Uttrykket og kliniske betydningen av MIR-132 i mage kreftpasienter

Uttrykket og kliniske betydningen av MIR-132 i mage kreftpasienter
Abstract
Bakgrunn og formål
MIR-132 spiller en rolle i regulering av neuronal morfologi og cellulær oppstemthet. Lite er kjent om effekter av MIR-132 i kreft. Målet med denne studien er å evaluere uttrykk for MIR-132 og klinisk betydning i magekreft.
Metoder
Kreft vev og tilsvarende normale vev fra 79 pasienter med magekreft ble undersøkt for ekspresjon av MIR-132 ved hjelp av kvantitativ PCR og sammenhengen mellom Mir-132 uttrykk nivåer og clinicopathological faktorer og prognose ble analysert.
Resultater
i 79 kliniske prøver av magekreftpasienter, Mir-132 uttrykk nivåer i kreftvev var betydelig høyere enn i de tilsvarende normale vev (P
= 0,001). Høyere uttrykk nivåer av MIR-132 ble forbundet med hyppigere lymfeknutemetastase (P
= 0,033), mer lymphatic tumor emboli (P
= 0,007), og mer avansert stadium (P
= 0,016). I tillegg uttrykk for MIR-132 var en uavhengig prognostisk faktor for total overlevelse (P
= 0,020).
Konklusjon
MIR-132 kan tjene som en effektiv prognostisk faktor for mage kreftpasienter.
Virtual lysbilder
virtuelle lysbilde (er) for denne artikkelen finner du her: http:... //www diagnosticpathol logi diagnomx eu /vs /8168577241196050
nøkkelord
Gastric kreft Prognose biologiske markører Innledning
Selv om forekomsten av magekreft har blitt betydelig fallende i flere tiår, er det fortsatt den fjerde vanligste kreftformen og den nest hyppigste årsaken til kreftdød [1, 2]. Et multiplum av gener synes å bidra til den ondartede biologiske oppførsel av magekreft [3, 4]. Det er meget viktig å identifisere de prognostiske faktorer for å maksimalisere den terapeutiske effekten, og for å minimalisere de ugunstige effekter ved behandling av kreftpasienter.
MicroRNAs er en klasse av endogene små ikke-kodende RNA som fungerer som gene regulatorer ved å regulere messenger-RNA oversettelse og degradering [5]. MicroRNAs spille en avgjørende rolle i å regulere de vanlige funksjonene som spredning, differensiering og apoptose. Videre dysregulering av mirnas bidrar til kreftutvikling og progresjon av kreft [6, 7]. Som medlem av miRNAs familie, spiller MIR-132 en viktig rolle i betennelse, angiogenese, og neural utvikling [8-10]. Nylig har enkelte studier viste at feilregulering av MIR-132 var knyttet til en rekke humane tumorer, slik som ikke-småcellet lungekreft, osteosarkom, brystcancer, leverkreft, prostatakreft, kreft i bukspyttkjertelen og [11-16]. Men det er ingen rapporter om uttrykk og kliniske betydningen av MIR-132 i magekreft.
I denne studien ble Mir-132 uttrykk i magekreftpasienter undersøkt og sammenhengen mellom MIR-132 og clinicopathological parametre ble analysert . I tillegg har vi undersøkt ekspresjonen av noen proteiner som er involvert i cellesykluskontroll (p21, p53), vev proliferasjon og differensiering (c-myc). p21 og p53-proteiner er produkter av tumor-suppressor-gener, som aktiveres ved å modulere celleproliferasjon via kontroll av G1 arrest sjekkpunktet av cellesyklusen [17, 18]. c-myc protein er en type transkripsjonsfaktor.
Pasienter og metoder
Menneskelig magekreft og tilsvarende normale vev ble oppnådd fra 79 pasienter som gjennomgikk gastrektomi ved Institutt for magekreft og bløtvevssarkomer, Fudan University i Shanghai Cancer sentrum, mellom januar 2007 og desember 2009. Delvis gastrektomi ble utført hos 36 pasienter, og total gastrektomi ble utført i de andre 43 pasienter. Minst 4 cm reseksjonskanten fra brutto tumor ble garantert for alle pasienter. Totalt 71 pasienter fikk adjuvant kjemoterapi. Etter reseksjon ble prøvene umiddelbart frosset i flytende nitrogen og deretter lagret i -80 ° kjøleskap. Inklusjonskriteriene for denne studien var adenokarsinom og komplett patologisk data; Eksklusjonskriterier var neoadjuvant terapi, peritoneal formidling, og fjernmetastaser. Data ble hentet fra sine operative og patologiske rapporter, og oppfølgingsdata ble innhentet via telefon poliklinisk og klinisk database. Den skriftlig informert samtykke var innhentet fra alle pasientene, og denne studien ble godkjent av etisk komité Shanghai Cancer Center of Fudan University.
RNA ekstraksjon og kvantitativ real-time PCR
total RNA fra vev ble ekstrahert med TRIzol reagens (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) etter produsentens anvisninger. Kvantitative real-time PCR (QRT-PCR) analyser ble utført for å påvise den endogene ekspresjon av MIR-132 i henhold til den Applied Biosystems metoden. Kort fortalt cDNA ble revers transkribert fra total RNA prøver ved hjelp av en miRNA-spesifikke stilk-løkke primer fra TAQMAN mikroRNA analyser og reagenser fra TaqMan® mikroRNA Reverse Transcription Kit (ABI, Forest City, CA, USA). Deretter ble PCR-produktene amplifisert fra cDNA-prøver ved hjelp av den TaqMan® mikroRNA Assays sammen med den TaqMan® Universal PCR masterblanding og mengden av PCR-produkt ble overvåket ved bruk av Applied Biosystems 7900 Sequence Detection System. U6 small nuclear RNA ble anvendt som en intern kontroll. Den relative mengde av MIR-132 ble beregnet ved anvendelse av 2 (-Delta Deltac (T)) metoden [19].
Immunohistokjemisk farging
p21, p53, og c-myc ble påvist ved immunhistokjemisk metode. Alle primære antistoffer og mus monoklonale antistoffer ble kjøpt fra Dako (Hamburg. Tyskland). Immunhistokjemisk farging ble utført av styrke merket polymer system (ELPS) -metoden. Etter inkubering over natten ved 4 ° C med anti-p21, p53, og c-myc-antistoff, ble seksjonene behandlet i henhold til standard immunoperoxidase metoder ved hjelp av et streptavidin biotin peroxidise kompleks kit (LSAB + Kit /HRP; Dako). Den peroxidise Reaksjonen ble deretter utviklet med diaminobenzidin (Dako). Negative kontroll seksjonene ble underkastet den samme prosedyre, bortsett fra at det første antistoffet ble erstattet med fosfatbuffersaltløsning (PBS) [20].
Immunohistokjemisk farging anledninger
Alle skivene ble evaluert ved to patologer uten kjennskap til klinisk resultat. Prosentandelen av immunreaktive celler og fargeintensitetene ble evaluert i hver prøve. Prosentandelen av immunreaktive celler ble gradert på en skala fra 0 til 4: ingen farging er scoret som 0, 1-10% av celler farget scoret som en, 11-50% som 2, 51-80% som tre, og 81- 100% for eksempel 4. De fargeintensitetene ble gradert fra 0 til 3: 0 er definert som negativ, en så svak, 2 som moderert, og tre like sterk, respektivt. Rådata ble konvertert til immunhistokjemiske score (IHS) ved å multiplisere mengde og intensitet score. På den endelige analysen, sakene hadde en score på mindre enn 1 ble ansett som negativt, og ≥ 1 ble ansett som positivt [20].
Statistisk analyse Bedrifter Den pasientenes funksjoner og clinicopathological egenskaper ble analysert ved hjelp av to -endepåfestet Students t
-test for kontinuerlig variabel og χ 2 test for kategoriske variable. Samlet overlevelseskurvene ble beregnet ved Kaplan-Meier-metoden, og forskjellene mellom overlevelseskurver ble undersøkt med lang-rank test. De uavhengige prognostiske faktorer ble undersøkt av multivariat overlevelsesanalyse ved hjelp av Cox modell. Den aksepterte nivået av betydning var P
< 0,05. Statistiske analyser og grafikk ble utført ved hjelp av SPSS 13.0 statistikkpakke (SPSS Inc., Chicago, IL)
Resultater
Clinicopathological egenskaper
Det var 62 menn og 17 kvinner. (3,6: 1) med en gjennomsnittlig alder av 58 år. Det var 7 (8,9%) tidlig mage kreft og 72 (91,1%) avansert magekreft. I henhold til histologisk type var godt differensierte tumorer observert hos 3 (3,8%) pasienter, moderat differensiert i 11 (13,9%) pasienter, og dårlig differensiert tumorer i gjenværende 65 (82,3%) pasienter. Av 79 pasienter, 25 (31,6%) hadde svulster som befinner seg i den øvre tredjedel, 15 (19,0%) hadde svulster i den midtre tredjedel, 36 (45,6%) hadde svulster i den nedre tredjedel av magen, og 3 (3,8%) hadde svulster okkupert to tredjedeler eller mer av magen. Lymfeknutemetastase ble observert hos 57 pasienter, metastase rente var 72,2%. Fordelingen av patologisk trinn var som følger: 10 (12,6%) pasienter tilhørte stadium I, 24 (30,4%) II, og 45 (57%) III
ekspresjon og korrelasjon av MIR-132, p21, p53. og c-myc
MIR-132 nivåer i 79 kreft (T) og tilsvarende normale vev (N) ble undersøkt ved QRT-PCR. De fleste tumorvev (57/79, 72%) viste forhøyede nivåer av MIR-132 sammenlignet med tilsvarende normale vev, med en median økning på 2,3 ganger. MIR-132 nivåer i cancervev (gjennomsnitt ± SD, 0,35 ± 0,58) var betydelig høyere enn de i de tilsvarende noncancerous vev (gjennomsnitt ± SD, 0,15 ± 0,35, P
< 0,05). Uttrykkene av p21, p53, og c-myc ble undersøkt ved immunhistokjemisk farging. p21-ekspresjon var positiv i 64,6% av alle gastrisk kreft vev. p21 farging ble observert i kjernen av carcinomceller. p53-ekspresjon var positiv i 74,7% av alle gastrisk kreft vev. p53 farging ble observert i kjernen av carcinomceller. c-myc ekspresjonen var positiv i 44,3% av alle gastrisk kreft vev. c-myc farging ble observert i cytoplasma av carcinomceller. MIR-132 uttrykk var assosiert med p53 og c-myc. Det var ingen sammenheng med p21. I tillegg p53expression var assosiert med c-myc (tabell 1) .table 1 Positive resultater av sammenhenger mellom biologiske markører
Biologiske markører Book Korrelasjonskoeffisienter (r)
P value

miR-132
P53
0.274
0.015
miR-132
c-myc
0.228
0.044
P53
c-myc
0.235
0.038
Klinisk betydning av MIR-132 i magekreft
79 mage kreftpasienter ble delt inn i to grupper, inkludert Mir-21 high-uttrykk gruppe (T /N > 0,5, n = 33) og lav-uttrykk gruppe (T /N < 0,5, n = 46) i henhold til median T /N rasjon av MIR-132 uttrykk. Korrelasjonen mellom MIR-132 uttrykk og patologiske parametre ble analysert. Resultatene viste at pasienter med høy MIR-132 uttrykk hadde hyppigere lymfeknutemetastase (P
= 0,033), mer lymfatiske tumor emboli (P
= 0,007), og mer avansert stadium (P = 0,016
). Men det var ingen signifikante forskjeller om kjønn, alder, histologisk type svulst beliggenhet, tumorstørrelse, nervøs invasjon, og T stadium (tabell 2). I total overlevelse, pasienter med Mir-132 høy uttrykk hatt en vesentlig dårligere prognose enn de med MIR-132 lav uttrykk (P
= 0,000) (figur 1). Univariat analyse av total overlevelse viste at den relative uttrykk for MIR-132, nervøs invasjon, lymfatisk svulst emboli, og patologisk stadium var prognostiske prediktorer. Multivariat overlevelsesanalyse, inklusive alle vesentlige prognostiske faktorer som er nevnt i univariat analyse ble utført for å bestemme de uavhengige prognostiske faktorer for magekreft. Multivariat analyse viste at Mir-132 uttrykk nivå og patologisk stadium var uavhengige prognostiske faktorer (tabell 3) .table 2 Mir-132 uttrykk og clinicopathological faktorer
Variabler Book Høy uttrykk n = 33

lav uttrykk n = 46
P
Kjønn
0,618
Mann fra 25
37
Kvinne
8
9
Age
0,556
< 60
18
22
≥60
15
24
Histologisk gradering
0,412
Dårlig -differentiated
28
36
moderat differensiert
5
7
godt differensiert
0
3
Tumor plassering
0,467
øvre tredje
10
15
Middle tredje
8
7
Nedre tredje
15
21
To tredjedel eller mer
0
3
Tumor størrelse (cm)
0,862
< 5
18
26
≥5
15
20
Nervous invasjon
0,096
Ja
22
22
Ingen
11
24
lymphatic svulst emboli
0,005
Ja
26
22
Nei
7
24
T scenen
0,070
T1, T2
6
17
T3, T4
27
29
lymfeknute metastase
0,033
Ja
28
29
Ingen
5
17
Patologisk scenen
0,016
jeg
2
8
II
6
18
III
25
20
Figur 1 Sammenligning av overlevelse i henhold til uttrykk av MIR-132. Det var signifikante forskjeller mellom MIR-132 høy uttrykk og MIR-132 lav uttrykk (P
= 0,000).
Tabell 3 multivariat analyse av pasienter ved Cox modell
Variabel
χ2

P
vale
RR
95% KI
Mir-132 uttrykk
5,447
0,020
2,414
1,152 til 5,059
Nervøs invasjon
1,918
0,166
1.890
0,768 til 4,655
lymphatic svulst emboli
0,173
0,677
0,838
0,366 til 1,923
Patologisk scenen
8,742
0,003
4,356
1,642 til 11,555
diskusjon
identifisere prognostiske faktorer i magekreft var avgjørende for å forutsi pasientens overlevelse og bestemme optimale terapeutiske strategier . Dybden av invasjonen og lymfeknutemetastaser var de viktigste prognostiske faktorer i magekreft. Som et resultat av variasjonen av prognose innenfor samme patologisk stadium av magekreft, har det vært en rekke forskere for spesifikke biologiske markører for å identifisere pasienter med prognose [21-28]. De biologiske markører som mikroRNA, c-Met, L1CAM, endotelial lipase protein, variable kopi antall mitokondrie DNA (mtDNA), TIMP3, Ht6, og ezrin har blitt studert. Som en ny biomarkør, er potensialet for mirnas i forutsi prognose i økende grad undersøkt. MIR-132 er et sterkt konservert miRNA transkribere fra en intergenisk region på det humane kromosom 17 av transkripsjonsfaktoren cAMP-responselementet bindende protein [29]. De fleste av rapportene bout MIR-132 regulering og biologiske funksjoner dukket opp fra de utførte i nevronale sammenheng studier. I tillegg har MIR-132 også blitt beskrevet i en rekke andre områder, så som inflammasjon, celletransformasjon og tumorgenesen. MIR-132 ble vist å være oppregulert eller nedregulert i ulike kreft hos mennesker [16, 30, 31]. Noen studier viste at MIR-132 kan fremme celleproliferasjon [31]. Men det er fortsatt ingen rapporter om MIR-132 i magekreft.
I denne studien undersøkte vi Mir-132 uttrykk i magekreft og bestemt om det kunne forutsi pasientens utfall. Vi fant at MIR-132 ekspresjon var høyere i cancervev sammenlignet med tilsvarende normale vev. Den eksakte årsaken til MIR-132 høy uttrykk i magekreft er ukjent. Park JK et al. rapportert [31] at B2AR agonist terbutalin øker Mir-132 uttrykk. MIR-132 ble transcriptionally aktivert av CREB i nerveceller [32]. B2AR antagonister inhiberte aktiveringen av CREB [33]. Derfor er det mulig at simulering av B2AR øke MIR-132 uttrykk etter aktivering av CREB.
Resultatene viste at høy MIR-132-ekspresjon i magekreft ble signifikant korrelert med aggressive clinicopathological egenskaper som hyppigere lymfeknutemetastase, mer lymfatisk svulst emboli, og mer avansert stadium. Disse resultatene antydet at oppregulering av MIR-132 spilte en viktig rolle i magekreft progresjon. Interessant, fant vi at Mir-132 uttrykk var assosiert med p53 og c-myc. Noen tidligere studier viste at noen microRNAs kan mediere og regulere tumorundertrykkelse som utøves av p53 eller c-myc [34, 35]. Jiang L et al. [34] fant at has-MIR-125a-3p kan indusere apoptose via p53 veien. Zhang N, et al. [35] fant at MIR-150 kan fremme spredning av lungekreftceller ved å målrette p53. Wang B et al. [36] fant at det var en dobbel negativ feedback loop mellom MIR-122 og c-myc i hepatocellulær kreft. Li X, et al. [37] fant at c-MYC fremmet uttrykk for modne MIR-23a, miR24-2, og miR27a og senere forfremmet brystkreft celle migrasjon og invasjon. Men den eksakte korrelasjon mellom MIR-132 og p53, er c-myc uklart og er ikke avklart i fremtidige studier. Vi undersøkte sammenhengen av MIR-132 uttrykk med prognose for mage kreftpasienter, fant at pasienter med høyt Mir-132 uttrykk hadde dårligere total overlevelse at de med lav Mir-132 uttrykk. Enda viktigere, multivariat analyse viste at høy Mir-132 uttrykk var uavhengig prognostisk indikator. Det var uenighet om MIR-132 ble spilt samme prognostisk verdi i ulike typer svulster. Parker et al. rapportert [38] så høy ekspresjon av MIR-132 var assosiert med dårlig prognose i pasienter med primær glioblastoma multiforme. Imidlertid Yang et al. [12] rapporterte at osteosarkom pasienter med lav Mir-132 uttrykk hadde dårligere generell og sykdomsfri overlevelse. Det var mulig at MIR-132 spilte forskjellige funksjoner i ulike svulster. Wang et al. [39] fant at overekspresjon av MIR-132 trykkes in vitro celle-proliferasjon og in vivo-tumorvekst. Li et al. [13] har vist at overekspresjon av MIR-132 kunne hemme proliferasjonen av brystkreftceller. Omvendt, Park et al. [31] rapporterte at over-uttrykk for MIR-132 økte bukspyttkjertelkreft celleproliferasjon.
Til sammen vår studie indikerte at MIR-132 ble oppregulert i magekreft og kan være en uavhengig molekylær biomarkør for å forutsi prognosen av mage kreft. I mellomtiden, som et resultat av lite utvalg forskning, er en stor sak forskning trengs for å bekrefte den prognostiske verdien av MIR-132 i magekreft.
Erklæringer
Forfattere 'originale legges filer for Images Nedenfor er linkene til forfatternes originale innsendte filer for bilder. 13000_2014_947_MOESM1_ESM.tif Forfatteroriginalfilen for figur 1 Konkurrerende interesser
Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Forfattere. 'Bidrag
utviklet og designet forsøkene: XWL HMY HC YNW. Utførte eksperimenter: XWL. Analysert data: XWL HMY. Bidratt reagenser /materialer verktøy /analyse: HC YNW. Skrev avisen: XWL. Alle forfattere lese og godkjent den endelige manuskriptet.

• Sammenligning av effekt av annen rute for administrasjon av kjemoterapi på operabel, avansert mage cancer
• Blandet adeno (nevro) endokrin kreft som følge av ektopisk mage slimhinnene i øvre thorax esophagus