Выражение и клиническое значение MIR-132 при раке желудка patients

Экспрессия и клиническая значимость MIR-132 в больных раком желудка
Аннотация
Предыстория и цели
микроРНК-132 играет роль в регуляции нейрональной морфологии и клеточная возбудимость. Мало что известно о влиянии микроРНК-132 в раке. Целью данного исследования является оценка экспрессии микроРНК-132 и его клиническое значение при раке желудка.
Методы
раковой ткани и соответствующие нормальные ткани от 79 пациентов с раком желудка были исследованы на экспрессию микроРНК-132 анализировали с помощью количественной ПЦР и связь между уровнями экспрессии микроРНК-132 и клинико-патологическими факторами и прогнозом.

Результаты в 79 клинических образцах больных раком желудка, микроРНК-132 уровни экспрессии в раковых тканях были значительно выше, чем в соответствующие нормальные ткани (P = 0,001
). Более высокие уровни экспрессии микроРНК-132 были связаны с более частыми метастаза лимфатических узлов (P
= 0,033), более лимфатической эмболии опухоли (P = 0,007
), и более продвинутой стадии (P = 0,016
). Кроме того, экспрессия микроРНК-132 был независимым прогностическим фактором для общей выживаемости (P = 0,020
).
Вывод изображения микроРНК-132 может служить эффективным прогностическим фактором для больных раком желудка.
Виртуальный слайды
виртуальный слайд (ы) для этой статьи можно найти здесь: HTTP:... //WWW diagnosticpathol логия diagnomx ЕЭ /VS /8168577241196050
Ключевые слова
желудочном рак Прогноз Биологические маркеры Введение
Хотя заболеваемость раком желудка была существенно снижается в течение нескольких десятилетий, она до сих пор является четвертым наиболее распространенным видом рака и второй наиболее частой причиной смерти от рака [1, 2]. Многократная генов, кажется, способствуют злокачественному биологического поведения рака желудка [3, 4]. Очень важно определить прогностические факторы для того, чтобы максимизировать терапевтический эффект и свести к минимуму отрицательные последствия в лечении онкологических больных.
MicroRNAs представляют собой класс эндогенных малых некодирующих РНК, которые функционируют в качестве регуляторов генов путем регулирования матричную РНК перевод и деградация [5]. MicroRNAs играют решающую роль в регуляции нормальных функций, таких как пролиферации, дифференцировки и апоптоза. Кроме того, дерегуляция микроРНК внести свой вклад в канцерогенеза и прогрессии рака [6, 7]. В качестве члена семьи микроРНК, микроРНК-132 играет важную роль в развитии воспаления, ангиогенеза и развития нервной системы [8-10]. В последнее время некоторые исследования показали, что дерегуляция MIR-132 было связано с целым рядом человеческих опухолей, таких как немелкоклеточный рак легкого, остеосаркома, рак молочной железы, гепатоцеллюлярной карциномы, рака простаты и рака поджелудочной железы [11-16]. Тем не менее, нет никаких сообщений о выражении и клинической значимости MIR-132 при раке желудка.
В этом исследовании экспрессия микроРНК-132 в больных раком желудка исследовали и анализировали связь между микроРНК-132 и клинико-патологическими параметрами , Кроме того, мы оценили экспрессию некоторых белков, участвующих в регуляции клеточного цикла (p21, p53), пролиферации и дифференцировки тканей (с-Мус). р21 и р53 белки являются продуктами генов опухолевых супрессоров, которые активируются путем модуляции пролиферации клеток с помощью контроля G1 арест контрольной точки клеточного цикла [17, 18]. с-Мус белок представляет собой тип фактора транскрипции.
Пациенты и методы
человеческого рака желудка и соответствующие нормальные ткани были получены от 79 пациентов, перенесших гастрэктомию в отделении рака желудка и мягких тканей саркомы, Фудань Шанхай рака Центр, в период с января 2007 года по декабрь 2009 года Частичная резекция была выполнена у 36 больных, а общая гастрэктомия была выполнена в остальных 43 пациентов. По крайней мере, 4 см от края резекции опухоли брутто были гарантированы для всех пациентов. В общей сложности 71 пациентов получили адъювантной химиотерапии. После резекции, образцы были немедленно заморожены в жидком азоте, а затем хранили в холодильнике -80 °. Критерии включения для этого исследования были аденокарциномы и полное патологические данные; Критерии исключения неоадъювантной терапии, перитонеального распространение и отдаленных метастазов. Данные были получены из их оперативных и патологических отчетов, и последующие данные были получены по телефону амбулаторной и клинической базы данных. Письменное информированное согласие было получено от всех пациентов, и это исследование было одобрено Комитетом по этике Шанхай онкологического центра университета Фудань путем. Экстракции
РНК и количественный ПЦР в реальном времени
тотальной РНК из ткани экстрагировали с реагентом TRIzol (Invitrogen, Карлсбад, Калифорния, США) в соответствии с инструкциями изготовителя. Количественные ПЦР в реальном времени (QRT-PCR) анализы были проведены для выявления эндогенной экспрессии микроРНК-132 в соответствии с методом Applied Biosystems. Вкратце, кДНК обратной транскрипции от общего количества образцов РНК с использованием микроРНК-специфического праймера стволовых петли из TaqMan микроРНК проб и реагентов из TaqMan® микроРНК с обратной транскрипцией Kit (ABI, Форест-Сити, штат Калифорния, США). Затем ПЦР-продукты были амплифицированы из образцов кДНК с использованием TaqMan микроРНК Assays вместе с TaqMan® Универсальной PCR Master Mix, и количество продукта ПЦР контролировалась при использовании Applied Biosystems 7900 Sequence Detection System. U6 небольшой ядерной РНК использовали в качестве внутреннего контроля. Относительное количество MIR-132 была рассчитана с помощью метода 2 (Гамма-Дельта DeltaC (Т)) [19].
Иммуногистохимическое окрашивание
p21, p53, и с-Мус были обнаружены иммуногистохимическим методом. Все первичные антитела и моноклональные антитела мыши были приобретены у Dako (Гамбург. Германия). Иммуногистохимическое окрашивание проводили методом повышения меченый полимерной системы (ELPS). После инкубации в течение ночи при 4 ° C с анти-p21, p53, и с-Мус антител, срезы обрабатывали в соответствии со стандартными методами иммунопероксидазных с использованием стрептавидина биотин peroxidise сложного набора (LSAB + Kit /HRP, Dako). Реакция peroxidise Затем была разработана с диаминобензидино (Dako). Отрицательные контрольные участки были подвергнуты такой же методике, за исключением того, что первое антитело было заменено фосфатным буферным солевым раствором (PBS) [20].
Иммуногистохимическое окрашивание скоринг
Все срезы оценивались двумя патологи без знания клинического результата. Процент иммунореактивных клеток и интенсивности окраски оценивали в каждом образце. Процент иммунореактивных клеток оценивали по шкале от 0 до 4: нет окрашивания не оценивается как 0, 1-10% клеток окрашиваются по шкале от 1, 11-50%, так как 2, 51-80%, так как 3, и 81- 100%, так как 4. интенсивности окрашивания сортировали от 0 до 3: 0 определяется как отрицательное, 1, как слабый, 2, как замедлителем, и 3, как сильные, соответственно. Исходные данные были преобразованы в иммуногистохимического балла (ИСС), путем умножения количества и интенсивности баллов. На конечном счете, случаи имели оценку менее 1 рассматривались как отрицательные, и ≥ 1 считался положительным [20].
Статистический анализ
особенностей пациентов и клинико-патологическими характеристики были проанализированы с использованием двух т -tailed студента
-test для непрерывной переменной и х 2 теста для категориальной переменной. В целом кривые выживаемости были вычислены по методу Kaplan-Meier, и различия между кривыми выживаемости были исследованы с помощью теста долго ранга. Независимые прогностические факторы были рассмотрены многомерный анализ выживаемости с использованием модели пропорциональных рисков Кокса. Принятый уровень значимости был P
&л; 0,05. Статистический анализ и графики были выполнены с использованием SPSS 13,0 статистического пакета (SPSS, Inc., Chicago, IL)

Результаты клинико-патологическими характеристики
Существовали 62 мужчин и 17 женщин. (3.6: 1) со средним значением возраст 58 лет. Был 7 (8,9%) в начале рака желудка и 72 (91,1%) расширенный рак желудка. В соответствии с гистологическим типом, наблюдали хорошо дифференцированные опухоли у 3 (3,8%) пациентов, умеренно дифференцированные у 11 (13,9%) больных, и слабо дифференцированной опухоли в остальных 65 (82,3%) пациентов. Из 79 пациентов, 25 (31,6%) имели опухоли, расположенные в верхней трети, 15 (19,0%) имели опухоли в средней трети, 36 (45,6%) имели опухоли в нижней трети живота, и 3 (3,8%) имели опухоли занимают две трети или более желудка. узел метастаз лимфа наблюдалось у 57 больных, частота метастазов составила 72,2%. Распределение патологической стадии распределились следующим образом: 10 (12,6%) пациентов принадлежали к стадии I, 24 (30,4%) II, и 45 (57%) III
Экспрессия и соотношение микроРНК-132, p21, p53. , и с-Мус
уровни микроРНК-132 в 79 раковой (Т) и соответствующие нормальные ткани (N) были исследованы с помощью QRT-PCR. Большинство опухолевых тканей (57/79, 72%) показали повышенные уровни микроРНК-132 по сравнению с соответствующими нормальными тканями, со средним увеличением в 2,3 раза. Уровни микроРНК-132 в ткани опухоли (среднее ± стандартное отклонение, 0,35 ± 0,58) были значительно выше, чем в соответствующих нераковых тканей (среднее ± стандартное отклонение, 0,15 ± 0,35, Р &
л; 0,05). Выражения p21, p53, и с-Мус были рассмотрены иммуногистохимического окрашивания. Выражение p21 был положительным в 64,6% всех раковых тканей желудка. P21 окрашивание наблюдалось в ядре клетки карциномы. экспрессии p53 был положительным в 74,7% всех раковых тканей желудка. Окрашивание р53 наблюдалась в ядре клетки карциномы. с-Мус выражение было положительным в 44,3% всех раковых тканей желудка. с-Мус окрашивание наблюдалось в цитоплазме клеток карциномы. выражение микроРНК-132 был связан с p53 и с-Мус. Там не было никакой корреляции с р21. Кроме того, p53expression был связан с с-Мус (таблица 1) .table 1 Положительные результаты корреляции между биологическими маркерами
Биологические маркеры

коэффициенты корреляции (r)

P value

miR-132
P53
0.274
0.015
miR-132
c-myc
0.228
0.044
P53
c-myc
0.235
0.038
Клиническая значимость MIR-132 при раке желудка
79 больных раком желудка были разделены на две группы, в том числе MIR-21 высокой экспрессии группы (T /N &GТ; 0,5, п = 33) и с низким уровнем экспрессии группы (T /N &л; 0,5, п = 46) в соответствии с медианный T /N рацион экспрессии микроРНК-132. Был проведен анализ корреляции между экспрессией микроРНК-132 и патологических параметров. Результаты показали, что пациенты с высоким уровнем экспрессии микроРНК-132 имели более частое метастазирование лимфатических узлов (P
= 0,033), более лимфатическую эмболии опухоли (P
= 0,007) и более продвинутой стадии (P = 0,016
). Тем не менее, не было никаких существенных различий около пола, возраста, гистологического типа, локализации опухоли, размера опухоли, инвазии, нервной и Т стадии (таблица 2). В общей выживаемости у больных с высоким уровнем экспрессии микроРНК-132 был значительно худший прогноз, чем те, с микроРНК-132 низким уровнем экспрессии (P = 0.000
) (рисунок 1). Одномерный анализ общей выживаемости показал, что относительное выражение микроРНК-132, нервной, лимфатической инвазии эмболии опухоли и патологической стадии были прогностическими предикторами. Многофакторный анализ выживаемости, включая все значимые прогностические факторы, упомянутые в одномерном анализе, было проведено с целью определения независимых прогностических факторов для рака желудка. Многофакторный анализ показал, что уровень экспрессии микроРНК-132 и патологической стадии являются независимыми прогностическими факторами (таблица 3) .table 2 микроРНК-132 экспрессия и клинико-патологическими Факторов
Переменные

Высокое выражение п = 33

Низкая выражение п = 46

P


Пол
0,618
Мужчина
25
37
Женский
8 <бр> 9
Возраст
0,556
&60 Лт;
18
22
≥60
15
24
Гистологическое градация
0,412
плохо -differentiated
28
36
Умеренно дифференцированная страница 5 из 7
хорошо дифференцированной
0 страница 3 Опухоль местоположение
0,467
Верхняя треть
10
15
Средняя треть
8
7
Нижняя треть
15
21
Две трети или более
0 <бр> 3
размер опухоли (см)
0,862
&Лт; 5
18
26
≥5
15
20
Нервный вторжение 0,096
Результаты
Да
22
22
Нет
11
24
лимфатической опухоли эмболии
0,005
Да
26
22
Нет
7
24
T этап
0,070
T1, T2
6
17
T3, T4
27
29
лимфатического узла метастазирование
0,033
Да
28
29
Нет страница 5 из 17
Патологическая стадия
0,016
я страница 2 8
II
6
18
III
25
20 Рисунок 1
Сравнение выживаемости в соответствии с выражением микроРНК-132. Были существенные различия между микроРНК-132 высокой экспрессии и MIR-132 низкой экспрессии (P
= 0,000).
Таблица 3 Многофакторный анализ пациентов по модели Кокса
Переменная

χ2 <бр>
P
юдоль

RR

95% ДИ

микроРНК-132 выражение
5.447
0,020
2,414
1.152-5.059
Нервный вторжение
1,918
0,166
1,890
0.768-4.655
опухолевой эмболии лимфатической
0,173
0,677
0,838
0.366-1.923
Патологическая стадия
8,742
0,003
4,356
1.642-11.555
Обсуждение
идентификация прогностических факторов при раке желудка имеет важное значение для прогнозирования выживаемости пациентов и определения оптимальных терапевтических стратегий , Глубина вторжения и метастазов в лимфатических узлах были наиболее важными прогностическими факторами при раке желудка. В результате изменчивости прогноза в той же патологической стадии рака желудка, там было много исследований для конкретных биологических маркеров для выявления пациентов с прогнозом [21-28]. Биологические маркеры, такие как микроРНК, C-Met, L1CAM, эндотелиальной липазы белка, переменное число копий митохондриальной ДНК (мтДНК), TIMP3, hK6 и Эзриным были тщательно изучены. В качестве нового биомаркеров, потенциал микроРНК в прогнозировании прогноз все более изучен. микроРНК-132 является высоко консервативны микроРНК транскрибировать из межгенном области человеческой хромосомы 17 элементом ответа фактора транскрипции цАМФ связывания с белками [29]. В большинстве докладов Матчевая регулирования микроРНК-132 и биологические функции возникли из исследований, проведенных в нейрональной контексте. Кроме того, микроРНК-132 также был описан в ряде других областей, таких как воспаление, трансформация клеток и tumourigenesis. микроРНК-132 было показано, повышающей регуляции или понижающей регуляции в различных злокачественных опухолях человека [16, 30, 31]. Некоторые исследования показали, что микроРНК-132 может способствовать пролиферации клеток [31]. Тем не менее, до сих пор нет сообщений о MIR-132 при раке желудка.
В этом исследовании мы исследовали экспрессию микроРНК-132 при раке желудка и определить, если он может предсказать результаты лечения пациентов. Мы обнаружили, что экспрессия микроРНК-132 был выше в раковых тканях по сравнению с соответствующими нормальными тканями. Точная причина высокого уровня экспрессии микроРНК-132 в развитии рака желудка неизвестна. Парк JK и др. сообщили [31], что B2AR агонист тербуталин повышает экспрессию микроРНК-132. микроРНК-132 был транскрипционно активируется CREB в нейронах [32]. B2AR антагонисты ингибируют активацию CREB [33]. Поэтому вполне возможно, что моделирование B2AR увеличения экспрессии микроРНК-132 после активации CREB.
Результаты показали, что высокий уровень экспрессии микроРНК-132 в раке желудка была достоверно коррелирует с агрессивным клинико-патологическими характеристиками, такими как более частые метастазировании в лимфатические узлы, более лимфатической эмболии опухоли, и более продвинутой стадии. Эти результаты свидетельствуют о том, что позитивная регуляция микроРНК-132 играет важную роль в прогрессии рака желудка. Интересно, что мы обнаружили, что экспрессия микроРНК-132 был связан с p53 и с-Мус. Некоторые предыдущие исследования показали, что некоторые микроРНК может посредничать и регулировать подавление опухоли, оказываемое р53 или с-Мус [34, 35]. Цзян L и др. [34] обнаружили, что есть-микроРНК-125а-3p может индуцировать апоптоз через р53 пути. Чжан N, и др. [35] обнаружили, что микроРНК-150 может способствовать пролиферации клеток рака легких путем пристреливать p53. Ван Б и др. [36] обнаружили, что существует двойная петля отрицательной обратной связи между микроРНК-122 и С-Мус в гепатоцеллюлярной рака. Ли Х, и др. [37] установлено, что с-Мус способствовало экспрессии зрелого MIR-23А, miR24-2 и miR27a и впоследствии способствовали миграции клеток карциномы молочной железы и инвазии. Тем не менее, точная корреляция между микроРНК-132 и р53, с-Мус неясно, и еще предстоит выяснить в будущих исследованиях. Мы исследовали корреляцию экспрессии микроРНК-132 с прогнозом у больных раком желудка, обнаружили, что пациенты с высоким уровнем экспрессии микроРНК-132 имели худшую общую выживаемость, что люди с низким уровнем экспрессии микроРНК-132. Что еще более важно, многомерный анализ показал, что высокий уровень экспрессии микроРНК-132 был независимым прогностическим индикатором. Это был спор играли ли микроРНК-132 такой же прогностическое значение в различных видах опухолей. Паркер и др. сообщили [38] показано, что высокий уровень экспрессии микроРНК-132 было связано с неблагоприятным прогнозом у больных с первичным глиобластомы. Тем не менее, Янг и др. [12] сообщили, что остеосаркома у пациентов с низким уровнем экспрессии микроРНК-132 был беднее общей и безрецидивной выживаемости. Вполне возможно, что микроРНК-132 сыграли различные функции в различных опухолях. Wang и др. [39] обнаружили, что избыточная экспрессия микроРНК-132 подавленную в клеточной пролиферации пробирке и в естественных условиях роста опухоли. Ли и др. [13] показали, что избыточная экспрессия микроРНК-132 может ингибировать пролиферацию клеток рака молочной железы. И наоборот, Парк и др. [31] сообщили, что избыточная экспрессия микроРНК-132 увеличил пролиферацию раковых клеток поджелудочной железы.
Взятые вместе, наше исследование показало, что микроРНК-132 был в повышающей регуляции рака желудка и может быть независимым молекулярным биомаркером для предсказания прогноза желудка рак. В то же время, в результате небольшого исследования образца, нужен большое исследование случая, чтобы подтвердить прогностическую ценность микроРНК-132 в развитии рака желудка.
Заявления
Авторы 'оригинальные представлены файлы для изображений изображения Ниже приведены ссылки оригинальным представленных файлов авторов для изображений. 13000_2014_947_MOESM1_ESM.tif авторов исходного файла для рисунка 1 Конкурирующие интересы
Авторы заявили, что не существует никаких конкурирующих интересов
авторов. Взносы
задуманы и спроектированы эксперименты: XWL HMY HC Уп. Выполненные эксперименты: XWL. Проанализировав данные: XWL HMY. Внесенный реагенты /материалы /инструменты анализа: HC Уп. Написал бумагу: XWL. Все авторы читали и одобрили окончательный вариант рукописи.

• Сравнение эффективности различных способа введения химиотерапии на неоперабельным, прогрессирующим раком ж…
• Смешанные адено (нейро) эндокринные карциномы, возникающие из эктопической слизистой оболочки желудка верхн…