Izraz in klinični pomen miR-132 pri bolnikih z rakom želodca

Izraz in klinični pomen miR-132 pri bolnikih želodca z rakom
Abstract
Ozadje in objektivno
miR-132 ima vlogo pri uravnavanju nevronov morfologijo in celično razdražljivost. Malo je znanega o učinkih miR-132 pri bolnikih z rakom. Namen te študije je oceniti izraz miR-132 in njegovo klinično pomembna pri raku želodca.
Metode
rakavih tkiv in ustreznih normalnih tkiv iz bili pregledani 79 bolnikov z rakom želodca za izražanje miR-132 uporabo smo analizirali kvantitativno PCR in povezava med izražanjem miR-132 in clinicopathological dejavnikov in prognozo.
Rezultati
v 79 kliničnih vzorcev bolnikov z rakom želodca, miR-132 raven izražanja v tumorskih tkivih občutno višje od tistih v ustrezne normalno tkiva (P
= 0,001). Višje stopnje izraženosti Mir-132 so bili povezani s pogostejšo bezgavkah metastaze (P
= 0,033), več limfnega tumorja embolija (P
= 0,007), in še več v poznejši fazi (P
= 0,016). Poleg tega, je bil izraz miR-132 neodvisen napovedni dejavnik za celokupno preživetje (P
= 0,020).
Zaključek
miR-132 lahko služi kot učinkovito prognostični dejavnik pri bolnikih z rakom želodca.
Virtualna diapozitivi
virtualni slide (i) za tega člena, lahko najdete tukaj: http:... //www diagnosticpathol vili diagnomx eU /vs /8168577241196050
Ključne besede
želodca rak Prognoza biološke označevalce Uvod
Čeprav se je incidenca raka želodca bistveno upada že več desetletij, je še vedno četrti najpogostejši rak in drugi najpogostejši vzrok smrti zaradi raka [1, 2]. Večkratna genov zdi, da prispeva k malignega biološko obnašanje raka želodca [3, 4]. To je zelo pomembno, da se opredelijo prognostičnih dejavnikov, da bi povečali terapevtski učinek in bi čim bolj zmanjšali škodljive učinke pri zdravljenju bolnikov z rakom.
MicroRNAs so skupina endogenih malih nekodirano RNA, ki delujejo kot genskih regulatorji z ureditvijo messenger RNA prevajanje in degradacija [5]. MicroRNAs igrajo ključno vlogo pri uravnavanju običajne funkcije, kot so proliferacije, diferenciacije in apoptoze. Poleg tega disregulacijo od miRNAs prispeva k karcinogeneze in napredovanja raka [6, 7]. Kot član miRNAs družine, miR-132 ima pomembno vlogo pri vnetju, angiogenezo in razvoj živčevja [8-10]. Nedavno so nekatere študije so pokazale, da je bila disregulacijo miR-132 povezani z različnimi človeških tumorjev, kot nedrobnoceličnim pljučnim rakom, osteosarkoma, raka dojke, hepatocelularni karcinom, rak prostate in rak trebušne slinavke [11-16]. Vendar pa ni nobenih poročil o izražanja in klinični pomen miR-132 raka želodca.
V tej študiji so preiskovali miR-132 izražanje pri bolnikih z rakom želodca in je bila analizirana povezava med miR-132 in clinicopathological parametrov . Poleg tega smo ocenili izražanje nekaterih proteinov, vključenih v kontrolo celičnega cikla (p21, p53), proliferacijo tkiva in diferenciacijo (c-myc). p21 in p53 beljakovine so proizvodi tumor-zaviralnih genov, ki se aktivirajo s spreminjanjem proliferacijo celic z nadzorom G1 prijetje kontrolno točko na celičnega cikla [17, 18]. c-myc protein je vrsta transkripcijski faktor.
Bolniki in metode
Human raka želodca in ustreza normalno tkiva so bili pridobljeni od 79 bolnikov, ki so doživeli želodca na Oddelku želodčnega raka in Soft Tissue sarkom, Fudan University Šanghaj raku center, v obdobju od januarja 2007 do decembra je bilo 2009 po delni odstranitvi želodca opravili pri 36 bolnikih, in skupno želodca je bila izvedena v drugih 43 bolnikih. Vsaj 4 cm resekcijske marže iz bruto tumorja so zagotovljena za vse bolnike. Skupno 71 bolnikov prejelo adjuvantno kemoterapijo. Po resekcijo, so bili vzorci takoj zamrznili v tekočem dušiku in nato shrani v -80 ° hladilniku. merila za vključitev za te študije so bili adenokarcinom in popolne patoloških podatkov; Merila za izključitev so neoadjuvantnem terapija, peritonealna razširjanje in oddaljeno metastaze. Podatki so bili pridobljeni iz svojih operativnih in patoloških poročil, in podatki o spremljanju so bili pridobljeni po telefonu ambulantno in klinično bazi podatkov. Privoljenjem napisano je bilo pridobljeno iz vseh bolnikih, in ta študija je odobrila etični odbor Shanghai Cancer Center Fudan univerze. Ekstrakcija
RNA in kvantitativni PCR v realnem času
celotne RNK iz ekstrahiramo tkiva z TRIzola reagenta (Invitrogen, Carlsbad, CA, ZDA) po navodilih proizvajalca. Kvantitativni PCR v realnem času (QRT-PCR) analize so bile izvedene za odkrivanje endogene izraz miR-132 po metodi Applied Biosystems. Na kratko, cDNA reverzno prepisana iz celotne RNA vzorcev z uporabo Mirna specifičnih matičnih zanke premaz iz TaqMan MicroRNA testov in reagentov iz TaqMan® MicroRNA reverzno transkripcijo Kit (ABI, Forest City, CA, ZDA). Nato so bili proizvodi PCR pomnožili s cDNA vzorcev z uporabo TaqMan MicroRNA teste po skupaj z TaqMan® Universal PCR Master Mix in znesek PCR produkta spremlja uporabo Applied Biosystems 7900 Detection System Sequence. U6 majhna jedrska RNA je bila uporabljena kot notranje kontrole. Relativna količina miR-132 je bila izračunana z uporabo 2 (-Delta DeltaC (T)) metoda [19].
Imunohistokemijsko
p21, p53 in c-myc so odkrile imunohistokemičnim metodo. Vsa primarna protitelesa in miška monoklonska protitelesa so bile kupljene od Dako (Hamburg. Nemčija). Imunohistokemijsko je opravila povečali z oznako sistem polimerno metodo (ELPS). Po inkubaciji preko noči pri 4 ° C z anti-p21, p53 in c-myc protitelesa so odseki obdelamo v skladu s standardnimi metodami imunoperoksidazni ob uporabi streptavidina biotin peroxidise kompleksa kit (LSAB + Kit /HRP; Dako). Reakcija peroxidise smo nato razvili s diaminobenzidine (Dako). Negativne kontrole odseki podvržemo enakem postopku, razen da je prvo protitelo nadomesti z fosfatnem pufru s soljo (PBS) [20].
Imunohistokemijsko točkovanje
bili vsi rezine ocenili z dvema patologi brez poznavanja kliničnega rezultata. Odstotek imunoreaktivnega celic in intenzivnosti obarvanje smo ocenili v vsakem vzorcu. Odstotek imunoreaktivnih celic smo ocenili na lestvici od 0 do 4: no obarvanje je dosegel kot 0, 1-10% celic, obarvanih dosegel kot 1, 11-50%, kot 2, 51-80% kot 3, in 81- 100% so 4. intenzivnosti barvanje so ocenjena 0 do 3: 0 je definirana kot negativni, 1, ko je šibka, 2, ko je umirila, in 3 tako močan, oz. Neobdelani podatki so bili preračunani na imunohistokemičnim točk (IHS) z množenjem količine in intenzivnosti rezultate. V končni fazi so imeli primere, rezultat manj kot 1, so bile obravnavane kot negativni, in ≥ 1 je bil obravnavati kot pozitiven [20].
Statistična analiza
funkcij pacientov in clinicopathological značilnosti smo analizirali z uporabo dveh -tailed Študentska t
-test za zvezno spremenljivko in χ 2 test za kategorične spremenljivke. Splošni Krivulje preživetja smo izračunali po metodi Kaplan-Meier, in razlike med krivuljami preživetja so bile pregledane s testom dolgo ranga. Neodvisni napovedni dejavniki so bile pregledane z analizo multivariatno preživetja z uporabo Cox sorazmernih tveganj modela. Sprejeta Stopnja pomembnosti je P
< 0,05. Statistične analize in grafike so bile izvedene s pomočjo SPSS 13.0 statistični paket (SPSS, Inc., Chicago, IL)
Rezultati
Clinicopathological značilnosti
je bilo 62 moških in 17 žensk. (3,6: 1), s povprečjem starost 58 let. Tam je bilo 7 (8,9%), zgodnje želodčni rak in 72 (91,1%) napredovala želodca raka. Glede na histološki tip, so se v 3 (3,8%) bolnikih, ki so dobro diferencirana-tumorji, zmerno diferenciran v 11 (13,9%) bolnikov, in slabo diferencirane tumorje v preostalih 65 (82,3%) bolnikov. Od 79 bolnikov, 25 (31,6%) so tumorji, ki se nahajajo v zgornji tretjini, 15 (19,0%) je imela tumor v srednji tretjini, 36 (45,6%) je imela tumor v spodnji tretjini želodca, in 3 (3,8%) imeli tumorji zaseda dve tretjini ali več želodec. Bezgavka metastaze so opazili pri 57 bolnikih, stopnja metastaze je bila 72,2%. Porazdelitev patološkega fazi je bila naslednja: 10 (12,6%) bolnikov je pripadal fazi I, 24 (30,4%) II in 45 (57%) III
izražanje in povezanosti miR-132, p21, p53. in c-myc
smo miR-132 ravni v 79 rakasto (T) in pripadajoče normalne tkiva (N) pregledal QRT-PCR. Večina tumor tkiva (57/79, 72%) so pokazale povišane ravni miR-132 v primerjavi z ustreznimi normalnih tkivih, s povprečnim povečanjem 2,3-krat. miR-132 ravni v rakastih tkivih (povprečje ± SD, 0,35 ± 0,58), so bile bistveno višje od tistih v ustreznih noncancerous tkiva (povprečje ± SD, 0,15 ± 0,35, P
< 0,05). Med izrazi p21, p53 in c-myc so obravnavali imunohistokemičnim barvanjem. p21 izraz je bil pozitiven v 64,6% vseh želodčnega tkiva raka. p21 obarvanje opazili v jedru celic karcinoma. p53 izraz je bil pozitiven v 74,7% vseh želodčnega tkiva raka. p53 obarvanje opazili v jedru celic karcinoma. c-myc izraz je bil pozitiven v 44,3% vseh želodčnega tkiva raka. c-myc obarvanje opazili v citoplazmi celic karcinoma. miR-132 izraz je bila povezana z p53 in c-myc. Ni bilo nobene povezave s p21. Poleg tega je bil p53expression povezana s c-myc (tabela 1) .table 1 Pozitivni rezultati korelacij med biološke označevalce
Biološki markerji
koeficientov korelacije (r)
P value

miR-132
P53
0.274
0.015
miR-132
c-myc
0.228
0.044
P53
c-myc
0.235
0.038
Klinični pomen miR-132 na raka želodca
79 bolnikov z rakom želodca so bili razdeljeni v dve skupini, vključno z miR-21 visoko izražanja skupino (T /N > 0,5, n = 33) in nizko izražanja skupino (T /N < 0,5, n = 46) v skladu z mediano T /n obrok miR-132 ekspresijo. Analizirana je bila korelacija med miR-132 izražanja in patoloških parametrov. Rezultati so pokazali, da so imeli bolniki z visokim miR-132 izražanja pogostejše limfnega vozla metastaze (P
= 0,033), več limfni tumor embolij (P
= 0,007), in še več naprednih fazah (P
= 0,016 ). Vendar pa ni bilo bistvenih razlik o spolu, starosti, histološki tip, lokacija tumorja, velikosti tumorja, živčni invazije, in fazo T (tabela 2). V celokupno preživetje so imeli bolniki z visokim izražanja miR-132 bistveno slabšo prognozo kot tisti z miR-132 nizkega izražanja (P
= 0,000) (slika 1). Univariatna Analiza celokupnega preživetja je pokazala, da so relativni izraz miR-132, živčni invazije, limfnega tumorja embolija in patološko fazi prognostični napovedujejo. Multivariatne analize preživetje, vključno z vsemi pomembnimi prognostičnih dejavnikov, navedenih v univariatno analizo, je bila izvedena za določitev neodvisnih napovednih dejavnikov za raka želodca. Multivariatna analiza je pokazala, da so bili miR-132 nivo izražanja in patološko oder neodvisni napovedni dejavniki (tabela 3) .table 2 miR-132 izražanja in clinicopathological dejavnikov,
spremenljivke
visoki izraz n = 33

Nizka izraz n = 46
P
Spol
0,618
Moški
25
37
Moški
8
9
Age
0,556
< 60
18
22
≥60
15
24
histološki razvrščanje
0,412
slabo -differentiated
28
36
Zmerno diferencirane
5
7
dobro diferencirani
0
3
Tumor lokacija
0.467
Zgornja tretjina
10
15
Bližnji tretji
8
7
Spodnja tretjina
15
21
Dve tretjini ali več
0
3
velikost tumorja (cm)
0.862
< 5
18
26
≥5
15
20
živčevja invazija
0,096
Da
22
22
Ne
11
24
limfni tumor embolija
0.005
Da
26
22
Ne
7
24
oder T
0,070
T1, T2
6
17
T3, T4
27
29
bezgavka metastaze
0,033
da
28
29
Ne
5
17
Patološka stage
0,016
sem
2
8
II
6
18
III
25
20
Slika 1: Primerjava preživetja po izražanju miR-132. So bile razlike med miR-132 visoko izražanja in pokoj-132 nizko izražanje (P
= 0,000).
Tabela 3 Multivariatna analiza bolnikov z Cox modelu
Variable
χ2

P
vale
RR
95% CI
miR-132 izraz
5.447
0.020
2,414
1,152-5,059
živčni napad
1.918
0,166
1.890
0.768-4.655
limfnega tumorja embolija
0.173
0,677
0,838
0.366-1.923
Patološka stage
8,742
0.003
4,356
1.642-11.555
Razprava
prepoznavanje napovednih dejavnikov pri raku želodca je bistvenega pomena za napovedovanje preživetje bolnikov in določitev optimalnih terapevtskih strategij . Globina invazije in bezgavkah metastaze so najpomembnejši napovedni dejavniki pri raku želodca. Kot posledica variabilnosti prognoze znotraj istega patološkega fazi raka želodca, je bilo veliko raziskav za posebne biološke označevalce odkriti bolnike z napovedjo [21-28]. Bioloških označevalcev, kot so microRNA, c-Met, L1CAM, endotelijske lipaze beljakovine, različno število kopija mitohondrijske DNK (mtDNK), TIMP3, hK6 in Ezrin so natančno preučili. Kot nov biomarker, je potencial miRNAs v napovedovanju prognoze bolj raziskano. miR-132 je zelo ohranjena miRNA prepisati iz medgenskega regije na človeškem kromosomu 17, ki jih je transkripcijski faktor cAMP odzivni element vezave na beljakovine [29]. Večina poročil borbi uredbe miR-132 in bioloških funkcijah nastale iz študij, opravljenih v nevronov kontekstu. Poleg tega, miR-132 je opisan tudi v številnih drugih področjih, kot so vnetja, transformacijo celic in tumourigenesis. miR-132 je bilo dokazano, da je reguliran ali dol, urejena v različnih oblikah raka [16, 30, 31]. Nekatere študije so pokazale, da bi lahko miR-132 spodbudo proliferacije celic [31]. Vendar pa še vedno ni poročil o pokoj-132 raka želodca.
V tej študiji smo raziskovali miR-132 izražanje pri raku želodca in ugotoviti, če bi lahko napovedati izid bolezni pri bolniku. Ugotovili smo, da je miR-132 ekspresijo višja pri rakavih tkiv v primerjavi z ustreznimi normalnih tkiv. Natančen vzrok za miR-132 visoko ekspresijo raka želodca ni znano. Park JK sod. poročali [31], da B2AR agonist terbutalin povečuje miR-132 izraz. miR-132 je transkripcijsko aktivira CREB v nevronih [32]. B2AR antagonisti inhibira aktivacijo CREB [33]. Zato je možno, da simulacija B2AR poveča miR-132 ekspresijo po aktivaciji CREB.
Rezultati so pokazali, da je bil visok miR-132 ekspresijo v rak želodca močno povezana z agresivnim clinicopathological lastnostmi, kot so pogostejše bezgavkah metastaze, bolj limfni tumor embolija in bolj napredni fazi. Ti rezultati kažejo, da Povecanje miR-132 je igral pomembno vlogo pri želodčnem napredovanju raka. Zanimivo je, da smo ugotovili, da je miR-132 ekspresijo povezano z p53 in c-myc. Nekatere prejšnje študije so pokazale, da bi lahko nekateri microRNAs posredovanje in urejanje zatiranje tumorja p53 ali c-myc [34, 35], ki se prenaša. Jiang L et al. [34] ugotovljeno, da ima-miR-125a-3p lahko povzročijo apoptozo preko p53 poti. Zhang N, et al. [35] je pokazala, da bi lahko miR-150 spodbujanje širjenja pljuč rakavih celic z usmerjanjem p53. Wang B et al. [36] je pokazala, da je bil dvojni negativna povratna zanka med miR-122 in c-myc raka jetrnih celic. Li X, et al. [37] je pokazala, da je c-MYC spodbuja izražanje zrelo pokoj-23a, miR24-2 in miR27a nato spodbujati migracije celic dojke karcinom in invazijo. Vendar natančna korelacija med miR-132 in p53, c-myc je nejasen in še ni pojasnjen v prihodnjih študijah. Preučevali smo korelacijo miR-132 izražanja s prognozo bolnikov z rakom želodca, je pokazala, da so imeli bolniki z visokim miR-132 izražanja slabšo skupno preživetje, da tisti z nizkimi miR-132 izražanja. Še pomembneje je, multivariatna analiza je pokazala, da je bila visoka miR-132 izraz neodvisni prognostični kazalec. Bilo je polemiko, ali miR-132 igral enako napovedno vrednost pri različnih vrstah tumorjev. Parker et al. poročali [38], ki je bila visoka ekspresija miR-132, povezano s slabo prognozo pri bolnikih s primarno multiformnega glioblastoma. Vendar, Yang et al. [12] je poročal, da je imel osteosarkomne bolniki z nizko miR-132 izražanja slabšo splošno in brez bolezni preživetje. To je bilo možno, da miR-132 igral različne funkcije v različnih tumorjev. Wang et al. [39] ugotovljeno, da je čezmerno miR-132 zatreti v proliferacije in vitro celic in vivo rast tumorja. Li et al. [13] pokazala, da bi prekomerno miR-132 inhibira proliferacijo raka dojk celice. Nasprotno, Park et al. [31] poroča, da je prekomerno ekspresijo miR-132 povečal širjenja trebušne slinavke rakavih celic.
Skupaj naša raziskava je pokazala, da je bila miR-132 povečana pri raku želodca in je lahko neodvisen molekularno biomarkerjev za napovedovanje prognozo želodca rak. Medtem, zaradi majhnih raziskav vzorcev, je potrebna velika zadeva raziskave za potrditev napovedno vrednost miR-132 pri raku želodca.
Izjave
Avtorji "prvotna predložiti datoteke za slike
Spodaj so povezave originalnih predloženih spisov avtorjev za slike. 13000_2014_947_MOESM1_ESM.tif avtorjev izvirna datoteka za sliki 1 Konkurenčni interesi
Avtorji so izjavili, da ne obstajajo konkurenčni interesi
avtorjev. Prispevkov
zasnovanih poskusov: XWL HMY HC YNW. Izvedli eksperimente: XWL. Analizirali podatke: XWL HMY. Prispevali reagenti /gradivo /orodja za analizo: HC YNW. Napisal papirja: XWL. Vsi avtorji prebrali in potrdil končni rokopis.

• Primerjava učinkovitosti drugim načinom kemoterapije neizrezljivega, napredne želodca cancer
• Mešani adeno (nevro) endokrinih karcinom izhajajo iz zunajmaternične želodčne sluznice zgornjega prsni požiralnika