indipendenti (Tabella 3) .table 2 miR-132 di espressione e clinico-patologici fattori
variabili
alta espressione n = 33

bassa espressione n = 46
P
genere
0.618
Maschio
25
37
femminile
8
9
Età
0,556
< 60
18
22
≥60
15
24
classificazione istologica
0.412
mal -differentiated
28
36
moderatamente differenziato
5
7
ben differenziato 0 3
localizzazione del tumore
0,467
superiore terzo 10
15
Medio terzo
8 7
inferiore terzo
15
21
due terzi o più
0
3
Le dimensioni del tumore (cm)
0.862
< 5
18
26
≥5
15
20
nervoso invasione
0.096
Sì
22
22
No
11
24
linfatico tumore emboli
0.005
Sì
26
22
No 7
24
stadio T
0,070
T1, T2
6
17
T3, T4
nodo 27
29
Lymph metastasi
0,033
Sì
28
29
No
5
17
stadio patologico
0.016
I 2
8
II
6
18
III
25
20
Figura 1 Confronto tra la sopravvivenza secondo l'espressione di miR-132. Ci sono state differenze significative tra miR-132 e miR alta espressione-132 bassa espressione (P = 0.000
).
Tabella 3 Analisi multivariata dei pazienti di modello di Cox
variabile
χ2

P
Vale
RR
95% CI
miR-132 espressione
5,447 0,020

2.414
1,152-5,059 invasione
nervoso
1.918
0,166
1.890
0,768-4,655
linfatico tumore emboli
0,173 0,677

0.838
0,366-1,923
stadio patologico
8,742 0,003

4.356
1,642-11,555
Discussione
L'identificazione dei fattori prognostici nel carcinoma gastrico è stato essenziale per predire la sopravvivenza dei pazienti e determinare strategie terapeutiche ottimali . La profondità di invasione e metastasi linfonodali sono stati i più importanti fattori prognostici nel cancro gastrico. Come risultato della variabilità della prognosi entro stessa fase patologica del carcinoma gastrico, ci sono stati un sacco di ricerche per marcatori biologici specifici per identificare i pazienti con la prognosi [21-28]. I marcatori biologici quali microRNA, c-Met, L1CAM, proteine ​​lipasi endoteliale, numero di copie variabile del DNA mitocondriale (mtDNA), TIMP3, HK6, e Ezrin sono stati ampiamente studiati. Come un romanzo biomarker, il potenziale di miRNA nel predire la prognosi è sempre più studiato. miR-132 è un miRNA altamente conservato trascrivere da una regione intergenica sul cromosoma umano 17 per il fattore di trascrizione cAMP risposta elemento legame con le proteine ​​[29]. La maggior parte delle relazioni Bout regolazione miR-132 e funzioni biologiche emerse dagli studi effettuati nel contesto neuronale. Inoltre, miR-132 è stata descritta in un certo numero di altri campi, come infiammazioni, trasformazione cellulare e tumorigenesi. miR-132 ha dimostrato di essere up-regolata o down-regolato in diversi tumori umani [16, 30, 31]. Alcuni studi hanno dimostrato che miR-132 potrebbe favorire la proliferazione cellulare [31]. Tuttavia, vi sono ancora segnalazioni di miR-132 nel carcinoma gastrico.
In questo studio, abbiamo studiato miR-132 nel tumore gastrico e determinato se si poteva prevedere i risultati del paziente. Abbiamo scoperto che l'espressione di miR-132 è stata maggiore nei tessuti cancerosi rispetto alle corrispondenti tessuti normali. La causa esatta della elevata espressione di miR-132 nel cancro gastrico è sconosciuta. Parco JK et al. riferito [31] che la terbutalina B2AR agonista aumenta l'espressione di miR-132. miR-132 è stato trascrizionalmente attivato CREB nei neuroni [32]. antagonisti B2AR inibito l'attivazione del CREB [33]. Pertanto, è possibile che la simulazione di B2AR aumentare espressione miR-132 dopo l'attivazione del CREB.
I risultati hanno mostrato che alta miR-132 nel tumore gastrico era significativamente correlata con caratteristiche clinicopatologiche aggressive come più frequenti metastasi linfonodali, more emboli tumorali linfatica, e stadio più avanzato. Questi risultati suggeriscono che upregulation di miR-132 ha avuto un ruolo importante nella progressione del cancro gastrico. È interessante notare che, abbiamo scoperto che l'espressione di miR-132 è stata associata con p53 e c-myc. Alcuni studi precedenti hanno dimostrato che alcuni microRNA potrebbero mediare e regolare soppressione del tumore esercitata dalla p53 o c-myc [34, 35]. Jiang L et al. [34] ha trovato che ha-miR-125a-3p potrebbe indurre l'apoptosi attraverso la via p53. Zhang N, et al. [35] ha rilevato che miR-150 potrebbe promuovere la proliferazione delle cellule tumorali del polmone di mira p53. Wang B et al. [36] scoperto che c'era un ciclo di feedback negativo doppio tra miR-122 e c-myc nel cancro epatocellulare. Li X, et al. [37] ha rilevato che c-Myc ha promosso l'espressione di miR-23a maturo, miR24-2, e miR27a e successivamente promosso la migrazione delle cellule carcinoma mammario e l'invasione. Tuttavia, la correlazione esatta tra miR-132 e p53, c-myc è chiara e resta da chiarire in studi futuri. Abbiamo studiato la correlazione di espressione di miR-132 con la prognosi dei pazienti affetti da cancro gastrico, ha trovato che i pazienti con alta miR-132 espressione era la sopravvivenza globale più poveri che quelli con basso miR-132 espressione. Ancora più importante, l'analisi multivariata ha rivelato che un'alta espressione di miR-132 è stato indicatore prognostico indipendente. E 'stato polemica se miR-132 ha svolto lo stesso valore prognostico in diversi tipi di tumori. Parker et al. riferito [38] che l'alta espressione di miR-132 è stato associato ad una prognosi sfavorevole nei pazienti con glioblastoma multiforme primaria. Tuttavia, Yang et al. [12] hanno riportato che i pazienti con osteosarcoma bassa espressione di miR-132 avevano più poveri la sopravvivenza globale e libera da malattia. Era possibile che miR-132 svolto diverse funzioni in diversi tumori. Wang et al. [39] trovarono che sovraespressione di miR-132 soppressa nella proliferazione cellulare in vitro e in vivo la crescita del tumore. Li et al. [13] hanno dimostrato che la sovraespressione di miR-132 potrebbe inibire la proliferazione delle cellule di cancro al seno. Al contrario, Parco et al. [31] hanno riportato che l'eccesso di espressione di miR-132 ha aumentato la proliferazione delle cellule tumorali del pancreas.
Nel loro insieme, il nostro studio ha indicato che miR-132 è stato upregulated nel cancro gastrico e potrebbe essere un biomarker molecolare indipendente per predire la prognosi di gastrico cancro. 'Originale presentate Nel frattempo, a seguito di ricerche piccolo campione, è necessaria una grande ricerca caso per confermare il valore prognostico di miR-132 nel carcinoma gastrico.
Dichiarazioni
Autori file per le immagini
Di seguito sono riportati i link per i file inviati originali degli autori per le immagini. 13000_2014_947_MOESM1_ESM.tif Autori file originale per la figura 1 interessi in competizione
Gli autori hanno dichiarato che non esistono interessi in competizione
autori. «Contributi
ideato e progettato gli esperimenti: XWL HMY HC YNW. Eseguita gli esperimenti: XWL. Ha analizzato i dati: XWL HMY. Contributo reagenti /materiali /strumenti di analisi: HC YNW. Ha scritto il giornale: XWL. Tutti gli autori hanno letto e approvato il manoscritto finale.

• Confronto di efficacia di differenti modalità di somministrazione della chemioterapia sul inoperabile, carcinoma gastrico avanzato
• Il carcinoma misto adeno (neuro) endocrino derivante dalla mucosa gastrica ectopica dell'esofago toracico superiore