Výraz a klinický význam MIR-132 u karcinómu žalúdka patients

výrazu a klinický význam Mir-132 u pacientov s karcinómom žalúdka
abstraktné
pozadia a objektívne
Mir-132 hrá úlohu pri regulácii neuronálne morfológiu a bunkový vzrušivosť. Málo je známe o účinkoch Mir-132 v rakoviny. Cieľom tejto štúdie je vyhodnotiť expresiu Mir-132 a jeho klinický význam u rakoviny žalúdka.
Metódy
rakovinových tkanív a príslušné normálne tkaniva z bolo vyšetrených 79 pacientov s karcinómom žalúdka pre expresiu MIR-132 používajúce kvantitatívne PCR a súvislosť medzi Mir-132 úrovňami expresie a klinicko-faktory a prognóza bola analyzovaná.
Výsledky
v 79. klinických vzorkách pacientov s rakovinou žalúdka, MIR-132 hladiny expresie v rakovinových tkanivách boli výrazne vyššie ako v zodpovedajúce normálne tkanív (P
= 0,001). Vyššie úrovne expresie MIR-132 bolo spojené s častejším lymfatických uzlín (P
= 0,033), väčšie lymfatické nádorové embólia (P
= 0,007) a vyššieho stupňa (P
= 0,016). Navyše expresie MIR-132 bol nezávislý prognostický faktor pre celkové prežívanie (P
= 0,020).
Záver
MIR-132 by mohol slúžiť ako účinný prognostický faktor u pacientov s karcinómom žalúdka.
Virtuálne šmykľavky
virtuálne snímka (y) tohto článku nájdete tu: http: ... //www diagnosticpathol nika diagnomx eU /vS /8168577241196050
Kľúčové slová
žalúdočné rakovina Prognóza biologické markery Úvod
Hoci je výskyt rakoviny žalúdka bola podstatne klesá už niekoľko desiatok rokov, to je ešte štvrtou najčastejšou rakovinou a druhou najčastejšou príčinou úmrtí na rakovinu [1, 2]. Násobok génov, zdá sa, že prispievajú k malígnemu biologickej správanie karcinómu žalúdka [3, 4]. Je veľmi dôležité identifikovať prognostické faktory, aby sa maximalizoval terapeutický účinok, a minimalizovať nepriaznivé účinky pri liečbe pacientov s rakovinou.
MikroRNA sú skupinou endogénnych malých nekódovacích RNA, ktoré fungujú ako regulátory génov tým, že reguluje messenger RNA preklad a degradácia [5]. MikroRNA hrajú kľúčovú úlohu pri regulácii normálnej funkcie, ako je proliferácia, diferenciácia a apoptózy. Okrem toho, regulačné poruchy miRNA prispievajú k karcinogenézy a vývoj rakoviny [6, 7]. Ako člen rodiny miRNA, MIR-132 hrá dôležitú úlohu pri zápale, angiogenézy, a nervového vývoja [8-10]. V poslednej dobe, niektoré štúdie ukázali, že porucha regulácie MIR-132 sa vzťahuje k palete ľudských nádorov, ako je napríklad non-malobunkovým karcinómom pľúc, osteosarkóm, rakovina prsníka, hepatocelulárneho karcinómu, rakoviny prostaty a rakoviny pankreasu [11-16]. Avšak, nie sú tam žiadne správy o expresiu a klinický význam Mir-132 v karcinómu žalúdka.
V tejto štúdii sa MIR-132 expresie u pacientov s rakovinou žalúdka bola skúmaná a bola analyzovaná súvislosť medzi Mir-132 a klinicko parametrov , Ďalej sme hodnotili expresiu niektorých proteínov zapojených do kontroly bunkového cyklu (p21, p53), proliferácie a diferenciácie tkanív (c-myc). p21 a p53 proteíny sú produkty tumor-supresorové gény, ktoré sú aktivované moduláciou bunkovej proliferácie prostredníctvom ovládania fáze G1 kontrolný bod bunkového cyklu [17, 18]. c-myc proteín je druh transkripčný faktor.
Pacienti a metódy
ľudskej rakoviny žalúdka a zodpovedajúce normálne tkanivá boli získané od 79 pacientov, ktorí podstúpili gastrektómii na Katedre rakoviny žalúdka a sarkómy mäkkých tkanív, Fudan University Shanghai rakovine centrum, v období od januára 2007 do decembra 2009. Čiastočné gastrektómii bola vykonaná u 36 pacientov, a celkový gastrektómia bola vykonaná u ostatných 43 pacientov. Najmenej 4 cm resekcia marže z hrubej nádoru bola zaručená pre všetkých pacientov. Celkovo 71 pacientov dostávalo chemoterapiu. Po resekcii, vzorky boli okamžite zmrazený v kvapalnom dusíku a potom sa uloží do -80 ° chladničke. Kritériá pre zaradenie do tejto štúdie boli adenokarcinóm a úplné patologické dát; vylučovacích kritérií, boli neoadjuvantná terapia, peritoneálnej šírenie a vzdialené metastázy. Údaje boli získané z ich operatívne a patologických správach a následné údaje boli získané po telefóne ambulantnej a klinickej databázy. Písomný informovaný súhlas bol získaný od všetkých pacientov, a táto štúdia bola schválená etickou komisiou Shanghai Cancer Center of Fudan University. Extrakcia
RNA a kvantitatívne real-time PCR
celkovej RNA z tkaniva bola extrahovaná s TRIzolu činidlo (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) podľa inštrukcií výrobcu. Kvantitatívny real-time PCR (QRT-PCR), testy boli vykonávané pre detekciu endogénne expresie Mir-132 v súlade s metódou Applied Biosystems. Stručne, cDNA bola reverzne transkribovaných z celkového počtu vzoriek RNA za použitia miRNA špecifický primer kmeňových slučky z microRNA testy a činidiel TaqMan z TaqMan® microRNA reverznej transkripcie Kit (ABI, Forest City, CA, USA). Potom sa produkty PCR boli amplifikované z cDNA vzoriek s využitím mikroRNA testoch TaqMan spolu s TaqMan® Universal PCR Master Mix a množstvo produktu PCR boli monitorované za použitia Applied Biosystems 7900 Sequence Detection System. U6 malé jadrové RNA bola použitá ako vnútorná kontrola. Relatívne množstvo MIR-132 bola vypočítaná za použitia metódy 2 (-Delta DeltaC (T)) [19].
Imunohistochemické farbenie
p21, p53 a c-myc boli detekované imunohistochemické metódou. Všetky primárne protilátky a myší monoklonálne protilátky boli zakúpené od firmy Dako (Hamburg, Nemecko). Imunohistochemické farbenie bolo vykonané metódou zvýšenie značený polymér systém (ELP). Po inkubácii cez noc pri 4 ° C s anti-p21, p53 a c-myc protilátky, rezy boli spracované podľa štandardných metód s použitím streptavidín imunoperoxidázovému biotín peroxidise komplexu kit (LSAB + Kit /HRP; Dako). Peroxidise Reakcia potom bola vyvinutá s Diaminobenzidine (Dako). Negatívne kontrolné rezy boli podrobené rovnakým postupom s tým, že sa prvá protilátka bola nahradená fosfátového pufra fyziologického roztoku (PBS) [20].
Imunohistochemické farbenie bodovania
Všetky rezy boli hodnotené dvoma patológmi bez znalosti klinickým výsledkom. Percento imunoreaktívnych buniek a farbenie intenzity boli hodnotené v každej vzorke. Percento imunoreaktívnych buniek bola odstupňovaná na stupnici od 0 do 4: nie farbenie je hodnotený ako 0, 1 až 10% buniek zafarbených zaznamenal ako 1, 11-50% ako 2, 51-80% ako 3, a 81- 100% je 4. farbenie intenzity boli odstupňované 0-3: 0 je definovaná ako záporný, 1 ako je slabý, 2 ako moderované, a 3, ako je silný, resp. Hrubé údaje boli prevedené na imunohistochemické skóre (IHS) vynásobením množstva a intenzity skóre. V konečnom dôsledku sú prípady mali skóre menej ako 1 boli považované za negatívne, a ≥ 1 bol považovaný za pozitívny. [20]
Štatistická analýza
funkcií pacientov a klinicko-charakteristiky boli analyzované pomocou dvoch -tailed Student t-test
pre kontinuálne premenné a × 2 test pre kategorické premenné. Celkové Krivky prežitia boli vypočítané metódou Kaplan-Meier, a rozdiely medzi krivkami prežitia boli skúmané s dlhými-rank testu. Nezávislé prognostické faktory boli skúmané pomocou analýzy mnohorozmerné prežitie s využitím Coxovho modelu proporcionálneho rizika. Prijatá Hladina významnosti bola P Hotel < 0,05. Štatistické analýzy a grafiky boli vykonané pomocou SPSS 13.0 štatistický balíček (SPSS Inc., Chicago, IL)
Výsledky
klinicko-charakteristiky
Tam bolo 62 mužov a 17 žien. (3,6: 1) s priemerom vek 58 rokov. Došlo 7 (8,9%) skoré žalúdočné rakoviny a 72 (91,1%) pokročilej žalúdočné rakoviny. Podľa histologického typu, dobre diferencované nádory boli pozorované u 3 (3,8%) pacientov, mierne diferencované u 11 (13,9%) pacientov a zle diferencované nádory v zostávajúcich 65 (82,3%) pacientov. Zo 79 pacientov, 25 (31,6%) sa nádory umiestnené v hornej tretine, 15 (19,0%) malo nádory v strednej tretine, 36 (45,6%) malo nádory v dolnej tretine žalúdka a 3 (3,8%) mali nádory obsadila dve tretiny alebo viac z žalúdka. Lymfatických uzlín bola pozorovaná u 57 pacientov, miera metastáz bola 72,2%. Distribúcia patologického fáza bola nasledujúca: 10 (12,6%) pacientov patrí fáze I, 24 (30,4%) II, a 45 (57%) III
expresiu a koreláciu MIR-132, p21, p53. a c-myc
hladiny Mir-132 v 79 rakovinové (T) a zodpovedajúce normálne tkanive (N) boli skúmané pomocou QRT-PCR. Väčšina nádorových tkanív (57/79, 72%), vykazovali zvýšenú hladinu MIR-132 v porovnaní so zodpovedajúcimi normálnymi tkanivami, s priemerným zvýšením 2,3-krát. hladiny Mir-132 v rakovinových tkanivách (priemer ± SD, 0,35 ± 0,58) boli významne vyššie ako v zodpovedajúcich nenádorové tkaniva (priemer ± SD, 0,15 ± 0,35, P Hotel &0,05). Vyjadrenie p21, p53 a c-myc boli vyšetrené imunohistochemickým farbením. p21 expresie bola pozitívna v 64,6% všetkých žalúdočných rakovinových tkanív. p21 farbenie bol pozorovaný v jadre buniek karcinómu. p53 bol pozitívny u 74,7% všetkých žalúdočných rakovinových tkanív. p53 farbenie bol pozorovaný v jadre buniek karcinómu. c-myc expresie bola pozitívna v 44,3% všetkých žalúdočných rakovinových tkanív. c-myc farbenie bol pozorovaný v cytoplazme buniek karcinómu. MIR-132 expresia bola spojená s p53 a c-myc. Nebola nájdená žiadna korelácia s P21. Navyše, p53expression bolo spojené s c-myc (tabuľka 1) .Table 1 Pozitívne výsledky korelácií medzi biologické markery
biologické markery
korelačných koeficientov (R)
P value

miR-132
P53
0.274
0.015
miR-132
c-myc
0.228
0.044
P53
c-myc
0.235
0.038
Klinický význam Mir-132 v karcinómu žalúdka
79 pacientov s karcinómom žalúdka boli rozdelené do dvoch skupín, vrátane MIR-21 s vysokou expresiou skupiny (T /N > 0,5, n = 33) a s nízkou expresiu skupiny (T /N < 0,5, n = 46), v závislosti na strednej T /n pomeru MIR-132 expresie. bol analyzovaný vzťah medzi MIR-132 expresie a patologických parametrov. Výsledky ukázali, že pacienti s vysokým Mir-132 prejave mal častejšie lymfatických uzlín (P
= 0,033), väčšie lymfatický nádor embóliu (P
= 0,007) a vyššieho stupňa (p = 0,016
). Avšak, tam neboli žiadne významné rozdiely o pohlaví, veku, histologický typ, umiestnenie nádoru, veľkosti nádoru, nervové invázie a T fáze (tabuľka 2). Na celkové prežívanie, pacienti s Mir-132 vysokú expresiu mali signifikantne horšiu prognózu ako tí s Mir-132 nízkou expresiou (P
= 0,000) (obrázok 1). Jednorozmerné analýza celkového prežívania ukázali, že relatívna expresia MIR-132, nervové invázie nádoru, lymfatické embólia, a patologické fázy boli prognostické prediktory. Multivariačný analýzy prežitie, vrátane všetkých významných prognostických faktorov uvedených v jednorozmerné analýze, sa vykonáva na stanovenie nezávislé prognostické faktory karcinómu žalúdka. Multivariačný analýza ukázala, že mier-132 hladina expresie a patologické štádium boli nezávislé prognostické faktory (tabuľka 3) .Table 2 MIR-132 prejavu a klinicko-faktory
Premenné
vysoká expresia n = 33

Low výraz n = 46
P
Pohlavie
0,618
Muž
25
37
Žena
8
9
Vek
0,556 Hotel < 60
18
22
≥60
15
24
Histologické triedenie
0,412
zle -differentiated
28
36
Stredne diferencovaný
5
7
Dobre diferencovaný
0 Sims 3
umiestnenie nádoru
0,467
horná tretina
10
15
Middle tretej
8
7
Dolné tretej
15
21
dve tretiny alebo viac
0
3
veľkosť tumoru (cm)
0,862 Hotel < 5
18
26
≥5
15
20
nervového invázie 0,096

Áno
22
22
Nie
11
24
lymfatického nádoru embóliu
0,005
Áno
26
22
Žiadne
7
24
T etapa
0,070
T1, T2
6
17
T3, T4
27
29
lymfatických uzlín metastázy
0,033
Áno
28
29
No
5
17
patologické štádium
0,016
Aj
2
8
II
6
18
III
25
20
Obrázok 1 Porovnanie prežitia v závislosti na expresiu Mir-132. Tam boli významné rozdiely medzi MIR-132 vysokú expresiou a mier-132 nízkou expresiou (P
= 0,000).
Tabuľka 3 Viacrozmerná analýza pacientov pomocou Cox modelu
Variable
χ2

P
vale
RR
95% CI
MIR-132 expresie
5.447
0,020 2,414
1,152-5,059
nervového invázie
1.918
0,166 1,890
0.768-4.655
lymfatických nádorov embólia
0,173
0,677 0,838
0.366-1.923
patologické štádium
8,742 0,003
4,356
1.642-11.555
Diskusia
identifikáciu prognostických faktorov u karcinómu žalúdka bola nevyhnutná pre predikciu prežitie pacientov a stanovenie optimálnej terapeutickej stratégie , Hĺbka invázie a metastáz lymfatických uzlín boli najdôležitejšie prognostické faktory u karcinómu žalúdka. V dôsledku variability prognózy v rámci rovnakého patologického štádiu rakoviny žalúdka, tam bolo veľa výskumov pre špecifické biologické markery na identifikáciu pacientov s prognózou [21-28]. Biologické markery ako microRNA, c-Met, L1CAM, endoteliálny lipázy proteín, rôzny počet kópií mitochondriálnej DNA (mtDNA), TIMP3, hK6 a Ezrin boli študované. Ako nová biomarkeru, potenciál miRNA v predikciu prognózy je stále študovaný. Mier-132 je vysoko konzervovaný miRNA prepísať z intergenové oblasti na ľudský chromozóm 17, väzbového proteínu transkripčný faktor cAMP odozvy prvku [29]. Väčšina správ Znamenák regulácia Mir-132 a biologických funkcií vynoril zo štúdií uskutočnených v neuronálne kontexte. Navyše, mier-132 bola tiež popísaná v celej rade ďalších odborov, ako je zápal, transformácia a tumorogenézy buniek. MIR-132 bolo preukázané, že up-regulované alebo down-regulované v rôznych ľudských rakovín [16, 30, 31]. Niektoré štúdie ukázali, že mier-132 by mohol podporiť proliferáciu buniek [31]. Avšak, tam sú ešte žiadne správy o MIR-132 u rakoviny žalúdka.
V tejto štúdii sme skúmali MIR-132 expresie v karcinómu žalúdka a určí, či by to mohlo predpovedať výsledky u pacientov. Zistili sme, že mier-132 expresie bola vyššia v rakovinových tkanivách v porovnaní so zodpovedajúcou normálnou tkaniva. Presná príčina MIR-132 vysokú expresiu v karcinómu žalúdka nie je známy. Park JK et al. hlásených [31], že B2AR agonista terbutalín zvyšuje MIR-132 expresie. Mir-132 sa transkripčný aktivovaná CREB v neurónoch [32]. B2AR antagonisti inhibujú aktiváciu CREB [33]. Z tohto dôvodu je možné, že simulácia B2AR zvýšenie expresie MIR-132 po aktivácii CREB.
Výsledky ukázali, že vysoká expresia Mir-132 v karcinómu žalúdka významne koreluje s agresívnymi klinicko-vlastnosťami, ako je častejšie lymfatických uzlín, viac lymfatický nádor embólia a pokročilejšie štádium. Tieto výsledky naznačujú, že zvýšenie expresie MIR-132 hrali dôležitú úlohu v progresii rakoviny žalúdka. Zaujímavé je, že sme zistili, že mier-132 expresia bola spojená s p53 a c-myc. Niektoré predchádzajúce štúdie ukázali, že niektoré microRNA mohla sprostredkovať a regulovať potlačenie nádoru vyvíjaný p53 alebo c-myc [34, 35]. Jiang L et al. [34] zistili, že má-MIR-125a-3p by mohlo vyvolať apoptózu prostredníctvom p53. Zhang N, et al. [35] zistili, že mier-150 by mohol podporiť proliferáciu buniek pľúcneho karcinómu zacielením p53. Wang B et al. [36] zistili, že existuje dvojaký negatívnej spätnej väzby medzi Mir-122 a c-myc v hepatocelulárneho karcinómu. Ak X, et al. [37] zistili, že c-myc podporovať expresiu zrelej MIR-23a, miR24-2 a miR27a a následne podporovať migráciu buniek karcinómu prsníka a invázie. Avšak, presný vzťah medzi Mir-132 a p53, c-myc, je nejasný a je potrebné ešte objasniť v ďalších štúdiách. Skúmali sme koreláciu MIR-132 expresie s prognózou u pacientov s karcinómom žalúdka, zistili, že pacienti s vysokým Mir-132 prejave mal horšie celkové prežívanie, že tí s nízkou Mir-132 výrazu. Ešte dôležitejšie je, multivariačný analýza ukázala, že vysoká expresia MIR-132 bol nezávislý prognostický ukazovateľ. To, či bola diskusia MIR-132 hrá rovnakú prognostickú hodnotu v rôznych druhoch nádorov. Parker et al. hlásených [38], že vysoká expresia MIR-132 bola spojená so zlou prognózou u pacientov s primárnou glioblastoma multiforme. Avšak, Yang et al. [12] uvádzajú, že pacienti osteosarkóm s nízkou expresiou Mir-132 mal horšie celkovú a prežitie bez známok ochorenia. Je možné, že mier-132 hrá rôzne funkcie v rôznych nádorov. Wang et al. [39] zistili, že nadmerná expresia MIR-132 potlačený v proliferáciu buniek in vitro a in vivo rast nádoru. Li et al. [13] preukázali, že nadmerná expresia MIR-132 môže inhibovať proliferáciu buniek rakoviny prsníka. Naopak, Park et al. [31] uvádzajú, že zvýšená expresia MIR-132 zvýšilo proliferáciu rakovinových buniek pankreasu.
Vzaté, naša štúdia ukázala, že mier-132 bola up-regulovaná u karcinómu žalúdka a môže byť nezávislý molekulárnej biomarker pre predikciu prognózu žalúdočných rakovina. Medzitým, v dôsledku malého výskumného vzorky, je potreba veľký prípad výskum potvrdil prognostickú hodnotu Mir-132 v rakoviny žalúdka.
Deklarácia
Autori ďalej len "pôvodné predložený súbory obrazov
Nižšie sú uvedené odkazy k autorov pôvodných predložených súborov pre obrázky. 13000_2014_947_MOESM1_ESM.tif autorov pôvodný súbor na obrázku 1. Konflikt záujmov
Autori vyhlásili, že žiadne konkurenčné záujmy neexistujú
autorov. Príspevkom
pochopil a navrhol experimenty: XWL HMY HC YNW. Vykonával experimenty: XWL. Analyzoval dáta: XWL HMY. Prispeli činidlá /materiály /analytické nástroje: HC YNW. Napísal na papier: XWL. Všetci autori čítať a schválená konečná rukopis.

• Porovnanie účinnosti inou cestou podávania chemoterapie na neodstrániteľný, pokročilou rakovinou žalúdka
• Zmiešané prasitrynes (neuro) endokrinné karcinóm vyplývajúce z ektopickej žalúdočnej sliznice hornej hrudnej časti pažeráka