Ilmaisu ja kliininen merkitys miR-132 mahasyövän patients

Ilmaus ja kliininen merkitys miR-132 mahalaukun syöpäpotilailla
tiivistelmä
tausta ja tavoite
miR-132 on rooli säätelyssä hermosolujen morfologia ja cellular ärtyvyyttä. Tiedetään vain vähän vaikutuksia miR-132 syövässä. Tutkimuksen tavoitteena on arvioida ilmaus miR-132 ja sen kliinistä merkitystä mahasyövän. Tool Menetelmät
syöpäkudoksiin ja vastaavat normaaleissa kudoksissa 79 potilaalla on mahasyöpä tutkittiin ilmentymisen miR-132 käyttämällä kvantitatiivinen PCR ja yhdistyksen välistä miR-132 ekspressiotasot ja kliinis tekijät ja ennusteen analysoitiin.
tulokset
79 kliinisistä näytteistä mahalaukun syövän potilaiden, miR-132 ekspressiotasot syövän kudoksissa olivat huomattavasti korkeammat kuin vastaavat normaalit kudokset (P
= 0,001). Korkeammat ekspressiotasot miR-132 liittyi useammin imusolmuke etäpesäke (P
= 0,033), lisää imunestejärjestelmän kasvain emboli (P
= 0,007), ja pitemmälle (P
= 0,016). Lisäksi ilmaus miR-132 oli itsenäinen ennustetekijä yleisen eloonjäämisen (P
= 0,020).
Päätelmä
miR-132 voisi toimia tehokkaana ennustetekijä mahasyövän potilaille.
Virtual dioja
virtuaalinen dia (t) tämän artikkelin löytyvät täältä: http: //www. diagnosticpathol logia. diagnomx. eu /vs /8168577241196050
avainsanat
Mahalaukun syöpä ennuste biologisia merkkiaineita Johdanto
Vaikka esiintyvyys mahasyövän on merkittävästi vähentynyt useita vuosikymmeniä, se on edelleen neljänneksi yleisin syöpä ja toiseksi yleisin syy syövän kuolema [1, 2]. Usean geenien näyttävät edistää pahanlaatuisten biologista käyttäytymistä mahalaukun syövän [3, 4]. On erittäin tärkeää tunnistaa ennustetekijöiden, jotta voidaan maksimoida terapeuttista vaikutusta ja minimoida haittavaikutuksia syöpäpotilaiden hoidossa.
MikroRNA ovat luokan endogeenisen pieniä ei-koodaavaa RNA: t, jotka toimivat geenin sääntelyviranomaisten säätelemällä lähetti-RNA käännös ja hajoaminen [5]. MikroRNA ratkaiseva rooli säätelyssä normaaliin toimintaan, kuten proliferaatiota, erilaistumista ja apoptoosia. Lisäksi häiriöstä miRNA edistävät syövän synnyn ja syövän etenemistä [6, 7]. Jäsenenä miRNA perhe, miR-132 on tärkeä rooli tulehduksen, angiogeneesi, ja hermoston kehittymistä [8-10]. Viime aikoina jotkut tutkimukset osoittivat, että dysregulaatio miR-132 liittyi erilaisissa ihmisen kasvaimissa, kuten ei-pienisoluinen keuhkosyöpä, osteosarkooma, rintasyöpä, maksasyövän, eturauhassyövän, haimasyövän hoitoon [11-16]. On kuitenkin olemassa mitään raportteja ilmaisun ja kliininen merkitys miR-132 mahasyövän.
Tässä tutkimuksessa MIR-132 ilmentymistä mahasyöpäpotilaista tutkittiin ja yhdistyksen välistä miR-132 ja kliinis parametrit analysoitiin . Lisäksi arvioimme kuvaamaan joitakin proteiineja, jotka liittyvät solusyklin kontrolli (p21, p53), kudoksen proliferaatiota ja erilaistumista (c-myc). p21 ja p53-proteiinit ovat tuotteita kasvaimen synnyssä, jotka aktivoidaan solun uudiskasvun moduloimiseksi kautta valvonta G1 pidätys tarkistuspiste solusyklin [17, 18]. c-myc-proteiini on eräänlainen transkriptiotekijän.
Potilaat ja menetelmät
Ihmisen mahasyövän ja vastaavat normaalit kudokset saatiin 79 potilasta joille tehtiin gastrectomy laitoksella mahasyövän ja pehmytkudossarkoomien, Fudanin yliopiston Shanghai Cancer keskustassa, tammikuu 2007 ja joulukuun 2009 Osittainen gastrektomia tehtiin 36 potilaalla, ja yhteensä gastrektomia suoritettiin muissa 43 potilasta. Vähintään 4 cm resektio marginaalit brutto kasvain oli taattu kaikille potilaille. Kaikkiaan 71 potilasta sai adjuvanttihoitoa. Resektion jälkeen, näytteet jäädytettiin välittömästi nestemäisessä typessä ja säilytettiin sitten -80 ° jääkaapissa. Inclusion kriteerit tässä tutkimuksessa olivat adenokarsinooma ja täydellisiä patologinen data; Hylkäämisperusteet olivat neoadjuvant hoito, vatsakalvon levittämistä, ja kaukainen etäpesäke. Tiedot haettiin operatiivista ja patologinen raportit, ja seuranta-tiedot saatiin puhelimitse avohoidon ja kliininen tietokanta. Kirjallisessa tietoinen suostumus oli saatu kaikista potilaista, ja tämä hyväksyi tutkimuksen eettinen komitea Shanghai Cancer Center Fudanin yliopistossa.
RNA ja kvantitatiivisen tosiaikaisen PCR
kokonais-RNA kudoksesta uutettiin jossa TRIzol reagenssia (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) noudattaen valmistajan ohjeita. Kvantitatiivisen tosiaikaisen PCR: n (qRT-PCR) määritykset suoritettiin havaita endogeenisen ilmentymisen miR-132 mukaisesti Applied Biosystems menetelmällä. Lyhyesti, cDNA käänteiskopioitiin kokonais-RNA näytteistä käyttäen miRNA-specific varsi-silmukka-aluketta Taqman MicroRNA määritykset ja reagensseja TaqMan® MicroRNA Reverse Transcription Kit (ABI, Forest City, CA, USA). Sitten PCR-tuotteet monistettiin cDNA: sta näytteistä käyttäen TaqMan MicroRNA Kokeet yhdessä TaqMan® Universal PCR Master Mix, ja PCR-tuotteen määrä seurattiin käyttämällä Applied Biosystems 7900 Sequence Detection System. Pieni nukleaarinen U6-RNA: ta käytettiin sisäisenä kontrollina. Suhteellinen määrä miR-132 laskettiin käyttämällä 2 (delta deltaC (T)) menetelmällä [19].
Immunohistokemiallinen värjäys
p21, p53 ja c-myc havaittiin immunohistokemiallisella menetelmällä. Kaikki ensisijainen vasta-aineita ja hiiren monoklonaalisia vasta-aineita ostettiin Dako (Hampuri. Saksa). Immunohistokemiallinen värjäys suoritetaan parantaa leimattu polymeeri-järjestelmä (elps) menetelmällä. Sen jälkeen kun oli inkuboitu yön yli 4 ° C: ssa anti-p21, p53 ja c-myc-vasta-ainetta, leikkeet käsiteltiin standardimenetelmien immunoperoksidaasitesti menetelmiä käyttäen streptavidiini biotiini peroxidise monimutkainen kit (LSAB + Kit /HRP; Dako). Peroxidise Sitten reaktio kehitettiin diaminobentsidiinillä (Dako). Negatiivinen kontrolli leikkeitä alistettiin samaan menettelyä paitsi, että ensimmäinen vasta-aine korvattiin fosfaattipuskurilla (PBS) [20].
Immunohistokemiallinen värjäys pisteytys
Kaikki leikkeet arvioitiin kahden patologit ilman tietoa kliinisen tuloksen. Prosenttiosuus immunoreaktiivisten solujen ja värjäytymisvoimakkuuksia arvioitiin kunkin näytteen. Prosenttiosuus immunoreaktiivisten solujen arvostellaan asteikolla 0-4: ei värjäytymistä pisteytetään 0, 1-10% soluista värjättiin pisteytetään 1, 11-50%, kuten 2, 51-80%, kuten 3, ja 81- 100% kun 4. värjäytymisvoimakkuuksia lajiteltiin 0-3: 0 määritellään negatiiviseksi, 1 heikko, 2 kuten valvottu, ja 3 niin vahva, vastaavasti. Raakadata muunnettiin immunohistokemiallinen pisteet (IHS) kertomalla määrän ja intensiteetin tulokset. On loppujen lopuksi tapauksista oli pisteet alle 1 katsottiin negatiivisiksi, ja ≥ 1 pidettiin positiivinen [20].
Tilastollinen analyysi
Potilaiden ominaisuudet ja kliinis ominaisuudet analysoitiin käyttämällä kahta -häntäistä Studentin t
-testiä varten portaattomasti ja χ 2 testi kategorisen muuttujan. Kokonaiselossaoloaika käyrät laskettiin Kaplan-Meier menetelmällä, ja erot eloonjäämiskäyrien tutkittiin pitkän rank-testi. Riippumaton ennustetekijöiden tutkittiin monimuuttuja eloonjääminen analyysi käyttäen Coxin suhteellisten riskien mallia. Hyväksytylle tasolle merkitys oli P
< 0,05. Tilastolliset analyysit ja grafiikkaa suoritettiin käyttäen SPSS 13.0 tilastopaketista (SPSS, Inc., Chicago, IL).
Tulokset
kliinis ominaisuudet
oli 62 urosta ja 17 naarasta (3,6: 1), jonka keskimääräinen ikä 58 vuotta. Oli 7 (8,9%) varhainen syöpien ja 72 (91,1%) eteni syöpien. Mukaan histologinen tyyppi, hyvin erilaistunut kasvainten havaittiin 3 (3,8%) potilaista, kohtalaisen erilaistuvat 11 (13,9%) potilaista, ja huonosti eriytetty kasvaimia loput 65 (82,3%) potilaista. 79 potilasta, 25 (31,6%) oli kasvaimia yläkulmassa kolmas, 15 (19,0%) oli kasvaimia keskimmäiseen kolmannekseen, 36 (45,6%) oli kasvaimia alin kolmannes mahan, ja 3 (3,8%) oli kasvaimia miehitetty kaksi kolmasosaa tai enemmän vatsaan. Imusolmuke etäpesäke havaittiin 57 potilaalla, etäpesäke oli 72,2%. Jakauma patologinen vaiheessa oli seuraava: 10 (12,6%) potilaista kuului vaiheessa I, 24 (30,4%) II, ja 45 (57%) III.
Ilmaisun ja korrelaatio miR-132, p21, p53 ja c-myc
miR-132 tasoilla 79 syöpä (T) ja vastaavat normaalien kudosten (N) tutkittiin qRT-PCR: llä. Useimmat kasvaimen kudokset (57/79, 72%) osoitti kohonneita miR-132 verrattuna vastaavaan normaaleissa kudoksissa, mediaani kasvoi 2,3-kertaiseksi. miR-132 pitoisuuksia syöpäkudokset (keskiarvo ± SD, 0,35 ± 0,58) olivat merkittävästi korkeammat kuin vastaavien noncancerous kudoksia (keskiarvo ± SD, 0,15 ± 0,35, P
< 0,05). Ilmaisut p21, p53 ja c-myc tutkittiin immunohistokemiallisella värjäyksellä. p21 ilmentyminen oli positiivinen 64,6% kaikista mahasyövän kudoksiin. p21 värjäytyminen havaittiin tumassa karsinoomasoluja. p53 ilmentyminen oli positiivinen 74,7% kaikista mahasyövän kudoksiin. p53 värjäytyminen havaittiin tumassa karsinoomasoluja. c-myc ilmentyminen oli positiivinen 44,3% kaikista mahasyövän kudoksiin. c-myc-värjäys havaittiin sytoplasmassa karsinoomasoluja. miR-132 ilmentyminen liittyi p53 ja c-myc. Ei ollut mitään korrelaatiota p21. Lisäksi, p53expression liittyi c-myc (taulukko 1) .table 1 Positiivisia tuloksia korrelaatioiden joukosta biologisten merkkiaineiden
biologisia merkkiaineita
korrelaatiokertoimet (r)
P value

miR-132
P53
0.274
0.015
miR-132
c-myc
0.228
0.044
P53
c-myc
0.235
0.038
Kliinistä merkitystä miR-132 mahasyövän
79 mahasyöpäpotilaista jaettiin kahteen ryhmään myös miR-21 korkean ilmentymisen ryhmässä (T /N > 0,5, n = 33) ja alhaisen ilmentymisen ryhmässä (T /N < 0,5, n = 46) mukaan mediaani T /N suhde on miR-132 ilme. Korrelaatio miR-132 ilmaisun ja patologinen parametrit analysoitiin. Tulokset osoittivat, että potilailla, joilla on korkea miR-132 ilmaisu oli useammin imusolmuke etäpesäke (P
= 0,033), lisää imunestejärjestelmän kasvain emboli (P
= 0,007), ja pitemmälle (P
= 0,016 ). Kuitenkin, ei ollut merkittäviä eroja sukupuolten, ikä, histologinen tyyppi, kasvain sijainti, kasvaimen koon, hermostunut invaasio, ja T vaihe (taulukko 2). Vuonna kokonaiselinaika, potilaiden kanssa miR-132 korkea ilmentyminen oli merkitsevästi huonompi ennuste kuin ne, joilla miR-132 heikkoa ilmentymistä (P
= 0,000) (kuvio 1). Univariate kokonaiselinajan analyysiin osoitti, että suhteellinen ilmentyminen miR-132, hermostunut invaasio, imusuonten kasvain emboli, ja patologinen vaiheessa olivat ennustetekijöiden ennustajia. Monimuuttuja selviytyminen analyysi, mukaan lukien kaikki merkittävät ennustetekijöiden mainittujen univariate analyysi, suoritettiin määrittämään itsenäinen ennustetekijöiksi mahasyövän. Monimuuttuja-analyysi osoitti, että miR-132 ekspressiotaso ja patologinen vaiheessa olivat riippumattomia ennustetekijöitä (taulukko 3) .table 2 miR-132 ilmaisun ja kliinis tekijät
muuttujat
korkea ilmaisun n = 33

Low ilme n = 46
P
Sukupuoli
0,618
Mies
25
37
Female
8
9
Ikä
0,556
< 60
18
22
≥60
15
24
Histologinen luokittelu
0,412
Huonosti -differentiated
28
36
Kohtalaisen erilaistunut
5
7
Hyvin eriytetty
0
3
Kasvain sijainti
0,467
Ylä kolmas
10
15
Lähi kolmas
8
7
Ala kolmas
15
21
Kaksi kolmasosa tai enemmän
0
3
Tuumorikoko (cm)
0,862
< 5
18
26
≥5
15
20
Nervous invaasio
0,096
Kyllä
22
22
Ei
11
24
Lymphatic kasvain emboli
0,005
Kyllä
26
22
Ei
7
24
T vaiheessa
0,070
T1, T2
6
17
T3, T4
27
29
Imusolmuke etäpesäke
0,033
Kyllä
28
29
Ei
5
17
patologinen vaiheessa
0,016
I
2
8
II
6
18
III
25
20
Kuvio 1 vertailu selviytymisen mukaan ilmaus miR-132. Oli merkittäviä eroja miR-132 korkea ilmaisun ja miR-132 heikkoa ilmentymistä (P
= 0,000).
Taulukko 3 Monimuuttuja-analyysi potilaiden Cox mallin
Variable
χ2

P
vale
RR
95% CI
miR-132 ilmaisu
5.447
0,020
2,414
1,152-5,059
Nervous invaasio
1,918
0,166
1.890
0,768-4,655
Lymphatic kasvain emboli
0,173
0,677
0,838
0,366-1,923
patologinen vaiheessa
8,742
0,003
4,356
+1,642-11,555
keskustelu
ennustavien tekijöiden identifiointia mahasyövän oli olennaista ennustamiseen potilaiden eloonjäämisen ja määriteltäessä optimaalista hoitostrategioita . Syvyys invaasion ja imusolmuke etäpesäke olivat tärkeimpiä ennustettaessa mahasyövässä. Seurauksena vaihtelevuuden ennusteen sisällä samassa patologinen vaiheessa mahasyövän, on ollut paljon tutkimuksia erityisiä biologisia merkkiaineita tunnistamaan potilaita, joilla ennusteeseen [21-28]. Biologinen markkereita, kuten microRNA, c-Met, L1CAM, endoteelin lipaasiproteiinin, vaihteleva kopioluku mitokondriaalisen DNA (mtDNA), TIMP-3, hK6, ja Erzin on tutkittu paljon. Uutena biomarkkereiden, mahdollisuudet miRNA ennustamisessa ennuste yhä tutkitaan. miR-132 on erittäin konservoitunut miRNA puhtaaksi peräisin geenien välinen alue ihmisen kromosomissa 17 transkriptiotekijä cAMP-vaste-elementtiin sitoutuva proteiini [29]. Useimmat kertomukset bout miR-132 sääntely ja biologisia toimintoja ilmi tutkimuksista suoritetaan hermosolujen yhteydessä. Lisäksi, miR-132 on myös kuvattu useita muita kenttiä, kuten tulehdus, solun transformaatio ja tuumorigeneesiä. miR-132 osoitettiin olevan säädelty tai alassäädetty eri ihmisen syövissä [16, 30, 31]. Joidenkin tutkimusten mukaan miR-132 voisi edistää soluproliferaatiota [31]. On kuitenkin olemassa vielä ole raportteja miR-132 mahasyövän.
Tässä tutkimuksessa selvitettiin miR-132 ilmentymistä mahasyövän ja määrittää, jos se voisi ennustaa hoitotuloksia. Huomasimme, että miR-132 ilmentyminen oli korkeampi syöpäkudokset verrattuna vastaaviin normaaleihin kudoksiin. Tarkka syy miR-132 voimakasta ilmentymistä mahalaukun syöpää, on tuntematon. Park JK et al. raportoitu [31], että B2AR agonisti terbutaliini kasvattaa miR-132 ilme. miR-132 oli transkriptionaalisesti aktivoitiin CREB hermosoluissa [32]. B2AR antagonistit inhiboivat aktivointi CREB [33]. Näin ollen, on mahdollista, että simulointi B2AR lisätä miR-132 ilmentymisen aktivoinnin jälkeen CREB.
Tulokset osoittivat, että korkean miR-132 ilmentyminen mahasyövän korreloi merkitsevästi aggressiivinen kliinis ominaisuudet, kuten useammin imusolmuke etäpesäke, lisää imusuonten kasvain emboli, ja pitemmälle. Nämä tulokset viittaavat siihen, ylössäätely miR-132 oli tärkeä rooli mahalaukun syövän etenemisessä. Kiinnostavaa kyllä, havaitsimme, että miR-132-ekspressio liittyy p53 ja c-myc. Jotkin aikaisemmat tutkimukset osoittivat, että jotkut MikroRNA voisi välittää ja säädellä tuumorisuppressiogeeneksi kohdistama p53 tai c-myc [34, 35]. Jiang L et al. [34] havaitsivat, että on-miR-125a-3p voisi apoptoosin kautta p53-reitin. Zhang N, et al. [35] mukaan miR-150 voisi edistää leviämisen keuhkosyöpään solujen kohdistamalla p53. Wang B et al. [36] todettiin, että oli kaksinkertainen negatiivinen kierre välillä miR-122 ja c-myc hepatosellulaaristen syöpä. Li X, et ai. [37] havaitsivat, että c-MYC edisti ilmaus kypsän miR-23a, miR24-2 ja miR27a sittemmin edistänyt rintasyöpä solujen vaeltamiseen ja invaasiota. Kuitenkin tarkka korrelaatio miR-132 ja p53, c-myc on epäselvä ja vielä selvittämättä tulevissa tutkimuksissa. Tutkimme korrelaatio miR-132 lausekkeen ennusteeseen mahalaukun syövän potilaiden, havaittiin, että potilaat, joilla on korkea miR-132 ilmaisu oli huonompi kokonaiselossaoloaikaa että heikosti miR-132 ilme. Vielä tärkeämpää on, monimuuttuja-analyysi paljasti, että korkean miR-132 ilmentyminen oli itsenäinen prognostinen indikaattori. Se oli kiista siitä miR-132 pelataan sama ennusteen arvioinnissa erilaisissa kasvaimissa. Parker et ai. raportoitu [38], että korkea ilmentyminen miR-132 oli yhteydessä huonoon ennusteeseen primaarista glioblastoma multiforme. Kuitenkin, Yang et ai. [12] kertoi, että osteosarkoomaa potilaalla on matala miR-132 ilmaisu oli huonompi yleistä ja taudista vapaan eloonjäämisen. Se oli mahdollista, että miR-132 ollut eri toimintoja eri kasvaimissa. Wang et ai. [39] todettiin, että yli-ilmentyminen miR-132 tukahdutetaan in vitro solujen lisääntymisen ja in vivo kasvaimen kasvua. Li et ai. [13] osoittivat, että yli-ilmentyminen miR-132 voisi inhiboida rintasyöpäsolu-. Toisaalta, Park et ai. [31] on raportoitu, että yli-ilmentyminen miR-132 lisäsi haimasyövän soluproliferaation.
Yhdessä Tutkimuksemme osoittivat, että miR-132 on yliaktiivista mahasyövän ja voi olla itsenäinen molekyyli biomarkkerina ennustamiseksi ennustetta mahalaukun syöpä. Samaan aikaan, seurauksena pieni näyte tutkimus, suuri tapaus tutkimusta tarvitaan vahvistamaan ennusteen arvioinnissa Mir-132 mahasyövän.
Julistukset
Kirjoittajien alkuperäinen toimitti asiakirjat kuville
Alla linkit kirjoittajien "alkuperäiset toimitti asiakirjat kuville. 13000_2014_947_MOESM1_ESM.tif Kirjoittajien alkuperäinen tiedosto kuvio 1 Kilpailevat edut
Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.
Tekijät osuudet
suunniteltu ja kokeet: XWL HMY HC YNW. Suoritti kokeita: XWL. Analysoi tiedot: XWL HMY. Contributed reagenssit /materiaalit /analyysityökaluja: HC YNW. Kirjoitti paperille: XWL. Kaikki kirjoittajat luettu ja hyväksytty lopullinen käsikirjoitus.

• Vertailu tehoa eri antoreitin kemoterapia on leikkaushoitoon, kehittynyt mahasyöpä
• Mixed adeno- (neuro) hormonitoimintaa syöpä johtuvat kohdunulkoinen mahalaukun limakalvo ylemmän rintakehä ruokatorvi