fenotipos moleculares inmunohistoquímicas de cáncer gástrico en base a Sox2 y CDX2 predecir los fenotipos moleculares outcome

paciente inmunohistoquímicas de cáncer gástrico en base a Sox2 y CDX2 predecir el resultado del paciente
Resumen Antecedentes

El cáncer gástrico sigue siendo un problema de salud grave en todo el mundo. Los pacientes se beneficiarían en gran medida a partir del descubrimiento de nuevos biomarcadores que predicen el resultado con mayor precisión y permitir un mejor tratamiento y las decisiones de seguimiento. En este caso, se utilizó un estudio retrospectivo, observacional para evaluar la expresión y el valor pronóstico de los factores de transcripción Sox2 y CDX2 en el cáncer gástrico.
Métodos
Sox2, CDX2, MUC5AC y expresión MUC2 se evaluaron en 201 tumores gástricos mediante técnicas de inmunohistoquímica . Sox2 y expresión CDX2 se cruzaron con los datos clínico-patológicos y de seguimiento para determinar su impacto en el comportamiento del tumor y el resultado. Por otra parte, SOX2
locus Ejemplares número se evaluó mediante FISH (N = 21) y número de copia variación de ensayo (N = 62).
Resultados
Sox2 se expresó en el 52% de los tumores gástricos y fue significativamente asociado con el sexo masculino, el estadio T y N etapa. Por otra parte, la expresión de Sox2 predice una peor supervivencia del paciente, y la combinación con CDX2 define dos fenotipos moleculares, SOX2 + CDX2 - en comparación con Sox2 -CDX2 +, que predicen el peor y el mejor de largo resultado a largo plazo los pacientes. Estos perfiles combinados con parámetros clínico estratificar el pronóstico de los pacientes con tumores intestinales y en expansión y en aquellos sin signos de invasión venosa. Por último, Sox2
número de copias locus ganancias se encontraron en el 93% de las muestras que llegan al umbral de amplificación en un 14% y de manera significativa la asociación con la expresión de proteínas.
Conclusiones
Hemos demostrado, por primera vez, que combinan Sox2 con el perfil de expresión de CDX2 en el cáncer gástrico segregar a los pacientes en diferentes grupos de pronóstico, complementando la información clínico-patológica. Además, demuestran un mecanismo molecular para la expresión de Sox2 en un subconjunto de casos de cáncer gástrico.
Palabras clave
Sox2 CDX2 cáncer gástrico pronóstico de supervivencia Antecedentes
El cáncer gástrico es uno de los cánceres más comúnmente diagnosticados y ahora la tercera causa de las muertes relacionadas con cáncer en el mundo [1]. clasificación de Lauren divide cáncer gástrico en dos principales tipos histológicos: intestinal y difuso [2]. Presentan características morfológicas, clínicos y epidemiológicos distintos y se cree que se desarrollan a partir de la activación de los mecanismos moleculares independientes. Los datos epidemiológicos muestran que, en la mayoría de casos, el cáncer gástrico no surge de novo
del epitelio gástrica normal, sino más bien el resultado de un proceso de varios pasos, a través de alteraciones genéticas y epigenéticas sucesivas en múltiples genes. Contrariamente al tipo difuso, para los que no están bien establecidos lesiones predisponentes, la sucesión de acontecimientos que conducen a cáncer gástrico de tipo intestinal está bien descrita. De acuerdo con la cascada de la Correa, que se desarrolla de una manera escalonada, generalmente iniciado por un proceso inflamatorio provocado por Helicobacter pylori
, que puede progresar a multifocales gastritis atrófica, la metaplasia intestinal (IM), displasia y finalmente adenocarcinoma [3].
a pesar de que ha habido una disminución constante en la incidencia de cáncer gástrico a nivel mundial, la expansión y el envejecimiento de la población del mundo pronostica un aumento en el número de casos y, a pesar de los últimos avances en el diagnóstico y el tratamiento, el pronóstico de los pacientes con cáncer restos gástricos pobre. Esto se traduce en una tasa de supervivencia a los 5 años de no más de 25%, en Europa [4]. La mayoría de los pacientes con cáncer gástrico han avanzado de la enfermedad al momento del diagnóstico para los que la única opción de curación se basa en la extirpación quirúrgica completa del tumor, con una amplia disección de los ganglios linfáticos que puede ser complementada por la administración de la quimioterapia neoadyuvante o adyuvante [5]. La supervivencia más importante factor pronóstico influir, así como tratamiento de elección es el estadio TNM. Sin embargo, una capa adicional de complejidad se deriva de la observación de que los pacientes con la misma puesta en escena a menudo muestran una evolución clínica diferente, destacando la heterogeneidad de cáncer gástrico [6]. Esto sugiere que las únicas propiedades biológicas intrínsecas de estos tumores pueden afectar significativamente su potencial agresivo. Por lo tanto, todavía hay una necesidad urgente de descubrir biomarcadores de pronóstico adicionales para predecir el resultado con mayor precisión y, como consecuencia, para ayudar a tomar decisiones de tratamiento más informadas con respecto a la terapia. A medida que los tumores que están más diferenciadas general se comportan de una manera menos agresiva, nos preguntamos la relevancia de dos marcadores de diferenciación, Sox2 y CDX2, por el comportamiento biológico de los cánceres gástricos. Estos marcadores se expresan diferencialmente a lo largo de la cadena de acontecimientos que conducen al cáncer gástrico y están estrechamente relacionados con gástrica y la diferenciación intestinal, respectivamente [7].
CDX2 es un factor de transcripción homeobox-delgado específica cuya función garantiza el desarrollo y el mantenimiento de la diferenciación intestinal en el intestino y sitios ectópicos, que fue bien establecido en modelos animales [8, 9]. Es ampliamente conocido que CDX2 se expresa en metaplasia intestinal humana del estómago y el esófago [10]. Se demostró que también se expresa en la displasia reforzando así su papel como un biomarcador de la progresión en las etapas de la carcinogénesis gástrica preneoplásicas [11].
Sox2 es un miembro de la SOX (relacionado SRY-HMG Box) la familia de factores de transcripción , codificada por un gen exón altamente conservada, sola. SOX2 juega diversos papeles en todo el desarrollo y la diferenciación celular, la primera orquestación de la embriogénesis de mamíferos [12], y más tarde contribuir a la morfogénesis normal y la homeostasis de los epitelios del intestino anterior derivado del esófago, pulmón y tráquea [13]. En la edad adulta, SOX2 se expresa en una variedad de tejidos, a saber, en el epitelio escamoso que recubren el esófago y el epitelio glandular del estómago. Se ha demostrado, en ratones, que la expresión de Sox2 contribuye a todos los linajes de células que normalmente se encuentran en el estómago, lo que sugiere una contribución importante para la diferenciación gástrico [14]. Además, la expresión anormal de SOX2 se ha observado en los tumores del cerebro, de mama, de pulmón y de esófago [15-17]. Sin embargo, en el contexto del cáncer gástrico, su función sigue siendo desconcertante y necesita más aclaraciones [18-20]. Por otra parte, su interacción con CDX2 permanece sin explorar.
Nuestro objetivo fue analizar la relevancia clínica de Sox2 y CDX2 expresión en la biología del cáncer gástrico. Los resultados obtenidos muestran que su expresión en los tumores primarios tiene un valor pronóstico importante para pacientes con cáncer gástrico.
Métodos
tejidos y muestras de ADN Humanos
Doscientos un casos de fijado en formalina incluido en parafina (FFPE ) se estudiaron muestras de pacientes con adenocarcinoma gástrico sometidos a cirugía en el Centro Hospitalario S. João, Oporto, Portugal entre 1988 y 2010. Los casos seleccionados fueron aquellos con el material incluido en parafina disponibles, clínico-patológica y seguimiento de los datos obtenidos a partir de la patología y los servicios quirúrgicos del Centro Hospitalario S. João. De esos, se proporcionaron sesenta y siete muestras como los microarrays de tejidos (TMA), con 2 núcleos de repetición de cada muestra, desde el tumor y el tejido Biobanco del mismo Departamento de Patología. Se obtuvo ADN genómico tumoral (gDNA) a partir de 62 casos incluidos en el TMA. ADNg también fue extraído de muestras FFPE de dos mucosas gástricas normales utilizando el kit de purificación de ADN genómico (Citomed, Lisboa, Portugal), y se utiliza como controles. Todas las muestras de la Biobanco se obtuvieron con consentimiento informado de los pacientes. El uso de muestras retrospectivas de la que informó el consentimiento no se puede obtener está autorizado para estudios de investigación por parte de la ley portuguesa. Este estudio fue aprobado por el comité de ética del Centro Hospitalario S. João.
Inmunohistoquímica
secciones de tejido FFPE con 4 micras, a partir de muestras quirúrgicas y TMA fueron sometidas a inmunohistoquímica para Sox2, CDX2, MUC5AC y MUC2, siguiendo metodologías estándar. En pocas palabras, después de desparafinación y rehidratación, la recuperación de antígenos se realizó en una recuperación del epítopo vapor Conjunto IHC-Tek (IHC Mundial, Woodstock, MD, EE.UU.), durante 40 minutos con tampón de 10 mM de citrato, pH 6,0 (CDX2) o 10 mM, pH 8,0 EDTA (Sox2). Desialilación se realizó para la detección MUC2, con 0,1 U /ml de neuraminidasa de Clostridium perfringes
tipo VI (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EE.UU.) en tampón de acetato de sodio pH 5,5 durante 2 horas a 37 ° C. La peroxidasa endógena fue bloqueada con peróxido de hidrógeno al 3% en metanol durante 10 min. Se llevó a cabo la incubación con anticuerpos primarios para CDX2 (dilución 1:50, CDX2-88 clon, Biogenex, San Ramon, CA, EE.UU.), MUC5AC (dilución 1:10, clon CLH2) y MUC2 (dilución 1:10, PMH1 clon) durante la noche, a 4 ° C. Las secciones fueron incubadas con un anticuerpo secundario de conejo anti-ratón marcado con biotina, seguido de la avidina /biotina-peroxidasa sistema de detección (kit Vectastain ABC, Vector Laboratories, Burlingame, CA, EE.UU.). Para la tinción SOX2, la incubación con el anticuerpo primario (dilución 1:50, SP76 clon, Cell Marque, rockling, CA, EE.UU.) se realizó durante 1 hora a RT y la detección se realizó utilizando el Sistema de Detección de Dako Envision ™ REAL ™ peroxidasa /DAB + (DAKO, Glostrup, Dinamarca) según las instrucciones del fabricante. La detección de la expresión se realizó con 3,3 'diaminobencidina (DAB) (Sigma, St. Louis, MO, EE.UU.) secciones de tejido se counterstained con hematoxilina de Gill (Leica Microsystems, Amersham, Bucks, Reino Unido), deshidratada, clarificada y montado. mucosa gástrica normal se usó como un control positivo para SOX2 y expresión MUC5AC y la mucosa colónica normal se usó como un control positivo para CDX2 y expresión MUC2. Los casos se consideraron positivas cuando más del 5% de las células se tiñeron con cada anticuerpo con el consenso de los tres observadores (VC; LD y RA).
In situ con fluorescencia
hibridación (FISH) sobre Fish se utilizó para evaluar SOX2
estado de amplificación en 21 muestras, utilizando un ensayo de 2 colores como se describe por Bass et al
[17]. Se utilizó una sonda que abarca el locus 3q26.33 (clon BAC CTD-2348H10) para determinar SOX2
número de copias y se comparó con una sonda de hibridación referencia a 3p22.3-3p22.2 (RP11-286G5 clon BAC), compró de Invitrogen (Carlsbad, CA, EE.UU.). La sonda para la diana se marcó con digoxigenina (DIG-11-UTP, Roche, Mannheim, Alemania) y se detectó con un anticuerpo anti-digoxigenina-fluoresceína (Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Alemania) y la sonda de referencia se marcó con biotina (BioPrime® Sistema de marcaje de ADN, Invitrogen, se deparaffinised Carlsbad, CA, EE.UU.) y se detecta con un CY 3-anticuerpo avidina (Jackson Immunoresearch Lab, West Grove, EE.UU.).
cuatro micras diapositivas de cada muestra de adenocarcinoma gástrico, rehidratada y se coloca en una solución precalentada de NaSCN 1M a 80 ° C durante 10 min. Las muestras fueron digeridas con 6 mg /ml de pepsina (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, EE.UU.) en HCl 0,02 N, pH 2 durante 30 minutos a 37 ° C. mezcla de sondas en formamida al 50% en 2 x SSC fue codenatured con ADN nuclear a 94 ° C durante 3 min. La hibridación se llevó a cabo durante 30h a 37 ° C. Los núcleos se counterstained con DAPI-Vectashield solución de montaje (Vector, Burlingame, EE.UU.). Para cada caso, un mínimo de 67 células se analizaron en un microscopio de fluorescencia (Zeiss Axio Z1) y las imágenes fueron adquiridas con una magnificación × 1000, utilizando un MRm leva Zeiss Axio y el Axiovision Rel. software 4.8. La relación entre el número de SOX2 y las señales de la sonda de referencia se calculó para cada célula individual y se determinó la media de los coeficientes para cada caso. La amplificación génica se consideró siempre que el promedio fue de ≥2.
Copy Number Variation ensayos (CNV) Francia El ensayo de la CNV se realizó con un número de copias TaqMan ensayo específico (Applied Biosystems, Foster City, CA, EE.UU.) siguiendo el Instrucciones del fabricante. En pocas palabras, multiplex PCR para Sox2 gratis (objetivo) y RNasa P gratis (control endógeno) se realizaron en un sistema ABI Prism7500 Fast-PCR en tiempo real utilizando el software v2.0 (Applied Biosystems, Foster City, CA, EE.UU. ). Veinte nanogramos de gDNA y un control no plantilla se analizaron por cuadruplicado. Normales muestras de mucosa gástrica se utilizaron como calibradores. La cuantificación de SOX2
número de copias de genes se realizó utilizando el método y los datos ΔΔCt análisis fue realizado por el software v2.0 CopyCaller (Applied Biosystems, Foster City, CA, EE.UU.). La amplificación génica se definió siempre que el número de copias de genes fue 2 veces mayor que la de la mucosa gástrica normal. Las veces de aumento entre 1,5 y 2 fue considerada ejemplar número ganancia.
El análisis estadístico Francia El test de chi cuadrado se utilizó para evaluar la significación de las diferencias en las características clínico-patológicas que abarcan las categorías de Sox2 y expresión CDX2, excepto con la edad, donde el significación de las diferencias en las medias se calculó utilizando el T-test
. la supervivencia global de los pacientes se calculó utilizando el método de Kaplan-Meier y la significación de las diferencias entre las curvas de supervivencia de crudo se analizó mediante la prueba de log-rank. Cox de riesgos proporcionales fue utilizado para calcular los coeficientes de riesgo univariante y multivariante. La mediana del tiempo de seguimiento de los pacientes que sobrevivieron fue de 62 meses. La tasa de supervivencia a los 5 y 10 años se estimó mediante el método de tabla de vida. Las diferencias se consideraron estadísticamente significativas cuando los p
valores eran < 0,05. Los análisis se realizaron utilizando el software SPSS v21.0 (Chicago, IL, EE.UU.) y Stata v11 (College Station, TX, EE.UU.).
Resultados
la expresión de Sox2 en los carcinomas gástricos
características clinicopatológicas del cáncer gástrico 201 casos, así como los perfiles de expresión de Sox2, CDX2, MUC2 y MUC5AC se resumen en la Tabla 1. expresión Sox2 nuclear se encontró en el 52% (104/201) de los carcinomas gástricos y la expresión fue heterogénea entre y dentro de los tumores (Figura 1A, B y C). En 13% (18/134) de la expresión casos SOX2 fue mayor en la parte delantera invasiva (Figura 1D y E) (esta evaluación sólo se realizó en los casos no incluidos en el TMA, donde esta evaluación no fue posible) .Tabla 1 Resumen de los parámetros clínico de cáncer gástrico según la expresión de Sox2 y CDX2
Sox2
CDX2
negativo positivo


negativo positivo

N
%
N
%

p
N
%
N
%
p
Edad, años1
media ±
65,8 ± 12,7 63,4 ± 13,5

0.2
64,1 ± 13,6 65,2 ± 12,6

0.6
mediana (rango)
69 (34- 85)
66,5 (24-89)
69 (24-89)
67 (36-89)
sEX1
Hombre
52
41,9
72
58,1
0,02
75
60,5
49
39,5
0.1
Mujer
45
58,4
32
41,6
38
49,4
39
50,6
TNM stage2
I /II
35
54,7
29
45,3
0,09
26
40,6
38
59,4
0,002
III /IV
59
44,7
73
55,3
83
62,9
49
37,1
T stage3
T1 /T2
22
62,9
13
37,1
0,03
13
37,1
22
62.9
0,007
T3 /T4
75
45,5
90
54,5
99
60,0
66
40,0
N stage1
N0
28
62,2
17
37,8
0,03
20
44,4
25
55,6
0,07
N +
69
44,2
87
55,8
93
59,6
63
40,4
Margins4
R0
85
47,5 52,5
94

0.5
98
54,7
81
45,3
0.2
R1 página 11
55,0 45,0
página 9 página 14
70.0 página 6
30,0
vascular invasion4
negativo
39
55,7
31
44,3
0.1
37
52,9
33
47,1
0.5
positiva
57
44,2
72
55,8
75
58,1
54
41,9
Láuren5
intestinal
44
49,4
45
50,6
0.9
45
50,6
44
49,4
0.3
difuso
20
48,8
21
51,2
26
63,4
15
36,6
Sin clasificación
31
46,3
36
53.7
40
59,7
27
40,3
Ming6
expansivo
32
53,3
28
46,7
0.5
28
46.7
32
53,3
0.1
infiltrativa
60
45,8
71
54,2
81
61,8
50
38.2
Sin clasificación
2 66,7 33,3
1 | 1 |
33,3 66,7
2
Sox21
negativo
58
59.8
39
40,2
0.3
positiva
55
52,9
49
47,1
CDX21
negativo
58
51.3
55
48,7
0.3
positiva
39
44,3
49
55,7
MUC5AC1
negativo
39
44,8
48
55,2
0.4
42
48,3
45
51,7
0.05
positiva
58
51,3
55
48.7
70
61,9
43
38,1
MUC21
negativo
69
48,6
73
51,4
0.9
84
52.2
58
40,8
0.1
positiva
27
48,2
29
51,8
26
46,4
30
53.6
1 N = 201; 2 N = 196; 3 N = 200; 4 N = 199; 5 N = 197; 6 N = 194.
Figura 1 expresión de la proteína Sox2 en los carcinomas gástricos, detectada por inmunohistoquímica. (A) La heterogeneidad de la expresión de Sox2 en tumores gástricos. Dentro de la misma muestra de tumor, las áreas con altos niveles de Sox2 se observan (B) en las proximidades de las zonas con menores niveles de expresión de Sox2 (C). (D, E) la expresión de Sox2 en el frente invasivo de tumores.
A continuación, se evaluó si la expresión de Sox2 correlacionado con las características clínico-patológicas de los casos. Este análisis reveló que la expresión de Sox2 se asoció significativamente con el sexo masculino (p = 0,02
), con una mayor etapa T (p = 0,03
) y con la presencia de metástasis en los ganglios linfáticos regionales (estadio N) (p
= 0,03). Los otros parámetros clínico, que incluyeron la edad, estadio TNM, el aclaramiento del tumor en los márgenes de resección (categoría I), invasión vascular, la clasificación de Lauren y clasificación Ming no se asociaron significativamente con la expresión de Sox2 (Tabla 1).
Desde Sox2 se asocia con diferenciación gástrico [14] se estudió si esta se mantuvo en el cáncer, el uso de MUC5AC como marcador gástrico. Sin embargo, no se encontró asociación entre Sox2 y MUC5AC expresión. Del mismo modo, no se encontró una asociación inversa entre Sox2 y CDX2 /MUC2 (utilizados como marcadores de diferenciación intestinal). Es de destacar que la expresión de CDX2 se asoció significativamente con una etapa inferior TNM (p = 0,002
) y con un estadio inferior T (p = 0,007
). Por otra parte, aunque no estadísticamente significativa, hubo una tendencia hacia una relación inversa entre CDX2 y MUC5AC (p = 0,05
).
El análisis de supervivencia
La supervivencia global a los 5 años, basado en el seguimiento de 199 pacientes, fue de 35% (archivo adicional 1: Figura S1). A continuación observó que la expresión de Sox2 en los tumores se asoció, en el análisis univariado, con una peor supervivencia global (p = 0,02
), la estratificación de los pacientes en dos grupos de pronóstico (Figura 2A), con una supervivencia a los 5 años del 45 % para los pacientes con tumores SOX2- frente al 26% para los pacientes con tumores SOX2 +. Por el contrario, la expresión de CDX2 asociado con una mejora de la supervivencia global, aunque la diferencia no alcanzó significación (datos no mostrados). Figura 2 Curvas de Kaplan-Meier que muestran la probabilidad de supervivencia global de los pacientes con cáncer gástrico según la expresión de Sox2 (A) y de acuerdo con el Sox2 molecular fenotipos - /+ y CDX2 Sox2 + /CDX2 - (B).
Sobre la base de la asociación de Sox2 y CDX2 con una peor supervivencia y mejor, así como más y menos agresivas características clinicopatológicas, respectivamente, se estudiaron más de los pacientes resultados de acuerdo con los fenotipos moleculares definidos por ambas proteínas. Cuatro grupos de pacientes podrían definirse (archivo adicional 1: Figura S2) de los cuales el que tiene la mejor supervivencia tenían tumores negativos para Sox2 y positivas para CDX2 (SOX2- /CDX2 +), mientras que la supervivencia fue el más bajo en los pacientes portadores de tumores con el perfil inverso, positivo para Sox2 y negativos para CDX2 (Sox2 + /CDX2-) (p = 0,01
) (archivo adicional 1: Figura S2 y la Figura 2B). Los casos con expresión tanto de Sox2 y CDX2 o sin expresión de los marcadores de papel mostraron una supervivencia similar e intermedio (archivo adicional 1: Figura S2). fenotipos moleculares + /CDX2- el /CDX2 + y SOX2 SOX2-, en comparación con Sox2 solo, predicen tasas de supervivencia muy similares a los 5 años (49% vs 26% y 45% vs 26%, respectivamente). Sin embargo, la tasa de supervivencia a 10 años predicho basado en la expresión de Sox2 solo es del 34% (SOX2-) frente al 22% (Sox2 +), mientras que, utilizando los fenotipos moleculares Sox2 /CDX2, se convierte en el 41% (SOX2- /CDX2 +) frente al 14% (Sox2 + /CDX2-).
Hemos explorado aún más el impacto en la supervivencia de los fenotipos moleculares definidos por Sox2 + vs SOX2-, CDX2 + vs CDX2- y SOX2- /CDX2 de los pacientes en comparación con Sox2 + + /CDX2- estratificado en función de parámetros clínico. En este caso, el trazado de la supervivencia de acuerdo con cualquiera de Sox2 o el estado CDX2 solo han mostrado diferencias pronósticos significativos de los primeros, en algunos de los parámetros (tumores de tipo intestinal- y expansión) y no hubo diferencias para CDX2 solos (archivo adicional 1: Figuras y S3 S4). Los resultados de Cox modelo proporcional se presentan en el archivo adicional 1: Tabla S1. Una vez más, el uso de la expresión combinada de SOX2 y CDX2 refina los resultados anteriores (Figura 3). Sox2 + /CDX2 - Perfil predijo un resultado significativamente más pobre de los pacientes con intestinal (p = 0,005
) y la ampliación (p = 0,002)
tumores, con índices de riesgo de 3,18 y 4,84, respectivamente y de aquellos sin signos de invasión venosa (p = 0,009
), que presenta un riesgo relativo de 3,84. A pesar de que el límite no significativa, se observó una tendencia similar en los pacientes sin metástasis en los ganglios linfáticos (p = 0,08
) (Figura 3). Las razones de riesgo y los intervalos de confianza del 95% para todos los grupos se presentan en detalle en la Tabla 2 y siguen siendo significativas después de ajustar por edad y sexo en un análisis multivariado. Figura 3 Curvas de Kaplan-Meier que muestran la probabilidad de supervivencia global de los pacientes con cáncer gástrico según la Sox2 fenotipos moleculares - /CDX2 + y Sox2 + /CDX2 - estratificado en función de los parámetros clínico-patológicos: clasificación de Lauren (A), la clasificación Ming (B) , invasión venosa (C) y metástasis de ganglios linfáticos (D).
Tabla 2 riesgos proporcionales de Cox Modelos de supervivencia en función de los fenotipos moleculares (Sox2 + /CDX2- vs SOX2- /CDX2 +) para cada parámetro clínico-
Parámetro
Cociente de riesgos instantáneos (IC del 95%)

sin ajustar
P
Adjusteda
P

En general
1,95 (01/15 a 03/31) 0,01

1.90 (01.10 a 03.28)
0,02
clasificación de Lauren
intestinal de tipo
3,18 (1,33-7,58)
0,009
2.93 (1.21 a 7.10)
0,02
difuso de tipo
1,35 (0,35-5,17)
0.7
Sin clasificación
1,34 (0,60-3,02)
0.5
clasificación Ming
Expansión
4,84 (1,64-14,29)
0,004
4,53 (1,29-15,85)
0,02
infiltrativa
1,13 (0,60-2,13)
0.7
La invasión vascular
negativo
3,84 (1,30-11,35)
0,02
3,82 (1,29-11,40)
0,02
positiva
1.10 (0.60- 2,02)
0.8
estadio N
N0
2,96 (0,82-10,65)
0.1
3,98 (0,72-21,83)
0.1
N +
1.29 ( 0,72-2,30)
0.4
Abreviatura: CI
intervalo de confianza
una ajustado por edad y género (análisis multivariante mediante regresión de Cox) amplificación
Sox2
Teniendo en cuenta ese gen.. amplificación es un caso específico de tumor durante la transformación maligna, y que locus SOX2 se somete a esta alteración en otros tumores, a saber, del pulmón y esófago [17], la hipótesis de que la amplificación SOX2 podría explicar su expresión y la heterogeneidad, tanto dentro como entre tumores gástricos. En apoyo de esta hipótesis, una encuesta realizada en la base de datos Oncomine mostró que Sox2 clasificada entre las principales 10% de genes con aumentos del número de copias en el cáncer gástrico (archivo adicional 1: Figura S5).
Con base en los datos de inmunohistoquímica, se seleccionaron 14 casos con la expresión de Sox2 y 7 casos negativos para analizar mediante un ensayo de FISH de 2 colores. Hemos observado que SOX2 se amplificó en 14% (2/14) de los casos con expresión y en ninguno de los casos sin expresión (0/7). Un caso positivo representante tanto para la expresión de Sox2 y amplificación se muestra en la figura 4A y B. Un caso con la expresión de Sox2, pero no de amplificación se muestra en la Figura 4C y D. Por otra parte, el análisis FISH demostró la presencia de un alto grado de aumento de número de copias y la heterogeneidad dentro de los tumores, se observa no sólo con la sonda diana para Sox2
locus sino también con la sonda de referencia, que se encuentra a la 3p brazo (archivo adicional 1: Figura S6). Figura 4 casos de cáncer gástrico con expresión de la proteína Sox2 (A y C) se puede presentar con o sin amplificación Sox2 (B y D, respectivamente) determinado por FISH. Verde sondas marcadas como objetivo Sox2
, mientras que las sondas marcadas de color rojo dirigen el brazo 3p. Los núcleos se tiñeron con DAPI (azul). muestras de cáncer gástrico (E) Sesenta y dos gDNA se evaluó la condición de número de copias Sox2 y se comparan con la mucosa gástrica normal (calibrador). (F) el número de copias Sox2 se asoció significativamente con la expresión de la proteína, determinado por IHC (p Hotel < 0,05).
A aclarar la frecuencia de Sox2
copia locus alteraciones en el número de cáncer gástrico, se realizó una copia -número PCR usando gDNA de 62 casos de cáncer gástrico, utilizando una sonda de ARNasa P
localizado en el cromosoma 14 como referencia. La mayoría de las muestras (93%) presentó algún grado de SOX2
copiar la variación del número, que van desde 3 a 9 copias (Figura 4E). Una importante asociación positiva entre el aumento de número de copias y la expresión de Sox2 (p Hotel < 0,05). Se observó (Figura 4F)
Discusión
El cáncer gástrico es una enfermedad con múltiples resultados que no se pueden predecir por las características clinicopatológicas solos [6]. En consecuencia, la identificación de biomarcadores moleculares que pueden permitir que otras decisiones de estratificación resultado y de tratamiento es de importancia crítica.
En este estudio se caracterizó la expresión del factor de transcripción Sox2 en el cáncer gástrico y la relacionamos con las características clínico-patológicos y marcadores de diferenciación es decir, MUC5AC (marcador gástrico) y CDX2 y MUC2 (marcadores intestinales). Esto condujo a la identificación de dos grupos de pronóstico diferentes, en base a la expresión de Sox2, que podría ser refinada aún más teniendo en cuenta la expresión combinada con CDX2. Por último, desentrañado la heterogeneidad de locus Sox2
y el cromosoma 3 número de copias en el cáncer gástrico, lo que demuestra una asociación entre el aumento del número de copias y la expresión de la proteína Sox2.
Una de las principales conclusiones de este estudio fue la observación de que la expresión de Sox2 solo, y posteriormente perfeccionados por la combinación con CDX2, permite la estratificación de los pacientes en subgrupos con diferentes significativamente los resultados clínicos. Por otra parte, cuando se combinaron estos perfiles moleculares con los datos clínico-patológicos, se hizo evidente que el Sox2 + /CDX2 - perfil asociado con un peor pronóstico, dentro de los subgrupos de tumores que en general tienen un mejor pronóstico: de tipo intestinal , del tipo de expansión y sin signos de invasión venosa [21, 22]. Aunque no es estadísticamente significativo, se observó la misma tendencia para los tumores que presentan sin metástasis en los ganglios linfáticos. Estos perfiles moleculares indican un comportamiento biológico diferente del tumor más probable debido a progresión de la enfermedad o la resistencia al tratamiento y pueden ser utilizados para instruir a una terapia más eficaz o seguimiento horarios.
En particular, como los ganglios linfáticos de metástasis es una de las principal riesgo factores de recurrencia del cáncer gástrico, después de una cirugía R0, todos los pacientes que presentan metástasis en los ganglios linfáticos reciben terapia adyuvante [23]. Sin embargo, nuestros resultados muestran que los pacientes sin este factor de riesgo, y por lo tanto no se trata, presentan un resultado sorprendentemente peor cuando el tumor se presenta con un Sox2 + /CDX2 - perfil molecular. Esto plantea la hipótesis de que, dentro de los tumores N0, los pacientes dentro de este subgrupo molecular probablemente se beneficiarían de la terapia adyuvante. Sin embargo, estas observaciones requieren la validación en las cohortes más grandes y que también serían muy informativo para añadir la información clínica sobre el tratamiento del paciente.
Sox2 también emerge como un objetivo potencial para nuevas intervenciones terapéuticas. Aunque los factores de transcripción no son objetivos farmacológicos clásicos, los enfoques de la terapia Sox2 orientada ya están siendo tratados en el cáncer de mama. Figura S2. Figura S3. Figura S6. Tabla S1.

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