Imunohistocheminiais molekulinės fenotipų Skrandžio vėžio remiantis SOX2 ir CDX2 prognozuoti pacientų rezultatus

Imunohistocheminiais molekulinės fenotipų Skrandžio vėžio remiantis SOX2 ir CDX2 prognozuoti pacientų rezultatus
Anotacija
faktai
skrandžio vėžys išlieka rimta sveikatos susirūpinimą visame pasaulyje. Pacientai būtų labai naudinga naujoms biologinių žymenų, kad prognozuoti rezultatus tiksliau atradimas ir leisti geresnį gydymą ir tolesnius sprendimus. Čia mes naudojamas retrospektyvinę, stebimasis tyrimas, siekiant įvertinti raišką ir prognostinė vertė transkripcijos veiksniai SOX2 ir CDX2 skrandžio vėžio.
Metodai
SOX2, CDX2, MUC5AC ir MUC2 išraiška buvo vertinami 201 skrandžio navikų imunohistocheminiu , SOX2 ir CDX2 išraiška buvo kryžminami su klinikos ir tolesnių duomenų, siekiant nustatyti jų poveikį naviko elgesį ir rezultatus. Be to, SOX2
lokusas kopijos numerį statusas buvo įvertintas žuvys (n = 21) ir kopijų skaičiaus kitimas Analizės (n = 62).
Rezultatai
SOX2 buvo išreikšta 52% skrandžio navikų ir buvo reikšmingai susijęs su vyriškos lyties, T etape ir N etape. Be to, SOX2 išraiška prognozuojama skurdesnė pacientų išgyvenimą, o kartu su CDX2 apibrėžta du molekulinius fenotipų, SOX2 + CDX2 - palyginti SOX2 -CDX2 + kad prognozuoti blogiausias ir geriausias ilgai terminas pacientų rezultatas. Šie profiliai kartu su klinikos parametrų stratifikuoti pacientų prognozę su žarnyno ir plečia navikų ir tie, kurie neturi požymių venų invazijos. Galiausiai, SOX2
lokusas kopijų skaičiaus prieaugis buvo rasta 93% mėginių pasiekiančių amplifikacijos ribą 14% ir ženkliai Bendraudami su baltymų išraiška.
Išvados
Mes parodėme, pirmą kartą, kad SOX2 derinama su CDX2 ekspresijos profilio skrandžio vėžio atskirti pacientus į skirtingas prognostinių grupių, papildyti klinikos informaciją. Mes taip pat įrodyti molekulinė mechanizmą SOX2 išraiška į skrandžio vėžio atvejų pogrupyje.
Raktiniai žodžiai
SOX2 CDX2 Skrandžio vėžio prognozė Išgyvenimo faktai
Skrandžio vėžys yra viena iš dažniausiai diagnozuojama vėžio, o dabar trečioji pagrindinė priežastis, vėžio mirčių pasaulyje [1]. Lauren klasifikacija skirsto skrandžio vėžio į dvi pagrindines histologinių tipų: žarnyno ir difuzinis [2]. Jie pateikia skirtingas morfologines, klinikinius ir epidemiologinius funkcijų ir yra manoma, kad sukurti iš nepriklausomų molekulinius mechanizmus aktyvacijos. Epidemiologiniai duomenys rodo, kad daugeliu atvejų, skrandžio vėžys nekyla de novo
nuo įprasto skrandžio epitelį, o rezultatus iš daugiapakopį procesą, po kito genetinių ir epigenetinių pokyčių kelių genų. Priešingai difuzinio tipo, už kurį lemiantį pažeidimai nėra gerai žinomi, renginių pirmaujančių skrandžio vėžio žarnyno tipo perėmimas yra gerai aprašytas. Pagal Correa kaskados, jis vystosi laipsniško būdu, paprastai inicijuoja uždegiminiu procesu sukeltos Helicobacter pylori pervežimas, kuri gali progresuoti iki Daugiažidininės atrofijos gastritas, žarnyno Metaplasia (IM), displazija ir pagaliau adenokarcinoma [3].
nors ten buvo pastovus mažėjimas skrandžio vėžio atvejų pasaulyje, Expansion ir senėjimas pasaulio gyventojų prognozuoja bylų skaičiaus padidėjimą ir, nepaisant pastarojo meto įvykius diagnostikos ir gydymo, skrandžio vėžiu sergančių pacientų palaikų prognozė prasta. Tai reiškia, kad 5 metų išgyvenamumas ne daugiau kaip 25%, Europoje [4]. Dauguma skrandžio vėžiu sergantiems pacientams Išplėstinė ligą diagnozuoti, kuriems vienintelė galimybė išgydyti remiasi visiškai chirurginis pašalinimas naviko, turintys didelę limfmazgių skrodimo, kuris gali būti papildytas neoadjuvantu ar palaikomoji chemoterapija administravimo [5]. Svarbiausia prognostinis faktorius turi įtakos išlikimui, taip pat gydymo pasirinkimas yra TNM stadija. Tačiau papildomas sluoksnis sudėtingumo kyla iš stebėjimo, kad pacientai su tuo pačiu sustojimo dažnai rodo kitą klinikinį raidą, išryškinant skrandžio vėžio [6] įvairiapusiškumą. Tai rodo, kad unikalių būdingas biologines savybes šių navikų gali žymiai paveikti jų agresyvų potencialą. Todėl, vis dar susiduriama su neatidėliotinu poreikiu atrasti papildomus prognozės biologinius žymenis prognozuoti rezultatus tiksliau ir, kaip rezultatas, padės padaryti geriau pagrįstus sprendimus dėl gydymo, atsižvelgiant į terapiją. Kaip navikų, kurie apskritai diferencijuotų elgtis mažiau agresyvus mados, mes suabejojo ​​dviejų diferenciacijos žymekliai, SOX2 ir CDX2 aktualumą, biologiniam elgesį skrandžio vėžio. Šie žymenys skirtingai išreiškiama palei įvykių, kurie veda į skrandžio vėžio ir yra glaudžiai susijęs su skrandžio ir žarnyno diferenciacijos, atitinkamai [7].
CDX2 grandinės yra žarnynas konkrečių homeozinis genas transkripcijos faktorius, kurio funkcija užtikrina kūrimas ir priežiūra žarnyno diferenciacija žarnyne ir negimdinio svetainių, kurios buvo gerai nustatyta gyvūnų modeliais [8, 9]. Ji yra plačiai žinoma, kad CDX2 yra išreikšta žmogaus žarnyno metaplazijos skrandžio ir stemplės [10]. Buvo parodyta, taip pat turi būti išreikštas displazija taip stiprinant kaip progresavimo biologinis į į priešvėžine etapuose skrandžio kancerogenezėje [11] savo vaidmenį.
SOX2 yra iš SOX narys (SRY susijusių HMG langelis) šeimos transkripcijos veiksnių , koduotas labai konservatyvios, vieną egzono geno. SOX2 vaidina skirtingus vaidmenis visoje plėtros ir ląstelių diferenciacijos, pirmasis orchestrating žinduolių embriogenezę [12], o vėliau prisideda prie normalaus morfogenezę ir homeostazę iš Priekinis žarna gautas epitelyje stemplės, plaučių ir trachėjos [13]. Suaugus, SOX2 yra išreikšta audinių, ty į suragėjusių epitelio pamušalas stemplę ir liaukinio epitelio skrandžio įvairovė. Ji buvo parodyta, pelėms, kad Sox2 išraiška prisideda prie visų ląstelių linijų randamą skrandžio, tai rodo, svarų indėlį skrandžio diferenciacijos laipsnį [14]. Be to, nenormalus išraiška SOX2 buvo pastebėta, į navikų smegenų, krūties, plaučių ir stemplės [15-17]. Tačiau, skrandžio vėžio kontekste, jo vaidmuo išlieka mįslingas ir turi papildomo paaiškinimo [18-20]. Be to, jo sąveika su CDX2 lieka neištirta.
Mūsų tikslas buvo išanalizuoti klinikinę svarbą SOX2 ir CDX2 išraiška skrandžio vėžio biologija. Gauti rezultatai rodo, kad jų raiška pirminių navikų turi svarbią prognostinę vertę skrandžio vėžiu sergantiems pacientams.
Metodai
Žmogaus audiniai ir DNR mėginiai
du šimtai vienas atvejai formalino fiksuoto parafiną įterptųjų (FFPE ) mėginiai iš pacientų, sergančių skrandžio adenokarcinoma atliekama operacija ne Centro Hospitalar S. João, Porto, Portugalija nuo 1988 ir 2010 buvo tirta. atrinktais atvejais buvo tie turimą parafiną įdėta medžiaga, klinikos ir tolesnės duomenys, gauti iš patologijos ir chirurginiai departamentai Centro Hospitalar S. João. Nuo šešiasdešimt septyni mėginiai buvo numatyta kaip audinių microarray (TMA), 2 kartotinių branduolių kiekvieno mėginio, iš naviko ir audinių biobanków paties patologijos skyrius. Naviko genomo DNR (gDNA) buvo gauta iš 62 atvejų įtraukti į PMA. gDNA taip pat buvo išgauti iš FFPE mėginių dviejų normalių skrandžio mucosas naudojant genomo DNR gryninimo rinkinį (Citomed, Lisabona, Portugalija), ir naudojamas kaip kontrolės. Visi mėginiai iš biobanków buvo gauti informuoto sutikimo pacientų. Iš retrospektyvinių pavyzdžių naudojimo, iš kurios informuotas sutikimas negali būti gautas leidžiama mokslinius tyrimus pagal Portugalijos teisės aktus. Šis tyrimas buvo patvirtintas etikos komisijos Centro Hospitalar S. João.
Imunohistocheminis
FFPE audinio skyriai su 4 pm nuo chirurginių egzempliorių ir TMA buvo atliktas imunohistocheminis už SOX2, CDX2, MUC5AC ir MUC2 po standartines metodikas. Trumpai tariant, po devaškavus ir Rehidratacija, antigenas paieška buvo atliekama IHC-Tek epitopq Retrieval Steamer Set (IHC Pasaulis, Woodstock, MD, JAV), už 40 minučių su 10 mm citrato buferiu, kurio pH 6,0 (CDX2) arba 10 mm, pH 8,0 EDTA (SOX2). Desialylation buvo atlikta MUC2 aptikimo, su 0,1 U /ml neuraminidazės iš Clostridium perfringes
VI tipas (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, JAV) natrio acetato buferio pH 5,5 už 2h 37 ° C temperatūroje. Endogeninė peroksidazės buvo užblokuotas su 3% vandenilio peroksido metanolį, 10min. Inkubacijos su pirminių antikūnų CDX2 (01:50 skiedimo, CDX2-88 klonas, Biogenex, San Ramon, Kalifornija, JAV), MUC5AC (01:10 praskiedimo, CLH2 klonas) ir MUC2 (01:10 skiedimo, PMH1 klonas) buvo atliktas per naktį, esant 4 ° C temperatūroje. tada dalys buvo inkubuotos su biotino žymėto triušio anti-pelės antrinio antikūno, o po to avidino /biotino-peroksidazės aptikimo sistema (Vectastain ABC rinkinio, Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA). Dėl SOX2 dažymo, inkubacinis su pirminiais antikūnais (1:50 praskiedus, SP76 klonas, Mobilusis Marque, vėgėlė, CA, JAV) buvo atliktas 1h kambario temperatūroje ir aptikimo buvo padaryta naudojant Dako NEKILNOJAMASIS ™ Įsivaizduoti ™ aptikimo sistema peroksidazės /DAB + (DAKO, Glostrup, Danija), pagal gamintojo instrukcijas. Aptikta išraiška buvo atliktas su 3,3'-diaminobenzidinu (DAB) (Sigma, Šv. Louis, MO, USA) audinio skyriai buvo counterstained su Gill hematoksilinu (Leica Microsystems, Amersham, Bucks, JK), dehidratuoti, patikslinti ir sumontuoti. Normalus skrandžio gleivinė buvo naudojamas kaip teigiama kontrolė SOX2 ir MUC5AC saviraiškos ir normalaus storosios žarnos gleivinėje buvo naudojamas kaip teigiama kontrolė CDX2 ir MUC2 išraiška. Atvejai buvo laikomas teigiamu, kai daugiau nei 5% ląstelių buvo tamsintas su kiekvienu antikūnų su sutarimu trys stebėtojai (VC; LD ir RA).
Fluorescencinis in situ hibridizacijos (FISH
)
žuvis buvo naudojamas įvertinti SOX2
amplifikacijos būklės 21 mėginių, naudojant 2-spalvų testą, kaip aprašyta Bass kt
[17]. Zondas apimanti locus 3q26.33 (AKK klonas BTD 2348H10) buvo siekiama nustatyti SOX2
kopijuoti skaičių ir buvo lyginamas su nuoroda zondo hibridizuojasi į 3p22.3-3p22.2 (AKK klonas RP11-286G5) įsigijo nuo Invitrogen (Carlsbad, CA, JAV). Tikslinė zondas buvo paženklinti digoxigenin (DIG-11-UTP, Roche, Manheimas, Vokietija) ir aptinkamas kartu su anti-digoxigenin-fluoresceino antikūnų (Roche Diagnostics GmbH, Manheimas, Vokietija) ir atskaitos zondo buvo paženklinti biotinu (BioPrime® DNR ženklinimo sistema, Invitrogen, Karlovi Varai, CA, JAV), ir nustatė su CY 3-avidino antikūnų (Jacksonas Immunoresearch Lab, Vakarų Grove JAV).
Keturi mkm skaidres iš kiekvienos skrandžio adenokarcinoma mėginyje buvo deparaffinised, rehidrataciją ir įdedamas į įkaitintą tirpalo NaSCN 1M 80 ° C temperatūroje 10 min. Mėginiai buvo suardomas su 6 mg /ml pepsino (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, JAV), HCl 0.02N, pH 2 už 30 min 37 ° C temperatūroje. Zondas mišinys 50% formamido į 2 × SSC buvo codenatured su branduolio DNR 94 ° C 3min. Hibridizacija buvo atlikta 30h 37 ° C temperatūroje. Branduoliai buvo counterstained su DAPI-Vectashield montavimo tirpalo (Vektorius, Burlingame, JAV). Kiekvienu atveju, iš 67 ląstelių minimalus buvo analizuojami fluorescencijos mikroskopu (Zeiss® Z1 AXIO) ir vaizdai buvo įsigytas su 1000 × priartinimas, naudojant Carl Zeiss AXIO cam MRM ir Axiovision Rel. 4.8 programinė įranga. Skirtumas tarp SOX2 numerį ir pateikti nuorodą zondas signalų santykis buvo apskaičiuotas kiekvienos ląstelės atskirai ir santykio vidurkis buvo nustatytas kiekvienu konkrečiu atveju. Geno buvo laikoma, kai vidurkis buvo ≥2.
Kopijuoti Taškų variantą (CNV) tyrimams Viesbutis The CNV tyrimas buvo atliktas naudojant specialią TaqMan® kopijos numeris Analizės (taikoma BIOSYSTEMS Foster City, CA, USA) Po gamintojo instrukcijas. Trumpai tariant, Multiplex PGR reakcijų dėl SOX2
(tikslinės) ir RNaze P
(endogeninė kontrolė) buvo atliktas ABI Prism7500 Fast Realaus laiko PGR sistema naudojant programinę įrangą v2.0 (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA ). Dvidešimt nanogramų iš gDNA ir ne šablonų kontrolės išanalizuoti keturiais egzemplioriais. Normalus skrandžio gleivinės mėginiai buvo naudojamas kaip kalibravimo medžiagų. Kiekybinis SOX2
genų kopijų skaičiaus buvo padaryta naudojant ΔΔCt metodo ir duomenų analizė buvo atlikta pagal CopyCaller programinės įrangos v2.0 (Applied Biosystems, Foster City, CA, JAV). Geno ekspresija buvo apibrėžta kiekvieną kartą, kai genas kopijų skaičiaus buvo 2 kartus didesnis, nei, kad iš įprasto skrandžio gleivinės. Sulenkite padidėjimą tarp 1,5 ir 2 buvo laikoma kopija skaičius pelnas.
Statistinė analizė
chi-square testą buvo naudojamas siekiant įvertinti skirtumų klinikos ypatybes visoje kategorijų SOX2 ir CDX2 išraiškos reikšmę, išskyrus atvejus, su amžiumi, kur reikšmė skirtumų priemonėmis buvo apskaičiuotas naudojant T
-test. Pacientų bendras išgyvenamumas buvo apskaičiuojamas naudojant Kaplan-Meier metodą ir skirtumus žalios išgyvenimo kreivių buvo išbandyti log-rank testą reikšmę. Cox proporcinės pavojai modelis buvo naudojamas apskaičiuojant vienmatės ir daugiamačių pavojaus santykį. Stebėjimo trukmės mediana laikas išlikusių pacientų buvo 62 mėnesiai. 5- ir 10 metų išgyvenamumas buvo įvertintas naudojant gyvenimas stalo metodą. Skirtumai buvo laikomi statistinis reikšmingas, kai P
vertės buvo < 0,05. Tyrimai buvo atliekami naudojant SPSS programinę įrangą v21.0 (Čikaga, IL, JAV) ir Stata v11 (College Station, TX, Jungtinės Amerikos Valstijos).
Rezultatai
SOX2 išraiška skrandžio karcinoma
klinikos ypatybes 201 skrandžio vėžio atvejais, taip pat ekspresijos profilius SOX2, CDX2, MUC2 ir MUC5AC apibendrinti 1 lentelėje atominės SOX2 išraiška buvo rasta 52% (104/201) skrandžio karcinoma ir išraiška buvo nevienalytė tarp navikų ir per (paveikslas 1A, B ir C). 13% (18/134) atvejų SOX2 išraiška buvo didesnis invazinės priekyje (1D ir E pav) (šis vertinimas buvo atliktas tik tais atvejais, neįskaičiuotos į PMA, kur šis vertinimas buvo neįmanoma) .table 1 Santrauka iš klinikos parametrų skrandžio vėžio pagal SOX2 ir CDX2 pervežimas pervežimas SOX2 pervežimas pervežimas CDX2 pervežimas pervežimas pervežimas Neigiama
išraiškos pervežimas Teigiamas


Neigiama

Teigiamas
N.
%
N.
%

psl
N.
%
N.
%
psl
amžius, metų1
vidurkis ± SD
65,8 ± 12,7
63,4 ± 13,5
0,2
64,1 13,6
± 65,2 ± 12,6
0,6
mediana (klasės)
69 (34- 85)
66,5 (24-89)
69 (24-89)
67 (36-89)
Sex1
Vyras
52
41,9
72
58.1
0,02
75
60,5
49
39,5
0,1
Moteris
45
58,4
32
41,6
38
49,4
39
50,6
TNM stage2
I /II
35
54,7
29
45,3
0,09
26
40.6
/IV
59
44,7
73
55,3
83
62,9
49 <
38
59,4
0,002 III Br> 37,1
T Stage3
T1 /T2
22
62,9
13
37,1
0,03
13
37,1
22
62,9
0,007
T3 /T4
75
45,5
90
54,5
60,0
99 66
40,0
N. stage1
N0
28 62,2
17
37,8
0,03
20
44,4
25
55,6
0,07
n +
69
44,2
87
55,8
93
59,6
63
40,4
Margins4
R0
85
47,5
94
52,5
0,5
98
54,7 81 45,3 0,2
R1
11
55,0
9
45,0
14
70,0
kraujagyslių invasion4
Neigiama
39
55,7
31
44,3
0,1
37
52,9
6
30,0
33 47,1 0,5
teigiamą
57
44,2
72
55,8
75
58,1
54
41,9
Láuren5
žarnyno
44
49,4
45
50,6
0,9
45
50,6
44
49,4
0,3
Difuzinė
20
48,8
21
63,4
36,6
15
51,2
26 Nenaudokite
31
46,3
36
53,7
40
59.7
27
40,3
Ming6
išsiplečiantis
32
53,3
28
46,7
0,5
28
46,7
32
53,3
0,1
infiltracinė
60
45,8
71
54,2
81
61,8
50
38,2
Nenaudokite
2
66,7
1 33,3
1
33,3
2
66,7
SOX21
Neigiama
58
59,8
39
40,2
0,3
teigiamą
55
52,9
49
47,1
CDX21
Neigiama
58
51,3
55
48,7
0,3
teigiamą
39
44,3
49
55,7
MUC5AC1
Neigiama
39
44,8
48
55,2
0,4 ​​
42
48,3
45
51,7
0,05
Teigiamas
58
51,3
55
48,7
70 43
61,9
38,1
MUC21
Neigiama
69
48,6
73
51,4
0,9
84
52,2
58
40,8
0,1
Teigiamas
27
48,2
29
51,8
26
46,4
30
53,6
1N = 201; 2N = 196; 3N = 200; 4N = 199; 5N = 197; 6N = 194.
1 pav SOX2 baltymų ekspresija skrandžio karcinoma, aptinkama imunohistocheminiu. (A), heterogeniškumas SOX2 raiškos skrandžio navikų. Per tą patį auglio mėginį, vietovės su aukšto lygio SOX2 būtų laikomasi (b) arti srityse su mažesnėmis ekspresijos lygio SOX2 (C). (D, E) SOX2 išraiška invazinių navikų priekyje.
Pirmyn, mes įvertinti, ar SOX2 išraiška koreliuoja su klinikos ypatybes atvejais. Ši analizė parodė, kad SOX2 išraiška buvo reikšmingai susijęs su vyriškos lyties (p = 0,02 pervežimas), su aukštuoju T etape (psl
= 0,03), o buvimas sritiniuose metastazių limfmazgiuose (N etapas) (p
= 0,03). Kiti klinikos parametrai, kurie įtraukti amžių, TNM stadija, naviko klirensas ne rezekcijos maržos (R kategorija), kraujagyslių invazija, Lauren klasifikavimo ir Mingas klasifikavimo nebuvo reikšmingai susijęs su SOX2 išraiškos (1 lentelė).
Nuo SOX2 yra susijęs su skrandžio diferenciacija [14], mes studijavo, ar tai buvo prižiūrimi vėžio, naudojant MUC5AC kaip skrandžio persekiotoją. Tačiau nė asociacija buvo nustatyta tarp SOX2 ir MUC5AC išraiška. Be to, nėra atvirkštinio asociacija buvo nustatyta tarp SOX2 ir CDX2 /MUC2 (naudojamas kaip žymenų žarnyno diferenciacijos). Pažymėtina, CDX2 išraiška buvo reikšmingai susijęs su mažesnė TNM etape (psl pervežimas = 0,002) ir su mažesniu T etape (psl pervežimas = 0,007). Be to, nors statistiškai nereikšmingas, ten buvo tendencija atvirkštinis ryšys tarp CDX2 ir MUC5AC (p =
0,05).
Išgyvenamumo analizė
5 metų bendras išgyvenamumas, remiantis tolesnių 199 pacientai, buvo 35% (Papildoma failą 1: S1 paveiksle). Mes šalia pastebėjo, kad SOX2 išraiška navikų buvo susijęs, kad pagal vieną požymį analizės, o bendras prastesne išlikimo (p
= 0,02), stratifikuoti pacientus į dvi prognostinių grupių (2a pav), su 5 metų išgyvenamumas 45 % pacientams, sergantiems SOX2- navikų, palyginti su 26% pacientų, kurių SOX2 + navikų. Priešingai, CDX2 išraiška susijęs su didesnės bendros išlikimo, nors skirtumas nepasiekė reikšmę (duomenys neparodyta). 2 paveikslas Kaplan-Meier kreivė, rodantys bendrą išgyvenamumą tikimybę pacientams su skrandžio vėžiu, pagal SOX2 išraiškos (A) ir pagal molekulinę fenotipų SOX2 - /CDX2 + ir SOX2 + /CDX2 - (B).
Sprendžiant iš SOX2 ir CDX2 su blogiau ir geriau išgyventi, taip pat daugiau ir mažiau agresyvių klinikos funkcijų, atitinkamai asociacijos, mes toliau studijavo pacientų rezultatus pagal molekulinius fenotipų apibrėžtų abiejų baltymų. Keturi grupės pacientams gali būti apibrėžiamas (papildomas failą 1: S2 paveikslas), kuris vienas su geriausiais išlikimo turėjo auglius, neigiamų SOX2 ir teigiamų už CDX2 (SOX2- /CDX2 +), o išgyvenimo trukmė buvo mažiausia pacientams slėpimas navikai atvirkštinis aprašymą, teigiamas SOX2 ir neigiamas CDX2 (SOX2 + /CDX2-) (psl
= 0,01) (Papildoma failą 1: S2 pav ir 2B pav.) Atvejai su išraiška tiek SOX2 ir CDX2 ar be išraiškos arba persekiotoją eksponuojami panašų ir vidutinio išlikimą (papildomas failo 1: S2 pav). Į SOX2- /CDX2 + ir SOX2 + /CDX2- molekulinės fenotipų, palyginti su vien SOX2, prognozuoti labai panašūs išgyvenamumo dažnis 5 metus (49% vs 26% ir 45%, palyginti su 26%, atitinkamai). Tačiau prognozuojama 10 metų išgyvenamumas remiantis vien SOX2 išraiška yra 34% (SOX2-) vs 22% (SOX2 +), kadangi naudojant SOX2 /CDX2 molekulinius fenotipų, ji tampa 41% (SOX2- /CDX2 +) vs 14% (SOX2 + /CDX2-).
Mes taip pat tyrinėjo pacientams "išlikimo molekulinių fenotipų apibrėžtų SOX2 + vs SOX2-, CDX2 + vs CDX2- ir SOX2- /CDX2 poveikį + palyginti SOX2 + /CDX2- suskirstytos pagal klinikos parametrus. Šiuo atveju, braižymo išlikimą pagal abiejų SOX2 ar CDX2 statuso vien davė reikšmingų prognozinius skirtumus buvęs, kai parametrų (intestinal- ir plėsti tipo navikų) ir jokių skirtumų CDX2 vienas (Papildoma failą 1: Skaičiai S3 ir S4). Rezultatai nuo Cox proporcinio modelio pateikti papildomų failų 1: Stalas S1. Dar kartą, vadovaujantis Kombinuotosios išraiška SOX2 ir CDX2 naudojimas rafinuoti anksčiau gautais rezultatais (3 pav.) SOX2 + /CDX2 - profilis numatė žymiai prasčiau rezultatus pacientams, sergantiems žarnyno (p
= 0,005) ir plečiasi (psl
= 0,002) navikai, kurių pavojingumo santykis 3.18 ir 4,84, atitinkamai ir tų, be ženklų venų invazijos (psl pervežimas = 0,009), pristatydamas rizikos koeficientas 3.84. Nors ties riba nėra svarbu, panaši tendencija buvo stebima pacientams be metastazių limfmazgiuose (psl
= 0,08) (3 pav.) Rizikos santykis ir 95% pasikliautinieji intervalai visose grupėse pateikti išsamiai 2 lentelėje ir išlieka didelė po koreguojant pagal amžių ir lytį Dispersinės analizės. 3 Kaplan-Meier kreivė, rodantys bendrą išgyvenamumą tikimybę pacientams, sergantiems skrandžio vėžiu, pagal molekulinę fenotipų SOX2 - /CDX2 + ir SOX2 + /CDX2 - suskirstytos pagal klinikos parametrais: Lauren klasifikacija (A) Mingas klasifikacija (B) , venų invazija (C) ir metastazių limfinių mazgų (D). 2
Stalo Cox proporcinės rizikos Modeliai išlikimo kaip molekulinių fenotipų funkcija (SOX2 + /CDX2- vs SOX2- /CDX2 +), kiekvienam klinikos parametro pervežimas Parametras
šanso santykis (95% CI)

Nepakoregavus
P
Adjusteda
P

Apskritai
1,95 (1,15-3,31)
0,01
1,90 (1,10-3,28)
0,02
Lauren klasifikaciją
žarnyno tipo
3,18 (1,33-7,58)
0,009
2,93 (1,21-7,10)
0,02
Difuzinė tipo
1,35 (0,35-5,17)
0,7
Nenaudokite
1,34 (0,60-3,02)
0,5
Mingas klasifikacija
Plėsti
4.84 (1.64-14.29)
0,004
4.53 (1.29-15.85)
0,02
infiltracinė
1,13 (0,60-2,13)
0,7
kraujagyslių invazija
Neigiama
3.84 (1,30-11,35)
0,02
3.82 (1,29-11,40)
0,02
Teigiamas
1.10 (0.60- 2,02)
0,8
N. etapą
N0
2.96 (0,82-10,65)
0,1
3,98 (0,72-21,83)
0,1
n +
1.29 ( 0,72-2,30)
0,4 ​​
santrumpa: Ci
pasikliautinasis intervalas
a Pritaikytas amžių ir lytį (daugiamatė analizė, naudojant Cox regresijos modelį)
SOX2 amplifikacija
manydamos, kad geną.. stiprinimas yra navikas konkretaus renginio metu piktybinę transformaciją, ir kad SOX2 lokusas yra taikomos šio pakeitimo kitais navikais, ty plaučių ir stemplės [17], mes iškėlė hipotezę, kad SOX2 stiprinimas galėtų paaiškinti savo išraiška ir įvairiapusiškumą, tiek ir tarp skrandžio navikų. Parama šią hipotezę, apklausa atlikta remiantis Oncomine duomenų bazėje parodė, kad SOX2 reitinguojami tarp geriausių 10% genų kopiją skaičių laimėjimų skrandžio vėžys (Papildoma failų 1: S5 pav.)
Remiantis imunohistocheminis duomenimis, mes išrinkome 14 bylų su SOX2 išraiška ir 7 neigiami atvejai analizuoti pagal 2-spalvų FISH testą. Mes pastebėjo, kad SOX2 buvo papildyta 14% (2/14) atvejų su žodžio ir nė atvejų be išraiškos (0/7). Atstovas teigiamas atvejis tiek SOX2 saviraiškos ir stiprinimas yra parodyta 4A ir B paveiksle bylą SOX2 išraiška, bet ne amplifikacija yra parodyta 4C ir D pav Be to, FISH tyrimas parodė aukšto lygio kopija skaičius pelnas buvimą ir heterogeniškumas per navikų, pastebimas ne tik su tiksline zondo už SOX2
locus, bet taip pat su etalonine zondo, esančio prie 3p rankos (papildomas failą 1: S6 pav). 4 pav skrandžio vėžio atvejai SOX2 baltymų raiškos (A ir C) gali pateikti su arba be SOX2 amplifikacijos (B ir D, atitinkamai) nustatomas pagal žuvų. Žalioji paženklinti zondai nukreipti SOX2
, o raudonos paženklinti zondai nukreipti 3p ranką. Branduoliai dažomi su DAPI (mėlyna). (E), šešiasdešimt du gDNA skrandžio vėžio mėginiai buvo įvertintas SOX2 kopijavimo numeris Statusas ir, palyginti su normalaus skrandžio gleivinės (kalibratorius). (F), SOX2 kopija skaičius buvo reikšmingai susijęs su baltymų raiškos, nustatytas IHC (psl pervežimas < 0,05).
Paaiškinti SOX2 dažnį
lokusas kopijų skaičiaus pakitimai skrandžio vėžiu, Mes atlikome kopiją pagal skaitmeninį PGR naudojant gDNA iš 62 skrandžio vėžio atvejų, naudojant RNaze P
zondas esantis chromosomos 14 kaip nuoroda. Pavyzdžių (93%) Daugumos kai SOX2
kopijų skaičiaus kitimą, nuo 3 iki 9 kopijų (4e pav) laipsnis. Didelį teigiamą ryšys tarp kopijų skaičiaus padidėjimas ir SOX2 išraiškos (psl pervežimas < 0,05). Buvo pastebėta (4f paveikslas)
Diskusijos
Skrandžio vėžys yra liga, su keliais rezultatus, kurie negali būti prognozuojama vien klinikos funkcijų [6]. Vadinasi, molekulinių biologinių žymenų nustatymas, kuris gali leisti daugiau rezultatų stratifikacijos ir gydymo sprendimus yra labai svarbu.
Šiame tyrime mes būdinga, kad transkripcijos faktorius SOX2 skrandžio vėžiu išraiška ir susijusių su klinikos ypatybių ir diferenciacijos žymekliai būtent MUC5AC (skrandžio požymis) ir CDX2 ir MUC2 (žarnyno žymekliai). Tai buvo apie dviejų skirtingų tipų prognostinių grupių identifikavimo, remiantis SOX2 išraiškos, kuri galėtų būti dar labiau rafinuotas atsižvelgiant į bendrą išraišką su CDX2. Galiausiai, mes išardyti į SOX2 heterogeniškumas
lokuso ir chromosomos 3 kopijų skaičiaus skrandžio vėžiu, rodo asociaciją tarp padidėjusio kopijų skaičiaus ir SOX2 baltymų raiškos asociacija.
Pagrindinė išvada, šiame tyrime buvo pastebėjimas, kad SOX2 išraiška vienas, ir patikslinta pagal kartu su CDX2, leidžia pacientams suskirstymo į pogrupius, kurių gerokai skirtingų klinikinių rezultatų. Be to, kai mes kartu šiuos molekulinius profilius su klinikos duomenimis, tapo aišku, kad SOX2 + /CDX2 - profilis, susijęs su blogesne prognoze, per pogrupių navikų, kad apskritai turi geresnį prognozė: žarnyno tipo , plėsti tipo ir be jokių venų invazijos požymius [21, 22]. Nors nėra statistiškai reikšmingas, tas pats buvo pastebėta tendencija navikų keliančių be metastazių limfmazgiuose. Šių molekulinio profiliai rodo, skirtingu biologiniu elgesį naviko greičiausiai dėl to, ligos progresavimo arba atsparumo gydymo ir gali būti naudojamas nurodyti daugiau efektyvų gydymą arba tolesnių grafikus.
Pažymėtina, kad, kaip limfmazgių metastazės yra vienas iš pagrindinės rizikos veiksniai skrandžio vėžio pasikartojimo, po R0 operacijos, visi pacientai pristatantys limfos metastazes mazgas gauna adjuvantinis gydymas [23]. Tačiau, mūsų rezultatai rodo, kad pacientams, be šios rizikos veiksnys, todėl negydoma, pateikti stulbinamai blogiau rezultatus, kai navikas pristato su SOX2 + /CDX2 - molekulinė aprašymą. Tai iškelia hipotezę, kad per N0 navikų, pacientams, per šį molekulinės pogrupio tikriausiai naudos iš palaikomąja terapija. Nepaisant to, šie stebėjimai reikalauja patvirtinimo didesnėse kohortos ir taip pat būtų labai informatyvus pridėti klinikinę informaciją apie paciento gydymą.
SOX2 pat iškyla kaip galimą tikslo naujų terapinių intervencijų. Nors transkripcijos faktoriai nėra klasikiniai narkotikų tikslai, metodai SOX2 orientuojasi terapijos jau svarstomas krūties vėžio. Naujausioje studijoje, SOX2
genas buvo selektyviai tikslingai naudojant cinko pirštų remiantis dirbtinio transkripcijos veiksniai požiūrį, todėl jos labai specifinė, stiprus ir ilgalaikis žemyn reguliavimas, verčiant į susilpninto tumorogeniš-, tiek in vitro,

• Glutationo S-transferazės genas GSTM1, genų genų sąveika, ir skrandžio vėžys jautrumas: įrodymų atnaujintą meta analysis
• Šviežio oro gurkšnis: kokybės tobulinimą tyrimas lyginant žinutę techniką, palyginti su įprastinių technika oro cirkuliacijai išvengti nosies-skrandžio vamzdelį disfunkcija