Иммуногистохимическая молекулярные фенотипы рака желудка на основе SOX2 и CDX2 предсказывают outcome

пациент Иммуногистохимическая молекулярные фенотипы рака желудка на основе SOX2 и CDX2 предсказать исход пациента
абстрактного
фона
рак желудка остается серьезной проблемой здравоохранения во всем мире. Пациенты бы извлечь большую пользу от открытия новых биомаркеров, которые предсказывают исход более точно и позволит лучше лечения и последующие решения. Здесь мы использовали ретроспективное обсервационное исследование с целью оценки экспрессии и прогностическое значение факторов транскрипции SOX2 и CDX2 при раке желудка.
Методы
SOX2, CDX2, MUC5AC и экспрессия MUC2 были оценены в 201 опухолях желудка с помощью иммуногистохимии , SOX2 и экспрессия CDX2 были скрещены с клинико-патологическими и последующих данных, чтобы определить их влияние на поведение опухоли и исход. Кроме того, Sox2
локус копия статус номер был оценен FISH (N = 21) и Copy Number Variation Анализ (N = 62) выражалась.

Результаты SOX2 в 52% опухолей желудка и был значительно связано с мужским полом, Т стадии и N стадии. Кроме того, выражение SOX2 предсказал выживаемость пациентов беднее, а комбинация с CDX2 определены два молекулярных фенотипов, Sox2 + CDX2 - по сравнению с SOX2 -CDX2 +, что предсказывают самое худшее и самое лучшее на длительный исход термин пациентов. Эти профили в сочетании с клинико-патологическими параметрами стратифицировать прогноз у больных с кишечными и расширяющихся опухолей и у пациентов без признаков венозной инвазии. И, наконец, Sox2
локус копия получает номер были найдены в 93% образцов, достигающих порога усиления в 14% и значительно ассоциирования с экспрессией белка.
Выводы
Мы показали, в первый раз, что SOX2 комбинированный с профилем экспрессии CDX2 при раке желудка пациентов в сегрегации различных прогностических групп, дополняя информацию клинико-патологическими. Кроме того, мы продемонстрировать молекулярный механизм для экспрессии Sox2 в подгруппе случаев рака желудка.
Ключевые слова
SOX2 CDX2 Рак желудка Прогноз выживания фон
рака желудка является одним из наиболее распространенных видов рака диагностируется и в настоящее время является третьей ведущей причиной смертей от онкологических заболеваний в мире [1]. Lauren классификация делит рак желудка на два основных гистологических типов: кишечный и диффузный [2]. Они представляют собой различные морфологические, клинические и эпидемиологические особенности и, как полагают, развиваются из активации независимых молекулярных механизмов. Эпидемиологические данные показывают, что в большинстве случаев, рак желудка не возникает заново
от нормального желудочного эпителия, а скорее является результатом многоступенчатого процесса, путем последовательных генетических и эпигенетических изменений в нескольких генах. В отличие от типа диффузного, для которых предрасполагающие поражения не очень хорошо установлено, последовательность событий, приводящих к раку желудка типа кишечника хорошо описана. По каскаду Корреа, она развивается ступенчато, как правило, инициированного воспалительного процесса, вызванного Helicobacter Pylori
, которое может прогрессировать до Мультифокальными атрофический гастрит, кишечная метаплазия (IM), дисплазии и, наконец, аденокарциномы [3].
несмотря на то, что имеет место устойчивое снижение желудочной заболеваемости раком во всем мире, расширение и старение населения в мире прогнозирует увеличение числа случаев и, несмотря на последние события в диагностике и лечении, прогноз у больных раком желудка остается бедные. Это приводит к 5-летней выживаемости не более 25%, в Европе [4]. Большинство больных раком желудка выдвигали заболевания на момент постановки диагноза, для которых единственный вариант лечения опирается на полное хирургическое удаление опухоли, с обширной лимфодиссекции, которая может быть дополнена введением неоадъювантной или адъювантной химиотерапии [5]. Наиболее важным прогностическим фактором, влияющим на выживаемость, а также выбором лечения является стадия TNM. Тем не менее, дополнительный слой сложности проистекает из наблюдения, что пациенты с той же постановкой часто показывают различную клиническую эволюцию, выделяя гетерогенность рака желудка [6]. Это говорит о том, что уникальные внутренние биологические свойства этих опухолей могут существенно повлиять на их агрессивный потенциал. Поэтому, по-прежнему существует настоятельная необходимость обнаружить дополнительные прогностические биомаркеры предсказать результат более точно и, как результат, чтобы помочь принимать более обоснованные решения в отношении лечения в отношении терапии. Как опухолей, которые более дифференцированы вообще ведут себя в менее агрессивной манере, мы поставили под сомнение значимость двух маркеров дифференцировки, Sox2 и CDX2, для биологического поведения рака желудка. Эти маркеры дифференциально экспрессируются вдоль цепи событий, которые приводят к раку желудка и тесно связанных с желудочной и кишечной дифференцировки, соответственно [7].
CDX2 является кишечник-специфическим фактором транскрипции гомеобоксный функция, обеспечивает разработку и техническое обслуживание кишечная дифференциация в кишечнике и эктопических участках, которая была хорошо зарекомендовали себя в животных моделях [8, 9]. Широко известно, что CDX2 выражается в кишечной метаплазией человека желудка и пищевода [10]. Было показано, что также выражается в дисплазии укрепляя тем самым свою роль в качестве биомаркеров прогрессирования в предраковых стадиях рака желудка [11].
SOX2 является членом SOX (SRY связанных с HMG Box) семейство факторов транскрипции , кодируемый высоко консервативными, одного гена экзона. SOX2 играет различные роли на протяжении развития и дифференцировки клеток, сначала оркестровать эмбриогенеза млекопитающих [12], а затем способствуя нормальному морфогенеза и гомеостаза передней кишки, полученных эпителии пищевода, легких и трахеи [13]. В зрелом возрасте, Sox2 экспрессируется в различных тканях, а именно в плоскоклеточный эпителиальную выстилку пищевода и железистый эпителий желудка. Было показано, у мышей, что Sox2 выражение способствует всех клеточных клонов, обычно попадающих в желудок, что указывает на важный вклад в желудочном дифференцировки [14]. Кроме того, ненормально экспрессия SOX2 наблюдалась в опухолях головного мозга, молочной железы, легких и пищевода [15-17]. Тем не менее, в желудочном контексте рака, его роль остается загадочным и нуждается в дальнейшем уточнении [18-20]. Кроме того, его взаимодействие с CDX2 остается неисследованной.
Наша цель состояла в том, чтобы проанализировать клиническую значимость экспрессии Sox2 и CDX2 в биологии рака желудка. Полученные результаты показывают, что их экспрессия в первичных опухолях имеет соответствующую прогностическое значение для больных раком желудка.
Методов
человеческих тканей и ДНК образцы
Двести один случаи формалином фиксированной парафин (FFPE ) были исследованы образцы пациентов с аденокарциномой желудка, оперированных в Centro HOSPITALAR Сан-Жуан, Порту, Португалия в период между 1988 и 2010 гг. Случаи были выбраны те, с имеющимися в парафин материала, и клинико-патологическими последующие данные, полученные от патологии и хирургических отделений Центро HOSPITALAR S. João. Из тех, шестьдесят семь образцов были представлены в виде микрочипов ткани (TMA), с 2-мя ядрами дублирующих каждого образца, из опухоли и тканей Биобанка того же отдела патологии. Опухоль геномную ДНК (гДНК) получали из 62 случая включены на ТМА. гДНК также извлечены из FFPE образцов двух нормальных желудочных слизистых оболочках с использованием геномной ДНК набора для очистки (Citomed, Лиссабон, Португалия), и использовали в качестве контролей. Все образцы из Биобанка были получены с информированного согласия от пациентов. Использование ретроспективных образцов, из которых информированное согласие не может быть получено разрешено для научных исследований португальцами закона. Это исследование было одобрено этическим комитетом Centro HOSPITALAR S. João.
Immunohistochemistry
срезы ткани FFPE с 4 мкм от хирургических образцов и TMA были подвергнуты иммуногистохимии для Sox2, CDX2, MUC5AC и MUC2, следуя стандартной методологии. Коротко говоря, после депарафинизации и повторной гидратации, извлечение антигена проводили в IHC-Tek эпитопа Retrieval Steamer Set (IHC World, Вудсток, штат Мэриленд, США), в течение 40 минут с 10 мМ цитратного буфера, рН 6,0 (CDX2) или 10 мМ, рН 8.0 ЭДТА (SOX2). Десиалилирование проводили для обнаружения MUC2, 0,1 ед /мл нейраминидазы из Clostridium perfringes
тип VI (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) в натрий-ацетатного буфера, рН 5,5 в течение 2 час при 37 ° С. Эндогенный пероксидазы блокировали 3% раствором перекиси водорода в метаноле в течение 10 минут. Инкубация с первичными антителами для CDX2 (разведение 1:50, CDX2-88 клон, BioGenex, Сан-Рамон, Калифорния, США), MUC5AC (разведение 1:10, CLH2 клон) и MUC2 (разведение 1:10, PMH1 клон) была выполнена в течение ночи при температуре 4 ° С. Затем срезы инкубировали с биотин-меченных кроличьих антител против мышиного вторичного антитела, за которым следует /биотин-пероксидаза системы обнаружения авидин (Vectastain ABC Kit, Vector Laboratories, Burlingame, CA, США). Для Sox2 окрашивания, инкубация с первичным антителом (разведение 1:50, SP76 клон, Cell Капера, налим, CA, США) проводили в течение 1 ч при комнатной температуре и обнаружение было выполнено с использованием Дако REAL ™ Энвижн ™ Система обнаружения пероксидаза /DAB + (DAKO, Glostrup, Дания) в соответствии с инструкциями изготовителя. Обнаружение экспрессии проводили с 3,3'-диаминобензидино (DAB) (Sigma, St. Louis, MO, USA) срезы ткани были контрастно гематоксилином Гилла (Leica Microsystems, Amersham, Бакс, Великобритания), обезвоженной, выясненных и смонтированы. Нормальная слизистая оболочка желудка, использовали в качестве положительного контроля для SOX2 и экспрессии MUC5AC и нормальной слизистой оболочки толстой кишки использовали в качестве положительного контроля для CDX2 и экспрессии MUC2. Случаи считались положительными, когда более чем 5% клеток окрашивались каждого антитела с консенсусом трех наблюдателей (ВК, LD и RA).
Флуоресценцию в Ситу
гибридизация (FISH)
FISH была использована для оценки Sox2
статус амплификации в 21 образцах, с использованием 2-цветный анализа, как описано в Бассом и др
[17]. Зонд охватывающий локус 3q26.33 (BAC клон СТД-2348H10) был использован для определения SOX2
число копий и сравнивали с эталонным зондом гибридизации с 3p22.3-3p22.2 (BAC клон RP11-286G5), приобретенный от Invitrogen (Карлсбад, Калифорния, США). Мишень зонд метили дигоксигенином (DIG-11-UTP, Roche, Mannheim, Германия) и детектировали с анти-дигоксигенином флуоресцеина антитела (Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Германия) и эталонного зонда метили биотином (BioPrime® ДНК системы маркировки, Invitrogen, Carlsbad, CA, США) и детектировали CY <суб> 3-авидин антитела (Jackson ImmunoResearch Lab, Вест-Гроув, США).
Четыре мкм передвигают из каждого образца желудочной аденокарциномы были deparaffinised, регидратации и помещают в предварительно нагретый раствор NaSCN 1М при 80 ° с в течение 10 мин. Образцы подвергали гидролизу 6 мг /мл пепсина (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) в HCl, рН 0,02 N 2 в течение 30 мин при 37 ° С. Probe смесь в 50% формамида в 2 × SSC был codenatured с ядерной ДНК при 94 ° С в течение 3 мин. Гибридизацию проводили в течение 30 ч при 37 ° С. Ядра контрастно с DAPI-Vectashield монтажного раствора (Vector, Burlingame, США). Для каждого случая, как минимум 67 клеток анализировали под флуоресцентным микроскопом (Zeiss Axio Z1) и изображения были получены с 1000-кратным увеличением, с помощью кулачка MRM Цейсс Axio и AxioVision отн. 4.8 программного обеспечения. Соотношение между количеством SOX2 и сигналов эталонный зонд вычисляли для каждой ячейки в отдельности, а среднее значение коэффициентов определяют для каждого случая. Амплификации гена считался всякий раз, когда в среднем составлял ≥2.
Copy Number вариации (CNV) Assays
Анализ ХНОП проводили с использованием специального TaqMan® числа копий анализа (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) в соответствии с инструкции изготовителя. Вкратце, мультиплекс ДЗП для Sox2
(мишень) и RNase P
(эндогенный контроль) были выполнены на быстрый в реальном масштабе времени системы ABI Prism7500 ПЦР с использованием программного обеспечения v2.0 (Applied Biosystems, Foster City, CA, США ). Двадцать нанограммов гДНК и управления нешаблонном были проанализированы в четырех экземплярах. Нормальные образцы слизистой оболочки желудка были использованы в качестве калибратора. Количественное Sox2
числа копий гена было сделано с помощью метода и анализа данных ΔΔCt была выполнена с помощью программного обеспечения CopyCaller v2.0 (Applied Biosystems, Foster City, CA, США). Амплификацию генов была определена, когда число копий гена была в 2 раза больше, чем у нормального слизистой оболочки желудка. Сложите увеличение между 1,5 и 2 рассмотрен копия усиления номер.
Статистический анализ
хи-квадрат тест был использован для оценки значимости различий в клинико-патологическими характеристиками по всей категории SOX2 и выражения CDX2, за исключением того, с возрастом, где Достоверность различий в средствах была рассчитана с использованием Т
-test. общая выживаемость пациентов "была рассчитана с использованием метода Каплана-Мейера и значимости различий между кривыми неочищенных выживаемости проверялась с помощью теста лог-ранга. Кокс модели пропорциональных рисков была использована для расчета одномерных и многомерных отношения рисков. Медиана время наблюдения для выживших пациентов было 62 месяцев. Коэффициент выживаемости 5- и 10-летний оценивалась с использованием метода жизни таблицы. Различия считали статистически значимым, когда значения р
были ≪ 0,05. Анализы были выполнены с использованием программного обеспечения SPSS v21.0 (Чикаго, Иллинойс, США) и Стата v11 (College Station, TX, USA).

Результаты SOX2 выражение в желудочных карцином
клинико-патологические особенности 201 рака желудка случаев, а также профили экспрессии Sox2, CDX2, MUC2 и MUC5AC обобщены в таблице 1. Ядерный выражение Sox2 было найдено у 52% (104/201) желудочных карцином и выражение было неоднородным среди и внутри опухолей (рис 1А, В и С). В 13% (18/134) экспрессии Sox2 случаев была выше при инвазивной фронте (рис 1D и E) (эта оценка была только выполнена в случаях, не включенных в TMA, где эта оценка не была возможна) .table 1 Резюме из клинико-патологических параметров рака желудка в соответствии с выражением SOX2 и CDX2

Sox2

CDX2


Негативный

Позитивный


Негативный

Положительный:

N

%

N

%

р

N

%

N

%

р

Age, лет1 <бр> Среднее ± SD
65,8 ± 12,7 ± 63,4
13,5
0,2
64,1 ± 13,6 ± 65,2
12,6
0,6
Медиана (диапазон)
69 (34- 85)
66,5 (24-89)
69 (24-89)
67 (36-89)
Sex1
Мужской
52
41,9
72
58,1
0,02
75
60,5
49
39,5
0,1
Female
45
58,4
32
41,6
38
49,4
39
50,6
TNM stage2
I /II
35
54,7
29
45,3
0.09
26 <бр> 40,6
38
59,4
0,002
III /IV
59
44,7
73
55,3
83
62,9
49 <бр> 37,1
T stage3
T1 /T2
22
62,9
13
37,1
0,03
13
37,1
22
62,9
0,007
T3 /T4
75
45,5
90
54,5
99
60,0
66
40,0
N stage1
N0
28
62,2
17
37,8
0,03
20
44,4
25
55,6
0,07
N +
69 <бр> 44,2
87
55,8
93
59,6
63
40,4
Margins4
R0
85
47,5
94
52,5
0,5
98
54,7
81
45,3
0,2
R1
11
55,0
9
45,0
14 <бр> 70,0
6
30,0
Сосудистый invasion4
Отрицательная
39
55,7
31
44,3
0,1
37
52,9
33
47,1
0,5
позитиве
57
44,2
72
55,8
75
58,1
54
41,9
Láuren5
Кишечные
44
49,4
45
50,6
0,9
45
50,6
44
49,4
0,3
Диффузный
20
48,8
21
51,2
26
63,4
15
36.6
классифицировано
31
46,3
36
53,7
40
59,7
27
40,3
Ming6
экспансивной
32
53,3
28
46,7
0,5
28
46,7
32
53,3
0,1
Инфильтративная
60
45,8
71
54,2
81
61,8
50
38,2
классифицировано страница 2 66,7
1
33,3
1
33,3 страница 2 66,7
SOX21
Отрицательная
58
59,8
39
40,2
0,3
позитиве
55
52,9
49
47,1
CDX21
Отрицательная
58
51,3
55
48,7
0,3
позитиве
39
44,3
49
55,7
MUC5AC1
Отрицательная
39
44,8
48
55,2
0,4 ​​
42
48,3
45
51,7
0,05
Положительный
58
51,3
55
48,7
70
61,9
43
38,1
MUC21
Негативный
69
48,6
73
51,4
0,9
84
52,2
58
40,8
0,1
Положительный
27
48,2
29
51,8
26
46,4
30
53,6
1N = 201; 2N = 196; 3N = 200; 4N = 199; 5N = 197; 6N = 194. Рисунок
экспрессии белка 1 SOX2 в желудочных карцином, обнаруженных с помощью иммуногистохимии. (A) гетерогенность экспрессии Sox2 в опухолях желудка. В том же образце опухоли, участки с высоким уровнем SOX2 наблюдаются (В) в непосредственной близости от районов с более низкими уровнями экспрессии SOX2 (C). (D, Е) выражение SOX2 при инвазивном фронте опухолей.
Далее, мы оценили ли выражение SOX2 коррелируют с клинико-патологическими особенностями случаев. Этот анализ показал, что экспрессия SOX2 была в значительной степени связано с мужским полом (р = 0,02
), с более высокой ступени Т (р
= 0,03), а также с наличием метастазов в регионарных лимфатических (N стадия) (р
= 0,03). Остальные параметры, клинико-патологические, которые включали возраст, стадию TNM, клиренс опухоли при резекции (R категория), сосудистая инвазия, классификации Lauren и классификации Ming не были связаны с выражением Sox2 (таблица 1).
Поскольку SOX2 связано с желудка дифференцировки [14] мы изучали, был ли это поддерживается при раке, используя MUC5AC в качестве маркера желудка. Тем не менее, ни одна ассоциация не была найдена между SOX2 и выражения MUC5AC. Точно так же, нет обратной связи не было обнаружено между SOX2 и CDX2 /MUC2 (используется в качестве маркеров кишечной дифференцировки). Следует отметить, что выражение CDX2 было в значительной степени связано со стадией TNM ниже (р = 0,002
) и со стадией ниже Т (р = 0,007
). Кроме того, хотя не является статистически значимым, существует тенденция к обратной зависимости между CDX2 и MUC5AC (р = 0,05)
.
Анализ выживаемости
5-летней общей выживаемости, основанные на последующей деятельности 199 пациентов, составила 35% (Дополнительный файл 1: Рисунок S1). Далее мы наблюдали, что экспрессия SOX2 в опухолях было связано, в однофакторного анализа, с общей низкой выживаемостью (р
= 0,02), стратификация пациентов на две прогностические группы (рис 2А), с выживаемостью 45 5 лет % для пациентов с SOX2- опухолей по сравнению с 26% у пациентов с Sox2 + опухолей. Напротив, экспрессия CDX2 что связано с общим повышением выживаемости, хотя различие не достигало значения (данные не показаны). Рисунок 2 Кривые Каплана-Мейера, показывающие вероятность общей выживаемости у пациентов с раком желудка в соответствии с выражением Sox2 (А) и в соответствии с фенотипов SOX2 молекулярно - /+ CDX2 и SOX2 + /CDX2 - (В).
На основе ассоциации SOX2 и CDX2 с худшей и лучшей выживаемости, а также более и менее агрессивных клинико-патологическими особенностями, соответственно, мы дополнительно изучали исход пациентов в соответствии с молекулярными фенотипов, определяемых обоими белками. Четыре группы пациентов могут быть определены (дополнительный файл 1: Рисунок S2) из ​​которых один с лучшей выживаемости имели опухоли отрицательные для SOX2 и положительных для CDX2 (SOX2- /CDX2 +), в то время как выживаемость была наименьшей у пациентов, несущих опухоли с обратный профиль, положительный результат на SOX2 и отрицательные для CDX2 (SOX2 + /CDX2-) (р = 0,01
) (Дополнительный файл 1: Рисунок S2 и Рисунок 2B). Случаи с выражением как SOX2 и CDX2 или без выражения либо маркера проявляли подобное и промежуточное выживание (Дополнительный файл 1: Рисунок S2). В SOX2- /CDX2 + и Sox2 + /CDX2- молекулярные фенотипы, по сравнению с только SOX2, предсказывают очень близкие показатели выживаемости в 5-ти лет (49% против 26% и 45% против 26%, соответственно). Тем не менее, прогнозируемый уровень выживаемости 10-летнего, основываясь только Sox2 выражении составляет 34% (SOX2-) против 22% (SOX2 +), тогда как, используя молекулярные фенотипы SOX2 /CDX2, она становится 41% (SOX2- /CDX2 +) против 14% (SOX2 + /CDX2-).
Мы также исследовали влияние на выживаемость пациентов молекулярных фенотипов, определяемых Sox2 + против SOX2-, CDX2 + против CDX2- и SOX2- /CDX2 + по сравнению с SOX2 + /CDX2- расслаивается в соответствии с клинико-патологическими параметрами. В этом случае построение выживание согласно либо SOX2 или статуса CDX2 в одиночку привел к значительному прогностические различия для бывших, в некоторых из параметров (intestinal- и расширение типа опухолей) и никаких различий для CDX2 в одиночку (Дополнительный файл 1: Фигуры S3 и S4). Результаты Кокс пропорциональной модели представлены в дополнительном файле 1: Таблица S1. Еще раз, использование комбинированной экспрессии SOX2 и CDX2 рафинированное предыдущих результатов (рисунок 3). SOX2 + /CDX2 - профиль предсказал значительно худший исход у пациентов с кишечными (р
= 0,005) и расширения (р = 0,002
) опухоли, с соотношение риска 3,18 и 4,84, соответственно , а также лиц, не имеющих признаков венозной инвазии (р = 0,009
), представляя отношение риска 3,84. Хотя пограничная недостоверное, аналогичная тенденция наблюдалась у пациентов без метастазов в лимфатических узлах (р = 0,08
) (Рисунок 3). Отношения риска и 95% доверительные интервалы для всех групп подробно представлены в таблице 2 и остаются значительными после корректировки по возрасту и полу в многомерном анализе. Рисунок 3 Кривые Каплана-Мейера, показывающие вероятность общей выживаемости у пациентов с раком желудка в соответствии с фенотипов SOX2 молекулярно - /CDX2 + и Sox2 + /CDX2 - расслаивается в соответствии с клинико-патологическими параметрами: Lauren классификация (А), Мин классификации (B) , венозная инвазия (С) и метастазами в лимфатических узлах (D).
Таблица 2 Кокса Модели выживания в зависимости от молекулярных фенотипов (SOX2 + /CDX2- против SOX2- /CDX2 +) для каждого параметра
клинико-патологическими Параметр

отношение риска (95% ДИ)

:

Нескорректированная

P


Adjusteda

P


В целом
1.95 (1.15-3.31)
0.01
1.90 (1.10-3.28) 0.02

Lauren классификации
кишечно-типа
3.18 (1.33-7.58)
0,009
2.93 (1.21-7.10) 0.02

диффузного типа
1.35 (0.35-5.17)
0.7
классифицировано
1.34 (0.60-3.02) <бр> 0,5
Ming классификации
Расширение
4,84 (1.64-14.29)
0,004
4,53 (1.29-15.85)
0,02
Инфильтративная
1.13 (0.60-2.13)
0.7
васкулярной инвазии
Отрицательный
3.84 (1.30-11.35)
0,02
3.82 (1.29-11.40)
0.02
Положительный
1.10 (0.60- 2,02)
0,8
N этап
N0
2.96 (0.82-10.65)
0,1
3.98 (0.72-21.83)
0,1
N +
1.29 ( 0.72-2.30)
0,4 ​​
Аббревиатура: CI
доверительный интервал
с учетом возраста и пола (Многофакторный анализ с помощью регрессионной модели Кокса)
SOX2 амплификации
Учитывая, что ген.. амплификации является событием опухоли конкретным во время злокачественной трансформации, и что SOX2 локус подвергается этому изменению в других опухолей, а именно легких и пищевода [17], мы предположили, что SOX2 усиление может объяснить свое выражение и гетерогенность как внутри, так и между ними опухоли желудка. Поддерживая эту гипотезу, опрос проводится на Oncomine базе данных показал, что SOX2 входит в число 10% генов с числом копий прибыли в раке желудка (Дополнительный файл 1: Рисунок S5).
На основе данных иммуногистохимических, мы выбрали 14 случаев с выражение SOX2 и 7 негативных случаев для анализа с помощью 2-цветного анализа FISH. Мы наблюдали, что SOX2 амплифицировали в 14% (2/14) случаев с выражением и ни в одном из случаев без выражения (0/7). Представитель положительный случай как для выражения Sox2 и усиления показан на рисунке 4A и B. Случай с выражением Sox2, но амплификации не показан на фигуре 4C и D. Кроме того, анализ FISH показал наличие высокой степени прироста числа копий и гетерогенность внутри опухоли, наблюдается не только с целевым зондом для SOX2
локуса, но и с эталонным зондом, расположенным на 3p руки (дополнительный файл 1: Рисунок S6). Рисунок 4 Желудочные случаев рака с выражением SOX2 белка (А и С), могут представлять с или без SOX2 амплификации (В и D, соответственно), определенной рыбы. Зеленый меченых зондов целевой Sox2
, в то время как красные меченые зонды нацелены на 3p руку. Ядра окрашивали DAPI (синий). (Е) Шестьдесят два GDNA образцов рака желудка оценивали статус номер SOX2 копирования и по сравнению с нормальной слизистой оболочки желудка (калибратора). (F) номер SOX2 копия была в значительной степени связано с экспрессией белка, определяемой IHC (р
≪ 0,05).
Для выяснения частоты SOX2
локус количества копий изменений при раке желудка, мы выполнили копию -количество ПЦР с использованием GDNA из 62 случаев рака желудка, с помощью RNase P
зонд, расположенный в хромосоме 14 в качестве ссылки. Большинство образцов (93%) представлены в некоторой степени SOX2
копировать Вариации количества, в диапазоне от 3 до 9 копий (рис 4д). Значительная положительная связь между усилением числа копий и экспрессии Sox2 (р
< 0,05). Наблюдалось (рис 4F)
Обсуждение
Рак желудка является заболеванием с несколькими результатами, которые не могут быть предсказаны с помощью одних только клинико-патологическими особенностями [6]. Следовательно, идентификация молекулярных биомаркеров, которые могут позволить дальнейшее расслоение и исход лечения решений имеет решающее значение.
В этом исследовании мы охарактеризовали экспрессию фактора транскрипции SOX2 при раке желудка и связанных с его клинико-патологическими особенностями и дифференциации маркеров, а именно MUC5AC (желудочная маркер) и CDX2 и MUC2 (кишечные маркеры). Это привело к идентификации двух различных прогностических групп, на основе выражения Sox2, который можно было бы улучшить, принимая во внимание комбинированное выражение с CDX2. Наконец, мы разгадали гетерогенность SOX2
локус хромосомы и 3 числа копий при раке желудка, демонстрируя связь между ростом числа копий и экспрессии белка SOX2.
Основной вывод этого исследования было наблюдение, что выражение SOX2 в одиночку, и дальнейшее уточнение комбинации с CDX2, позволяет стратификацию больных на подгруппы с существенно различными клиническими результатами. Более того, когда мы объединили эти молекулярные профили с клинико-патологическими данными, стало очевидно, что SOX2 + /CDX2 - профиль, связанный с неблагоприятным прогнозом, в пределах подмножеств опухолей, которые в целом имеют лучший прогноз: кишечная типа , расширение типа и без признаков венозной вторжения [21, 22]. Хотя не было статистически значимым, наблюдалась та же тенденция к опухоли, представляющие без метастазов в лимфатических узлах. Эти молекулярные профили указывают на различные биологические поведение опухоли скорее всего из-за прогрессирования заболевания или резистентности к лечению и может быть использован для указания более эффективной терапии или последующих графиков.
Следует отметить, что, как узел метастаз лимфатический является одним из главных рисков факторы для желудка рецидива рака, после операции R0, все пациенты, которые метастазами в лимфатические получают адъювантной терапии [23]. Тем не менее, наши результаты показывают, что пациенты без этого фактора риска, и, таким образом, не лечить, представляют собой поразительно худший результат, когда опухоль представляет с SOX2 + /CDX2 - молекулярный профиль. Это выдвигает гипотезу о том, что в опухолях N0, пациенты в этой молекулярной подгруппы, скорее всего, пользу от адъювантной терапии. Тем не менее, эти наблюдения требуют проверки в больших когорт и было бы также очень информативным, чтобы добавить клиническую информацию, касающуюся лечения пациента.
SOX2 также выступает в качестве потенциальной мишенью для новых терапевтических вмешательств. Хотя транскрипционные факторы не являются классическими объектами наркотиков, подходы к Sox2-направленной терапии, уже решаются при раке молочной железы.

• Глутатион S-трансферазы гена GSTM1, взаимодействие генов-ген, и желудочный предрасположенность к раку: данные об…
• Глоток свежего воздуха: исследование качества улучшение по сравнению технику воздушной циркуляции в сравнен…