De expressie en klinische betekenis van miR-132 in maagkanker patients

de expressie en klinische betekenis van miR-132 in maagkankerpatienten
De abstracte Achtergrond en doel
miR-132 een rol speelt bij het reguleren neuronale morfologie en cellulaire prikkelbaarheid. Er is weinig bekend over de effecten van miR-132 bij kanker. Het doel van deze studie is om de expressie van miR-132 en de klinische relevantie bij maagkanker te evalueren.
Methods
kankerweefsel en overeenkomstige normale weefsel van 79 patiënten met maagkanker voor de expressie van miR-132 werden onderzocht met behulp van kwantitatieve PCR en de associatie tussen miR-132 expressie en clinicopathologische factoren en de prognose werd geanalyseerd.
Resultaten
in 79 klinische monsters van maagkanker patiënten, miR-132 expressie in kanker weefsels waren significant hoger dan die in de overeenkomstige normale weefsels (P
= 0,001). Hogere expressie van miR-132 werd geassocieerd met frequentere lymfeknoop métastase (P
= 0,033), meer lymfatische tumor emboli (P
= 0,007), en verder gevorderd stadium (P
= 0,016). Bovendien, de expressie van miR-132 was een onafhankelijke prognostische factor voor de algehele overleving (P
= 0,020).
Conclusie
miR-132 kan als een efficiënte voorspellende factor voor maagkanker patiënten te helpen.
Virtual slides Ondernemingen De virtuele slide (s) voor dit artikel kun je hier vinden: http:... //www diagnosticpathol gie diagnomx eu /vs /8168577241196050
Sleutelwoorden
Gastric kanker Prognose biologische markers Inleiding
Hoewel het aantal gevallen van maagkanker aanzienlijk daalt al enkele decennia, is het nog steeds de vierde meest voorkomende vorm van kanker en de tweede meest voorkomende oorzaak van kanker overlijden [1, 2]. Een veelvoud van genen lijken bij te dragen aan de kwaadaardige biologische gedrag van maagkanker [3, 4]. Het is zeer belangrijk om de prognostische factoren identificeren om het therapeutische effect te maximaliseren en bij de behandeling van kankerpatiënten de nadelige gevolgen.
MicroRNAs zijn een klasse van kleine endogene coderende RNA's die fungeren als regulatoren van gen reguleren messenger RNA vertaling en degradatie [5]. MicroRNAs spelen een cruciale rol bij het reguleren van de normale functies zoals proliferatie, differentiatie en apoptose. Bovendien ontregeling van miRNAs bij aan de carcinogenese en progressie van kanker [6, 7]. Als lid van miRNAs familie, miR-132 een belangrijke rol speelt bij ontsteking, angiogenese, en de ontwikkeling van het zenuwstelsel [8-10]. Onlangs hebben enkele studies aangetoond dat de ontregeling van miR-132 werd als gevolg van verschillende menselijke tumoren, zoals niet-kleincellige longkanker, osteosarcoom, borstkanker, leverkanker, prostaatkanker en pancreaskanker [11-16]. Echter, er zijn geen meldingen over de expressie en klinische betekenis van miR-132 bij maagkanker.
In deze studie werd de miR-132 expressie in maagkanker patiënten onderzocht en het verband tussen miR-132 en clinicopathologische parameters werd geanalyseerd . Daarnaast evalueerden wij de expressie van sommige eiwitten betrokken bij celcyclus controle (p21, p53), proliferatie en differentiatie weefsel (c-myc). p21 en p53 eiwitten de produkten van tumorsuppressorgenen, die worden geactiveerd door het moduleren van celproliferatie via stuurverbinding het G1 arrestatie controle punt van de celcyclus [17, 18]. c-myc eiwit is een type van de transcriptiefactor.
Patiënten en methoden
Human maagkanker en overeenkomstige normale weefsels werden verkregen van 79 patiënten die gastrectomie ondergingen bij de afdeling maagkanker en wekedelensarcomen, Fudan University Shanghai Cancer Center, tussen januari 2007 en december 2009. Gedeeltelijke gastrectomy werd uitgevoerd bij 36 patiënten, en de totale gastrectomy werd uitgevoerd in de andere 43 patiënten. Tenminste 4 cm resectieranden grove tumor werden gegarandeerd voor alle patiënten. Een totaal van 71 patiënten kregen adjuvante chemotherapie. Na resectie werden de monsters onmiddellijk bevroren in vloeibare stikstof en vervolgens opgeslagen bij -80 ° koelkast. Inclusie criteria voor deze studie waren adenocarcinoom en volledige pathologische gegevens; Uitsluitingscriteria waren neoadjuvante therapie, peritoneale verspreiding en metastasen op afstand. Gegevens werden opgehaald uit hun operatieve en pathologische rapporten, en follow-up gegevens werden verkregen via de telefoon ambulante en klinische database. De schriftelijke toestemming was verkregen van alle patiënten, en deze studie werd goedgekeurd door de Ethische Commissie van de Shanghai Cancer Center van Fudan University.
RNA-extractie en kwantitatieve real-time PCR Ondernemingen De totale RNA uit weefsel werd geëxtraheerd met TRIzol reagens (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) volgens de instructies van de fabrikant. Kwantitatieve real-time PCR (qRT-PCR) assays werden uitgevoerd om de endogene expressie van miR-132 detecteert in de werkwijze Applied Biosystems. Kort samengevat werd cDNA reverse getranscribeerd van totaal RNA-monsters met een miRNA-specifieke stamlus primer van de Taqman MicroRNA Assays en reagentia van de TaqMan MicroRNA Reverse Transcription Kit (ABI, Forest City, CA, USA). Vervolgens werden PCR producten geamplificeerd uit cDNA monsters met de TaqMan MicroRNA Testen met de TaqMan Universal PCR Master Mix en de hoeveelheid PCR-product werd gecontroleerd met behulp van Applied Biosystems 7900 Sequence Detection System. U6 klein nucleair RNA werd gebruikt als een interne controle. De relatieve hoeveelheid van miR-132 werd berekend met 2 (-Delta Deltac (T)) methode [19].
Immunohistochemische kleuring
p21, p53 en c-myc werden gedetecteerd door immunohistochemische methode. Alle primaire antilichamen en muizen monoklonale antilichamen werden verkregen van Dako (Hamburg. Duitsland). Immunohistochemische kleuring werd uitgevoerd door het verbeteren gemerkte polymeersysteem (ELPS) methode. Na overnacht incubatie bij 4 ° C met anti-p21, p53 en c-myc antilichaam, werden delen behandeld volgens standaard werkwijzen immunoperoxidase met een streptavidine- biotine-peroxidase complex kit (Kit LSAB + /HRP; Dako). De peroxidase reactie werd vervolgens ontwikkeld met diaminobenzidine (Dako). Negatieve controle coupes werden onderworpen aan dezelfde procedure, behalve dat het eerste antilichaam werd vervangen door fosfaatbuffer zoutoplossing (PBS) [20].
Immunohistochemische kleuring scoring
Alle plakjes werden geëvalueerd door twee pathologen zonder kennis van de klinische uitkomst. Het percentage immunoreactieve cellen en kleuring intensiteiten werden bij elk monster. Het percentage immunoreactieve cellen werd beoordeeld op een schaal van 0 tot 4: geen kleuring wordt gescoord als 0, 1-10% van de cellen gekleurd gescoord als 1, 11-50% als 2, 51-80% als 3 en 81- 100% als 4. De kleuring intensiteiten werden beoordeeld van 0 tot 3: 0 wordt gedefinieerd als negatieve, zwak 1, 2 en gemodereerd en 3 zo sterk, respectievelijk. De ruwe gegevens werden omgezet in de immunohistochemische score (IHS) door vermenigvuldiging van de hoeveelheid en intensiteit scores. Op uiteindelijk de gevallen had een score kleiner dan 1 werden beschouwd als negatief, en ≥ 1 werd als positief [20].
Statistische analyse
kenmerken van de patiënten en klinisch-pathologische kenmerken werden geanalyseerd met de twee -tailed Student t
-test voor continue variabele en χ 2 test voor categorische variabele. Totale overleving werden berekend door Kaplan-Meier-methode, en de verschillen tussen de overleving curves werden onderzocht met een lange-rank test. De onafhankelijke prognostische factoren werden onderzocht door de multivariate survival analyse met behulp van Cox proportionele risico model. De geaccepteerde niveau van betekenis was P Restaurant < 0,05. Statistische analyses en grafieken werden uitgevoerd met behulp van de SPSS 13.0 statistisch pakket (SPSS Inc., Chicago, IL)
Resultaten
klinisch-pathologische kenmerken
Er waren 62 mannen en 17 vrouwen. (3.6: 1) met een gemiddelde leeftijd van 58 jaar. Er was 7 (8,9%) vroege maagkanker en 72 (91,1%) geavanceerd maagkanker. Volgens weefseltype werden goed gedifferentieerde tumoren waargenomen bij 3 (3,8%) patiënten, matig gedifferentieerd in 11 (13,9%) patiënten en slecht gedifferentieerde tumoren resterende 65 (82,3%) patiënten. Van 79 patiënten, 25 (31,6%) had tumoren in het bovenste derde, 15 (19,0%) had tumoren in het middelste derde deel, 36 (45,6%) had tumoren in het onderste deel van de maag, en 3 (3,8%) had tumoren bezetten twee derde of meer van de maag. Lymfeklier metastase werd waargenomen bij 57 patiënten, de metastase bedroeg 72,2%. De verdeling van pathologisch stadium was als volgt: 10 (12,6%) patiënten was voor stadium I, 24 (30,4%) II, en 45 (57%) III Ondernemingen De expressie en correlatie van miR-132, p21, p53. en c-myc
miR-132 niveaus in 79 kankerachtige (T) en overeenkomstige normale weefsels (N) van qRT-PCR onderzocht. Meest tumorweefsels (57/79, 72%) vertoonden verhoogde niveaus van miR-132 in vergelijking met de overeenkomstige normale weefsels, met een gemiddelde stijging van 2,3-voudig. miR-132 niveaus in kankerachtige weefsels (gemiddelde ± SD, 0,35 ± 0,58) significant hoger dan in de overeenkomstige goedaardig weefsel (gemiddelde ± SD, 0,15 ± 0,35, P
< 0,05). Uitingen van p21, p53 en c-myc werden door immunohistochemische kleuring. p21 expressie was positief in 64,6% van maagkanker weefsels. p21 kleuring werd waargenomen in de kern van carcinoomcellen. p53 was positief in 74,7% van maagkanker weefsels. p53 kleuring werd waargenomen in de kern van carcinoomcellen. c-myc-expressie was positief in 44,3% van maagkanker weefsels. c-myc kleuring werd waargenomen in het cytoplasma van carcinoomcellen. miR-132 expressie is geassocieerd met p53 en c-myc. Er was geen correlatie met p21. Daarnaast werd p53expression geassocieerd met c-myc (Tabel 1) .table 1 Positieve resultaten van correlaties tussen biologische markers
Biologische markers
Correlatiecoëfficiënten (r)
P value

miR-132
P53
0.274
0.015
miR-132
c-myc
0.228
0.044
P53
c-myc
0.235
0.038
Klinische betekenis van miR-132 in maagkanker
79 maagkanker patiënten werden verdeeld in twee groepen zoals miR-21 hoge expressie groep (T /N > 0,5, n = 33) en lage-expressie groep (T /N <, 0,5, n = 46) volgens de mediane T /N verhouding van miR-132 expressie. De correlatie tussen miR-132 expressie en pathologische parameters werd geanalyseerd. De resultaten toonden aan dat patiënten met hoge miR-132 expressie hadden vaker lymfeklier (P
= 0,033), meer lymfatische tumor emboli (P
= 0,007), en verder gevorderd stadium (P = 0,016
). Er waren echter geen significante verschillen over geslacht, leeftijd, weefseltype, tumorlokalisatie, tumorgrootte, nerveuze invasie en T-stadium (tabel 2). In de totale overleving, patiënten met miR-132 hoge expressie een significant slechtere prognose dan die met miR-132 lage expressie (P
= 0,000) (figuur 1). Univariate analyse van de totale overleving toonde aan dat de relatieve expressie van miR-132, nerveuze invasie, lymfatische tumor emboli, en pathologisch stadium waren prognostische voorspellers. Multivariate overlevingsanalyse inclusief alle significant univariate analyse vermelde prognostische factoren, werd uitgevoerd om de onafhankelijke prognostische factoren voor maagkanker bepalen. Multivariate analyse toonde aan dat de miR-132 expressie niveau en pathologisch stadium onafhankelijke prognostische factoren (tabel 3) .table 2 miR-132 expressie en clinicopathologische factoren
Variabelen
Hoge expressie n = 33
Lage expressie n = 46
P
Geslacht
0,618
Man
25 | 37
Female
8
9
Age
0,556 Restaurant < 60
18
22
≥60
15
24
histologische indeling
0,412
Slecht -differentiated
28
36
Matig-gesplitste
5
7
goed gedifferentieerde
0
3
Tumor locatie
0,467
bovenste derde
10 | 15
Midden derde
8
7
Neder derde
15
21
Twee-derde of meer
0
3
Tumor grootte (cm)
0,862 Restaurant < 5
18
26
≥5
15
20
Nervous invasie
0,096
Ja
22
22 verhuur No
11
24
Lymfatische tumor emboli
0.005
Ja
26
22 verhuur No
7
24
T-stadium
0.070
T1, T2
6
17
T3, T4
27
29
Lymfeknoop metastase
0,033
Ja
28
29 verhuur No
5
17
Pathologische stadium
0,016
I 2
8
II
6
18
III
25 | 20
Figuur 1 Vergelijking van de overleving op basis van de expressie van miR-132. Er waren significante verschillen tussen miR-132 hoge expressie en miR-132 lage expressie (P
= 0.000).
Tabel 3 Multivariate analyse van patiënten door Cox model
Variable
χ2

P
vale
RR
95% CI
miR-132 expressie
5,447
0.020
2,414
1,152-5,059
Nervous invasie
1.918
0,166
1.890
0,768-4,655
Lymfatische tumor emboli
0,173
0,677
0,838
0,366-1,923
Pathologische stadium
8,742
0.003
4,356
1,642-11,555
Discussie
De identificatie van prognostische factoren bij maagkanker was van essentieel belang voor het voorspellen van de overleving van patiënten en het bepalen van de optimale therapeutische strategieën . De diepte van de invasie en lymfeklier waren de belangrijkste prognostische factoren bij maagkanker. Als gevolg van de variabiliteit van prognose binnen dezelfde pathologische stadium van maagkanker, zijn er veel onderzoekingen voor specifieke biologische merkers identificeren van patiënten met de prognose [21-28]. De biologische merkers zoals microRNA, c-Met, L1CAM, endotheliale lipaseproteïne variabel aantal kopieën van mitochondriaal DNA (mtDNA), TIMP3, hK6 en Ezrin zijn uitgebreid bestudeerd. Als nieuw biomarker wordt het potentieel van miRNAs in prognostische steeds onderzocht. miR-132 is een sterk geconserveerd miRNA transcriberen van een intergene gebieden van humaan chromosoom 17 door de transcriptiefactor cAMP respons element bindend eiwit [29]. Het merendeel van de meldingen bout miR-132 regelgeving en biologische functies voortgekomen uit de studies uitgevoerd in de neuronale context. Daarnaast is miR-132 eveneens beschreven in een aantal andere gebieden, zoals ontsteking, celtransformatie en tumorgenese. miR-132 bleek te worden opgereguleerd of omlaag gereguleerd in verschillende menselijke kankers [16, 30, 31]. Sommige studies toonden aan dat miR-132 celproliferatie [31] zou kunnen bevorderen. Er zijn echter nog geen rapporten over miR-132 bij maagkanker.
In dit onderzoek onderzochten we miR-132 expressie in maagkanker en bepaald indien patiëntuitkomsten kunnen voorspellen. We vonden dat miR-132 expressie was hoger in kankerachtige weefsels vergeleken met overeenkomstige normale weefsels. De precieze oorzaak van de miR-132 hoge expressie bij maagkanker is onbekend. Park JK et al. gerapporteerd [31] dat de B2AR agonist terbutaline verhoogt miR-132 expressie. miR-132 werd transcriptioneel geactiveerd door CREB in neuronen [32]. B2AR antagonisten remden activering van CREB [33]. Daarom is het mogelijk dat simulatie van B2AR verhogen miR-132 expressie na activering van CREB. Ondernemingen De resultaten toonden aan dat miR-132 hoge expressie bij maagkanker significant gecorreleerd met klinisch-agressieve kenmerken zoals vaker lymfeknoop metastase, more lymfatische tumor emboli, en verder gevorderd stadium. Deze resultaten suggereren dat de opregulatie van miR-132 een belangrijke rol gespeeld bij maagkanker progressie. Interessant, vonden we dat miR-132 expressie is geassocieerd met p53 en c-myc. Sommige eerdere studies is gebleken dat sommige microRNAs kon bemiddelen en te reguleren tumor onderdrukking die wordt uitgeoefend door p53 of c-myc [34, 35]. L Jiang et al. [34] blijkt dat heeft-miR-125a-3p kan apoptose via de p53-route. N Zhang, et al. [35] bleek dat miR-150 de verspreiding van longkanker-cellen kunnen bevorderen door zich te richten p53. Wang B et al. [36] vond dat er sprake was van een dubbele negatieve terugkoppeling tussen miR-122 en c-myc in hepatocellulaire kanker. Li X, et al. [37] blijkt dat c-MYC bevorderde de expressie van volwassen miR-23a, miR24-2 en miR27a en vervolgens bevorderd mammacarcinoom cel migratie en invasie. De exacte correlatie tussen miR-132 en p53, c-myc is onduidelijk en nog worden toegelicht in toekomstige studies. We onderzochten de correlatie van miR-132 expressie met de prognose van maagkanker patiënten, bleek dat patiënten met een hoge miR-132 expressie hadden slechtere algemene overleving dat mensen met een laag miR-132 expressie. Belangrijker multivariate analyse bleek dat hoge miR-132 expressie was onafhankelijke prognostische indicator. Het was controverse of miR-132 gespeeld dezelfde prognostische waarde in verschillende soorten tumoren. Parker et al. gemeld [38] dat hoge expressie van miR-132 werd geassocieerd met een slechte prognose bij patiënten met primaire glioblastoma multiforme. Echter, Yang et al. [12] gemeld dat osteosarcoom patiënten met een lage miR-132 expressie hadden slechtere algehele en ziektevrije overleving. Het was mogelijk dat miR-132 gespeeld verschillende functies in verschillende tumoren. Wang et al. [39] vonden dat overexpressie van miR-132 onderdrukt in vitro celproliferatie en in vivo tumorgroei. Li et al. [13] toonde aan dat overexpressie van miR-132 de proliferatie van borstkankercellen kan remmen. Omgekeerd Park et al. [31] gemeld dat overexpressie van miR-132 vergroot de alvleesklier kankercelproliferatie.
Samengevat onze studie aan dat miR-132 werd opgereguleerd bij maagkanker en kan een onafhankelijke moleculaire biomarker voor het voorspellen van de prognose voor de maag worden kanker. Ondertussen, als gevolg van een kleine steekproef onderzoek, een grote case onderzoek is nodig om de prognostische waarde van miR-132 bij maagkanker te bevestigen.
Verklaringen
Authors 'originele ingediende dossiers voor afbeeldingen
Hieronder staan ​​de links de oorspronkelijke ingediende dossiers van de auteurs voor afbeeldingen. 13000_2014_947_MOESM1_ESM.tif Authors 'originele bestand voor figuur 1 Concurrerende belangen Ondernemingen De auteurs hebben verklaard dat er geen tegenstrijdige belangen bestaan ​​
auteurs.' Bijdragen
bedacht en ontworpen de experimenten: XWL HMY HC YNW. Voerde de experimenten: XWL. Analyseerde de gegevens: XWL HMY. Bijgedragen reagentia /materialen /analyse-instrumenten: HC YNW. Schreef de krant: XWL. Alle auteurs gelezen en goedgekeurd het definitieve manuscript.

• Vergelijking van de werkzaamheid van de verschillende wijze van toediening van chemotherapie op inoperabele, gevorderde maagkanker
• Mixed adeno (neuro) endocriene carcinoom als gevolg van de buitenbaarmoederlijke maagslijmvlies van de bovenste thoracale slokdarm