Die Expression und klinische Bedeutung von miR-132 in Patienten mit Magenkrebs

Die Expression und klinische Bedeutung von miR-132 in Patienten mit Magenkrebs
Zusammenfassung
Hintergrund und Ziel
miR-132 spielt eine Rolle neuronale Morphologie und zelluläre Erregbarkeit bei der Regulierung. Es ist wenig über die Wirkungen von miR-132 in Krebs bekannt. Das Ziel dieser Studie ist es, die Expression von miR-132 und ihre klinische Bedeutung bei Magenkrebs zu bewerten.
Methoden
Krebsgewebe und entsprechenden normalen Geweben von 79 Patienten mit Magenkrebs für die Expression von miR-132 untersucht wurden, mittels quantitativer PCR und die Assoziation zwischen miR-132-Expressionsniveaus und klinisch-pathologischen Faktoren und Prognose analysiert.
Ergebnisse
in 79 klinischen Proben von Patienten mit Magenkrebs, miR-132-Expressionsniveaus in Krebsgeweben waren signifikant höher als die in die entsprechenden normalen Geweben (P
= 0,001). Höhere Expressionsniveaus von miR-132 wurden mit häufiger Lymphknotenmetastasen (P
= 0,033) zugeordnet ist, mehr lymphatischen Tumor Embolien (P
= 0,007) und fortgeschritteneren Stadium (P
= 0,016). Zusätzlich wird die Expression von miR-132 war ein unabhängiger prognostischer Faktor für das Gesamtüberleben (p = 0,020
).
Fazit
miR-132 als effiziente Prognosefaktor für Magenkrebs-Patienten dienen könnten.
Virtuelle Dias
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Schlüsselwörter Magen Krebs Prognose von biologischen Markern Einleitung
Obwohl die Häufigkeit von Magenkrebs ist seit mehreren Jahrzehnten deutlich zurückgegangen ist, ist es immer noch die vierthäufigste Krebserkrankung und die zweithäufigste Ursache für Krebstod [1, 2]. Ein Vielfaches von Genen scheinen das maligne biologische Verhalten von Magenkrebs [3, 4] beizutragen. Es ist sehr wichtig, um die prognostische Faktoren zu identifizieren, um die therapeutische Wirkung zu maximieren und die negativen Auswirkungen bei der Behandlung von Krebspatienten.
MicroRNAs sind eine Klasse von endogenen kleinen nicht-kodierenden RNAs, die Funktion als Genregulatoren zu minimieren, indem Boten-RNA regulieren Übersetzung und Abbau [5]. MicroRNAs spielen eine entscheidende Rolle, die normalen Funktionen wie Proliferation, Differenzierung und Apoptose bei der Regulierung. Darüber hinaus tragen Dysregulation von miRNAs auf die Karzinogenese und Tumorprogression [6, 7]. Als Mitglied der miRNAs Familie spielt miR-132 eine wichtige Rolle bei der Entzündung, Angiogenese und neuronale Entwicklung [8-10]. Kürzlich zeigten einige Studien, dass die Fehlregulation von miR-132 auf eine Vielzahl von humanen Tumoren verbunden war, wie nicht-kleinzelligem Lungenkarzinom, Osteosarkom, Brustkrebs, Leberzellkarzinom, Prostatakrebs, Bauchspeicheldrüsenkrebs und [11-16]. keine Berichte über die Expression und klinische Bedeutung von miR-132 in Magenkrebs dort sind jedoch. die miR-132 Expression in Magenkrebs-Patienten
In dieser Studie wurde untersucht, und die Assoziation zwischen miR-132 und klinisch-pathologischen Parameter analysiert . Zusätzlich untersuchten wir die Expression von einigen beteiligten Proteine ​​in Zellzyklus-Kontrolle (p21, p53), Gewebeproliferation und -differenzierung (c-myc). p21 und p53-Proteine ​​sind die Produkte von Tumor-Suppressor-Gene, die durch Modulation der Zellproliferation über die Steuerung des G1-Arrest checkpoint des Zellzyklus aktiviert werden [17, 18]. c-myc-Protein ist eine Art von Transkriptionsfaktor.
Patienten und Methoden
menschliche Magenkrebs und entsprechenden normalen Geweben wurden von 79 Patienten, die Gastrektomie an der Abteilung für Magenkrebs unterzog und Weichteilsarkomen, Fudan University Shanghai Cancer Center, zwischen Januar 2007 und Dezember 2009 teilweise Gastrektomie wurde bei 36 Patienten durchgeführt, und Gastrektomie wurde in den anderen 43 Patienten durchgeführt. Mindestens 4 cm Resektionsrändern aus Brutto Tumor wurden für alle Patienten gewährleistet. Insgesamt 71 Patienten erhielten eine adjuvante Chemotherapie. Nach der Resektion wurden die Proben sofort in flüssigem Stickstoff eingefroren und dann in -80 ° Kühlschrank aufbewahrt. Einschlusskriterien für diese Studie waren Adenokarzinom und vollständige pathologische Daten; Ausschlusskriterien waren eine neoadjuvante Therapie, Peritonealdialyse Verbreitung und Fernmetastasen. Die Daten wurden aus ihren operativen und pathologischen Berichte abgerufen werden, und Follow-up-Daten wurden telefonisch bei der ambulanten und klinischen Datenbank erhalten. Die schriftliche Einverständniserklärung war von allen Patienten erhalten worden ist, und diese Studie wurde von der Ethikkommission der Shanghai Cancer Center der Fudan-Universität.
RNA-Extraktion und quantitative Echtzeit-PCR wurde die Gesamt-RNA aus dem Gewebe extrahiert
genehmigt mit Trizolreagenz (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) gemäß den Anweisungen des Herstellers. Quantitative real-time PCR (qRT-PCR) Assays wurden ausgeführt, um die endogene Expression von miR-132 nach dem Applied Biosystems Verfahren zu erkennen. mit einem miRNA spezifischen Stem-Loop-Primer aus den TaqMan MicroRNA-Assays und Reagenzien aus dem TaqMan MicroRNA Reverse Transkription-Kit (ABI, Forest City, CA, USA) Kurz gesagt, wurde cDNA aus Gesamt-RNA-Proben revers transkribiert. Dann wurden PCR-Produkten aus cDNA-Proben amplifiziert die TaqMan MicroRNA Assays unter Verwendung zusammen mit der TaqMan ® Universal-PCR Master Mix und die Menge des PCR-Produkts wurden Applied Biosystems 7900 Sequence Detection System überwacht. U6 small nuclear RNA wurde als interne Kontrolle verwendet. Die relative Menge von miR-132 wurde unter Verwendung von 2 (-Delta DeltaC (T)) Methode [19] berechnet.
Immunhistochemische Färbung
p21, p53 und c-myc wurden durch immunhistochemische Verfahren detektiert. Alle primären Antikörper und monoklonalen Maus-Antikörper wurden von Dako (Hamburg. Deutschland) erworben. Immunhistochemische Färbung wurde von dem markierten Polymersystems zu verbessern durchgeführt (ELPS) -Methode. Nach Inkubation über Nacht bei 4 ° C mit Anti-p21, p53 und c-myc-Antikörper wurden die Schnitte nach Standard Immunperoxidase Methoden behandelt, um eine Streptavidin Biotin Peroxidase-Komplex-Kit (LSAB + Kit /HRP; Dako) verwendet wird. Die Peroxidase-Reaktion wurde dann mit Diaminobenzidin (Dako) entwickelt. Negative Kontrollschnitte wurden mit Ausnahme der gleichen Prozedur unterzogen, daß der erste Antikörper durch Phosphatpuffer-Salzlösung (PBS) ersetzt wurde [20].
Immunhistochemische Färbung scoring
Alle Scheiben von zwei Pathologen ohne Kenntnis der klinischen Ergebnisse wurden bewertet. Der Prozentsatz der immunoreaktiven Zellen und Färbungsintensitäten wurden in jeder Probe ausgewertet. Der prozentuale Anteil an immunreaktiven Zellen wurde auf einer Skala von 0 bis 4 bewertet: keine Färbung erzielt wurde als 0, 1-10% der Zellen als 1, 11-50%, wie 2, 51-80% als 3 gefärbt erzielt und 81- 100% als 4. Die Färbeintensitäten von 0 bis 3 bewertet wurden: 0 als negativ definiert, 1 als schwach, 2 moderierte und 3 so stark sind. Die Rohdaten wurden dem immunhistochemischen Score (IHS) umgewandelt, indem sie die Menge und Intensität Partituren multipliziert wird. In der letzten Analyse hatten die Fälle eine Punktzahl von weniger als 1 wurden als negativ angesehen, und ≥ 1 wurde als positiv [20] betrachtet.
Statistische Analyse
Die Patienten Merkmale und klinisch-pathologischen Eigenschaften wurden die beiden analysiert -tailed Student t
-Test für kontinuierliche Variable und χ 2-Test für kategorische variablen. Die Gesamtüberlebenskurven wurden durch Kaplan-Meier-Methode berechnet, und die Unterschiede zwischen den Überlebenskurven wurden mit lang-Rank-Test untersucht. Die unabhängigen prognostischen Faktoren wurden von der multivariaten Analyse untersuchte Modell mit Cox Proportional-Hazards. Die akzeptierte Signifikanzniveau war P
< 0,05. Statistische Analysen und Grafiken wurden mit dem SPSS 13.0 Statistikpaket (SPSS Inc., Chicago, IL) durchgeführt
Ergebnisse
Clinicopathological Eigenschaften
Es waren 62 Männer und 17 Frauen. (3,6: 1) mit einem mittleren Alter von 58 Jahren. Es gab 7 (8,9%) frühen Magenkrebs und 72 (91,1%) mit fortgeschrittenem Magenkrebs. Gemäß histologischen Typ, gut differenzierten Tumoren wurden in 3 (3,8%) der Patienten beobachtet, mäßig differenzierten in 11 (13,9%) der Patienten und schlecht differenzierten Tumoren in restlichen 65 (82,3%) Patienten. Von 79 Patienten, 25 (31,6%) hatte im oberen Drittel befindet Tumoren, 15 (19,0%) hatten Tumoren im mittleren Drittel, 36 (45,6%) hatten Tumoren im unteren Drittel des Magens und 3 (3,8%) hatten Tumoren besetzt zwei Drittel oder mehr des Magens. Lymphknotenmetastasen bei 57 Patienten beobachtet wurde, war die Metastasierungsrate 72,2%. Die Verteilung der Krankheitsstadium war wie folgt: 10 (12.6%) Patienten gehörte ich zu Stufe 24 (30,4%) II und 45 (57%) III
Die Expression und Korrelation von miR-132, p21, p53. und c-myc
miR-132 in 79 Ebenen kanzerösen (T) und den entsprechenden normalen Geweben (N) nach qRT-PCR untersucht wurden. Die meisten Tumorgewebe (57/79, 72%) zeigte erhöhte Spiegel von miR-132 im Vergleich zu den entsprechenden normalen Geweben, mit einer medianen Steigerung von 2,3-fach. miR-132 Ebenen in Krebsgewebe (Mittelwert ± SD, 0,35 ± 0,58) waren signifikant höher als die in den entsprechenden noncancerous Gewebe (Mittelwert ± SD, 0,15 ± 0,35, P
< 0,05). Die Ausdrücke von p21, p53 und c-myc wurden durch immunhistochemische Färbung untersucht. p21-Expression wurde in 64,6% aller Magenkrebsgewebe positiv. p21-Färbung wurde in den Zellkern von Karzinomzellen beobachtet. p53-Expression war in 74,7% aller Magenkrebsgewebe positiv. p53-Färbung wurde in den Zellkern von Karzinomzellen beobachtet. c-myc-Expression positiv war in 44,3% aller Magenkrebsgewebe. c-myc-Färbung wurde in das Zytoplasma der Krebszellen beobachtet. miR-132-Expression wurde mit p53 und c-myc verbunden. Es gab keine Korrelation mit p21. Zusätzlich p53expression verbunden war mit c-myc (Tabelle 1) .Tabelle 1 Positive Ergebnisse von Korrelationen zwischen biologischen Markern
biologischen Markern
Korrelationskoeffizienten (r)
P value

miR-132
P53
0.274
0.015
miR-132
c-myc
0.228
0.044
P53
c-myc
0.235
0.038
Klinische Bedeutung von miR-132 in Magenkrebs
79 Magenkrebs-Patienten wurden in zwei Gruppen aufgeteilt, einschließlich miR-21 High-Ausdruck-Gruppe (T /N > 0,5, n = 33) und Low-Ausdruck-Gruppe (T /N < 0,5, n = 46) nach dem Median T /N-Verhältnis von miR-132-Expression. Die Korrelation zwischen miR-132 Expression und pathologischen Parametern analysiert. Die Ergebnisse zeigten, dass Patienten mit hohem miR-132 Expression häufiger Lymphknotenmetastasen hatte (P
= 0,033), mehr lymphatischen Tumor Embolien (P
= 0,007) und fortgeschrittenen Stadium (P
= 0,016 ). Allerdings gab es keine signifikanten Unterschiede zu Geschlecht, Alter, histologischen Typ, Tumorlokalisation, Tumorgröße, nervöse Invasion und T-Stadium (Tabelle 2). In der Gesamtüberlebenszeit hatten die Patienten mit der miR-132 eine hohe Expression eine deutlich schlechtere Prognose als solche mit miR-132 niedrige Expression (P
= 0,000) (Abbildung 1). Univariate Analyse der Gesamtüberlebenszeit zeigte, dass die relative Expression von miR-132, Nerven Invasion, lymphatische Tumorembolien und pathologischen Stadium waren prognostische Prädiktoren. Multivariaten Analyse, einschließlich aller wesentlichen prognostische Faktoren in der univariaten Analyse erwähnt, wurde die unabhängige prognostische Faktoren für Magenkrebs zu bestimmen, durchgeführt. Multivariate Analysen zeigten, dass die miR-132-Expressionsniveau und pathologischen Stadium waren unabhängige prognostische Faktoren (Tabelle 3) .Tabelle 2 miR-132 Expression und klinisch-pathologischen Faktoren
Variablen
Hohe Ausdruck
n = 33

Low Ausdruck n = 46
P
Geschlecht
0.618
männlich
25
37
Weiblich
8
9
Alter
0.556
< 60
18
22
≥60
15
24
Histologische Grading
0.412
Poorly -differentiated
28
36
Mäßig differenzierte
5
7
Gut differenzierte
0
3
Tumor Lage
0.467
obere Drittel 10
15
Mitte Drittel
8 7
unteren Drittel
15
21
Zwei Drittel oder mehr
0
3
Tumorgröße (cm)
0.862
< 5
18
26
≥5
15
20
Nervous Invasion
0.096
Ja
22
22
No
11
24
lymphatischen Tumor Embolien
0,005
Ja
26
22
Kein
7
24
T-Stadium
0.070
T1, T2
6 17
T3, T4
27
29
Lymph Node Metastasierung
0,033
Ja
28
29
No
5
17
Pathologische stage
0,016
I
2
8
II
6 18
III
25
20
Abbildung 1: Vergleich des Überlebens nach der Expression von miR-132. Es gab erhebliche Unterschiede zwischen miR-132 eine hohe Expression und miR-132 niedrige Expression (P
= 0,000).
Tabelle 3 Multivariate Analyse von Patienten, die von Cox-Modell
Variable
χ2

P
vale
RR
95% CI
miR-132 Expression
5,447
0,020
2,414
1,152-5,059
Nervous Invasion
1,918
0.166
1.890
0,768-4,655
lymphatischen Tumor Embolien
0.173
0.677
0.838
0,366-1,923
Pathologische stage
8,742
0,003
4,356
1,642 bis 11,555
Diskussion
Die Identifizierung von prognostischen Faktoren bei Magenkrebs für die Vorhersage der Patienten das Überleben und die Bestimmung der optimalen therapeutischen Strategien wesentlich war, . Die Tiefe der Invasion und Lymphknotenmetastasen waren die wichtigsten prognostischen Faktoren bei Magenkrebs. Als Ergebnis der Variabilität der Prognose im gleichen pathologischen Stadium von Magenkrebs, hat es für bestimmte biologische Marker viele Forschungen waren Patienten mit der Prognose zu identifizieren [21-28]. Die biologischen Markern wie microRNA, c-Met, L1CAM, die endotheliale Lipase-Protein, variable Kopienzahl der mitochondrialen DNA (mtDNA), TIMP3, HK6 und Ezrin wurden ausgiebig untersucht. Als neuartige Biomarker wird das Potential von miRNAs bei der Vorhersage Prognose zunehmend untersucht. miR-132 ist eine hochkonservierte miRNA aus einer intergenischen Region transkribieren auf dem menschlichen Chromosom 17 durch den Transkriptionsfaktor cAMP response element binding protein [29]. Die meisten Berichte Kampf miR-132 Regulation und biologische Funktionen entstanden aus den Studien im neuronalen Kontext durchgeführt. Zusätzlich miR-132 wurde auch in einer Reihe von anderen Bereichen, wie beispielsweise Entzündung, Zelltransformation und Tumorgenese beschrieben. miR-132 wurde gezeigt, nach oben reguliert oder nach unten reguliert in verschiedenen menschlichen Krebsarten werden [16, 30, 31]. Einige Studien haben gezeigt, dass miR-132-Zellproliferation fördern könnten [31]. Allerdings gibt es noch keine Berichte über miR-132 in Magenkrebs sind.
In dieser Studie untersuchten wir miR-132 Expression in Magenkrebs und bestimmt, ob es Patienten Ergebnisse vorhersagen könnte. Wir fanden, dass miR-132 Expression war höher in Krebsgewebe im Vergleich zu normalem Gewebe entspricht. Die genaue Ursache des miR-132 eine hohe Expression in Magenkrebs ist nicht bekannt. Park JK et al. berichtete [31], dass die B2AR Agonist Terbutalin erhöht die Expression von miR-132. miR-132 wurde transkriptionell von CREB in Neuronen aktiviert [32]. B2AR Antagonisten Aktivierung von CREB inhibiert [33]. Daher ist es möglich, dass die Simulation von B2AR erhöhen miR-132 Expression nach Aktivierung von CREB.
Die Ergebnisse zeigten, dass eine hohe miR-132 Expression in Magenkrebs signifikant mit aggressiven klinisch-pathologischen Eigenschaften wie häufiger Lymphknotenmetastasen korreliert wurde, mehr lymphatischen Tumor Embolien und fortgeschrittenen Stadium. Diese Ergebnisse legen nahe, dass upregulation von miR-132 eine wichtige Rolle bei Magenkrebs Progression gespielt. Interessanterweise fanden wir, dass miR-132-Expression mit p53 und c-myc verbunden war. Einige frühere Studien haben gezeigt, dass einige microRNAs vermitteln konnte und Tumorunterdrückung durch p53 oder c-myc [34, 35] ausgeübt regulieren. Jiang L et al. [34] festgestellt, dass hat-miR-125a-3p Apoptose über den p53-Signalweg induzieren könnte. Zhang N, et al. [35] festgestellt, dass miR-150, die Proliferation von Lungenkrebszellen durch gezielte p53 fördern könnte. Wang B et al. [36] festgestellt, dass es eine doppelte negative Rückkopplungsschleife zwischen miR-122 und c-myc in hepatozellulärem Krebs war. Li X, et al. [37] festgestellt, dass c-MYC die Expression von reifen miR-23a, miR24-2 gefördert und miR27a und anschließend Mammakarzinoms Zellmigration und Invasion gefördert. Jedoch ist die genaue Korrelation zwischen miR-132 und p53, c-myc unklar und bleibt in zukünftigen Studien aufgeklärt werden. Wir untersuchten die Korrelation von miR-132 Expression mit der Prognose von Patienten mit Magenkrebs festgestellt, dass Patienten mit hohem miR-132 Expression hatte schlechtere Gesamtüberlebenszeit, dass diejenigen mit niedrigen miR-132 Expression. Noch wichtiger ist, ergab, multivariate Analyse, dass eine hohe miR-132 Expression unabhängiger prognostischer Indikator war. Es war umstritten, ob miR-132 gleiche prognostischen Wert in verschiedenen Tumorarten gespielt. Parker et al. berichtet [38], dass eine hohe Expression von miR-132 mit einer schlechten Prognose bei Patienten mit primärem Glioblastom verbunden war. Jedoch Yang et al. [12] berichteten, dass Osteosarkom Patienten mit niedrigem miR-132 Expression schlechteren Gesamt und das krankheitsfreie Überleben hatte. Es war möglich, dass miR-132 verschiedene Funktionen in verschiedenen Tumoren gespielt. Wang et al. [39] festgestellt, dass die Überexpression von miR-132 in vitro-Zellproliferation unterdrückt, und in vivo Tumorwachstum. Li et al. [13] zeigten, dass die Überexpression von miR-132 konnte die Proliferation von Brustkrebszellen hemmen. Umgekehrt, Park et al. [31] berichtet, dass eine Überexpression von miR-132, um die Proliferation Pankreaskrebszelle erhöht. Zusammengenommen
, unsere Studie zeigte, dass miR-132 in Magenkrebs nach oben reguliert wurde und könnte ein unabhängiger molekularer Biomarker zur Vorhersage der Prognose von Magen sein Krebs. Inzwischen als Folge der kleinen Proben Forschung, ein großer Fall Forschung ist notwendig, den prognostischen Wert von miR-132 in Magenkrebs zu bestätigen.
Erklärungen
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Die Autoren haben erklärt, dass keine Interessenkonflikte bestehen
Autoren. Die Beiträge
erdacht und entwickelt, um die Experimente: XWL HMY HC YNW. Führten die Experimente: XWL. Analysiert die Daten: XWL HMY. Bereitgestellt Reagenzien /Materialien /Analyse-Tools: HC YNW. Schrieb das Papier: XWL. Alle Autoren gelesen und genehmigt haben das endgültige Manuskript.

• Vergleich der Wirksamkeit verschiedener Art der Verabreichung der Chemotherapie auf inoperablem, fortgeschrittenem Magen cancer
• Mixed Adeno (neuro) endokrine Karzinom aus der ektopischen Magenschleimhaut des oberen Brust esophagus