Immunohistokemiska molekylära fenotyper av magcancer baserat på Sox2 och CDX2 förutsäga patient outcome

Immunohistokemiska molekylära fenotyper av magcancer baserat på Sox2 och CDX2 förutsäga patientens resultatet Bild Sammanfattning
Bakgrund
Gastric cancer är fortfarande ett allvarligt hälsoproblem i hela världen. Patienterna skulle ha stor nytta av upptäckten av nya biomarkörer som förutsäger resultatet mer exakt och möjliggöra bättre behandling och uppföljningsbeslut. Här har vi använt en retrospektiv observationsstudie för att utvärdera uttrycket och prognostiska värde av transkriptionsfaktorer Sox2 och CDX2 i magcancer.
Metoder
Sox2, CDX2, MUC5AC och Muc2 uttryck utvärderades i 201 gastric tumörer genom immunhistokemi . Sox2 och CDX2 uttryck korsades med kliniskt patologiska och uppföljningsdata för att bestämma deras effekt på tumör beteende och resultat. Dessutom Sox2
locus kopietal status bedömdes av fisk (N = 21) och antalet exemplar Variation analys (N = 62).
Resultat
Sox2 uttrycktes i 52% av de gastriska tumörer och var signifikant associerad med manligt kön, T-steget och N skede. Dessutom Sox2 uttryck förutspådde sämre patientöverlevnad, och kombinationen med CDX2 definierat två molekylära fenotyper, Sox2 + CDX2 - kontra Sox2 -CDX2 +, som förutsäger det värsta och det bästa lång- Variga patienternas utfall. Dessa profiler i kombination med kliniskt patologiska parametrar skikta prognosen för patienter med tarm och växande tumörer och i dem utan tecken på venös invasion. Slutligen tillsattes Sox2
locus kopietal vinster som finns i 93% av proverna som når förstärkningsgränsen i 14% och signifikant associera med proteinuttryck.
Slutsatser
Vi visade, för första gången, att Sox2 kombinerade med CDX2 uttrycksprofilen i magcancer segregera patienter i olika prognostiska grupper som kompletterar klinisk-patologisk information. Vi visar vidare en molekylär mekanism för Sox2 uttryck i en delmängd av magcancer fall.
Nyckelord
Sox2 CDX2 Gastric cancer Prognos Survival Bakgrund
Gastric cancer är en av de vanligaste diagnosen cancer och nu den tredje vanligaste orsaken av cancerrelaterade dödsfall i världen [1]. Laurén klassificering delar magcancer i två huvud histologiska typer: intestinal och diffus [2]. De presenterar distinkta morfologiska, kliniska och epidemiologiska egenskaper och tros utvecklas från aktiveringen av oberoende molekylära mekanismer. Epidemiologiska data visar att i de flesta fall, inte magcancer inte uppstår de novo
från den normala gastric epitel, utan snarare ett resultat av en flerstegsprocess, genom successiva genetiska och epigenetiska förändringar i flera gener. I motsats till den diffusa typen, för vilken predisponerande lesioner inte är väl etablerade, är följden av händelser som leder till gastric cancer i tarm typ väl beskrivna. Enligt den Correa s kaskad, det utvecklas på ett stegvis sätt, vanligtvis initieras av en inflammatorisk process som utlöses av Helicobacter pylori
, vilket kan fortskrida till multifokala atrofisk gastrit, intestinal metaplasi (IM), dysplasi och slutligen adenokarcinom [3].
Även om det har varit en stadig nedgång i gastric cancerincidens globalt, expansion och åldrande av världens befolkning förutser en ökning av antalet fall och, trots den senaste utvecklingen inom diagnostik och behandling, prognosen för patienter med ventrikelcancer resterna fattig. Detta leder till en 5-års överlevnad på inte mer än 25%, i Europa [4]. De flesta patienter med ventrikelcancer har avancerad sjukdom vid diagnos för vilka det enda alternativet för att bota bygger på fullständig kirurgiskt avlägsnande av tumören, med omfattande lymfkörtel dissekering som kan kompletteras med administrering av neoadjuvant eller adjuvant kemoterapi [5]. Den viktigaste prognostiska faktor som påverkar överlevnad samt behandling val är TNM stadium. Men ett extra lager av komplexitet härrör från observationen att patienter med samma iscensättning visar ofta en annan klinisk utveckling, med fokus på heterogenitet magcancer [6]. Detta tyder på att unika inneboende biologiska egenskaperna hos dessa tumörer väsentligt kan påverka deras aggressiva potential. Därför finns det fortfarande ett stort behov av att upptäcka ytterligare prognostiska biomarkörer för att förutsäga resultatet mer exakt och, som en följd, för att fatta bättre underbyggda beslut behandling med avseende på behandlingen. Tumörer som är mer differentierade generellt bete sig på ett mindre aggressivt sätt, ifrågasatte vi betydelsen av två differentieringsmarkörer, Sox2 och CDX2, för den biologiska beteende magcancer. Dessa markörer är differentiellt uttryckta längs kedjan av händelser som leder till magsäckscancer och är nära förknippade med mag- och tarm differentiering, respektive [7].
CDX2 är en tarmspecifik homeobox transkriptionsfaktor vars funktion säkerställer utveckling och underhåll av intestinal differentiering i tarmen och ektopiska, som var väl etablerad i djurmodeller [8, 9]. Det är allmänt känt att CDX2 uttrycks i human intestinal metaplasi i magen och matstrupen [10]. Det visade sig vara uttrycks också i dysplasi därmed stärka sin roll som en biomarkör för progression i preneoplastiska stadier av gastric cancer [11].
Sox2 är en medlem av SOX (SRY-besläktad HMG Box) familj av transkriptionsfaktorer , som kodas av en mycket konserverad, enda exon gen. Sox2 spelar olika roller i hela utveckling och celldifferentiering, första iscensättandet däggdjursembryogenes [12], och senare bidrar till den normala morfogenesen och homeostas av foregut härledda epitel i matstrupen, lungor och luftstrupe [13]. I vuxen ålder, är Sox2 uttrycks i en mängd vävnader, nämligen i skivepitel bekläder matstrupen och den glandulära epitelet i magen. Det har visats i möss, som Sox2 uttryck bidrar till alla cellinjer som normalt finns i magen, vilket tyder på ett viktigt bidrag för gastric differentiering [14]. Dessutom har onormalt uttryck av Sox2 observerats i tumörer i hjärna, bröst, lunga och matstrupe [15-17]. Men i magcancer sammanhang, dess roll förblir förbryllande och behöver ytterligare förtydliganden [18-20]. Dessutom dess samspel med CDX2 fortfarande outforskad.
Vårt mål var att analysera den kliniska relevansen av Sox2 och CDX2 uttryck i gastric cancerbiologi. De erhållna resultaten visar att deras uttryck i primära tumörer har en relevant prognostiskt värde för gastric cancerpatienter.
Metoder
mänskliga vävnader och DNA prover
Två hundra och en fall av formalinfixerade paraffininbäddade (FFPE ) prover från patienter med magcancer som genomgår kirurgi vid Centro Hospitalar S. João, Porto, Portugal mellan 1988 och 2010 studerades. Fall utvalda var de med tillgängliga paraffininbäddade material, klinisk-patologisk och uppföljningsdata som erhållits från patologi och kirurgiska avdelningar av Centro Hospitalar S. João. Av dessa utfördes sextiosju prover tillhandahålls som en vävnadsmicroarray (TMA), med 2 likadana kärnor av varje prov, från tumör- och Tissue Biobank av samma Pathology Department. Tumöriskt DNA (gDNA) erhölls från 62 fall med på TMA. gDNA också extraheras från FFPE prover av två normala mag slemhinnorna använder Genomic DNA Purification Kit (Citomed, Lissabon, Portugal), och användes som kontroller. Samtliga prover från Biobanks erhölls med informerat samtycke från patienterna. Användningen av retrospektiva prover som informerat samtycke inte kan erhållas är godkänt för studier av den portugisiska lagen. Studien godkändes av den etiska kommittén i Centro Hospitalar S. João.
Immunohistokemi
FFPE vävnadssnitt med 4 pm från kirurgiska prover och TMA utsattes för immunohistokemi för Sox2, CDX2, MUC5AC och Muc2, enligt standardmetoder. Kortfattat, efter avparaffinering och rehydrering, var antigenåtervinning utförs i en IHC-Tek Epitope Retrieval Steamer Set (IHC World, Woodstock, MD, USA), i 40 minuter med 10 mM citratbuffert, pH 6,0 (CDX2) eller 10 mM, pH 8,0 EDTA (Sox2). Desialylering utfördes under Muc2 detektion, med 0,1 U /ml av neuraminidas från Clostridium perfringens
typ VI (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) i natriumacetatbuffert, pH 5,5 under 2 h vid 37 ° C. Endogen peroxidasaktivitet blockerades med 3% väteperoxid i metanol under 10 min. Inkubation med primära antikroppar för CDX2 (1:50 utspädning, CDX2-88 klon, Biogenex, San Ramon, CA, USA), MUC5AC (1:10 utspädning, CLH2 klon) och Muc2 (1:10 utspädning, PMH1 klon) utfördes över natt, vid 4 ° C. Sektioner inkuberades sedan med en biotin-märkt kanin-anti-mus sekundär antikropp, följt av avidin /biotin-peroxidas detektionssystem (Vectastain ABC kit, Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA). För Sox2 färgning, var inkubation med den primära antikroppen (1:50 utspädning, SP76 klon, Cell Marque, Rockling, CA, USA) utfördes under 1 h vid RT och detektion utfördes med användning av Dako REAL ™ Envision ™ Detection System Peroxidase /DAB + (DAKO, Glostrup, Danmark) i enlighet med tillverkarens instruktioner. Detektion av uttryck utfördes med 3,3-diaminobensidin (DAB) (Sigma, St. Louis, MO, USA) vävnadssnitt motfärgades med Gills hematoxylin (Leica Microsystems, Amersham, Bucks, UK), uttorkad, förtydligas och monteras. Normal magslemhinna användes som en positiv kontroll för Sox2 och MUC5AC expression och normal kolonslemhinna användes som en positiv kontroll för CDX2 och Muc2 uttryck. Fall ansågs positiva när mer än 5% av cellerna färgades med varje antikropp med konsensus av tre observatörer (VC; LD och RA).
Fluorescens In Situ
Hybridisering (FISH) Review FISH användes för att bedöma Sox2
amplifiering status i 21 sampel, under användning av en 2-färgs-analys såsom beskrivs av Bass et al
[17]. En sond som sträcker sig över locus 3q26.33 (BAC klon CTD-2348H10) användes för att bestämma Sox2
kopienummer och jämfördes med en referenssond hybridiserar till 3p22.3-3p22.2 (BAC klon RP11-286G5), köpt från Invitrogen (Carlsbad, CA, USA). Målsonden märktes med digoxigenin (DIG-11-UTP, Roche, Mannheim, Tyskland) och detekterades med ett anti-digoxigenin-fluorescein-antikropp (Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Tyskland) och referens Proben märktes med biotin (BioPrime® DNA märkningssystem, Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) och detekterades med en CY 3-avidin antikropp (Jackson Immunoresearch Lab, West Grove, USA).
Fyra um glider från varje adenocarcinom prov deparaffinised, uppblött och placerades i en förvärmd lösning av NaSCN 1M vid 80 ° C under 10 minuter. Prover digererades med 6 mg /ml pepsin (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA) i HCl 0,02 N, pH 2 under 30 minuter vid 37 ° C. Sondblandningen i 50% formamid i 2 x SSC var codenatured med nukleärt DNA vid 94 ° C under 3 min. Hybridisering utfördes under 30 h vid 37 ° C. Kärnor motfärgades med DAPI-Vectashield monteringslösning (Vector, Burlingame, USA). För varje fall, var minst 67 celler analyserades i ett fluorescensmikroskop (Zeiss Z1 Axio) och bilder förvärvades med en 1000 gångers förstoring, med hjälp av en Zeiss Axio cam MRM och AxioVision Rel. 4,8 programvara. Förhållandet mellan antalet Sox2 och referenssonderingssignaler beräknades för varje cell individuellt och genomsnittet av förhållandena bestämdes för varje fall. Genamplifiering ansågs närhelst den genomsnittliga var ≥2.
Copy Number Variation (CNV) Analyser
CNV-analysen utfördes med användning av en specifik TaqMan Copy Number Assay (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) genom att följa tillverkarens anvisningar. I korthet innebar detta multiplexa PCR för Sox2
(mål) och RNas P
(endogen kontroll) utfördes på en ABI Prism7500 Snabb Realtids-PCR-systemet med hjälp av programmet v2.0 (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA ). Tjugo nanogram gDNA och en icke-mall kontroll analyserades i fyra exemplar. Normala magslemhinnan prover användes som kalibratorer. Kvantifiering av Sox2
genkopietal utfördes med användning av ΔΔCt metod och dataanalys utfördes med hjälp av CopyCaller programvara v2.0 (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). Genamplifiering definierades närhelst genkopietalet var 2-faldigt högre än den för den normala magslemhinna. Faldig ökning mellan 1,5 och 2 ansågs kopietal vinst.
Statistisk analys
chitvåtest användes för att bedöma betydelsen av skillnader i kliniskt patologiska egenskaper över kategorier av Sox2 och CDX2 uttryck, utom med åldern, där betydelsen av skillnader i medel beräknades med T
-testet. Patienternas överlevnad beräknades med hjälp av Kaplan-Meier-metoden och betydelsen av skillnaderna mellan råa överlevnadskurvorna testades genom log-rank test. Cox proportional hazards modell användes för att beräkna univariata och multivariata hazard ratio. Median uppföljningstid för överlevande patienter var 62 månader. 5- och 10-års överlevnad uppskattades med hjälp av livs tabellen metod. Skillnader ansågs statistiskt signifikant när P
värdena var < 0,05. Analyser utfördes med hjälp av SPSS v21.0 (Chicago, IL, USA) och Stata v11 (College Station, TX, USA).
Resultat
Sox2 uttryck i mag karcinom
kliniskt patologiska egenskaper hos magcancer 201 fall, såväl som expressionsprofilerna för Sox2, CDX2, Muc2 och MUC5AC är sammanfattade i tabell 1. Kärn Sox2 expression återfanns i 52% (104/201) av gastriska karcinom och uttrycket var heterogen bland och inom tumörerna (Figur 1A, B och C). I 13% (18/134) av fallen Sox2 uttryck var högre vid den invasiva fronten (figur 1D och E) (denna utvärdering endast utföras i fall som inte ingår i TMA, där denna bedömning inte var möjligt) .table 1 Sammanfattning av de kliniskt patologiska parametrar för magcancer enligt uttrycket av Sox2 och CDX2
Sox2
CDX2
Negativ
Positiv


Negativ
Positiv
N
%
N
%

p
N
%
N
%
p
Age, åren1
Medelvärde ± SD
65,8 ± 12,7
63,4 ± 13,5
0,2
64,1 ± 13,6
65,2 ± 12,6
0,6
Median (Range) Review 69 (34- 85) Review 66,5 (24-89) Review 69 (24-89) Review 67 (36-89) Review sex1
Man
52
41,9
72
58,1
0,02
75
60,5
49
39,5
0,1
Kvinna
45
58,4
32
41,6
38
49,4
39
50,6
TNM stage2
I /II
35
54,7 29
45,3
0,09
26
40,6
38
59,4
0,002
III /IV
59
44,7
73
55,3
83
62,9
49
> 37,1 T stage3
T1 /T2
22
62,9
13
37,1
0,03
13
37,1
22
62,9
0,007
T3 /T4
75
45,5
90
54,5
99
60,0
66
40,0
N stage1
N0
28
62,2
17
37,8
0,03
20
44,4 25
55,6
0,07
N +
69
44,2
87
55,8
93
59,6
63
40,4
Margins4
R0
85
47,5
94
52,5
0,5
98
54,7
81
45,3
0,2
R1
11
55,0
9
45,0
14
70,0
6
30,0
Vascular invasion4
Negativ
39
55,7
31
44,3
0,1
37
52,9
33
47,1
0,5
Positiv
57
44,2
72
55,8
75
58,1
54
41,9
Láuren5
Intestinal
44
49,4
45
50,6 0,9
45
50,6
44
49,4
0,3
Diffusa
20
48,8
21
51,2
26
63,4
15
36,6
Oklassificerad
31
46,3
36
53,7
40
59,7
27
40,3
Ming6
Expansiva
32
53,3
28
46,7
0,5
28
46,7
32
53,3
0,1
infiltrativa
60
45,8
71
54,2
81
61,8
50
38,2
Oklassificerad
2 66,7 1
33,3 1
33,3 2
66,7
SOX21
Negativ
58
59,8
39
40,2
0,3
Positiv
55
52,9
49
47,1
CDX21
Negativ
58
51,3
55
48,7
0,3
Positiv
39
44,3
49
55,7
MUC5AC1
Negativ
39
44,8
48
55,2
0,4 ​​
42
48,3
45
51,7
0,05
Positiv
58
51,3
55
48,7
70
61,9
43
38,1
MUC21
Negativ
69 48,6
73
51,4
0,9
84
52,2
58
40,8
0,1
Positiv
27
48,2
29
51,8
26
46,4
30
53,6
1N = 201; 2N = 196; 3N = 200; 4N = 199; 5N = 197; 6N = 194.
Figur 1 Sox2 proteinuttryck i gastriska karcinom, detekteras genom immunohistokemi. (A) Heterogena Sox2 uttryck i gastriska tumörer. Inom samma tumörprov, är områden med höga nivåer av Sox2 observer (B) i nära anslutning till områden med lägre expressionsnivåer av Sox2 (C). (D, E) Sox2 uttryck vid den invasiva fronten av tumörer.
Därefter bedömde vi huruvida Sox2 uttryck korrelerade med kliniskt patologiska drag av fallen. Denna analys visade att Sox2 uttryck var signifikant associerad med manligt kön (p
= 0,02), med högre T-steget (p
= 0,03) och med närvaro av regionala lymfkörtelmetastaser (N steg) (p
= 0,03). De andra kliniskt patologiska parametrar som ingår ålder, TNM stadium, tumör clearance vid resektion marginaler (R kategori), vaskulär invasion, Laurén klassificering och Ming klassificering inte signifikant associerad med Sox2 uttryck (tabell 1).
Eftersom Sox2 förknippas med gastric differentiering [14] vi studerat om detta bibehölls i cancer, med hjälp av MUC5AC som en gastric markör. Dock inget samband finns mellan Sox2 och MUC5AC uttryck. Likaså har ingen omvänd association hittades mellan Sox2 och CDX2 /Muc2 (används som markörer för intestinal differentiering). Notera var CDX2 uttryck signifikant associerade med en lägre TNM stadium (p
= 0,002) och med en lägre T skede (p
= 0,007). Även om inte statistiskt signifikant, det fanns en trend mot ett omvänt förhållande mellan CDX2 och MUC5AC (p =
0,05).
Överlevnadsanalys
5-års överlevnad, baserat på uppföljning av 199 patienter, var 35% (Ytterligare fil 1: Figur S1). Vi observerade nästa att Sox2 uttryck i tumörerna associerades i univariat analys, med en total sämre överlevnad (p
= 0,02), stratifiering patienterna i två prognosgrupper (figur 2A), med en 5-års överlevnad på 45 % för patienter med SOX2- tumörer jämfört med 26% för patienter med Sox2 + tumörer. Tvärtom CDX2 uttryck i samband med en övergripande förbättrad överlevnad, även om skillnaden inte nådde signifikans (data visas ej). Figur 2 Kaplan-Meier kurvor som visar sannolikheten för överlevnad för patienter med magcancer enligt Sox2 uttryck (A) och i enlighet med den molekylära fenotyper Sox2 - /CDX2 + och Sox2 + /CDX2 - (B).
Baserat på sammanslutning av Sox2 och CDX2 med sämre och bättre överlevnad samt fler och mindre aggressiva kliniskt patologiska funktioner, respektive, studerade vi ytterligare patienter utfall enligt de molekylära fenotyper som definieras av båda proteinerna. Fyra grupper av patienter kan definieras (Ytterligare fil 1: Figur S2) varav en med den bästa överlevnads hade tumörer negativa för Sox2 och positiva för CDX2 (SOX2- /CDX2 +), medan överlevnaden var den lägsta på patienter hyser tumörer med den omvända profilen positivt för Sox2 och negativ för CDX2 (Sox2 + /CDX2-) (p
= 0,01) (Ytterligare fil 1: Bild S2 och figur 2B). Fallen med uttryck av både Sox2 och CDX2 eller utan anger antingen markör uppvisade en liknande och mellan överlevnad (Ytterligare fil 1: Figur S2). Den SOX2- /CDX2 + och Sox2 + /CDX2- molekylära fenotyper jämfört med enbart Sox2, förutsäga mycket likartade överlevnad på 5-år (49% vs 26% och 45% vs 26%, respektive). Emellertid är den förutsagda 10 års överlevnad baserat på enbart Sox2 uttryck 34% (SOX2-) vs 22% (Sox2 +), medan, med hjälp av de Sox2 /CDX2 molekylära fenotyper, blir det 41% (SOX2- /CDX2 +) vs 14% (Sox2 + /CDX2-).
Vi utforskade inverkan på patienternas överlevnad av de molekylära fenotyper definieras av Sox2 + vs SOX2-, CDX2 + vs CDX2- och SOX2- /CDX2 ytterligare + kontra Sox2 + /CDX2- stratifierat enligt kliniskt patologiska parametrar. I det här fallet, rita överlevnad enligt antingen Sox2 eller CDX2 status ensam gav betydande prognostiska skillnader för de förstnämnda, i några av parametrarna (intestinal- och expanderande typ tumörer) och inga skillnader för CDX2 enbart (Ytterligare fil 1: Siffror S3 och S4). Resultat från Cox proportionell modell presenteras i kompletterande fil 1: Tabell S1. Än en gång, användningen av det kombinerade uttrycket av Sox2 och CDX2 förfinat de tidigare resultaten (figur 3). Sox2 + /CDX2 - profil förutspådde en betydligt sämre utfall av patienter med tarm (p
= 0,005) och expanderande (p
= 0,002) tumörer, med hazard ratio på 3,18 och 4,84, respektive , och av dem utan tecken på venös invasion (p
= 0,009), presenterar en hazard ratio på 3,84. Även borderline icke-signifikant, var en liknande trend observerats hos patienter utan lymfkörtelmetastaser (p
= 0,08) (Figur 3). Hazard ratio och 95% konfidensintervall för alla grupper presenteras i detalj i tabell 2 och förblir signifikant efter justering för ålder och kön i en multivariat analys. Figur 3 Kaplan-Meier kurvor som visar sannolikheten för överlevnad för patienter med magcancer enligt den molekylära fenotyper Sox2 - /CDX2 + och Sox2 + /CDX2 - stratifierat enligt kliniskt patologiska parametrar: Laurén klassificering (A), Ming klassificering (B) , venös invasion (C) och lymfkörtelmetastaser (D).
Tabell 2 Cox proportional hazards Modeller av överlevnad som en funktion av de molekylära fenotyper (Sox2 + /CDX2- vs SOX2- /CDX2 +) för varje klinisk-patologisk parameter
Parameter
Riskkvot (95% CI)

Unadjusted
P
Adjusteda
P

Totalt
1,95 (1,15-3,31) Review 0,01
1,90 (1,10-3,28) katalog 0,02
Laurén klassificering
Intestinal-typ
3,18 (1,33-7,58)
0,009
2,93 (1,21-7,10)
0,02
Diffusa-typ
1,35 (0,35-5,17) Review 0,7
Oklassificerade
1,34 (0,60-3,02)
0,5
Ming klassificering
Expanderande
4,84 (1,64 till 14,29) Review 0,004
4,53 (1,29 till 15,85) Review 0,02
infiltrativ
1,13 (0,60-2,13)
0,7
vaskulär invasion
Negativ
3,84 (1,30 till 11,35) Review 0,02
3,82 (1,29 till 11,40) katalog 0,02
Positiv
1,10 (0.60- 2,02) katalog 0,8
N skede
N0
2,96 (0,82 till 10,65) Review 0,1
3,98 (0,72 till 21,83) Review 0,1
N +
1,29 ( 0,72-2,30) katalog 0,4
Förkortning: KI
konfidensintervall
en Justerat för ålder och kön (multivariat analys med hjälp av Cox regressionsmodell) katalog Sox2 förstärkning
med tanke på att genen.. förstärkning är en tumörspecifik händelse under malign transformation, och att Sox2 locus utsätts för denna förändring i andra tumörer, nämligen i lungorna och matstrupen [17], hypotes vi att Sox2 förstärkning kan förklara dess uttryck och heterogenitet, både inom och mellan gastriska tumörer. Stöd denna hypotes, en undersökning utförs på Oncomine databas visade att Sox2 rankas bland de 10% gener med kopietal vinster i magcancer (Ytterligare fil 1: Bild S5).
Baserat på immunohistokemi data valde vi 14 fall med Sox2 uttryck och 7 negativa fall för att analysera med 2-färg FISH analys. Vi observerade att Sox2 förstärktes i 14% (2/14) av fallen med uttryck och inte i något av fallen utan uttryck (0/7). Ett representativt positiva fallet både för Sox2 expression och amplifiering visas i figur 4A och B. Ett fall med Sox2 uttryck men ingen amplifiering visas i figur 4C och D. Dessutom visade det FISH-analys närvaron av en hög grad av kopietal förstärknings och heterogenitet inom tumörer, observerades inte bara med målsonden för Sox2
locus men också med referenssonden, som ligger till 3p armen (Ytterligare fil 1: Figur S6). Figur 4 Gastric cancerfall med Sox2 proteinuttryck (A och C) kan manifesteras med eller utan Sox2 amplifiering (B och D, respektive) bestämdes genom FISH. Grön märkta prober rikta Sox2
, medan röda märkta prober rikta 3p armen. Kärnor färgades med DAPI (blå). (E) Sextiotvå gDNA magcancer prover bedömdes för Sox2 antal kopior status och jämfört med normal magslemhinna (kalibrator). (F) Sox2 kopietal var signifikant associerade med proteinuttryck, bestämt genom IHC (p
< 0,05).
För att klargöra hur ofta Sox2
locus kopietal förändringar i gastrisk cancer, utförde vi en kopia -nummer PCR med användning gDNA från 62 magcancer fall med hjälp av en RNAse P
sond belägen i kromosom 14 som referens. Majoriteten av proverna (93%) presenteras en viss grad av Sox2
kopienummer variation, som sträcker sig från 3 till 9 kopior (Figur 4E). En betydande positivt samband mellan antalet kopior förstärkning och Sox2 uttryck (p Hotel < 0,05). Observerades (Figur 4F) Review Diskussion
Gastric cancer är en sjukdom med flera resultat som inte kan förutsägas genom enbart kliniskt patologiska egenskaper [6]. Följaktligen är identifiering av molekylära markörer som kan tillåta ytterligare resultatet skiktning och behandlingsbeslut av avgörande betydelse.
I denna studie vi karaktäriserat uttryck av transkriptionsfaktorn Sox2 i magcancer och relaterade det med kliniskt patologiska funktioner och differentieringsmarkörer nämligen MUC5AC (gastric markör) och CDX2 och Muc2 (intestinala markörer). Detta ledde till identifiering av två olika prognostiska grupper, baserat på Sox2 uttryck, som skulle kunna förfinas ytterligare genom att ta hänsyn den kombinerade uttryck med CDX2. Slutligen, unraveled vi heterogenitet Sox2
locus och kromosom 3 kopietal i magcancer, visar ett samband mellan ökad kopieantal och Sox2 proteinuttryck.
En viktig slutsats av denna studie var iakttagelsen att Sox2 uttryck ensam, och ytterligare förfinas genom kombinationen med CDX2 tillåter skiktning av patienter i undergrupper med signifikant olika kliniska resultat. Dessutom, när vi kombinerat dessa molekylära profiler med kliniskt patologiska data blev det uppenbart att Sox2 + /CDX2 - profil som är associerad med en sämre prognos, inom delmängder av tumörer som i allmänhet har en bättre prognos: intestinal typ expanderar-typ och med några tecken på venös invasion [21, 22]. Även om det inte statistiskt signifikant, var samma tendens som observeras för tumörer som uppvisar utan lymfkörtelmetastaser. Dessa molekylära profiler indikerar en annan biologisk beteende av tumören mest sannolikt på grund av sjukdomsprogression eller behandling beständighet och kan användas för att instruera mer effektiv terapi eller uppföljning scheman.
Noterbart är som lymfkörtel metastas är en av de viktigaste risk faktorer för magcancer återfall efter en R0 kirurgi, alla patienter som lymfkörtelmetastaser får adjuvant behandling [23]. Men våra resultat visar att patienter utan denna riskfaktor, och därför inte behandlas, presenterar en påfallande sämre resultat när tumören uppvisar en Sox2 + /CDX2 - molekylär profil. Detta lägger fram hypotesen att, inom N0 tumörer, patienter inom denna molekylgrupp skulle sannolikt gynnas av adjuvant terapi. Men dessa observationer kräver validering i större kohorter och det skulle också vara mycket informativt att lägga klinisk information om patientbehandling.
Sox2 också framstår som ett potentiellt mål för nya terapeutiska ingrepp. Även transkriptionsfaktorer är inte klassiska målproteiner, metoder för Sox2 inriktade terapi redan behandlas vid bröstcancer.

• Glutation-S-transferas-genen GSTM1, gen-gen interaktion, och magcancer känslighet: bevis från en uppdaterad metaanalys
• En fläkt av frisk luft: en kvalitetsförbättring studie som jämförde en luftcirkulerande teknik kontra konventionell teknik för att förhindra ventrikelsond dysfunktion