L'expression et la signification clinique de miR-132 dans le cancer gastrique patients

L'expression clinique et signification de miR-132 chez les patients atteints de cancer gastrique
Résumé de l'arrière-plan et
objectif miR-132 joue un rôle dans la régulation de la morphologie neuronale et excitabilité cellulaire. On sait peu sur les effets de miR-132 dans le cancer. Le but de cette étude est d'évaluer l'expression de miR-132 et sa signification clinique dans le cancer gastrique.
Méthodes
Les tissus cancéreux et les tissus normaux correspondants à partir de 79 patients atteints de cancer gastrique ont été examinés pour l'expression de miR-132 en utilisant la PCR quantitative et l'association entre les niveaux d'expression de miR-132 et les facteurs clinicopathologiques et le pronostic a été analysé.: Résultats
dans 79 échantillons cliniques de patients atteints de cancer gastrique, miR-132 niveaux d'expression dans les tissus du cancer étaient significativement plus élevés que ceux les tissus normaux correspondants (P
= 0,001). les niveaux d'expression plus élevés de miR-132 ont été associés à plus fréquentes des métastases des ganglions lymphatiques (P
= 0,033), les emboles de tumeur plus lymphatique (P
= 0,007) et le stade plus avancé (P
= 0,016). En outre, l'expression de miR-132 était un facteur pronostique indépendant pour la survie globale (P = 0,020
).
Conclusion
miR-132 pourrait servir comme un facteur pronostique efficace pour les patients atteints de cancer gastrique.
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Mots-clés
gastrique cancer Pronostic marqueurs biologiques Présentation
Bien que l'incidence du cancer gastrique a été considérablement diminué depuis plusieurs décennies, il est toujours le quatrième cancer le plus fréquent et la deuxième cause la plus fréquente de décès par cancer [1, 2]. Un multiple de gènes semblent contribuer au comportement biologique maligne de cancer gastrique [3, 4]. Il est très important d'identifier les facteurs pronostiques afin de maximiser l'effet thérapeutique et réduire au minimum les effets indésirables dans le traitement des patients atteints de cancer.
MicroARN sont une classe de endogènes petits ARN non codantes qui fonctionnent comme des régulateurs de gènes en régulant l'ARN messager la traduction et la dégradation [5]. Les microARN jouent un rôle crucial dans la régulation des fonctions normales telles que la prolifération, la différenciation et l'apoptose. En outre, la dysrégulation des miARN contribuer à la cancérogenèse et la progression du cancer [6, 7]. En tant que membre de la famille miARN, miR-132 joue un rôle important dans l'inflammation, l'angiogenèse et le développement neural [8-10]. Récemment, des études ont montré que la dysrégulation de miR-132 est liée à une variété de tumeurs humaines, telles que le cancer bronchique non à petites cellules, un ostéosarcome, un cancer du sein, le carcinome hépatocellulaire, le cancer de la prostate et le cancer du pancréas [11-16]. Cependant, il n'y a pas de rapports sur l'expression et la signification clinique de miR-132 dans le cancer gastrique.
Dans cette étude, l'expression de miR-132 chez les patients atteints de cancer gastrique a été examiné et l'association entre miR-132 et les paramètres clinicopathologiques a été analysée . En outre, nous avons évalué l'expression de certaines protéines impliquées dans la régulation du cycle cellulaire (p21, p53), la prolifération et la différenciation des tissus (c-myc). protéines p21 et p53 sont des produits de gènes suppresseurs de tumeur, qui sont activés par la modulation de la prolifération cellulaire par l'intermédiaire d'un contrôle du point de contrôle G1 arrêt du cycle cellulaire [17, 18]. la protéine c-myc est un type de facteur de transcription.
Patients et méthodes
cancer gastrique humain et ont été obtenus à partir de 79 patients ayant subi une gastrectomie au Département de cancer gastrique et sarcomes des tissus mous, Fudan University Cancer Shanghai tissus normaux correspondants Centre, entre Janvier 2007 et Décembre 2009. gastrectomie partielle a été réalisée chez 36 patients, et gastrectomie totale a été réalisée dans les 43 autres patients. Au moins 4 cm marges de la tumeur brute de résection ont été garantis pour tous les patients. Un total de 71 patients ont reçu une chimiothérapie adjuvante. Après résection, les échantillons ont été immédiatement congelés dans de l'azote liquide, puis stockés à -80 ° réfrigérateur. Les critères d'inclusion pour cette étude étaient adénocarcinome et des données pathologiques complètes; Les critères d'exclusion étaient traitement néoadjuvant, la diffusion péritonéale et des métastases à distance. Les données ont été extraites de leurs rapports opératoires et pathologiques, et les données de suivi ont été obtenus par ambulatoire de téléphone et base de données cliniques. Le consentement éclairé a été obtenu à partir de tous les patients, et cette étude a été approuvée par le Comité d'éthique du Cancer Center de l'Université Fudan de Shanghai. Extraction
ARN et quantitative PCR en temps réel
L'ARN total du tissu a été extrait avec le réactif Trizol (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) en suivant les instructions du fabricant. PCR en temps réel (qRT-PCR) quantitative ont été effectuées pour détecter l'expression endogène de miR-132 selon la méthode de Applied Biosystems. En bref, l'ADNc a été une transcription inverse à partir d'échantillons d'ARN totaux en utilisant une tige-boucle amorce spécifique miRNA des Taqman microARN dosages et réactifs du kit TaqMan microARN Reverse Transcription (ABI, Forest City, CA, USA). Ensuite, les produits de PCR ont été amplifiés à partir d'échantillons d'ADNc en utilisant les dosages TaqMan microARN avec le TaqMan Universal PCR Master Mix et la quantité de produit de PCR ont été surveillés à l'aide d'Applied Biosystems 7900 Sequence Detection System. U6 petit ARN nucléaire a été utilisé comme un contrôle interne. La quantité relative de miR-132 a été calculé en utilisant la méthode 2 (DeltaC -Delta (T)) [19].
Coloration immunohistochimique
p21, p53 et c-myc ont été détectés par une méthode immunohistochimique. Tous les anticorps primaires et les anticorps monoclonaux de souris ont été achetés auprès de Dako (Hambourg. Allemagne). La coloration immunohistochimique a été effectuée par la méthode d'améliorer le système de polymère marqué (ELPS). Après incubation pendant une nuit à 4 ° C avec des anticorps anti-p21, p53, et l'anticorps c-myc, les sections ont été traitées selon des méthodes standard en utilisant une immunoperoxydase biotine streptavidine peroxydase Kit complexe (LSAB + Kit /HRP; Dako). La réaction de peroxydase a ensuite été développée avec de la diaminobenzidine (Dako). les sections de contrôle négatif ont été soumis à la même procédure, sauf que le premier anticorps a été remplacé par une solution saline de tampon phosphate (PBS) [20].
coloration immunohistochimique le ballon
Toutes les coupes ont été évaluées par deux pathologistes sans connaissance du résultat clinique. Le pourcentage de cellules et l'intensité de coloration immunoréactifs ont été évaluées dans chaque échantillon. Le pourcentage de cellules immunoréactives a été notée sur une échelle de 0 à 4: aucune coloration est notée 0, 1 à 10% des cellules colorées marqué par 1, 11 à 50% en 2, 51 à 80% en 3 et 81- 100% par 4. Les intensités de coloration ont été notées de 0 à 3: 0 est définie comme étant négative, 1 comme faible, modéré en 2 et 3 en tant que solide, respectivement. Les données brutes ont été converties au score immunohistochimique (IHS) en multipliant la quantité et l'intensité des scores. Sur l'analyse finale, les cas avaient un score inférieur à 1 ont été considérés comme négatifs, et ≥ 1 a été considéré comme [20] L'analyse statistique.
Positif
les caractéristiques des patients et les caractéristiques clinico ont été analysées en utilisant les deux t de Student à queue
-test pour la variable continue et χ 2 test variable catégorique. courbes de survie globale ont été calculées par la méthode de Kaplan-Meier, et les différences entre les courbes de survie ont été examinés avec le test à long rang. Les facteurs pronostiques indépendants ont été examinés par l'analyse de survie multivariée utilisant Cox modèle des risques proportionnels. Le niveau accepté d'importance était P
< 0,05. Les analyses statistiques et graphiques ont été effectuées en utilisant le SPSS 13.0 logiciel statistique (SPSS, Inc., Chicago, IL)
caractéristiques clinicopathologiques
Résultats
Il y avait 62 hommes et 17 femmes. (3,6: 1) avec une moyenne âge de 58 ans. Il y avait 7 (8,9%) des cancers gastriques précoces et 72 (91,1%) a avancé des cancers gastriques. Selon le type histologique, les tumeurs bien différenciées ont été observées chez 3 (3,8%) patients, modérément différencié en 11 (13,9%) patients, et les tumeurs mal différenciées dans 65 (82,3%) patients restants. 79 patients, 25 (31,6%), les tumeurs situées dans le tiers supérieur, 15 (19,0%) avaient des tumeurs dans le tiers médian, 36 (45,6%) avaient des tumeurs dans le tiers inférieur de l'estomac et 3 (3,8%) les tumeurs avaient occupé les deux tiers ou plus de l'estomac. Métastases ganglionnaires a été observée chez 57 patients, le taux de métastases est de 72,2%. La distribution de stade pathologique est la suivante: 10 (12,6%) patients appartenaient au stade I, 24 (30,4%) II et 45 (57%) III
l'expression et la corrélation de miR-132, p21, p53. et c-myc
miR-132 dans les niveaux 79 cancéreux (T) et les tissus normaux correspondants (N) ont été examinés par qRT-PCR. La plupart des tissus tumoraux (57/79, 72%) ont montré des niveaux élevés de miR-132 par rapport aux tissus normaux correspondants, avec une augmentation médiane de 2,3 fois. miR-132 niveaux dans les tissus cancéreux (moyenne ± SD, 0,35 ± 0,58) étaient significativement plus élevés que ceux dans les tissus non cancéreux correspondants (moyenne ± écart type, 0,15 ± 0,35, P
< 0,05). Les expressions de p21, p53 et c-myc ont été examinés par la coloration immunohistochimique. l'expression de p21 a été positive dans 64,6% de tous les tissus de cancer gastrique. p21 coloration a été observée dans le noyau des cellules de carcinome. l'expression de p53 était positif dans 74,7% de tous les tissus du cancer de l'estomac. p53 coloration a été observée dans le noyau des cellules de carcinome. c-myc expression a été positive dans 44,3% de tous les tissus de cancer gastrique. c-myc, la coloration a été observée dans le cytoplasme des cellules de carcinome. l'expression de miR-132 était associée à p53 et c-myc. Il n'y avait aucune corrélation avec la p21. En outre, p53expression a été associé à c-myc (Tableau 1) .Table 1 résultats positifs de corrélations entre les marqueurs biologiques
marqueurs biologiques

coefficients de corrélation (r)
P value

miR-132
P53
0.274
0.015
miR-132
c-myc
0.228
0.044
P53
c-myc
0.235
0.038
Signification clinique de miR-132 dans le cancer gastrique
79 patients atteints de cancer gastrique ont été divisés en deux groupes, dont miR-21 groupe de haute expression (T /N > 0,5, n = 33) et groupe à faible expression (T /N < 0,5, n = 46) selon la médiane T /N ration de miR-132 d'expression. La corrélation entre l'expression de miR-132 et les paramètres pathologiques a été analysé. Les résultats ont montré que les patients ayant une miR-132 expression avaient plus fréquentes métastases des ganglions lymphatiques (P = 0,033
), embolies plus lymphatique de la tumeur (P
= 0,007), et plus avancé étape (P = 0,016
). Cependant, il n'y avait pas de différences significatives sur le sexe, l'âge, le type histologique, la localisation de la tumeur, la taille de la tumeur, l'invasion nerveux, et le stade T (tableau 2). Dans la survie globale, les patients avec la forte expression de miR-132 avaient un pronostic nettement plus pauvres que ceux avec miR-132 faible expression (P
= 0,000) (Figure 1). L'analyse univariée de la survie globale a montré que l'expression relative de miR-132, invasion nerveux, emboles de tumeur lymphatique et le stade pathologique étaient des prédicteurs pronostiques. analyse de survie multivariée, y compris tous les facteurs pronostiques significatifs mentionnés dans l'analyse univariée, a été réalisée pour déterminer les facteurs pronostiques indépendants pour le cancer gastrique. L'analyse multivariée a montré que le niveau d'expression de miR-132 et le stade pathologique étaient des facteurs indépendants de pronostic (Tableau 3) .Table 2 miR-132 Variables d'expression et clinico facteurs
haute expression n = 33

faible expression n = 46
P
Sexe
0,618
Homme
25
37
Femme
8
9
Âge
0,556
< 60
18
22
≥60
15
24
classement histologiques
0,412
mal -differentiated
28
36
5
7
bien différencié Modérément différencié 0 3
localisation de la tumeur
0,467
Upper troisième
10
15
troisième
Moyen 8
7
tiers inférieur
15
21
Deux-tiers ou plus
0
3
taille de la tumeur (cm)
0,862
< 5
18
26 invasion
≥5
15
20
nerveux
0,096
Oui
22
22
Pas
11
24
emboles de tumeur lymphatique
0,005
Oui
26
22
Non
7
24
stade T
0,070
T1, T2
6
17
T3, noeud 27
29
de lymphe
T4 métastase
0,033
Oui
28
29
Non
5
17
stade histopathologique
0,016
I 2
8
II
6
18
III
25
20
Figure 1 Comparaison de la survie selon l'expression de miR-132. Il y avait des différences significatives entre les miR-132 haute expression et miR-132 faible expression (P
= 0,000).
Tableau 3 L'analyse multivariée des patients par modèle de Cox
variable
χ2

P
vale
RR
IC à 95%
miR-132 expression
5.447
0,020
2.414
1,152 à 5,059 invasion
nerveux
1.918
0,166
1.890
0,768 à 4,655
emboles de tumeur lymphatique
0,173
0,677
0,838
0,366 à 1,923
stade histopathologique
8,742
0,003
4.356
1,642 à 11,555 de la discussion
L'identification des facteurs pronostiques dans le cancer gastrique était essentiel pour prédire la survie des patients et déterminer des stratégies thérapeutiques optimales . La profondeur de l'invasion et les métastases ganglionnaires étaient des facteurs pronostiques les plus importants dans le cancer gastrique. En raison de la variabilité du pronostic au sein même stade pathologique du cancer gastrique, il y a eu beaucoup de recherches pour les marqueurs biologiques spécifiques pour identifier les patients avec le pronostic [21-28]. Les marqueurs biologiques tels que les micro-ARN, c-Met, L1CAM, protéine lipase endothéliale, la variable du nombre de copies de l'ADN mitochondrial (ADNmt), TIMP3, hK6 et Ezrine ont été étudiées en profondeur. En tant que nouveau biomarqueur, le potentiel de miARN pour prédire le pronostic est de plus en plus étudié. miR-132 est un miARN hautement conservé transcrivent à partir d'une région intergénique sur le chromosome humain 17 par la protéine de liaison d'élément de réponse à l'AMPc facteur de transcription [29]. La plupart des rapports Bout réglementation miR-132 et les fonctions biologiques émergé à partir des études réalisées dans le contexte neuronal. En outre, miR-132 a également été décrite dans un certain nombre d'autres domaines, tels que l'inflammation, de transformation cellulaire et la tumorigenèse. miR-132 a été montré pour être régulés à la hausse ou à la baisse réglementée dans différents cancers humains [16, 30, 31]. Certaines études ont montré que miR-132 pourrait favoriser la prolifération cellulaire [31]. Cependant, il n'y a toujours pas de rapports sur miR-132 dans le cancer gastrique.
Dans cette étude, nous avons étudié miR-132 expression dans le cancer gastrique et déterminé si elle pouvait prédire les résultats des patients. Nous avons trouvé que l'expression de miR-132 était plus élevée dans les tissus cancéreux par rapport aux tissus normaux correspondants. La cause exacte de l'expression élevée miR-132 dans le cancer gastrique est inconnue. Parc JK et al. rapportés [31] que la terbutaline B2AR agoniste augmente l'expression de miR-132. miR-132 est transcriptionnellement activé par CREB dans les neurones [32]. antagonistes B2AR activation de CREB [33] inhibées. Par conséquent, il est possible que la simulation de B2AR augmenter l'expression de miR-132 après l'activation de CREB.
Les résultats ont montré que la haute miR-132 l'expression dans le cancer gastrique était significativement corrélée avec les caractéristiques dynamiques clinicopathological telles que plus fréquentes des métastases des ganglions lymphatiques, et plus emboles de tumeur lymphatique et stade plus avancé. Ces résultats suggèrent que la régulation positive de miR-132 a joué un rôle important dans la progression du cancer de l'estomac. Chose intéressante, on a trouvé que l'expression de miR-132 était associée à p53 et c-myc. Certaines études antérieures ont montré que certains microARN pourraient servir de médiateur et de réglementer la suppression tumorale exercée par p53 ou c-myc [34, 35]. Jiang L et al. [34] a découvert que miR-125a-3p pourrait induire l'apoptose par l'intermédiaire de la voie p53. Zhang N, et al. [35] ont montré que miR-150 peut favoriser la prolifération de cellules de cancer du poumon en ciblant p53. Wang B et al. [36] ont montré qu'il y avait une double boucle négative de rétroaction entre miR-122 et c-myc dans le cancer hépatocellulaire. X Li et al. [37] ont trouvé que c-MYC promu l'expression de maturité miR-23a, miR24-2 et miR27a et ensuite promu la migration des cellules de carcinome mammaire et de l'invasion. Cependant, la corrélation exacte entre miR-132 et p53, c-myc est pas claire et reste à élucider dans les études futures. Nous avons étudié la corrélation de l'expression de miR-132 avec le pronostic des patients atteints de cancer de l'estomac, a constaté que les patients ayant une miR-132 expression avaient survie globale moins bonne que ceux à faible miR-132 expression. Plus important encore, l'analyse multivariée a révélé que la haute miR-132 expression était indicateur pronostique indépendant. Il avait une controverse si miR-132 a joué même valeur pronostique dans différents types de tumeurs. Parker et al. rapportés [38] que la haute expression de miR-132 a été associée à un mauvais pronostic chez les patients atteints d'un glioblastome multiforme primaire. Cependant, Yang et al. [12] ont rapporté que les patients d'ostéosarcome avec une faible expression de miR-132 avaient la survie globale et sans maladie plus pauvres. Il était possible que miR-132 a joué différentes fonctions dans différentes tumeurs. Wang et al. [39] ont montré que la surexpression de miR-132 suppression de la prolifération cellulaire in vitro et la croissance tumorale in vivo. Li et al. [13] ont montré que la surexpression de miR-132 peut inhiber la prolifération des cellules du cancer du sein. A l'inverse, Park et al. [31] ont rapporté que la surexpression de miR-132 a augmenté la prolifération des cellules du cancer du pancréas.
Pris ensemble, notre étude a montré que miR-132 a été régulée à la hausse dans le cancer gastrique et peut-être un biomarqueur moléculaire indépendante pour prédire le pronostic de l'estomac cancer. «Original soumis Déclarations
Auteurs d'Entre-temps, à la suite de la recherche petite de l'échantillon, une grande recherche de cas est nécessaire pour confirmer la valeur pronostique de miR-132 dans le cancer gastrique. Fichiers pour les images
Voici les liens aux fichiers originaux présentés par les auteurs pour les images. 13000_2014_947_MOESM1_ESM.tif Auteurs fichier d'origine pour la figure 1 Intérêts concurrents
Les auteurs ont déclaré aucun conflit d'intérêts existent
auteurs. De Conçu pour les contributions et a conçu les expériences: XWL HMY HC YNW. Joué les expériences: XWL. Analyser les données: XWL HMY. Apportés réactifs /matériaux /outils d'analyse: HC YNW. A écrit le papier: XWL. Tous les auteurs ont lu et approuvé le manuscrit final.

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