Imunohistokemijski molekularne fenotipova od raka želuca na temelju SOX2 i CdX2 predvidjeti outcome

pacijent imunohistokemijski molekularna fenotipova od raka želuca na temelju SOX2 i CdX2 predvidjeti ishod bolesnika pregled apstraktne pregled Pozadina pregled, rak želuca ostaje ozbiljan zdravstveni problem u svijetu. Pacijenti će uvelike imati koristi od otkrića novih biomarkera koji predviđaju ishod točnije i omogućiti bolji tretman i follow-up odluke. Evo, koristili smo retrospektivnu, opservacijske studije o procjeni izraza i prognostičku vrijednost faktora transkripcije SOX2 i CdX2 u rak želuca.
Metode pregled SOX2, CdX2, MUG5AC i MUC2 izraz procijenjena je u 201 želučanih tumora imunohistokemijski , SOX2 i CdX2 izraz su prešli s kliničkopatološkim i praćenje podataka kako bi se odredio njihov učinak na ponašanje tumora i ishod. Štoviše, SOX2 pregled locus kopirati status broj je procijenjena RIBE (N = 21) i test Kopiraj broj varijacija (N = 62). | Rezultati
SOX2 je izražena u 52% želučanih tumora i značajno povezana s muškim spolom, T pozornici i N fazi. Štoviše, SOX2 izraz predvidjeti preživljavanje siromašniji za pacijenta, a kombinacija s CdX2 definira dvije molekularne fenotipova, SOX2 + CdX2 - u odnosu na SOX2 -CDX2 +, koji predviđaju najgore i najbolje dugo- Izraz pacijenata ishod. Ovi profili u kombinaciji s kliničkopatološkim parametrima stratificirati prognozu bolesnika s crijevnih i širenje tumora i kod onih bez znakova venske invazije. Konačno, SOX2 pregled locus broja kopija dobici nađeni su u 93% uzoraka dosežu prag pojačanje u 14% i značajno povezivanje s ekspresije proteina. Pregled Zaključci pregled pokazali smo, po prvi put, da SOX2 kombinaciji s CdX2 ekspresije profil na rak želuca odvajanje bolesnika u različite prognostičke skupine, upotpunjujući kliničkopatološkim informacije. Mi dalje pokazuju molekularni mehanizam za SOX2 izražavanja u podskup slučajeva raka želuca. Pregled Ključne riječi pregled SOX2 CdX2 Rak želuca Prognoza opstanak Pozadina pregled, raka želuca je jedan od rakova najčešće dijagnosticira, a sada je treći vodeći uzrok smrtnih slučajeva vezanih za rak u svijetu [1]. Lauren klasifikacija dijeli od raka želuca u dvije glavne histoloških tipova: crijevne i difuzne [2]. Oni prikazuju različite morfološke, kliničke i epidemiološke značajke i smatra se razviti iz aktivacije neovisnih molekularnih mehanizama. Epidemiološki podaci pokazuju da, u većini slučajeva, rak želuca ne nastaju de novo pregled od normalnog želuca epitel, nego je rezultat više koraka postupka, stalno su genetskim i epigenetičkim promjene u više gena. Nasuprot karakterističnim difuznog za koje nisu dobro poznato prijemljivih lezije, slijed događaja koji dovode do raka želuca intestinalnog tipa je dobro opisano. Prema Correa dobio kaskade, da se razvija na postupni način, obično je pokrenuo upalnim procesom potaknuta Helicobacter pylori
, što može napredovati do multifokalne atrofičnog gastritisa, intestinalne metaplazije (IM), displazija i konačno adenokarcinom [3].
iako je stalan pad incidencije raka želuca globalno, širenje i starenje stanovništva svijetu prognozira porast broja predmeta i, unatoč najnovijim dostignućima u dijagnostici i liječenju, prognozi želučanih oboljelima od raka ostataka loša. Ovaj prevodi u 5-godišnje preživljavanje koji nije veći od 25%, u Europi. [4] Većina pacijenata s rakom želuca su uznapredovale bolesti u trenutku postavljanja dijagnoze za koje je jedina opcija za liječenje oslanja na potpunog kirurškog uklanjanja tumora, s velikim limfnog čvora disekcija koja se može nadopuniti sa davanjem neoadjuvant ili adjuvantne kemoterapije [5]. Najvažniji prognostički čimbenik koji utječe na opstanak, kao i izbor liječenja je TNM stadij. Međutim, dodatni sloj kompleksnosti proizlazi iz zapažanja da pacijenti s istim skele često pokazuju različitu kliničku evoluciju, naglašavajući heterogenost raka želuca [6]. To upućuje na zaključak da je jedinstvena unutarnja biološka svojstva tih tumora može značajno utjecati na njihov agresivni potencijal. Dakle, još uvijek postoji potreba da se otkriju dodatne prognostičke biomarkera predvidjeti ishod točnije i, kao rezultat toga, pomoći kako bi bolje informirane odluke o tretmanu s obzirom na terapiju. Kao tumora koji se više razlikuju uglavnom ponašaju u manje agresivnom stilu, ispitivali smo relevantnost dva diferencijaciju markera, SOX2 i CdX2, za biološko ponašanje želučanog karcinoma. Ti markeri različito izraženi po lancu događaja koji dovode do raka želuca i usko su povezani s na želudac i crijeva diferencijacije, odnosno [7].
CdX2 je faktor crijeva specifične homeobox transkripcija čija je funkcija osigurava razvoj i održavanje crijevna diferencijacija u crijevima i ektopične web stranice, koji je dobro uspostavljen u životinjskim modelima [8, 9]. Poznato je da CdX2 izražen u ljudskoj intestinalne metaplazije želuca i jednjaka [10]. Pokazalo se također izražava u displazije time jačajući svoju ulogu kao biomarkera napredovanja u preneoplastic fazama želučane karcinogeneze [11]. Pregled SOX2 je član SOX (SRJ vezane HMG Box) obitelj transkripcijskih faktora , kodiran visoko očuvanih, jedan ekson gena. SOX2 igra različite uloge tijekom razvoja i diferencijacije stanica, najprije dirigira embriogeneze sisavaca [12], a kasnije pridonose normalnom morfogeneze i homeostazu u prednjem crijevu-izvedeni epitela jednjaka, pluća i dušnika [13]. U odrasloj dobi, SOX2 se izražava u različitim tkivima, i to u pločastog epitela sluznice jednjaka i žljezdani epitel želuca. Pokazano je, na miševima, koji SOX2 ekspresije doprinosi svih loza stanica normalno nalaze u želucu, što ukazuje na značajan doprinos za želučane diferencijaciju [14]. Osim toga, Nenormalna ekspresija SOX2 uočen je u tumorima mozga, dojke, pluća i jednjaka [15-17]. Međutim, u želučanoj kontekstu raka, njena uloga ostaje zagonetno treba dodatno pojašnjenje [18-20]. Nadalje, njegova interakcija s CdX2 ostaje neistražena.
Naš cilj bio je analizirati klinički značaj SOX2 i CdX2 izražavanja u želučanom biologije raka. Dobiveni rezultati pokazuju da je njihov izraz u primarnim tumorima ima relevantne prognostičku vrijednost za pacijente s rakom želuca. Pregled metoda
ljudskih tkiva i DNK uzorci pregled Dvije stotine i jedan slučajevi formalinom fiksne parafinske ugrađen (FFPE ) su proučavali uzorke iz pacijenata sa želučanim adenokarcinoma prolaziti kroz operacije na Centro Hospitalar S. João, Porto, Portugal između 1988. i 2010. godine. Slučajevi odabrane su one s raspoloživim materijalom parafinske ugrađen, kliničkopatološkim i follow-up podaci dobiveni iz patologiju i kirurških odjela Centro Hospitalar S. João. Od onih, šezdeset i sedam uzoraka pod uvjetom da kao microarray tkiva (TMA), sa 2 ponovljenih jezgri svakog uzorka, od tumora i tkiva Biobank istog patologiju. Tumora genomska DNA (gDNA) dobije se iz 62 predmeta koji se nalazi na TMA. gDNA također je izvađen iz uzoraka FFPE dvaju normalnih želučanih mucosas Korištenje genomske DNA pročišćavanja Kit (Citomed, Lisabon, Portugal), a koristi se kao kontrola. Svi uzorci iz Biobank dobiveni su uz informirani pristanak pacijenta. Korištenje retrospektivna uzoraka iz kojih informirani pristanak ne može dobiti ovlašten za istraživanja od strane portugalskog zakonom. Ova studija je odobrilo Etičko povjerenstvo Centro Hospitalar S. João. Pregled Imunohistokem pregled sekcije FFPE tkiva s 4 um iz kirurških uzoraka i TMA podvrgnuti su imunohistokemijski na SOX2, CdX2, MUC5AC i MUC2, nakon standardne metodologije. Ukratko, nakon deparaffination i rehidracije, dohvat antigen je provedena u IHC-Tek epitopnog dohvat parobrod Set (IHH World, Woodstock, MD, USA), za 40 minuta s 10 mM citrat puferu, pH 6,0 (CdX2) ili 10 mM, pH 8,0 EDTA (SOX2). Desialylation je provedena za detekciju MUC2, s 0,1 U /ml neuraminidaze sa Clostridium perfringens
tipa VI (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) u natrij acetatnim puferom pH 5,5 tijekom 2 sata pri 37 ° C. Endogene peroksidaze je blokirana s 3% vodikovog peroksida u metanolu tijekom 10 minuta. Inkubacija s primarnim protutijelima za CdX2 (01:50 razrjeđivanja, CDX2-88 klon, Biogenex, San Ramon, CA, USA), MUG5AC (1:10 razrjeđenje, CLH2 klon) i MUC2 (01:10 razrjeđivanja, PMH1 klon) je izvedena preko noći na 4 ° C. Uzorci su potom inkubirani s biotinom obilježeni zečjim anti-mišjim sekundarnim antitijelom, nakon čega slijedi avidin /biotin-peroksidaza sustav detekcije (Vectastain ABC kit, Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA). Za SOX2 bojenja, inkubacija s primarnim protutijelom (1:50 razrjeđivanja, SP76 klon, Cell Marke, Rockling, CA, USA) je izvedena 1 sat na sobnoj temperaturi i otkrivanje je učinjeno pomoću Dako REAL ™ Predvidjeti ™ Detection System peroksidaza /DAB + (DAKO, Glostrup, Denmark) u skladu s uputama proizvođača. Detekcija ekspresije provedena je s 3,3'-diaminobenzidinu (DAB) (Sigma, St. Louis, MO, USA) Rezovi tkiva su prebrojane s Gill je hematoksilinom (Leica Microsystems, Amersham, Bucks, UK), dehidrirane, pojasnio je i montiran. Normalna sluznica želuca je korišten kao pozitivna kontrola za SOX2 i MUC5AC ekspresiju i normalne sluznice kolona je korišten kao pozitivna kontrola za CdX2 i MUC2 izražavanja. Slučajevi su smatrane pozitivnim ako je više od 5%, stanice su označene su sa svakim antitijelom s konsenzusom tri promatrača (VC, LD i RA). Pregled Fluorescentna in situ hibridizacija pregled (FISH) pregled FISH koristi za procijeniti SOX2 pregled statusa pojačanja u 21 uzoraka, uz upotrebu testa 2-boje kao što je opisano od strane Bassa i sur pregled [17]. Sonda obilaženjem lokusa 3q26.33 (BAC klona CTD-2348H10) je korištena za određivanje SOX2 pregled broja kopija i uspoređena s referentnom sondom hibridizirati 3p22.3-3p22.2 (BAC klona RP11-286G5), nabavljen od Invitrogen (Carlsbad, CA, USA). Ciljni Sonda je označena digoksigeninom (DIG-11-UTP, Roche, Mannheim, Njemačka) i detektiran s anti-fluorescein digoksigeninom-antitijela (Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Njemačka) i referentnog sonde je obilježen biotinom (BioPrime® DNA sustava za obilježavanje, Invitrogen, bili deparaffinised Carlsbad, CA, USA) i detektiran s CY 3-avidin antitijela (Jackson ImmunoResearch Lab, West Grove, SAD). pregled Četiri pm klizi iz svake želučane uzorka adenokarcinom, rehidrira i stavi u prethodno zagrijanu otopinu NaSCN 1M na 80 ° C tijekom 10 minuta. Uzorci su digerirani s 6 mg /ml pepsinom (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) u HCl 0.02N, pH 2, 30 min na 37 ° C. Sonda smjesa u 50% formamidu, u 2 × SSC je codenatured s nuklearne DNA na 94 ° C tijekom 3min. Hibridizacije provodi se 30 h na 37 ° C. Jezgre su prebrojane s DAPI-Vectashield montiranje otopinom (Vector, Burlingame, USA). Za svaki slučaj, minimalno 67 stanica su analizirani u fluorescentnim mikroskopom (Zeiss Z1 Axio) i slike su stečene s × povećanjem 1000, koristeći Zeiss Axio cam MRM i Axiovision rel. 4.8 software. Odnos između broja SOX2 i sonde signala referentnim izračunat je za svaku ćeliju pojedinačno i prosjek omjera određena je za svaki slučaj. Gene pojačanje smatralo kad god je prosjek bio ≥2.
Copy broj varijacija (CNV) Analize
CNV Ispitivanje je provedeno uporabom posebne TaqMan® broj kopija ispitivanje (tnom City, CA, USA) koji slijedi upute proizvođača. Ukratko, Multiplex PCR za SOX2 Netlogu (cilj) i 'RNA-P Netlogu (endogeni kontrola) su na ABI Prism7500 Fast realnom vremenu PCR sustava pomoću softvera v2.0 (tnom City, CA, USA ). Dvadeset nanograma gDNA i kontrolu koja ne predložak analizirani četverostruko. Normalni uzorci želučane sluznice koristiti kao kalibratora. Kvantifikacija SOX2 pregled broja genskih kopija je učinjeno pomoću ΔΔCt metoda i podataka analiza provedena je od strane CopyCaller softver v2.0 (tnom City, CA, USA). Genskom amplifikacijom definiran kada je broj kopija gena bio je 2 puta veća od normalne sluznice želuca. Struko povećanje između 1,5 i 2 je smatran broj kopija dobitak.
Statistička analiza pregled hi-kvadrat test je korišten za procjenu značajnosti razlika u kliničkopatološkim obilježjima diljem kategorije SOX2 i CdX2 izražavanja, osim s dobi, gdje je Značajne razlike u sredstvima izračunat je pomoću T-test pregled. ukupno preživljenje pacijenata je izračunata pomoću Kaplan-Meier metodi i značaj razlika između krivulja sirove preživljavanja je testiran od strane log-rank testa. Cox proporcionalnih rizika model koristi se za izračunavanje univarijantna i multivarijatni rizik. Medijan praćenja vremena za preživljavanje bolesnika bio je 62 mjeseci. Stopa preživljavanja 5- i 10-godišnja procijenjena je pomoću metode život stol. Razlike su smatrane statistički značajna pri svakoj p
vrijednosti su 0,05. Analiza je izvršena pomoću SPSS programa v21.0 (Chicago, IL, USA) i Stata v11 (College Station, TX, USA). | Rezultati
SOX2 izraz u želučanom karcinomu
kliničkopatološka obilježja raka na 201 želuca slučajevima, kao i profile ekspresije SOX2, CdX2, MUC2 i MUC5AC sažeto su prikazani u tablici 1. Nuklearna SOX2 ekspresije pronađen je u 52% (104/201) želučane karcinoma, a ekspresija je bila heterogena među i unutar tumora (Slika 1A, B i C). U 13% (18/134) u izrazu slučajevi SOX2 bio viši na invazivne naprijed (Slika 1D i E) (ova procjena je provedena samo u slučajevima koji nisu uključeni u TMA, gdje je ta procjena nije bilo moguće) .table 1 Sažetak od kliničkopatološkim parametara raka želuca prema izrazu SOX2 i CdX2
SOX2
CdX2

Negative
Pozitivan pregled
pregled Negativna
Pozitivan
N
%
N
% pregled pregled, p
N
%
N
%
p
doba, godina1
srednja vrijednost ± SD pregled 65,8 ± 12,7 pregled 63,4 ± 13,5 pregled 0.2 pregled 64,1 ± 13,6 pregled 65,2 ± 12,6 pregled 0.6 pregled Medijan (raspon)
69 (34- 85)
66,5 (24-89)
69 (24-89)
67 (36-89)
Sex1 pregled Muški pregled 52
41,9
72
58,1 pregled 0,02 pregled 75
60,5 pregled 49
39,5 pregled 0.1 pregled ženskih pregled 45 pregled 58.4 pregled 32
41,6 pregled 38 pregled 49.4 pregled 39
50,6 pregled TNM stage2 pregled I /II
35 pregled 54,7 pregled 29 pregled 45.3
0,09 pregled 26
40,6 pregled 38
59,4 pregled 0,002 pregled III /IV pregled 59
44,7 pregled 73 pregled 55.3 pregled 83
62,9 pregled 49
37,1 pregled T stage3 pregled T1 /T2 pregled 22
62,9 pregled 13 pregled 37.1
0,03 pregled 13 pregled 37.1 pregled 22 pregled, 62.9
0,007 pregled T3 /T4
75 pregled 45.5 pregled 90
54,5 pregled 99 pregled 60.0 pregled 66 pregled 40.0
N stage1 pregled N0 pregled, 28 pregled 62,2 pregled 17 pregled 37.8
0,03 pregled 20
44,4 pregled 25
55,6 pregled 0.07
N + pregled 69
44,2 pregled 87
55,8 pregled 93
59,6 pregled 63
40,4 pregled Margins4 pregled R0 pregled 85
47,5 pregled 94 pregled 52.5 pregled 0.5 pregled 98
54,7 pregled 81 pregled 45.3 pregled 0.2 pregled R1 pregled 11
55,0
9
45,0 pregled 14
70,0 pregled 6
30,0 pregled vaskularnog invasion4 pregled Negativna pregled 39 pregled 55.7 pregled 31
44,3 pregled 0.1 pregled 37 pregled 52.9 pregled 33 pregled 47.1 pregled 0.5 pregled pozitivnih pregled 57 pregled 44.2 pregled 72
55,8 pregled 75
58,1 pregled 54
41,9 pregled Láuren5
Crijevna
44 pregled 49.4 pregled 45
50,6 pregled 0.9 pregled 45
50,6 pregled 44 pregled 49.4 pregled 0.3 pregled difuznu pregled 20 pregled 48,8 pregled 21 pregled 51.2 pregled 26
63,4 pregled 15 pregled 36.6 pregled Neklasificirani pregled 31 pregled 46.3 pregled 36 pregled, 53.7
40 pregled 59,7 pregled, 27 pregled, 40.3 pregled Ming6 pregled ekspanzivna pregled 32 pregled 53,3 pregled 28
46,7 pregled 0.5 pregled 28 pregled 46,7 pregled 32
53,3 pregled 0.1 pregled Invazivni pregled 60 pregled 45.8 pregled 71 pregled 54.2 pregled 81
61,8 pregled 50 pregled, 38.2
Neklasificirani pregled 2 pregled, 66,7
1 pregled 33.3
1 pregled 33.3 pregled 2 pregled, 66,7 pregled SOX21 pregled Negativna pregled 58 Netlogu 59,8 pregled 39 pregled 40.2 pregled 0.3 pregled pozitivnih pregled 55 pregled 52.9 pregled 49
47,1 pregled CDX21 pregled Negativna pregled 58 pregled, 51.3
55 pregled 48,7 pregled 0.3 pregled pozitivnih pregled 39 pregled 44.3 pregled 49 pregled 55.7 pregled MUC5AC1 pregled Negativna pregled 39
44,8 pregled 48 pregled 55.2 pregled 0.4 pregled 42
48,3 pregled 45 pregled 51.7
0,05 pregled Pozitivan pregled 58
51,3 pregled 55 pregled, 48.7
70 pregled 61,9 pregled 43 pregled 38.1 pregled MUC21 pregled Negativna pregled 69
48,6 pregled 73
51,4 pregled 0.9 pregled 84 pregled 52.2 pregled 58
40,8 pregled 0.1 pregled Pozitivan pregled 27 pregled 48.2 pregled 29
51,8 pregled 26
46,4 pregled 30 pregled, 53.6
1N = 201; 2N = 196; 3N = 200; 4N = 199; 5N = 197; 6M = 194. pregled Slika izraz 1 SOX2 proteina u želučanim karcinoma, otkrivena su imunohistokemijski. (A) Heterogenost SOX2 izražavanja u želučanim tumora. U istom uzorku tumora, područja s visokim razinama SOX2 se poštuju (B) u neposrednoj blizini područja s nižim razinama ekspresije SOX2 (C). (D, E) SOX2 izraz na invazivne ispred tumora.
Dalje, procjenjuje da li SOX2 izraz korelaciji s kliničkopatološkim obilježjima slučajeva. Ova analiza je otkrila da je ekspresija SOX2 je značajno povezana s muškim spolom (p
= 0,02), s višom T fazi (p pregled = 0,03), te uz nazočnost regionalne metastaze u limfne čvorove (N stadij) (p Netlogu = 0,03). Ostali kliničkopatološkim parametri koji su dob, TNM stadij, klirens tumora na resekcija margine (R kategorija), vaskularna invazija, Lauren klasifikacija i Ming klasifikacije nisu značajno povezani s izrazom SOX2 (Tablica 1).
Od SOX2 je povezana s želuca diferencijacija [14] smo ispitivali može li se to održava u raka, koristeći MUC5AC kao marker želuca. Međutim, bez povezanost između SOX2 i MUC5AC izražavanja. Isto tako, ne obrnuti povezanost između SOX2 i CdX2 /MUC2 (biljezi crijevne diferencijacije). Treba spomenuti, CdX2 ekspresija bila je značajno povezana s nižim TNM stadiju (p
= 0,002) te s nižim T fazi (p
= 0,007). Nadalje, iako ne statistički značajno, došlo je trend inverzni odnos između CdX2 i MUC5AC (p = 0,05) pregled.
Survival analize
5 godina ukupno preživljenje, na temelju praćenja 199 bolesnika, 35% (Dodatni file 1: Slika S1). Potom smo primijetili da izraz SOX2 u tumorima bila povezana u univarijatne analize, s ukupnim slabijeg opstanak (p Netlogu = 0,02), raslojavanju bolesnike u dvije prognostičke skupine (slika 2a), uz preživljavanje od 5 godina od 45 godina % za pacijente s SOX2- tumora u odnosu na 26% bolesnika sa SOX2 + tumorima. Naprotiv, CdX2 ekspresija povezana s poboljšanim ukupnim preživljavanje, iako razlika nije dosegao značajnost (podaci nisu prikazani). Slika 2 Kaplan-Meier krivulje koje pokazuju vjerojatnost ukupnog preživljavanja za pacijente s rakom želuca prema izrazu SOX2 (A) i prema fenotipa SOX2 molekularnoj - /CdX2 + i SOX2 + /CdX2 - (B). pregled temelju organizaciji SOX2 i CdX2 s lošije i bolje preživljavanje, kao i sve više i manje agresivne kliničkopatološkim mogućnosti, odnosno, mi i dalje proučavao ishod pacijenata prema molekularnim fenotipova definirane oba proteina. Četiri skupine bolesnika može se definirati (Dodatni datoteke 1: Slika S2) od kojih je jedan s najboljim preživljavanje imali tumore negativne za SOX2 i pozitivne za CdX2 (SOX2- /CdX2 +), dok je opstanak bio je najmanji u pacijenata koji nose tumor obrnuto profil, pozitivna za SOX2 a negativan za CdX2 (SOX2 + /CDX2-) (p pregled = 0,01) (Dodatni file 1: Slika S2 i Slika 2B). Slučajevi s ekspresijom SOX2 i CdX2 ili bez izražavanja ili markera pokazala je sličan i srednji opstanak (Dodatne datoteke 1: Slika S2). U SOX2- /CdX2 + i SOX2 + /CDX2- molekularne fenotipova, u usporedbi sa samim SOX2, predviđaju vrlo slične stope preživljavanja na 5-godina (49% vs 26% i 45% vs 26%, respektivno). Međutim, predviđeno 10 godina stopa preživljavanja na temelju izraza SOX2 samo je 34% (SOX2-) vs 22% (SOX2 +), dok pomoću molekularnih fenotipova SOX2 /CdX2, postaje 41% (SOX2- /CdX2 +) vs 14% (SOX2 + /CDX2-). pregled Mi dalje istraživali utjecaj na preživljenje molekularne fenotipova definirane SOX2 + vs SOX2-, CdX2 + vs CDX2- i SOX2- /CdX2 + odnosu SOX2 + /CDX2- stratificiran prema kliničkopatološkim parametrima. U tom slučaju, plotanje opstanak u skladu s bilo SOX2 ili status CdX2 sama dala značajni prognostički razlike za prvo, u nekim parametrima (intestinal- i širenje tipa tumora) i nema razlike za CdX2 sama (Dodatni file 1: Slike S3 i S4). Rezultati iz Cox proporcionalnom modelu prikazani su u dodatnu datoteku 1: Tablica S1. Još jednom, korištenje kombiniranog izražavanja SOX2 i CdX2 rafiniran prethodnih rezultata (Slika 3). SOX2 + /CdX2 - Profil predvidio značajno lošiji ishod bolesnika s crijeva (p Netlogu = 0,005) i širi (p pregled = 0,002) tumori, s omjerima opasnosti od 3,18 i 4,84, odnosno i onih bez znakova venske invazije (p
= 0,009), što predstavlja omjer rizika 3,84. Iako je na granici nije bilo značajno, sličan trend zabilježen je u bolesnika bez metastaza u limfnim čvorovima (p
= 0,08) (Slika 3). omjeri opasnosti i 95% intervali pouzdanosti za sve skupine prikazani su detaljno opisani u tablici 2 i ostati značajna nakon prilagodbe za dob i spol u multivarijatne analize. Slika 3 Kaplan-Meier krivulje koje pokazuju vjerojatnost ukupnog preživljavanja za pacijente s rakom želuca prema fenotipa SOX2 molekularnoj - /CdX2 + i SOX2 + /CdX2 - stratificiran prema kliničkopatološkim parametrima: Lauren klasifikacija (A), Ming klasifikacija (B) , vensku invazija (C) i metastaze u limfne čvorove (D). pregled Tablica 2. Cox proporcionalnih rizika Modeli opstanak kao funkcija molekularnih fenotipova (SOX2 + /CDX2- vs SOX2- /CdX2 +) za svaku kliničkopatološkim parametar
parametara
omjer rizika (95% CI)

Neprilagođen
P
Adjusteda
P

Općenito
1,95 (1,15-3,31) pregled, 0,01 pregled 1,90 (1,10-3,28)
0,02 pregled Lauren klasifikaciju pregled crijevni tipa pregled, 3,18 (1,33-7,58)
0,009 pregled 2,93 (1,21-7,10)
0,02 pregled difuzno tip pregled 1,35 (0,35-5,17) pregled 0.7 pregled Neklasificirani pregled 1,34 (0,60-3,02)
0,5 pregled, razvrstavanje Ming pregled širi pregled 4,84 (1.64-14.29)
0.004
4,53 (1.29-15.85)
0,02 pregled Invazivni pregled 1,13 (0,60-2,13) pregled 0.7 pregled vaskularnu invaziju pregled Negativna pregled 3,84 (1,30 - 11,35) pregled, 0,02 pregled 3,82 (1,29 - 11,40)
0,02 pregled Pozitivan pregled 1.10 (0.60- 2,02)
0,8 pregled, N pozornicu pregled N0 pregled 2,96 (0,82 - 10,65) pregled 0.1 pregled, 3,98 (0,72 - 21,83) pregled 0.1 pregled, N + pregled 1.29 ( 0,72-2,30) pregled 0.4 pregled naziv: CI pregled interval pouzdanosti
korekciju dobi i spolu (Multivarijatna analiza pomoću Cox regresijska modela) pregled SOX2 pojačanje pregled obzirom na to da gen.. amplifikacije događaj tumor specifični za maligne transformacije, a da se SOX2 mjesto je podvrgnut ovom promjene drugih tumora, odnosno pluća i jednjaka [17], pretpostavili smo da SOX2 pojačanje može objasniti ekspresiju i heterogenost, unutar i između želučanih tumora. Potpora tu hipotezu, istraživanje provedeno na Oncomine baze podataka pokazala je da SOX2 rangiran među prvih 10% gena s brojem kopija dobiva na karcinoma želuca (dodatne datotečne 1: Slika S5).
Temelju imunohemije podataka, odabrali smo 14 slučajeva s SOX2 izražavanje i 7 negativnih slučajeva analizirati pomoću FISH testa 2-boje. Uočili smo da je SOX2 je pojačan na 14% (2/14) slučajeva s izrazom i niti u jednom od slučajeva bez izražavanja (0/7). Predstavnik pozitivan slučaj i za izražavanje SOX2 i pojačanje prikazan je na slici 4A i B. A slučaj sa SOX2 izražavanja, ali ne i pojačanje prikazan je na slici 4C i D. Osim toga, analiza FISH pokazali prisutnost visokog stupnja broj kopija dobitak i heterogenost unutar tumora, primijetio ne samo s ciljnom sonde za SOX2 pregled locus, ali i sa referentnom sondom, koja se nalazi na 3p polugu (dodatne datotečne 1: Slika S6). Slika 4 Želučani slučajeva raka s ekspresijom proteina SOX2 (A i C) mogu predstaviti sa ili bez pojačanja SOX2 (B i D, respektivno) određena FISH. Zeleno označeni probe ciljati SOX2
, dok crvena označene probe ciljati 3p ruku. Jezgre su obojene sa DAPI (plava). (E) Šezdeset dva gDNA uzoraka raka želuca su ocijenjeni status SOX2 broj kopija, au odnosu na normalne sluznice želuca (kalibrator). (F) broj SOX2 kopija značajno povezana s ekspresije proteina, koja se određuje IHC (p izvoznici < 0,05).
Da pojasnimo učestalost SOX2 pregled locus broja kopija promjene u rak želuca, proveli smo jedan primjerak -broj PCR korištenjem gDNA od 62 slučajeva raka želuca, koristeći 'RNA-p pregled sondom koja se nalazi u kromosomu 14, kao referenca. Većina uzoraka (93%) prikazani neki stupanj SOX2 pregled kopirati broj varijacija, u rasponu od 3 do 9 kopija (Slika 4e). Značajna pozitivna veza između broja kopija dobitka i izražavanja SOX2 (p izvoznici < 0,05). Zabilježena je (Slika 4f) pregled Rasprava pregled rak želuca je bolest s više ishoda koji se ne mogu predvidjeti koje kliničkopatološkim mogućnosti sami [6]. Prema tome, identifikacija molekularnih biomarkera koji mogu omogućiti daljnje ishod stratifikacijske i liječenje odluka je od kritične važnosti.
U ovom istraživanju smo karakterizira ekspresija faktora transkripcije SOX2 na karcinoma želuca i to u vezi s kliničkopatološkim značajkama i diferencijaciju markera naime MUG5AC (želučana marker) i CdX2 i MUC2 (crijevne markeri). To je dovelo do identifikacije dva različita prognostičke skupine, na temelju SOX2 izraza, koji bi mogao biti dodatno oplemenjena uzimajući u obzir u kombinaciji izraz s CdX2. Konačno, raspao se na heterogenost SOX2 pregled lokusa i kromosoma 3 broja kopija u raka želuca, što pokazuje povezanost između povećanog broja kopija i izražavanja SOX2 proteina.
Ključni nalaz ovog istraživanja bio je promatranje sama da SOX2 izraz, i dalje oplemenjena kombinaciji s CdX2, omogućuje slojevitost pacijenata u skupine potpuno različitim kliničkim ishodima. Osim toga, kada smo u kombinaciji tih molekularnih profila s kliničkopatološkim podataka, postalo je jasno da je SOX2 + /CdX2 - profil povezana s lošijom prognozom, u okviru podskupine tumora koji općenito imaju bolju prognozu: crijevna tipa , širi tipa i bez znakova venske invazije [21, 22]. Iako nije statistički značajna, isti trend zabilježen je kod tumora koji prezentiraju bez metastaza u limfnim čvorovima. Ovi molekularni profili pokazuju drugačije biološko ponašanje tumora najvjerojatnije zbog progresije bolesti ili otpora liječenja i može se koristiti za podučavanje učinkovitiju terapiju ili follow-up rasporedi.
Naime, kao što je limfni čvor metastaziranje je jedan od glavnih rizika čimbenici za želučane recidiva raka, nakon R0 operacije, svi bolesnici koji se metastaze u limfne čvorove primanje adjuvantne terapije [23]. Međutim, naši rezultati pokazuju da pacijenti bez tog faktora rizika, i na taj način se ne liječi, predstaviti izrazito lošiji ishod kada je tumor predstavlja s SOX2 + /CdX2 - molekularni profil. Ovo stavlja naprijed hipotezu da, u roku od N0 tumora, pacijenti unutar ove molekularne podskupine će vjerojatno imati koristi od adjuvantne terapije. Ipak, ova promatranja zahtijevaju provjeru valjanosti u većim skupinama, a to će također biti vrlo informativan dodati kliničke podatke o liječenju pacijenta.
SOX2 također pojavljuje kao potencijalna meta za nove terapijske intervencije. Iako transkripcijski faktori nisu klasični ciljanih lijekova, pristupe terapiji SOX2 ciljani se već obratili kod raka dojke.

• Glutation gen GSTM1 S-transferaza, interakcija gena gena i rak želuca osjetljivost: dokazi iz ažurirani meta-analize
• Dašak svježeg zraka: istraživanje kvalitete poboljšanje usporedbom sa zračnom cirkulacijom tehnike u odnosu na klasične tehnike kako bi se spriječilo nazogastrične sonde disfunkciju