Imunohistokemične molekularne fenotipi raka želodca, ki temeljijo na SOX2 in CDX2 napovedujejo outcome

bolnik imunohistokemičnim molekularne fenotipov raka želodca, ki temeljijo na SOX2 in CDX2 napovedati izid bolnikov
Abstract
Ozadje
raka želodca ostaja resen zdravstveni problem po vsem svetu. Bolniki, ki bi v veliki meri koristi od odkritja novih biomarkerjev, ki napovedujejo izid bolj natančno in omogočilo boljše obravnavanje in nadaljnje odločitve. Tu smo uporabili retrospektivno, opazovalne študije za oceno izraz in prognostični vrednost transkripcijskih faktorjev SOX2 in CDX2 pri raku želodca.
Metode
SOX2, CDX2, MUC5AC in MUC2 izraz so bili ocenjeni na 201 želodčnih tumorjev, ki imunohistokemijo . SOX2 in CDX2 izraz so križali z clinicopathological in nadaljnjih podatkov za določitev njihovega vpliva na vedenje tumorja in rezultatih. Poleg tega SOX2
locus copy stanje številka je bila ocenjena s FISH (N = 21) in kopiranje Število Sprememba Vsebnost (N = 62).
Rezultati
SOX2 je bilo izraženo v 52% vseh želodčnih tumorjev in pomembno je bilo povezana z moškega spola, stadij T in fazo N. Poleg tega SOX2 izraz napovedal preživetje slabše pacientov in kombinacija z CDX2 opredelila dva molekularne fenotipi, SOX2 + CDX2 - v primerjavi SOX2 -CDX2 +, da napovedujejo najslabše in najboljše dolgoročne izid nite pacientov. Ti profili v kombinaciji z clinicopathological parametri razsloji prognozo bolnikov s črevesnimi in širi tumorji in pri tistih brez znakov venske invazijo. Na koncu so SOX2
locus število kopij dobiček v 93% vzorcev, ki so dosegli prag ojačevanja v 14% in bistveno povezujejo z izrazom beljakovin najdemo.
Sklepi
smo pokazali, prvič, da SOX2 kombinaciji z CDX2 izražanja profil na raka želodca ločiti bolnike v različnih prognostičnih skupine, ki dopolnjuje clinicopathological informacije. Nadaljevali smo pokazati, molekularni mehanizem za SOX2 izražanja v podskupini primerov raka želodca.
Ključne besede
SOX2 CDX2 Rak želodca Prognoza Survival Ozadje
raka želodca, je ena od najpogosteje diagnosticiran raka in je sedaj tretji najpogostejši vzrok smrtnih primerov zaradi raka v svetu [1]. Laurén klasifikacija deli raka želodca v dve glavni histoloških tipov: intestinalni in difuzni [2]. Predstavljajo različne morfološke, klinične in epidemiološke značilnosti in so mislili, da razvijejo aktivacije neodvisnih molekularnih mehanizmov. Epidemiološke podatki kažejo, da v večini primerov ne želodčni rak ne pojavi de novo
od običajnega želodčnega epitela, temveč izhaja iz večstopenjski proces, z zaporednimi genetskih in epigenetskih sprememb v različnih genov. V nasprotju z vrsto razpršenega, za katere so predispozicije lezije niso uveljavljene, se zaporedje dogodkov, ki vodijo do raka želodca črevesne tipa dobro opisana. Po kaskade na Correa je, da razvija postopoma način, običajno začel z vnetnim procesom s Helicobacter pylori
sprožil, ki lahko napreduje multifokalnega atrofični gastritis, intestinalno metaplazijo (IM), displazije in končno adenokarcinom [3].
čeprav je bil upad incidence raka želodca globalno širitev in staranje prebivalstva na svetu napoveduje povečanje števila primerov in kljub najnovejšim razvojem v diagnostiki in zdravljenju, prognozo bolnikov z rakom ostankov želodčnih slaba. To pomeni 5-letno stopnjo preživetja ne več kot 25%, v Evropi [4]. Večina bolnikov z rakom želodca so napredovale bolezni ob diagnozi, za katere je edina možnost ozdravitve opira na popolno kirurško odstranitev tumorja, z obsežno seciranje na bezgavkah, ki jih je mogoče dopolniti z dajanjem neoadjuvantni ali adjuvantno kemoterapijo [5]. Najpomembnejši napovedni dejavnik, ki vpliva na preživetje, kot tudi izbira zdravljenja je faza TNM. Vendar pa dodatno plast kompleksnosti izhaja iz ugotovitve, da bolniki z istim uprizoritve pogosto kažejo drugačno klinično razvoj, s poudarkom na heterogenost rakom želodca [6]. To pomeni, da lahko edinstvenih bioloških lastnosti teh tumorjev bistveno vplival na njihovo agresivno potencial. Zato je še vedno nujno potrebno odkriti dodatnih prognostičnih biomarkerjev napovedati izid bolj natančno in, kot posledica, da bi se bolje informirane odločitve zdravljenja v zvezi z zdravljenjem. Kot tumorjev, ki so bolj diferencirane splošno obnašajo v manj agresiven način, smo spraševali o pomembnosti dveh diferenciacije označevalcev, SOX2 in CDX2, za biološko obnašanje želodčnega raka. Ti označevalci so različno izražena v verigi dogodkov, ki vodijo do raka želodca in so tesno povezane z želodca in črevesa diferenciacije oz. [7]
CDX2 je črevo specifične homeobox transkripcijski faktor, katerega funkcija skrbi za razvoj in vzdrževanje črevesne diferenciacija v črevesju in zunajmaternične spomenikov, ki je dobro uveljavljena v živalskih modelih [8, 9]. Znano je, da se CDX2 izražen v človeškem intestinalno metaplazijo želodca in požiralnika [10]. Izkazalo se je, da se izrazi tudi v displazija s čimer se krepi svojo vlogo kot biomarker za napredovanje v preneoplastičnih fazah želodca rakotvornosti [11].
SOX2 je član SOX (Sry, povezanih z HMG Box) družina transkripcijskih faktorjev , kodirana z visoko ohranjenem, enega gena eksonu. SOX2 igra različne vloge v celotni razvoj in diferenciacijo celic, najprej orchestrating na embriogeneze sesalcev [12], kasneje pa prispeva k normalni morfogenezi in homeostaze-foregut izhaja epitelij požiralnika, pljuč in sapnika [13]. V odrasli dobi, je SOX2 izražena v različnih tkivih, in sicer v skvamoznega epitelija sluznice požiralnika in žleznega epitelija v želodcu. Dokazano je, pri miših, ki Sox2 izražanje prispeva k vsem linije celične navadno najdemo v želodcu, kar kaže na pomemben prispevek za želodčni diferenciacije [14]. Poleg tega je bila nenormalno ekspresijo SOX2 opazili pri tumorjih možganov, dojke, pljuč in požiralnika [15-17]. Vendar pa je v okviru želodčni raka, njena vloga je še vedno zmedo in potrebuje dodatna pojasnila [18-20]. Poleg tega je njegova medsebojni s CDX2 ostaja neraziskano.
Naš cilj je bil analizirati kliničnega pomena SOX2 in CDX2 izražanja v želodcu biologije raka. Dobljeni rezultati kažejo, da je njihovo izražanje v primarnih tumorjev ustrezno napovedno vrednost za bolnike z rakom želodca.
Metod
človeških tkiv in DNK vzorce
Dvesto in eno primerov-formalinom fiksni parafinskega vgrajeni (FFPE ) so preučevali vzorce bolnikov z adenokarcinomom želodca, operiranih na Centro Hospitalar S. João, Portu na Portugalskem med letoma 1988 in 2010. Primeri so bili izbrani tisti z razpoložljivim parafinsko vgrajenih materialov, clinicopathological in nadaljnji podatki, pridobljeni iz patologijo in kirurške oddelki Centro Hospitalar S. João. Od tega je bilo sedeminšestdeset vzorcev na voljo kot mikromrež tkiva (TMA), z 2 ponovitvene jedra vsakega vzorca iz tumorja in tkiv BIOBANK istega oddelka za patologijo. Tumorja genomske DNA (gDNA) dobimo z 62 primeri vključeni v TMA. gDNA je bila vzeta tudi iz FFPE vzorcev dveh normalnih želodčne sluznice, ki uporabljajo genomsko DNA Purification Kit (Citomed, Lizbona, Portugalska), in se uporablja kot kontrole. Vsi vzorci iz BIOBANK so bili pridobljeni z informirano soglasje od bolnikov. Uporaba za nazaj vzorcev, od katerih soglasja ni mogoče doseči, se dovoli za raziskovalne študije s portugalsko zakonodajo obveščeni. Ta študija je odobril odbor za etiko Centro Hospitalar S. João.
Imunohistokemija
tkiva odseki FFPE s 4 um od kirurške osebkov in TMA bili izpostavljeni imunohistokemija za SOX2, CDX2, MUC5AC in MUC2 po standardnih metodologij. Na kratko, potem ko odstranitvijo parafina in rehidraciji je pridobivanje antigena izvedemo v IHK-Tek epitop pridobivanje podatkov Steamer Set (IHK svetu, Woodstock, MD, ZDA), za 40 minut z 10 mM citratnem pufru, pH 6,0 (CDX2) ali 10 mM, pH 8,0 EDTA (SOX2). Desialylation smo izvedli za detekcijo MUC2, z 0,1 U /ml nevraminidaze iz Clostridium perfringes
tipa VI (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, ZDA) v natrijev acetatni pufer pH 5,5 2h pri 37 ° C. Endogene peroksidaze smo blokirali s 3% vodikovega peroksida v metanolu za 10min. Inkubacija s primarnimi protitelesi za CDX2 (01:50 redčenja, CDX2-88 klon, BIOGENEX, San Ramon, CA, ZDA), MUC5AC (01:10 redčenje, CLH2 klon) in MUC2 (01:10 redčenja, PMH1 klon) je bila izvedena preko noči pri 4 ° C. Odseki smo nato inkubirali s-biotina označene kunčjega anti-mouse sekundarnih protiteles, ki mu sledi avidinom /biotina peroksidazo sistemom za zaznavanje (Vectastain ABC kit, Vector Laboratories, Burlingame, Kalifornija, ZDA). Za SOX2 barvanja, inkubacijo s primarnim protitelesom (1:50 redčenje, SP76 klona, ​​Cell Marque, Rockling, CA, ZDA) izvaja 1h pri sobni temperaturi in odkrivanje je bila opravljena s pomočjo Dako REAL ™ Predstavljajte ™ Detection System peroksidaze /DAB + (DAKO, Glostrup, Danska), v skladu z navodili proizvajalca. Odkrivanje izražanja je bila izvedena z 3,3'-diaminobenzidine (DAB) (Sigma, St. Louis, MO, ZDA) odseki tkiva so jih nasprotno s hematoksilinom Gill je (Leica Microsystems, Amersham, Bucks, Združeno kraljestvo), dehidrirano, pojasniti in nameščen. Normalna želodčna sluznica je bila uporabljena kot pozitivna kontrola za SOX2 in MUC5AC izražanja in normalno debelega sluznice je bila uporabljena kot pozitivna kontrola za CDX2 in MUC2 izražanja. Primeri so bili ocenjeni kot pozitivni, ko je bilo več kot 5% celic, obarvanih z vsako protiteles s soglasjem treh opazovalcev (VC, LD in RA).
Fluorescence in situ
hibridizacije (FISH)
FISH je bila uporabljena za oceni SOX2
stanje ojačevanja v 21 vzorcih, z uporabo 2-barvni testa je, kot ga Bass et al
[17] opisano. Sonda segajo procesno 3q26.33 (BAC klon CTD-2348H10) je bila uporabljena za določitev SOX2
kopirati številko in je bila v primerjavi z hibridizira referenčna sonde do 3p22.3-3p22.2 (BAC klonov RP11-286G5), kupljena od Invitrogen (Carlsbad, CA, ZDA). Ciljna Sonda je bila označena z digoksigeninom (DIG-11-UTP, Roche, Mannheim, Nemčija) in zaznana z anti-digoksigenin-fluorescein protitelesa (Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Nemčija) in referenčno sondo je bil označen z biotinom (BioPrime® DNA označevanje System, Invitrogen, so deparaffinised Carlsbad, CA, ZDA) in zazna z CY 3-Avidin protitelesa (Jackson Immunoresearch Lab, West Grove, ZDA).
štiri um diapozitive iz vsake želodca adenokarcinomom vzorcu, hidracijo in damo v predhodno segreto raztopino NaSCN 1M pri 80 ° C za 10 minut. Vzorce smo razgradili s 6 mg /ml pepsinom (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, ZDA) v HCl 0.02N, pH 2 za 30 min pri 37 ° C. Sonda zmes v 50% formamidu v 2 x SSC je codenatured z jedrsko DNK pri 94 ° C 3min. Hibridizacija je bila izvedena za 30h pri 37 ° C. Jedra so jih nasprotno z DAPI-Vectashield montažo raztopine (Vector, BURLINGAME, ZDA). Za vsak primer, je bilo najmanj 67 celic analizirali v fluorescenčno mikroskopom (Zeiss Z1 Axio) in slike so bile pridobljene s 1000 x povečavo, z uporabo Zeiss Axio cam MRM in Axiovision Rel. 4.8 software. Razmerje med številom SOX2 in referenčnih signalov sonde je bila izračunana za vsako celico posebej in povprečje razmerja je bila določena za vsak primer posebej. Pomnožitev gena je zdelo, kadar je bila povprečna ≥2.
Kopiranje Število variacije (CNV) teste po
bil CNV test izvaja z uporabo posebne TaqMan® Kopiraj številko testom (Applied Biosystems, Foster City, CA, ZDA), ki sledi navodila proizvajalca. Na kratko, multipleks PCRs za SOX2
(ciljno) in RNase P
(endogeni nadzor) izvaja na hitro v realnem času sistem ABI Prism7500 PCR z uporabo programske opreme v2.0 (Applied Biosystems, Foster City, CA, ZDA ). Dvajset nanogramih, gDNA in kontrolo brez predlogo so bili analizirani v štirih izvodih. Normalno želodca vzorce sluznice so bili uporabljeni kot kalibratorjem. Količinska SOX2
število kopij gena je bila opravljena s pomočjo ΔΔCt metode in analizo podatkov je bila izvedena s v2.0 je CopyCaller programske opreme (Applied Biosystems, Foster City, CA, ZDA). Pomnožitev gena je definirano kadarkoli je število gen kopija 2-krat večja od normalne želodčne sluznice. Kratno povečanje med 1,5 in 2 je štelo za obrazec številka dobiček.
Statistična analiza
Test hi-kvadrat smo uporabili za oceno pomembnosti razlik v clinicopathological značilnosti po kategorijah SOX2 in CDX2 izražanja, razen s starostjo, v kateri je pomembnost razlik v sredstvih je bila izračunana z uporabo T
-test. celokupno preživetje bolnikov je bila izračunana po metodi Kaplan-Meier in pomen razlike med krivuljami surove preživetja je bil preizkušen s testom log-ranga. Cox sorazmernih tveganj model je bil uporabljen za izračun univariatne in multivariatne razmerje ogroženosti. Mediana spremljanja čas za preživelih bolnikov je bila 62 mesecev. Stopnja preživetja 5- in 10-letnik je bil ocenjen po metodi življenjskega mizo. Razlike so bile upoštevane statistično pomembne, kadar so
vrednosti p < 0,05. Analize so bile izvedene s pomočjo SPSS software v21.0 (Chicago, IL, ZDA) in stata V11 (College Station, TX, ZDA).
Rezultati
SOX2 izraz v želodčnih karcinomov
Clinicopathological značilnosti raka 201 želodca primeri, kot tudi profile izraz za SOX2, CDX2, MUC2 in MUC5AC so povzeti v tabeli 1. Jedrski SOX2 izražanje je bilo v 52% (104/201) v želodcu karcinomov in izraz je heterogena med in znotraj tumorjev (Slika 1A, B in C). V 13% (18/134) izražanja v primerih SOX2 je bila višja pri invazivni spredaj (Slika 1D in E) (ta ocena je bila opravljena le v primerih, ki niso vključeni v TMA, če ta presoja ni bilo mogoče) .table 1 Povzetek od clinicopathological parametrov raka želodca po izražanju SOX2 in CDX2
SOX2
CDX2

Negative

Pozitivna


Negativna
Pozitivna

N
%
N
%

p
N
%
N
%
p
dobe, leta1
povprečje ± SD
65,8 ± 12,7
63,4 ± 13,5
0,2
64,1 ± 13,6
65,2 ± 12,6
0,6
mediana (razpon)
69 (34- 85)
66,5 (24-89)
69 (24-89)
67 (36-89)
Sex1
Moški
52
41,9
72
58,1
0,02
75
60,5
49
39,5
0,1
ženski
45
58,4
32
41,6
38
49,4
39
50,6
TNM stage2
I /II
35
54,7
29
45,3
0,09
26
40,6
38
59,4
0.002
III /IV
59
44,7
73
55,3
83
62,9
49
37,1
T stage3
T1 /T2
22
62,9
13
37,1
0,03
13
37,1
22
62.9
0,007
T3 /T4
75
45,5
90
54,5
99
60,0
66
40,0
N stage1
N0
28
62,2
17
37,8
0,03
20
44,4
25
55,6
0,07
N +
69
44,2
87
55,8
93
59,6
63
40,4
Margins4
R0
85
47,5
94
52.5
0,5
98
54,7
81
45,3
0,2
R1
11
55.0
9
45,0
14
70,0
6
30,0
Vascular invasion4
Negative
39
55,7
31
44,3
0,1
37
52,9
33
47.1
0,5
pozitivno
57
44,2
72
55,8
75
58,1
54
41,9
Láuren5
Črevesne
44
49,4
45
50,6
0,9
45
50,6
44
49,4
0,3
razpršenih
20
48,8
21
51,2
26
63,4
15
36,6
Nerazvrščeni
31
46,3
36
53.7
40
59,7
27
40,3
Ming6
ekspanzivna
32
53,3
28
46,7
0,5
28
46.7
32
53,3
0,1
infiltracijsko
60
45,8
71
54,2
81
61,8
50
38.2
Nerazvrščena
2
66,7
1
33,3
1
33,3
2
66,7
SOX21
Negative
58
59.8
39
40,2
0,3
pozitivno
55
52,9
49
47,1
CDX21
Negative
58
51.3
55
48,7
0,3
pozitivno
39
44,3
49
55,7
MUC5AC1
Negative
39
44,8
48
55,2
0,4 ​​
42
48,3
45
51,7
0,05
Positive
58
51,3
55
48.7
70
61,9
43
38,1
MUC21
Negative
69
48,6
73
51,4
0,9
84
52.2
58
40,8
0,1
Positive
27
48,2
29
51,8
26
46,4
30
53.6
1 N = 201; 2N = 196; 3N = 200; 4N = 199; 5N = 197; 6N = 194.
Slika 1 SOX2 protein izražanje pri želodčnih karcinomov z imunohistokemijo zazna. (A) Heterogenost SOX2 izražanja v želodčnih tumorjev. V istem vzorcu tumorja, se upoštevajo območja z visoko stopnjo SOX2 (B) v neposredni bližini območij z nižjo stopnjo izraženosti SOX2 (C). (D, E) SOX2 izraz na invazivno pred tumorjev.
Naprej, smo ocenili, ali SOX2 izraz povezana z clinicopathological značilnosti primerov. Ta analiza je pokazala, da je bila SOX2 izraz značilno povezana z moškega spola (p
= 0,02), z višjo stopnjo T (p
= 0,03) in s prisotnostjo regionalnih bezgavkah (N faza) (p
= 0,03). Drugi clinicopathological parametri, ki so vključeni starost, stopnjo TNM, pred tumorja resekcijo robu (kategorije R), vaskularne invazije, razvrščanje Laurén in razvrščanje Ming ni pomembno povezana z SOX2 izražanja (tabela 1).
Ker je SOX2 povezana z želodca razlikovanje [14] smo raziskovali, ali je bil ta obdelujejo v skladu z rakom, z uporabo MUC5AC kot želodca marker. Vendar pa ni bilo združenje ugotovljeno med SOX2 in MUC5AC izražanja. Prav tako ni bilo obratno združenje našel med SOX2 in CDX2 /MUC2 (uporabljajo kot markerji črevesne diferenciacije). Pomembno je omeniti, je CDX2 izraz značilno povezana s stopnjo nižjo TNM (p
= 0,002) in s stopnjo nižjo T (p
= 0,007). Poleg tega, čeprav ni statistično pomembna, je bil trend v smeri obratnem razmerju med CDX2 in MUC5AC (p =
0,05).
Analizo preživetja
celokupno preživetje The 5 let, ki temelji na spremljanju 199 bolnikov je bilo 35% (dodatna datoteka 1: Slika S1). Naslednjič ugotovil, da je bil SOX2 izraz v tumorjih povezana v univariatno analizo, s skupno slabše preživetje (p
= 0,02), stratifikacije bolnikov v dve prognostične skupine (slika 2A), s 5-letno preživetje 45 a % za bolnike z SOX2- tumorji v primerjavi z 26% bolnikov s SOX2 + tumorjev. Nasprotno, CDX2 izraz povezan s splošnim izboljšano preživetje, čeprav razlika ni dosegla pomena (podatki niso prikazani). Slika 2 Kaplan-Meier krivulje, ki prikazujejo verjetnost celokupnega preživetja bolnikov z rakom želodca po SOX2 izražanja (A) in v skladu z fenotipov SOX2 molekularno - /CDX2 + in SOX2 + /CDX2 - (B).
Na podlagi pridružitve SOX2 in CDX2 s slabše in boljše preživetje, kot tudi bolj in manj agresivne clinicopathological funkcije, oziroma, smo še naprej raziskovali izid bolnikov glede na molekularne fenotipov, opredeljenih v obeh proteinov. Štiri skupine bolnikov bi lahko opredelili (Dodatne datoteke 1: Slika S2), od katerih je ena z najboljšo preživetje imeli tumorje negativne za SOX2 in pozitivne za CDX2 (SOX2- /CDX2 +), medtem ko je bilo preživetje najnižja pri bolnikih, ki so zasidrana tumorjev obratno profil, pozitiven SOX2 in negativna CDX2 (SOX2 + /CDX2-) (p
= 0,01) (Dodatni datoteka 1: Slika S2 in slika 2B). Primeri z izrazom tako SOX2 in CDX2 ali brez izražanja obeh označevalec razstavljena podobno in vmesno preživetje (Dodatni datotek 1: Slika S2). V SOX2- /CDX2 + in SOX2 + /CDX2- molekularna fenotipi, v primerjavi s samo SOX2, napovedujejo zelo podobne deleže preživetja na 5 let (49% proti 26% in 45% vs 26%, v tem zaporedju). Vendar pa je napovedal 10-letno preživetje, ki temelji samo na SOX2 izražanja je 34% (SOX2-) vs 22% (SOX2 +), medtem ko z uporabo SOX2 /CDX2 molekularne fenotipi, postane 41% (SOX2- /CDX2 +) vs 14% (SOX2 + /CDX2-).
smo podrobneje preučiti vpliv na preživetje bolnikov molekulskih fenotipov, ki jih SOX2 + vs SOX2-, CDX2 + opredeljenih vs CDX2- in SOX2- /CDX2 + primerjavi SOX2 + /CDX2- razvrščeni v razrede po clinicopathological parametrov. V tem primeru ubral preživetje po obeh SOX2 ali statusa CDX2 sam prineslo pomembne prognostičnih razlike za prvega v nekaterih parametrov (intestinal- in širi tipa tumorjev) in ni razlike sam za CDX2 (Dodatni datoteka 1: Številke S3 in S4). Rezultati iz Cox proporcionalnega modela so predstavljene v dodatni datoteki 1: Tabela S1. Še enkrat, uporaba kombinirane izražanja SOX2 in CDX2 rafinirano prejšnjih rezultatov (slika 3). SOX2 + /CDX2 - profil napovedal bistveno slabši izid bolnikov s črevesnimi (str
= 0,005) in širi (p
= 0,002), tumorji, z razmerjem ogroženosti 3,18 in 4,84 oz in tistih brez znakov venske invazije (p
= 0,009), ki predstavlja razmerje nevarnosti 3,84. Čeprav mejno nepomembne, je podoben trend opaziti pri bolnikih brez bezgavkah (p
= 0,08) (slika 3). razmerja ogroženosti in 95% intervali zaupanja za vse skupine so podrobneje predstavljeni v tabeli 2 in ostajajo pomembna po prilagoditvi za starost in spol v multivariatne analize. Slika 3 Kaplan-Meier krivulje, ki prikazujejo verjetnost celokupnega preživetja pri bolnikih z rakom želodca v skladu z fenotipov SOX2 molekularno - /CDX2 + in SOX2 + /CDX2 - stratificiran po clinicopathological parametre: razvrstitev Laurén (A), klasifikacija Ming (B) , venska invazija (C) in bezgavkah (D).
Tabela 2 Cox sorazmernih tveganj modeli preživetja v odvisnosti od molekularnih fenotipov (SOX2 + /CDX2- vs SOX2- /CDX2 +) za vsak clinicopathological parameter
Parameter
razmerja ogroženosti (95% IZ)

Neprilagojena
P
Adjusteda
P

Skupna
1,95 (1,15-3,31)
0,01
1,90 (1,10-3,28)
0,02
razvrstitev Lauren
intestinalnega tipa
3,18 (1,33-7,58)
0,009
2,93 (1,21-7,10)
0,02
razpršenih-type
1,35 (0,35-5,17)
0,7
Nerazvrščeni
1,34 (0,60-3,02)
0,5
uvrstitev Ming
Širjenje
4.84 (1.64-14.29)
0,004
4.53 (1.29-15.85)
0,02
infiltracijsko
1,13 (0,60-2,13)
0,7
Vascular invazija
Negativni
3,84 (1,30-11,35)
0,02
3,82 (1,29-11,40)
0,02
Positive
1.10 (0.60- 2.02)
0,8
N oder
N0
2,96 (0,82-10,65)
0,1
3,98 (0,72-21,83)
0.1
N +
1,29 ( 0,72-2,30)
0,4 ​​
okrajšava: IZ
interval zaupanja
Prilagojena za starost in spol (Multivariatna analiza z uporabo Cox regresijski model)
SOX2 ojačanje
Glede na to, da je gen.. pomnoževanje je tumorsko specifičen dogodek med maligne transformacije, in da SOX2 locus podvržemo to spremembo v drugih tumorjev, in sicer pljuč in požiralnika [17], smo predpostavili, da bi SOX2 pomnoževanje razloži izražanju in neenakomernosti, tako znotraj in med želodčnih tumorjev. Podpora to hipotezo, raziskava izvedena na Oncomine bazi podatkov je pokazala, da SOX2 uvrstila med prvih 10% genov s številko kopija dobičkov pri bolnikih z rakom želodca (Dodatni datotek 1: Slika S5).
Na podlagi podatkov imunohistokemija, smo izbrali 14 primerov z SOX2 izražanja in 7 negativnih primerov za analizo za 2-barvno FISH test. Opazili smo, da je bil SOX2 pomnožili v 14% (2/14) primerov s izražanja in v nobenem od primerov brez izražanja (0/7). Predstavnik pozitiven primer tako SOX2 izražanja in pomnoževanja je prikazano na sliki 4A in B. A primer s SOX2 izražanja, vendar ne pomnoževanje je prikazan na sliki 4C in D. Poleg tega je analiza FISH pokazala prisotnost visoke stopnje kopija številke dobička in heterogenost v tumorjih opazili ne le s ciljnim sondo za SOX2
locus temveč tudi z referenčnim sondo, ki se nahaja na 3p roko (Dodatni datoteka 1: Slika S6). Slika 4 želodca primerov raka s SOX2 beljakovin izražanja (A in C) se lahko predstavi z ali brez SOX2 ojačanja (B in D, v tem zaporedju), ki ga FISH določi. Green označene sonde ciljno SOX2
, medtem ko rdeče označene sonde usmeriti 3p roko. Jedra so obarvane z DAPI (modra). (E) Sixty-dva gDNA vzorcev raka želodca so ocenili status SOX2 števila kopij in v primerjavi z normalno želodčne sluznice (kalibrator). (F) število SOX2 kopija je bila značilno povezana z beljakovin izražanja, ki jo IHC (p
< 0,05) določena.
Za razjasnitev pogostost SOX2
locus kopiranje število sprememb pri raku želodca, smo opravili kopijo -Število PCR z uporabo gDNA od 62 želodca primerov raka, s pomočjo RNase P
sondo, ki se nahaja na kromosomu 14, kot referenco. Večina vzorcev (93%) je predstavil določeno stopnjo SOX2
kopiranje spremembo številke, od 3 do 9 kopij (slika 4e). Pomembna pozitivna povezava med števila kopij dobiček in SOX2 izražanja (p
< 0,05). So opazili (slika 4f)
Razprava
raka želodca je bolezen z več rezultatov, ki jih ni mogoče predvideti samo s clinicopathological funkcijami [6]. Zato je identifikacija molekularnih biomarkerjev, ki lahko dovoli nadaljnje odločitve rezultat stratifikacije in zdravljenje je ključnega pomena.
V tej študiji smo značilno izražanje prepis faktorja SOX2 raka želodca in jo v zvezi z clinicopathological funkcij in diferenciacije markerje in sicer MUC5AC (želodca marker) in CDX2 in MUC2 (črevesna markerji). To je privedlo do identifikacije dveh različnih prognostičnih skupin, ki temeljijo na SOX2 izražanja, ki bi lahko še dodatno izpopolnili z upoštevanjem kombinirano izraz z CDX2. Na koncu smo razkrili heterogenost SOX2
locus in kromosom 3 številu kopij raka želodca, ki dokazujejo povezavo med povečanim številom kopij in izražanja SOX2 beljakovin.
Bistvena ugotovitev te študije je bila pripomba, da samo SOX2 izraz, in nadalje izboljšano z kombinaciji z CDX2, omogoča razslojevanje bolnikov v podskupine z zelo različnimi klinične izide. Poleg tega, ko smo združili teh molekulskih profilov clinicopathological podatkov, je postalo očitno, da SOX2 + /CDX2 - profil povezana s slabšo prognozo, v podskupinah tumorjev, ki na splošno imajo boljšo prognozo: črevesne tipa , ki se širi tipa in brez znakov venske invazije [21, 22]. Čeprav ni statistično značilna, so opazili enako težnja tumorjev, ki predstavljajo brez bezgavkah. Te molekularna profili kažejo drugačno biološko obnašanje tumorja najverjetneje zaradi napredovanja bolezni ali odpornosti na zdravljenje in se lahko uporabljajo za poučevanje učinkovitejše zdravljenje ali nadaljnje urnike.
Predvsem, kot bezgavko metastaze je ena od glavnih nevarnosti dejavniki želodca ponovitev raka, po R0 operaciji, vse bolnike bezgavkah prejemajo adjuvantno zdravljenje [23]. Vendar pa naši rezultati kažejo, da bolniki brez tega dejavnika tveganja, in torej ne zdravimo, predstavljajo izredno slabše rezultate, ko je tumor predstavlja z SOX2 + /CDX2 - molekularna profil. To postavlja hipotezo, da je v n0 tumorji, bolniki v tem molekularno podskupini verjetno koristi od adjuvantno terapijo. Kljub temu, te ugotovitve zahtevajo potrditev v večjih generacij in da bi bilo tudi zelo informativen dodati klinične informacije o zdravljenju pacientov.
SOX2 pojavlja tudi kot potencialni cilj za novih terapevtskih posegov. Čeprav so transkripcijski dejavniki niso klasične cilji drog, pristopi k ciljno usmerjenostjo SOX2 terapiji se že obravnavana pri raku dojke.

• Glutation S-transferaza gen GSTM1, gen-gen interakcije in dovzetnost rak želodca: dokazi iz posodobljenega metaanalizi
• Svež zrak: študija kakovosti izboljšanje primerjavo z tehniko, kroženje zraka v primerjavi s klasično tehniko za preprečevanje nazogastrično cevko disfunkcije