Immunohistochemische moleculaire fenotypes van maagkanker gebaseerd op SOX2 en CDX2 voorspellen patiënt outcome

immunohistochemische moleculaire fenotypes van maagkanker gebaseerd op SOX2 en CDX2 patiënt uitkomst te voorspellen
Abstracte achtergrond
Maagkanker wereldwijd blijft een ernstig gezondheidsprobleem. Patiënten zouden veel baat hebben bij de ontdekking van nieuwe biomarkers die uitkomst nauwkeuriger te voorspellen en laat een betere behandeling en follow-up beslissingen. Hier hebben we gebruik gemaakt van een retrospectieve, observationele studie naar de expressie en prognostische waarde van de transcriptiefactoren SOX2 en CDX2 bij maagkanker te beoordelen.
Methods
SOX2, CDX2, MUC5AC en MUC2 expressie werden 201 maag tumoren beoordeeld door immunohistochemie . SOX2 en CDX2 expressie werden gekruist met klinisch-pathologische en follow-up van gegevens op hun invloed op gedrag van de tumor en de uitkomst te bepalen. Bovendien SOX2
locus kopieaantal status werd vastgesteld door FISH (N = 21) en Copy Number Variation Assay (N = 62).
Resultaten
SOX2 werd tot expressie gebracht in 52% van de maag tumoren en significant was geassocieerd met mannelijk geslacht, T podium en N-stadium. Bovendien SOX2 uitdrukking voorspelde overleving armere patiënt, en de combinatie met CDX2 gedefinieerd twee moleculaire fenotypes, SOX2 + CDX2 - versus SOX2 -CDX2 +, dat het ergste voorspellen en de beste lange- term patiënten uitkomst. Deze profielen in combinatie met klinische en pathologische parameters stratificeren de prognose van patiënten met intestinale en groeiende tumoren en bij proefpersonen zonder tekenen van veneuze invasie. Tenslotte SOX2
locus kopieaantal winsten werden gevonden in 93% van de monsters bereiken van de amplificatie drempel 14% en significant associëren met eiwitexpressie.
Conclusies
Wij toonden voor de eerste keer dat SOX2 gecombineerde met CDX2 expressie profiel bij maagkanker scheiden patiënten in verschillende prognostische groepen, als aanvulling op de klinische en informatie. We tonen verder een moleculair mechanisme SOX2 expressie in een subset van maagkanker cases.
Sleutelwoorden
SOX2 CDX2 Maagkanker Prognose Survival Achtergrond
Maagkanker is een van de meest gediagnosticeerde kanker en nu de derde hoofdoorzaak van kanker-gerelateerde sterfgevallen in de wereld [1]. Laurén classificatie verdeelt maagkanker in twee histologische types: darm- en diffuus [2]. Ze bieden verschillende morfologische, klinische en epidemiologische eigenschappen en worden verondersteld te groeien van de activering van onafhankelijke moleculaire mechanismen. Epidemiologische gegevens blijkt dat in de meeste gevallen, maagkanker ontstaat niet de novo
van het normale gastrische epitheel, maar eerder voortvloeit uit een werkwijze van meerdere stappen, door opeenvolgende genetische en epigenetische veranderingen in meerdere genen. Anders dan de diffuse waarvoor predisponerende lesies niet goed vastgesteld, wordt de opeenvolging van gebeurtenissen die leiden tot maagkanker van de intestinale soort goed beschreven. Volgens de cascade Correa's, ontwikkelt stapsgewijs, gewoonlijk geïnitieerd door een ontstekingsproces veroorzaakt door Helicobacter pylori
, wat zich kan ontwikkelen tot atrofische gastritis, intestinale metaplasie (IM), dysplasie en tenslotte adenocarcinoom [3]. Ook al is er een gestage daling van maagkanker incidentie wereldwijd, de uitbreiding en de veroudering van 's werelds bevolking is geweest voorspelt een toename van het aantal gevallen en, ondanks de recente ontwikkelingen in de diagnostiek en behandeling, de prognose van maagkanker patiënten overblijfselen slecht. Dit vertaalt zich in een 5-jaarsoverleving van niet meer dan 25%, in Europa [4]. De meeste maagkanker patiënten hebben gevorderde ziekte bij diagnose voor wie de enige optie op genezing is gebaseerd op volledige chirurgische verwijdering van de tumor, met uitgebreide lymfeklierdissectie die kan worden aangevuld door de toediening van neoadjuvante of adjuvante chemotherapie [5]. De belangrijkste overleving prognostische factor, evenals de behandeling keuze is de TNM stadium. Echter, een extra complexiteit komt voort uit de waarneming dat patiënten met dezelfde staging verschillende klinische evolutie vertonen vaak, aandacht voor de heterogeniteit van maagkanker [6]. Dit suggereert dat unieke intrinsieke biologische eigenschappen van deze tumoren significant van invloed kunnen zijn hun agressieve potentieel. Daarom is er nog steeds een dringende behoefte aan aanvullende prognostische biomarkers ontdekken uitkomst nauwkeuriger te voorspellen en, als gevolg daarvan, om beter geïnformeerde behandeling beslissingen met betrekking tot de therapie. Tumoren die meer gedifferentieerd algemeen gedragen op een minder agressieve manier, en stelden we de relevantie van twee differentiatiekenmerken, SOX2 en CDX2, het biologische gedrag van maagkanker. Deze markeringen worden differentieel tot expressie langs de keten van gebeurtenissen die leiden tot maagkanker en zijn nauw verbonden met maag- en differentiatie respectievelijk [7].
CDX2 een darm-specifieke homeobox transcriptiefactor waarvan de functie waarborgt de ontwikkeling en het onderhoud van intestinale differentiatie van de darm en ectopische plaatsen, die goed werd in diermodellen [8, 9]. Het is algemeen bekend dat CDX2 expressie wordt gebracht in humane intestinale metaplasie van de maag en de slokdarm [10]. Het bleek ook worden uitgedrukt in dysplasie aldus zijn rol versterken als biomarker progressie in het preneoplastische stadium van maagkanker [11].
SOX2 is een lid van de SOX (SRY-verwante HMG Box) familie van transcriptiefactoren , gecodeerd door een sterk geconserveerd, één exon gen. SOX2 speelt diverse rollen tijdens de ontwikkeling en celdifferentiatie, eerst het zoogdier embryogenese [12] orkestreren en later bijdragen tot de normale morfogenese en homeostase van de voordarm afgeleide epitheel van de slokdarm, longen en luchtpijp [13]. In volwassenheid wordt SOX2 uitgedrukt in verschillende weefsels, met name in het plaveiselepitheel langs de slokdarm en het glandulaire epitheel van de maag. Het is aangetoond in muizen, die Sox2 expressie bijdraagt ​​aan alle cellijnen die normaal in de maag suggereert een belangrijke bijdrage aan de maag differentiatie [14]. Daarnaast is abnormale expressie van SOX2 waargenomen in tumoren van de hersenen, borstkanker, longkanker en slokdarm [15-17]. Echter, in de maagkanker context, haar rol blijft raadselachtig en behoeft verdere verduidelijking [18-20]. Bovendien zijn samenspel met CDX2 blijft onontgonnen.
Ons doel was om de klinische relevantie van SOX2 en CDX2 expressie bij maagkanker biologie analyseren. De verkregen resultaten tonen aan dat hun expressie in de primaire tumoren heeft een relevante prognostische waarde voor maagkankerpatiënten.
Methods
menselijke weefsels en DNA-monsters
Tweehonderd en één geval van formaline gefixeerde in paraffine ingebedde (FFPE ) monsters van patiënten met adenocarcinoom van de maag een operatie ondergaan in het Centro Hospitalar S. João, Porto, Portugal tussen 1988 en 2010 werden bestudeerd. Cases geselecteerd waren die met de beschikbare paraffine ingebedde materiaal, clinicopathologische en follow-up gegevens van de Pathologie en chirurgische afdelingen van Centro Hospitalar S. João. Van die, werden zevenenzestig monsters geleverd als een tissue microarray (TMA), met 2 repliceren kernen van elk monster van de tumor en Tissue Biobank van dezelfde afdeling Pathologie. Tumor genomisch DNA (gDNA) verkregen uit 62 gevallen die op de TMA. gDNA werd geëxtraheerd uit FFPE monsters van twee normale maag via de slijmvliezen Genomic DNA Purification Kit (Citomed, Lissabon, Portugal), en als controles gebruikt. Alle monsters uit de Biobank werden verkregen met geïnformeerde toestemming van de patiënten. Het gebruik van retrospectieve monsters waaruit geïnformeerde toestemming kan niet worden verkregen is toegelaten voor onderzoeken door de Portugese wet. Deze studie werd goedgekeurd door de ethische commissie van Centro Hospitalar S. João.
Immunohistochemie
FFPE weefsel secties met 4 micrometer van chirurgische specimens en TMA werden onderworpen aan immunohistochemie voor SOX2, CDX2, MUC5AC en MUC2, volgende standaard methodieken. Kort na deparaffinering en rehydratie, werd antigeenterugtrekking uitgevoerd in een IHC-Tek epitoop Stoomboot Set (IHC World, Woodstock, MD, USA), gedurende 40 minuten met 10 mM citraatbuffer, pH 6,0 (CDX2) of 10 mM, pH 8,0 EDTA (SOX2). Desialylation werd gedurende MUC2 detectie met 0,1 U /ml neuraminidase uit Clostridium perfringens
Type VI (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) in natriumacetaatbuffer pH 5,5 gedurende 2 uur bij 37 ° C. Endogeen peroxidase werd geblokkeerd met 3% waterstofperoxide in methanol gedurende 10 min. Incubatie met primaire antilichamen voor CDX2 (1:50 verdunning, CDX2-88 kloon, BioGenex, San Ramon, CA, USA), MUC5AC (1:10 verdunning, CLH2 kloon) en MUC2 (1:10 verdunning, PMH1 kloon) werd uitgevoerd overnacht bij 4 ° C. Daarna werden de secties met biotine gelabeld konijn anti-muis secundair antilichaam, gevolgd door het avidine /biotine-peroxidase detectiesysteem (Vectastain ABC kit, Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA). Voor SOX2 kleuring incubatie met het primaire antilichaam (1:50 verdunning, SP76 kloon, Cell Marque, meun, CA, USA) werd uitgevoerd gedurende 1 uur bij kamertemperatuur en detectie werd uitgevoerd met behulp van de Dako Envision REAL ™ ™ Detectiesysteem Peroxidase /DAB + (DAKO, Glostrup, Denemarken) volgens de instructies van de fabrikant. Detectie van expressie werd uitgevoerd met 3,3'-diaminobenzidine (DAB) (Sigma, St. Louis, MO, USA) weefselsecties werden tegengekleurd met Gill's hematoxyline (Leica Microsystems, Amersham, Bucks, UK), gedehydrateerd, geklaard en gemonteerd. Normaal maagslijmvlies werd gebruikt als een positieve controle voor SOX2 en MUC5AC expressie en normale colon mucosa werd gebruikt als een positieve controle voor CDX2 MUC2 en expressie. Zaken werden als positief beschouwd wanneer meer dan 5% van de cellen werden gekleurd met elk antilichaam met consensus drie waarnemers (VC, LD en RA).
Fluorescentie In Situ Hybridisatie
(FISH)
FISH werd gebruikt beoordelen SOX2
amplificatie status 21 monsters met behulp van een 2-kleuren assay zoals beschreven door Bass et al
[17]. Een probe overspant de locus 3q26.33 (BAC kloon CTD-2348H10) werd gebruikt om SOX2
kopieaantal te bepalen en werd vergeleken met een referentie probe hybridiseert 3p22.3-3p22.2 (BAC kloon RP11-286G5), gekocht van Invitrogen (Carlsbad, CA, USA). Het doel probe werd gelabeld met digoxigenine (DIG-11-UTP, Roche, Mannheim, Duitsland) en gedetecteerd met een anti-digoxigenine-fluoresceïne antilichaam (Roche Diagnostics GmbH Mannheim, Duitsland) en de referentie probe werd gelabeld met biotine (BioPrime® DNA labeling System, Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) en gedetecteerd met een CY 3-avidine antilichaam (Jackson Immunoresearch Lab, West Grove, USA).
Vier um dia's uit elk adenocarcinoom monster werden deparaffinised, gehydrateerd en geplaatst in een voorverwarmde oplossing van NaSCN 1 M bij 80 ° C gedurende 10 minuten. Monsters werden gedigereerd met 6 mg /ml pepsine (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) in HCl 0.02N, pH 2 gedurende 30 min bij 37 ° C. Probe mengsel in 50% formamide in 2xSSC codenatured werd nucleair DNA bij 94 ° C gedurende 3 minuten. Hybridisatie werd gedurende 30 uur uitgevoerd bij 37 ° C. Kernen werden tegengekleurd met DAPI-Vectashield montageoplossing (Vector, Burlingame, USA). Voor elk geval een minimum van 67 cellen werden geanalyseerd in een fluorescentiemicroscoop (Zeiss Axio Z1) en afbeeldingen werden met een 1000 × vergroting verworven, met behulp van een Zeiss Axio cam MRM en de AxioVision Rel. 4,8 software. De verhouding tussen het aantal SOX2 en de referentie testsignalen berekend voor elke cel afzonderlijk en het gemiddelde van de verhoudingen bepaald voor elk geval. Genamplificatie werd beschouwd als het gemiddelde ≥2.
Copy Number Variation (CNV) Assays
CNV assay werd uitgevoerd met een specifieke TaqMan® Copy Number Assay (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) volgens de fabrikant. Kort multiplex PCRs voor SOX2
(doel) en RNAse P
(endogene controle) werden uitgevoerd op een ABI Prism7500 Fast real-time PCR met behulp van de software v2.0 (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA ). Twintig nanogram gDNA en een niet-mal controle werden geanalyseerd in viervoud. Normaal maagslijmvlies monsters werden als kalibratoren. Kwantificering van SOX2
genkopienummer werd gedaan met behulp van ΔΔCt werkwijze en data-analyse werd uitgevoerd door de CopyCaller software v2.0 (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). Genamplificatie werd gedefinieerd als het gen kopieaantal werd 2-maal groter dan die van de normale maagslijmvlies. Voudige toename tussen 1,5 en 2 beschouwd copy number gain.
Statistische analyse
chikwadraattoets werd gebruikt om de significantie van verschillen in klinisch-pathologische kenmerken in categorieën SOX2 en CDX2 expressievrijheid, behalve met de leeftijd, waarbij de significantie van verschillen in de wijze werd berekend met behulp van de T Shirts -test. totale overleving van patiënten is bepaald met de Kaplan-Meier-methode en de significantie van verschillen tussen ruwe overlevingscurves werd getest door de log rank test. Cox proportionele hazards model werd gebruikt om univariate en multivariate hazard ratio te berekenen. De mediane follow-up tijd voor het overleven van de patiënten was 62 maanden. De 5- en 10-jaars overleving werd geschat met behulp van de life-table-methode. De verschillen waren statistisch significant geacht wanneer de p-waarden waren
< 0,05. Analyses werden uitgevoerd met behulp van SPSS-software v21.0 (Chicago, IL, USA) en Stata v11 (College Station, TX, USA).
Resultaten
SOX2 meningsuiting in maagcarcinomen
klinisch-pathologische kenmerken van de 201 maagkanker gevallen, evenals de expressieprofielen van SOX2, CDX2, MUC2 en MUC5AC zijn samengevat in Tabel 1. nucleair SOX2 expressie werd gevonden in 52% (104/201) van maagcarcinomen en de expressie was heterogene tussen en binnen de tumoren (fig 1A, B en C). In 13% (18/134) van de gevallen SOX2 expressie was hoger bij de invasieve voorzijde (figuur 1D en E) (deze evaluatie werd uitsluitend uitgevoerd in gevallen die niet in de TMA, waar evaluatie mogelijk was) .table 1 Samenvatting van de klinisch-pathologische parameters van maagkanker volgens de uitdrukking van SOX2 en CDX2
SOX2
CDX2
Negatief
Positief


Negatief
Positieve
N
%
N
%

p
N
%
N
%
p
Age, jaar1
Mean ± SD
65,8 ± 12,7
63,4 ± 13,5
0.2
64,1 ± 13,6
65,2 ± 12,6
0,6
Mediaan (Range)
69 (34- 85)
66,5 (24-89)
69 (24-89)
67 (36-89)
sex1
Man
52
41,9
72
58,1
0.02
75
60,5
49
39,5
0.1
Female
45
58,4
32
41,6
38
49,4
39
50,6
TNM stage2
I /II
35
54,7
29
45,3
0.09
26
40.6
38
59,4
0,002
III /IV
59
44,7
73
55,3
83
62,9
49
37.1
T stage3
T1 /T2
22
62,9
13
37,1
0.03
13
37,1
22
62,9
0,007
T3 /T4
75
45,5
90
54,5
99
60,0
66
40,0
N stage1
N0
28
62,2
17
37,8
0.03
20
44,4
25 | 55.6
0,07
N +
69
44.2
87
55,8
93
59,6
63
40,4
Margins4
R0
85
47,5
94
52.5
0.5
98
54,7
81
45,3
0.2
R1
11
55,0
9
45,0
14
70,0
6
30,0
Vascular invasion4
Negatief
39
55,7
31
44,3
0.1
37
52,9
33
47,1
0.5
Positieve
57
44,2
72
55,8
75
58,1
54
41,9
Láuren5
Intestinale
44
49,4
45
50,6
0,9
45
50,6
44
49,4
0.3
Zend
20
48,8
21
51,2
26
63,4
15
36,6
Zonder Classificatie
31
46,3
36
53,7
40
59,7
27
40,3
Ming6
Uitgestrekte
32
53,3
28
46,7
0.5
28
46,7
32
53,3
0.1
Infiltratieve
60
45,8
71
54,2
81
61,8
50
38.2
Zonder Classificatie 2
66,7 1
33.3 1
33.3 2
66,7
SOX21
Negatief
58
59,8
39
40,2
0.3
Positieve
55
52,9
49
47,1
CDX21
Negatief
58
51,3
55
48,7
0.3
Positieve
39
44,3
49
55,7
MUC5AC1
Negatief
39
44,8
48
55,2
0.4
42
48,3
45
51,7
0.05
Positieve
58
51,3
55
48,7
70
61,9
43
38,1
MUC21
Negatief
69
48,6
73
51,4
0,9
84
52,2
58
40,8
0.1
Positieve
27
48,2
29
51,8
26
46,4
30
53,6
1 N = 201; 2N = 196; 3N = 200; 4N = 199; 5N = 197; 6 N = 194.
Figuur 1 SOX2 eiwitexpressie in de maag carcinomen, gedetecteerd door immunohistochemie. (A) Heterogeniteit van SOX2 expressie in maagtumoren. Binnen dezelfde tumormonster, worden gebieden met een hoog SOX2 waargenomen (B) in de nabijheid van gebieden met lagere expressieniveaus van SOX2 (C). (D, E) SOX2 uitdrukking aan de voorzijde van invasieve tumoren.
Vervolgens hebben we onderzocht of expressie SOX2 gecorreleerd met klinische en pathologische kenmerken van de gevallen. Deze analyse toonde aan dat SOX2 expressie was significant geassocieerd met mannelijke geslacht (p
= 0,02), met een hoger T-stadium (p
= 0,03) en met de aanwezigheid van de regionale lymfekliermetastasen (N-stadium) (p
= 0,03). De overige klinische en pathologische parameters, welke leeftijd, TNM tumor speling op resectievlakken (R categorie), vasculaire invasie, Laurén classificatie en Ming indeling is die niet significant geassocieerd met SOX2 expressie (Tabel 1).
Aangezien SOX2 is gekoppeld maag differentiatie [14] onderzocht of dit bij kanker werd gehandhaafd, met behulp van MUC5AC als een maag marker. Er werd echter geen verband gevonden tussen SOX2 en MUC5AC expressie. Eveneens werd geen omgekeerde associatie gevonden tussen SOX2 en CDX2 /MUC2 (gebruikt als markers van intestinale differentiatie). Van de nota, werd CDX2 expressie significant geassocieerd met een lager TNM stadium (p
= 0,002) en met een lagere T-stadium (p
= 0,007). Bovendien, hoewel niet statistisch significant, was er een trend naar een omgekeerde relatie tussen CDX2 en MUC5AC (p =
0,05).
Survival analyse
De 5-jaars totale overleving, op basis van de follow-up van 199 patiënten was 35% (Extra file 1: figuur S1). We volgende opgemerkt dat SOX2 expressie in de tumoren werd geassocieerd, in univariate analyse, met een totale slechtere overleving (p
= 0,02), stratificatie van de patiënten in twee prognostische groepen (Figuur 2A), met een 5-jaars overleving van 45 % voor patiënten met tumoren SOX2- versus 26% bij patiënten met SOX2 + tumors. Integendeel, CDX2 expressie geassocieerd met een totale verbeterde overleving, hoewel het verschil niet significant was (gegevens niet getoond). Figuur 2 Kaplan-Meier krommen die de kans op overleving van patiënten met maagkanker volgens SOX2 expressie (A) en volgens de moleculaire fenotypes SOX2 - /+ en CDX2 SOX2 + /CDX2 - (B).
Op basis van de associatie van SOX2 en CDX2 met slechtere en betere overleving evenals meer en minder agressief clinicopathologische functies, respectievelijk, we verder onderzocht uitkomst van patiënten op basis van de moleculaire fenotypes bepaald door beide eiwitten. Vier groepen van patiënten kunnen worden gedefinieerd (Extra file 1: Figuur S2), waarvan de ene met de beste overlevingskansen hadden tumoren negatief voor SOX2 en positief voor CDX2 (SOX2- /CDX2 +), terwijl de overleving was het laagst bij patiënten die tumoren met het omgekeerde profiel, positief voor SOX2 en negatief voor CDX2 (SOX2 + /CDX2-) (p
= 0,01) (Extra file 1: Figuur S2 en figuur 2B). De gevallen met expressie van zowel SOX2 en CDX2 of zonder uitdrukking van marker vertoonde een vergelijkbare en intermediair overleving (Extra file 1: Figuur S2). De SOX2- /CDX2 + en SOX2 + /CDX2- moleculaire fenotypes, in vergelijking met alleen SOX2, voorspellen zeer vergelijkbare overlevingskansen bij 5-jaar (49% vs 26% en 45% versus 26%, respectievelijk). Echter, de voorspelde 10-jaars overleving gebaseerd op SOX2 uitdrukking alleen al is 34% (SOX2-) versus 22% (SOX2 +), terwijl, met behulp van de SOX2 /CDX2 moleculaire fenotypes, wordt 41% (SOX2- /CDX2 +) versus 14% (SOX2 + /CDX2-).
wij verder het effect bij patiënten 'survival of the moleculaire fenotypes bepaald door SOX2 + vs SOX2-, CDX2 + vs CDX2- en SOX2- /CDX2 verkend + versus SOX2 + /CDX2- onderverdeeld volgens het clinicopathologische parameters. In dit geval plotten overleving volgens één of SOX2 CDX2 stand alone leverde significante prognostische verschillen van het eerste worden bepaalde parameters (darm- en uitbreiding type tumoren) en geen verschillen CDX2 alleen (aanvullende bestandsinformatie 1: Figuren S3 en S4). De resultaten van Cox proportionele model worden gepresenteerd in Extra file 1: Tabel S1. Nogmaals, het gebruik van de gecombineerde expressie van SOX2 en CDX2 verfijnde de vorige resultaten (figuur 3). SOX2 + /CDX2 - profiel voorspelde een significant slechtere uitkomst van patiënten met intestinale (p
= 0,005) en de uitbreiding (p
= 0,002) tumoren, met een hazard ratio van 3,18 en 4,84, respectievelijk en van die zonder tekenen van veneuze invasie (p
= 0,009), die een hazard ratio van 3,84. Borderline hoewel niet significant, werd een soortgelijke trend waargenomen bij patiënten zonder lymfekliermetastasen (p
= 0,08) (Figuur 3). Hazard ratio's en 95% betrouwbaarheidsintervallen voor alle groepen worden gedetailleerd uiteengezet in tabel 2 en blijven significant na correctie voor leeftijd en geslacht in een multivariate analyse. Figuur 3 Kaplan-Meier krommen die de kans op overleving van patiënten met maagkanker volgens de moleculaire fenotypes SOX2 - /CDX2 + en SOX2 + /CDX2 - gestratificeerd naar clinicopathologische parameters: Laurén classificatie (A), Ming indeling (B) , veneuze invasie (C) en lymfeknoop metastasen (D).
Tabel 2 Cox proportionele risico modellen te overleven als functie van de moleculaire fenotypes (SOX2 + /CDX2- vs SOX2- /CDX2 +) voor elke parameter clinicopathologische
Parameter
Hazard ratio (95% CI)

Ongecorrigeerde
P
Adjusteda
P

Algemeen
1,95 (1,15-3,31)
0,01
1,90 (1,10-3,28)
0,02
Laurén indeling
Intestinale-type
3,18 (1,33-7,58)
0,009
2,93 (1,21-7,10)
0.02
Zend-type
1,35 (0,35-5,17)
0.7
Zonder Classificatie
1,34 (0,60-3,02)
0.5
Ming indeling
Expanding
4,84 (1,64-14,29)
0,004
4,53 (1,29-15,85)
0,02
Infiltratieve
1,13 (0,60-2,13)
0.7
Vasculaire invasie (0.60-
Negatief
3,84 (1,30-11,35)
0,02
3,82 (1,29-11,40)
0,02
Positieve
1.10 2.02)
0.8
N-stadium
N0
2,96 (0,82-10,65)
0.1
3,98 (0,72-21,83)
0.1
N +
1,29 ( 0,72-2,30)
0.4
Afkorting: BI
betrouwbaarheidsinterval
gecorrigeerd voor leeftijd en geslacht (Multivariate analyse met behulp van Cox regressie model)
SOX2 versterking
Gezien het feit dat gen.. amplificatie is een tumor-specifieke gebeurtenis tijdens kwaadaardige transformatie, en dat SOX2 locus wordt onderworpen aan deze wijziging in andere tumoren, met name van de longen en de slokdarm [17] veronderstelden we dat SOX2 amplificatie zijn expressie en heterogeniteit kon verklaren, in en tussen maagtumoren. Ter ondersteuning van deze hypothese, een onderzoek uitgevoerd op de Oncomine databank bleek dat SOX2 gerangschikt onder de top 10% genen met copy number winst in maagkanker (Extra file 1: Figuur S5).
Op basis van immunohistochemie data, selecteerden we 14 gevallen met SOX2 expressie en 7 negatieve zaken te analyseren met 2-kleuren FISH test. We vonden dat SOX2 werd geamplificeerd in 14% (2/14) van de gevallen expressie en in geen van de gevallen zonder expressie (0/7). Een representatieve positieve geval voor de SOX2 expressie en amplificatie wordt getoond in figuur 4A en B. Een geval SOX2 expressie maar geen amplificatie wordt getoond in figuur 4C en D. Bovendien is de FISH analyse toonde de aanwezigheid van een hoge kopieaantal gain en heterogeniteit in tumoren waargenomen niet alleen het doel probe voor SOX2
locus maar ook met de referentiesonde, gelegen ten 3p arm (aanvullende bestandsinformatie 1: Figuur S6). Figuur 4 Maagkanker gevallen SOX2 eiwitexpressie (A en C) met of zonder amplificatie SOX2 (B en D respectievelijk) bepaald door FISH kunnen presenteren. Groen gelabelde probes richten SOX2
, terwijl rood gelabelde probes richten op de 3p arm. Kernen zijn gekleurd met DAPI (blauw). (E) tweeënzestig gDNA maagkanker monsters werden beoordeeld op SOX2 kopieaantal status en vergeleken met normale maagslijmvlies (calibrator). (F) SOX2 copy number was significant geassocieerd met eiwit expressie, bepaald door IHC (p Restaurant < 0,05). Belgique Om de frequentie van SOX2
locus kopie aantal veranderingen in maagkanker, we een kopie uitgevoerd te verduidelijken -nummer PCR met behulp van gDNA van 62 maagkanker gevallen, met behulp van een RNAse P
sonde zich in chromosoom 14 als referentie. Het merendeel van de monsters (93%) licht een zekere SOX2
kopienummer variatie, variërend van 3 tot 9 kopieën (Figuur 4E). Een significant positief verband tussen copy number versterking en SOX2 expressie (p Restaurant < 0,05). Waargenomen (Figuur 4F)
Discussie
Maagkanker is een ziekte met meerdere uitkomsten die niet kunnen worden voorspeld door clinicopathologische functies alleen [6]. Bijgevolg is de identificatie van moleculaire merkers die verdere uitkomst stratificatie en behandeling besluiten toestaan ​​van cruciaal belang.
In deze studie kenmerk de expressie van de transcriptiefactor SOX2 bij maagkanker en verwante met klinische en pathologische kenmerken en differentiatiemarkers weten MUC5AC (maag-marker) en CDX2 en MUC2 (intestinale markers). Dit leidde tot de identificatie van twee prognostische groepen gebaseerd op SOX2 expressie, die verder kan worden verfijnd door rekening te houden met de gecombineerde expressie met CDX2. Tot slot, ontrafeld we de heterogeniteit van SOX2
locus en chromosoom 3 aantal kopieën in maagkanker, waaruit blijkt een verband tussen toegenomen aantal kopiëren en SOX2 eiwitexpressie.
Een belangrijke conclusie van dit onderzoek was de constatering dat SOX2 uitdrukking alleen, en verder verfijnd door de combinatie met CDX2, laat de gelaagdheid van patiënten in subgroepen met significant verschillende klinische uitkomsten. Bovendien, wanneer we deze moleculaire profielen clinicopathologische gegevens in combinatie, werd duidelijk dat de SOX2 + /CDX2 - Profiel geassocieerd met een slechtere prognose, in subgroepen van tumoren die in het algemeen een betere prognose: intestinale-type , uitbreiding type en zonder tekenen van veneuze invasie [21, 22]. Hoewel niet statistisch significant, werd dezelfde trend waargenomen tumoren presenteren zonder metastasen. Deze moleculaire profielen duiden op een verschillend biologisch gedrag van de tumor waarschijnlijk door ziekteprogressie of behandelingsresistentie en kunnen worden gebruikt om meer effectieve therapie instrueren of follow-up schema.
Name als lymfeknoop metastase is een van de belangrijkste risicofactoren factoren voor maagkanker recidief na een operatie R0, alle patiënten lymfekliermetastasen ontvangen adjuvante behandeling [23]. Echter, onze resultaten tonen aan dat deze patiënten zonder risicofactor, en dus niet behandeld, vormen een opvallend slechtere uitkomst als de tumor presenteert met een SOX2 + /CDX2 - moleculair profiel. Deze voert de hypothese dat binnen N0 tumoren, patiënten binnen deze moleculaire subgroep zou waarschijnlijk baat hebben bij adjuvante therapie. Toch hebben deze observaties vereisen validatie in grotere cohorten en het zou ook zeer informatief zijn om de klinische informatie over de behandeling van de patiënt toe te voegen.
SOX2 ook naar voren als een potentieel doelwit voor nieuwe therapeutische interventies. Hoewel transcriptiefactoren zijn niet de klassieke drug targets, zal-SOX2 gerichte therapie zijn al aangepakt bij borstkanker. Figuur S2. Figuur S3. Tabel S1.

• Glutathion S-transferase-gen GSTM1, gen-gen interactie, en maagkanker gevoeligheid: bewijsmateriaal van een bijgewerkte meta-analyse
• Een verademing: een kwaliteitsverbetering studie waarbij een met lucht circuleert techniek ten opzichte van conventionele techniek om neussonde dysfunctie te voorkomen