Imunohistochemické molekulárnej fenotyp rakoviny žalúdka založené na SOX2 a CDX2 predpovedať výsledok pacienta

Imunohistochemické molekulárnej fenotyp rakoviny žalúdka založené na SOX2 a CDX2 predpovedať výsledok pacienta
abstraktné
pozadia
rakovinou žalúdka zostáva závažnou zdravotnú komplikáciu po celom svete. Pacienti by mohli využiť objavenie nových biomarkerov, ktoré predpovedajú výsledok presnejšie a umožní lepšie zaobchádzanie a nadväzujúcich rozhodnutí. Tu sme použili retrospektívnu, pozorovaciu štúdiu s cieľom posúdiť expresiu a prognostická hodnota transkripčných faktorov SOX2 a CDX2 v rakoviny žalúdka.
Metódy
SOX2, CDX2, MUC5AC a vyjadrenie MUC2 boli posúdené 201 nádorov žalúdka imunohistochemicky , SOX2 a CDX2 výraz bol krížený s klinicko a nadväzujúcich údajov, ktoré majú určiť ich vplyv na správanie nádoru a výsledku. Okrem toho, SOX2
locus Stav kopírovania číslo bola hodnotená pomocou FISH (N = 21) a variácií v počte kópií Assay (N = 62).
Výsledky
SOX2 bol exprimovaný v 52% nádorov žalúdka a výrazne sa spojená s mužské pohlavie, T stupeň a N javisku. Okrem toho SOX2 výraz predpovedal prežitie pacienta chudobnejší, a kombinácia s CDX2 definoval dva molekulárnej fenotyp, SOX2 + CDX2 - oproti SOX2 -CDX2 +, ktoré predpovedajú najhoršie a najlepšie dlhodobé výsledok Skratka pacientov. Tieto profily v kombinácii s klinicko parametrami stratifikovat prognózu pacientov s črevných nádorov a rozširujúcich sa a u pacientov bez známok žilovej invázie. A konečne, SOX2
locus počtu kópií zisky boli zistené u 93% vzoriek, ktoré dosahujú prahovú amplifikácia v 14% a významne sa združovať s expresiu proteínu.
Závery
Ukázali sme, prvýkrát, že SOX2 kombinované s CDX2 profilom expresie v karcinómu žalúdka oddeliť pacientov do rôznych prognostických skupín, ktorá by dopĺňala klinicko informácie. Ďalej ukazujú molekulárnej mechanizmus pre SOX2 expresiu v podskupine žalúdočných prípadov rakoviny.
Kľúčové
SOX2 CDX2 Karcinóm žalúdka prognóza prežitie pozadí
rakovina žalúdka je jedným z najčastejšie diagnostikovaná rakoviny a teraz treťou najčastejšou príčinou úmrtí súvisiacich s rakovinou vo svete [1]. Klasifikácia Laurena rozdeľuje karcinómu žalúdka do dvoch hlavných histologických typov: intestinálnu a difúzna [2]. Predstavujú odlišné morfologické, klinické a epidemiologické črty a sú myšlienka vytvoriť z aktivácie nezávislých molekulárnych mechanizmov. Epidemiologické údaje ukazujú, že vo väčšine prípadov, rakovina žalúdka nevzniká de novo
z normálnej žalúdočné epitel, ale skôr výsledkom viacstupňovom procese, prostredníctvom po sebe idúcich genetické a epigenetické zmeny v mnohých génov. Na rozdiel od typu difúzna, pre ktoré predisponujúce lézie nie sú dobre zavedené, postupnosť udalostí, ktoré vedú k rakovine žalúdka intestinálneho typu je dobre popísaný. V súlade s Correa v kaskáde, sa vyvíja v stupňovito, spravidla iniciované zápalový proces vyvolanej Helicobacter pylori
, čo môže viesť až k multifokálne atrofickou gastritídu, črevné metaplázia (IM), dysplázia a nakoniec adenokarcinóm [3].
hoci došlo k trvalému poklesu v žalúdku výskytu rakoviny v celosvetovom meradle, rozšírenie a starnutie svetovej populácie predpovedá nárast počtu prípadov, a to napriek najnovším vývojom v oblasti diagnostiky a liečby, prognózu žalúdočných pacientov s rakovinou ostatkov chudobný. To sa premieta do miera prežitia 5 rokov nie viac ako 25%, v Európe [4]. Väčšina pacientov s rakovinou žalúdka už pokročilom štádiu choroby pri diagnóze, pre ktorých je jedinou možnosťou vyliečenia sa opiera o úplnom chirurgickom odstránení nádoru, s rozsiahlymi lymfadenektómia, ktoré môžu byť doplnené podaním neoadjuvantnej alebo adjuvantnej chemoterapie [5]. Najdôležitejším prognostickým faktorom, ktorý ovplyvňuje prežitie, ako aj voľbou liečby je fáza TNM. Avšak, ďalšiu vrstvu komplexnosti vychádza z pozorovania, že pacienti s rovnakým inscenácie často vykazujú odlišný klinický vývoj, upozorňovať na heterogénnosť rakovinou žalúdka [6]. To naznačuje, že jedinečné vrodené biologické vlastnosti týchto nádorov môže mať významný vplyv na ich agresívne potenciál. Z tohto dôvodu je stále naliehavá potreba objaviť ďalšie prognostické biomarkery k predpovedať výsledok presnejšie a, ako výsledok, pomôcť lepšie informované rozhodnutia zaobchádzanie s ohľadom na terapiu. Ako nádory, ktoré sú viac diferencovaných všeobecne správajú v menej agresívnym spôsobom sme spochybnila relevantnosť dvoch diferenciačných markerov, SOX2 a CDX2, pre biologické správanie karcinómov žalúdka. Tieto značky sú odlišne exprimované pozdĺž reťazca udalostí, ktoré vedú k rakovine žalúdka a sú úzko spojené s žalúdočné a črevné diferenciácie, respektíve [7].
CDX2 je homeoboxový transkripčný faktor črevo-špecifická, ktorého funkcia zabezpečuje vývoj a údržbu črevné diferenciácie v čreve a mimomaternicových miest, ktorá bola dobre zavedená na zvieracích modeloch [8, 9]. Je všeobecne známe, že CDX2 je vyjadrená v ľudskej črevnej metaplázia žalúdka a pažeráka [10]. Bolo preukázané, že sa tiež vyjadriť v dysplázia a posilniť tak svoju úlohu ako biomarker progresia v preneoplastických fázach žalúdočnej karcinogenézy [11].
SOX2 je členom SOX (SRY súvisiace s HMG box) rodina transkripčných faktorov , kódovaný vysoko konzervatívny, jedinom exónu génu. SOX2 hrá rôzne úlohy v celej vývoja a diferenciácie buniek, prvý orchestrating cicavčie embryogenézy [12], a neskôr prispievať k normálnej morfogeneze a homeostázy v foregut odvodených epitelu pažeráka, pľúc a priedušnice [13]. V dospelosti, SOX2 je exprimovaný v rôznych tkanivách, a to v dlaždicového epitelu lemujúcich pažeráka a žľazového epithelium žalúdka. Bolo ukázané, u myší, ktoré Sox2 expresie sa podieľa na všetkých bunkových línií sa normálne vyskytujú v žalúdku, čo naznačuje výrazne prispieva k žalúdočnej diferenciácie [14]. Navyše, abnormálne expresie SOX2 bola pozorovaná u nádorov mozgu, prsníka, pľúc a pažeráka [15-17]. Avšak v kontexte rakoviny žalúdka, jeho úloha je stále mätúce a je potrebné ďalej objasniť [18-20]. Navyše, jeho súhra s CDX2 zostáva nepreskúmanej.
Naším cieľom bolo analyzovať klinický význam SOX2 a CDX2 expresie v žalúdku biológie rakoviny. Získané výsledky ukazujú, že ich expresie v primárnych nádorov má príslušnú prognostický význam u pacientov s karcinómom žalúdka.
Metódy
Ľudské tkanivá a vzorky DNA
dvesto jeden prípady formalínom fixované zaliatych parafínu (FFPE ) vzoriek od pacientov s adenokarcinómom žalúdka podstupujúcich chirurgický zákrok v Centro Hospitalar S. João, portugalskom Porte v rokoch 1988 až 2010 boli študované. Prípady vybrané budú tie s dostupného materiálu zaliatych parafínu, klinicko a následné údaje získané z patológie a chirurgických pracoviskách v Centro Hospitalar S. João. Od tých, šesťdesiat sedem vzoriek boli poskytnuté ako mikroskopické sústavy tkanív (TMA), s 2 opakovaných jadra každej vzorky, z nádoru a tkaniva biobanka rovnakého oddelenia patológie. Tumor genómovej DNA (gDNA) sa získa z 62 prípadoch išlo o TMA. gDNA bol tiež extrahuje z FFPE vzoriek dvoch normálnych žalúdočných slizníc pomocou genomickej DNA Purification Kit (Citomed, Lisabon, Portugalsko), a použité ako kontroly. Všetky vzorky z biobanky boli získané s informovaným súhlasom pacienta. Použitie retrospektívnu vzoriek, z ktorých informovaný súhlas nedá získať je povolené pre výskumné štúdie podľa portugalského práva. Táto štúdia bola schválená etickou komisiou Centro Hospitalar S. João.
Imunohistochémia
FFPE rezy s 4 um z chirurgických vzoriek a TMA boli podrobené imunohistochemicky za SOX2, CDX2, MUC5AC a MUC2 po štandardnej metodológie. Stručne povedané, po odparafinovaním a rehydratáciu, sprístupnenie antigénu sa vykonáva v IHC-Tek epitop Retrieval parníkov Set (IHC World, Woodstock, MD, USA) po dobu 40 minút s 10 mM citrátového pufra, pH 6,0 (CDX2) alebo 10 mM, pH 8,0 EDTA (SOX2). Desialylaci bola vykonaná pre detekciu MUC2, 0,1 U /ml neuraminidázy z Clostridium perfringens
typu VI (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) v pufri octanu sodného pH 5,5 počas 2 hodín pri teplote 37 ° C. Endogénne peroxidáza bola blokovaná 3% peroxidom vodíka v metanole po dobu 10 minút. bola vykonaná inkubácie s primárnymi protilátkami proti CDX2 (1:50 riedenie, CDX2-88 klonových, BIOGENEX, San Ramon, CA, USA), MUC5AC (1:10 riedenie, CLH2 klon) a MUC2 (1:10 riedenie, PMH1 klon) cez noc, pri 4 ° C. Rezy potom boli inkubované s králičie anti-myšou sekundárnou protilátky značené biotínom, nasledované avidín /biotín-peroxidáza detekčným systémom (Vectastain ABC kit, Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA). Pre SOX2 farbenie, inkubácie s primárnou protilátkou (riedenie 1:50, SP76 klon, Cell Marque, Rockling, CA, USA) bola vykonávaná po dobu 1 hodiny pri teplote miestnosti a detekcia bola vykonaná za použitia detekcie Dako Envision REAL ™ ™ System peroxidáze /DAB + (DAKO, Glostrup, Dánsko), v súlade s pokynmi výrobcu. Detekcia expresie bola vykonaná s 3,3'-Diaminobenzidine (DAB) (Sigma, St. Louis, MO, USA) tkanivové rezy boli kontrastne Gilla hematoxylínom (Leica Microsystems, Amersham, Bucks, UK), dehydrované, objasniť a namontovať. Normálny žalúdočnej sliznice bola použitá ako pozitívna kontrola pre SOX2 a výraz MUC5AC a normálne sliznice hrubého čreva bol použitý ako pozitívna kontrola pre expresiu a CDX2 MUC2. Prípady boli považované za pozitívny, ak viac ako 5% buniek boli zafarbené s každou protilátku s konsenzom tromi pozorovateľmi (VC LD a RA).
Fluorescenčné in situ hybridizácia (FISH
)
FISH bola použitá na posúdiť SOX2
stav amplifikácie v 21 vzorkách, s použitím 2-farebného testu, ako je popísané v Bass et al
[17]. Sonda preklenujúca locus 3q26.33 (BAC klon CTD-2348H10) bol použitý pre určenie SOX2
počtu kópií a bol porovnávaný s referenčným hybridizujícím sondy k 3p22.3-3p22.2 (BAC klon RP11-286G5), zakúpené od Invitrogen (Carlsbad, CA, USA). Cieľovou Sonda bola označená digoxigeninem (DIG-11-UTP, Roche, Mannheim, Nemecko) a detegované pomocou anti-digoxigeninem fluorescenčné protilátkou (Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Nemecko) a referenčné sondou bol označený biotínom (BioPrime® DNA značenie System, Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) a detekovaná pomocou CY 3-avidín protilátky (Jackson Immunoresearch Lab, West Grove, USA).
Štyri um fotografie z každého žalúdočného adenokarcinómu vzorky bolo deparaffinised, rehydratovaný a umiestni sa do predhriatej roztoku NaSCN 1M pri teplote 80 ° C počas 10 minút. Vzorky boli štiepené s 6 mg /ml pepsínu (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) v HCl 0,02 N, pH 2 počas 30 minút pri 37 ° C. Sonda zmesi v 50% formamidu v 2 x SSC bola codenatured s jadrovou DNA pri 94 ° C po dobu 3 minút. Hybridizácia bola vykonávaná po dobu 30 hodín pri teplote 37 ° C. Jadrá bola kontrastne zafarbený s DAPI-Vectashield montážny systém (Vector, Burlingame, USA). Pre každý prípad, minimálne 67 buniek boli analyzované fluorescenčným mikroskopom (Zeiss Z1 Axiom) a snímky boli nasnímané × zväčšenie 1000, s použitím Zeiss Axiom vačky MRM a Axiovision rel. 4,8 softvér. Pomer medzi počtom SOX2 a referenčných signálov sondy bola vypočítaná pre každú bunku samostatne a priemer pomerov bola stanovená pre každý prípad. Génová amplifikácia bol považovaný vždy, keď bol priemer ≥2.
Variácií v počte kópií (CNV) testoch
Test CNV bola vykonaná pomocou špecifického testu TaqMan počtom kópií (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) V nadväznosti na pokynov výrobcu. Stručne povedané, multiplex PCR pre SOX2
(cieľ) a P
RNázy (endogénne kontrola) boli vykonané na Fast Real-time systému ABI Prism7500 PCR s použitím softvéru v2.0 (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA ). Dvadsať nanogramov gDNA a kontroly bez predlohy boli analyzované v štyroch. Normálne vzorky žalúdočnej sliznice boli použité na kalibráciu. Kvantifikácia počtu kópií génu SOX2
bolo vykonané s využitím metódy a analýza dát ΔΔCt bola vykonaná podľa CopyCaller softvér v2.0 (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). amplifikácia génu bola definovaná, keď sa počet kópií génu sa 2-krát väčšie, než je normálne žalúdočnej sliznice. Násobné zvýšenie medzi 1,5 a 2 bola považovaná počtom kópií zisk.
Štatistická analýza
chí kvadrát testu bol použitý na posúdenie významnosti rozdielov v klinicko-charakteristikách naprieč kategóriami SOX2 a CDX2 prejavu, s výnimkou veku, kedy významnosť rozdielov v prostriedku bola vypočítaná za použitia T
-test. Celkové prežívanie pacientov bola vypočítaná metódou Kaplan-Meier a významnosť rozdielov medzi surových krivkami prežitia bola testovaná pomocou log-rank testu. Cox proporcionálny nebezpečenstvo model bol použitý na výpočet jednorozmerných a viacrozmerných pomer rizík. Medián follow-up čas pre preživších pacientov bol 62 mesiacov. Miera prežitia 5 a 10 rokov bola odhadnutá metódou life-table. Rozdiely boli považované za štatisticky významný, keď sa p
hodnoty boli menšie ako 0,05. Analýzy boli vykonané pomocou SPSS softvér v21.0 (Chicago, IL, USA) a Stata V11 (College Station, TX, USA). Výsledky
SOX2 expresie v žalúdočných karcinómov
klinicko znaky rakoviny žalúdka 201 puzdra, rovnako ako expresné profily SOX2, CDX2, MUC2 a MUC5AC sú zhrnuté v tabuľke 1. Jadrový SOX2 expresie bola nájdená v 52% (104/201) žalúdočných karcinómov a expresie bola heterogénne medzi a v nádoroch (obrázok 1A, B a C). U 13% (18/134) výrazu prípady SOX2 bola vyššia u invazívnej vpredu (obrázok 1D a E) (toto hodnotenie bolo vykonané iba v prípadoch, ktoré nie sú zahrnuté do TMA, kde nebolo možné toto hodnotenie) .Table 1 Súhrn z klinicko-parametrov rakoviny žalúdka podľa vyjadrenia SOX2 a CDX2
SOX2
CDX2
negatívny
Pozitívne

Negatívny
Pozitívna
N
%
N
%

p
N
%
N
%
p
veku, roky1
Stredná ± SD
65,8 ± 12,7
63,4 ± 13,5
0,2
64,1 ± 13,6
65,2 ± 12,6
0,6
Medián (rozsah)
69 (34- 85)
66,5 (24-89)
69 (24-89)
67 (36-89)
sex1
Muž
52
41,9
72
58,1
0,02
75
60,5
49
39,5
0,1
Žena 45
58,4
32
41,6
38
49,4
39
50,6
TNM stage2
I /II
35
54,7
29
45,3
0,09
26
40,6
38
59,4
0,002
III /IV
59
44,7
73
55,3
83
62,9
49
37,1
T Stage3
T1 /T2
22
62,9
13
37,1
0,03
13
37,1
22
62,9
0,007
T3 /T4
75
45,5
90
54,5
99
60,0
66
40,0
N Stage1
N0
28
62,2
17
37,8
0,03
20
44,4
25
55,6
0,07
N +
69
44,2
87
55,8
93
59,6
63
40,4
Margins4
R0
85
47,5
94
52,5
0,5
98
54,7
81
45,3
0,2
R1
11
55,0
9
45,0
14
70,0
6
30,0
cievne invasion4
Negatívne
39
55,7
31
44,3
0,1
37
52,9
33
47,1
0,5
pozitívny
57
44,2
72
55,8
75
58,1
54
41,9
Láuren5
Črevné
44
49,4 45
50,6
0,9 45
50,6
44
49,4
0,3
Difúzna
20
48,8
21
51,2
26
63,4
15
36,6
Unclassified
31
46,3
36
53,7
40
59,7
27
40,3
Ming6
expanzívna
32
53,3
28
46,7
0,5
28
46,7
32
53,3
0,1
infiltrative
60
45,8
71
54,2
81
61,8
50
38,2
Nezaradené
2
66,7
1
33,3
1
33,3
2
66,7
SOX21
Negatívne
58
59,8
39
40,2
0,3
pozitívny
55
52,9
49
47,1
CDX21
Negatívne
58
51,3
55
48,7
0,3
pozitívny
39
44,3
49
55,7
MUC5AC1
Negatívne
39
44,8
48
55,2
0,4 ​​
42
48,3 45
51,7
0,05
Pozitívne
58
51,3
55
48,7
70
61,9
43
38,1
MUC21
Negatívne
69
48,6
73
51,4
0,9
84
52,2
58
40,8
0,1
Pozitívne
27
48,2
29
51,8
26
46,4
30
53,6
1N = 201; 2N = 196; 3N = 200; 4N = 199; 5N = 197; 6 N = 194.
Obrázok 1 SOX2 expresie proteínu v žalúdočných karcinómov, detekovaný imunohistochemicky. (A) Heterogenita SOX2 expresie v nádorov žalúdka. V rovnakom vzorke nádoru, v oblastiach s vysokou úrovňou SOX2 sú pozorované (B) v tesnej blízkosti oblastí s nižšou úrovňou expresie SOX2 (C). (D, E) SOX2 expresie na invazívnu prednej nádorov.
Ďalšie nás, či sa SOX2 expresia koreluje s klinicko-rysy prípadov. Táto analýza ukázala, že SOX2 expresia bola významne spojená s mužským pohlavím (p
= 0,02), s vyšším T fázu (p
= 0,03) as prítomnosťou regionálnych lymfatických uzlín (N stage) (s
= 0,03). Ostatné klinicko-patologické parametre, ktoré zahŕňali vek, stav TNM, nádorové klírens v resekčných okrajov (R kategória), vaskulárne invázie, klasifikácia Laurena a Ming klasifikácie neboli významne spojené s expresiou SOX2 (Tabuľka 1). Vzhľadom k tomu,
SOX2 je spojená so žalúdočné diferenciácie [14] sme študovali, či to bol udržiavaný v rakovine, za použitia MUC5AC ako žalúdočné marker. Avšak, žiadny vzťah bol nájdený medzi SOX2 a prejavu MUC5AC. Rovnako tak žiadny spätný asociácia bola zistená medzi SOX2 a CDX2 /MUC2 (použitý ako markery črevnej diferenciácia). Za zmienku stojí, CDX2 expresia bola významne spojená s nižším štádiu TNM (p
= 0,002) a s javiskom nižšou T (p = 0,007
). Okrem toho, aj keď nie štatisticky významné, tam bol trend inverzný vzťah medzi CDX2 a MUC5AC (p = 0,05)
.
Analýza prežitie
5-ročné celkové prežitie, na základe nadväzujúcich 199 pacientov bolo 35% (Ďalší súbor 1: Obrázok S1). Ďalšie sme pozorovali, že SOX2 expresiu v nádoroch bolo spojené, v jednorozmerné analýze, s celkovým horšie prežitie (p = 0,02)
, stratifikácia pacientov do dvoch prognostických skupín (obrázok 2A), s 5-ročným prežitím 45 a % u pacientov s nádormi SOX2- oproti 26% u pacientov s nádormi SOX2 +. Naopak, CDX2 expresie spojené s celkovou lepšou prežitie, aj keď rozdiel nedosiahol významnosti (dáta nie sú uvedené). Obrázok 2 Kaplan-Meierove krivky znázorňujúce pravdepodobnosť celkového prežitia u pacientov s rakovinou žalúdka podľa SOX2 výrazu (A) a podľa fenotypov SOX2 molekulárnej - /+ CDX2 a SOX2 + /CDX2 - (B).
Na základe združenia SOX2 a CDX2 s horším a lepším prežitie, rovnako ako čoraz menej agresívnych klinicko-funkcií, respektíve sme ďalej študovali výsledok pacientov podľa molekulárnych fenotypov definovaných oboch proteínov. Štyri skupiny pacientov by mohla byť definovaná (dodatočný súbor 1: Obrázok S2), z ktorých jeden s najlepším prežitie mal nádorov negatívny pre SOX2 a pozitívne pre CDX2 (SOX2- /CDX2 +), zatiaľ čo prežitia bola najnižšia u chorých nesúcich nádory s spätný profil, pozitívne a negatívne SOX2 pre CDX2 (SOX2 + /CDX2-) (p = 0,01
) (Ďalšie súbor 1: obrázok S2 a obrázok 2B). Prípady s expresiou oboch SOX2 a CDX2 alebo bez expresie buď značkou vykazovali podobné a prostredný prežitie (ďalší súbor 1: Obrázok S2). V SOX2- /CDX2 + a SOX2 + /CDX2- molekulárnej fenotypy, v porovnaní so samotným SOX2, predpovedajú veľmi podobná percenta prežitie na 5 rokov (49% vs. 26% a 45% vs 26%, v uvedenom poradí). Avšak, predpovedal 10-ročné prežitie na základe samotného SOX2 výrazu je 34% (SOX2-) vs. 22% (SOX2 +), zatiaľ čo s využitím molekulárnej fenotyp SOX2 /CDX2, stáva sa 41% (SOX2- /CDX2 +) vs. 14% (SOX2 + /CDX2-).
ďalej sme skúmali vplyv na prežívanie pacientov molekulárnych fenotypov definovaných SOX2 + vs SOX2-, CDX2 + vs CDX2- a SOX2- /CDX2 + oproti SOX2 + /CDX2- rozložená podľa klinicko-parametrov. V tomto prípade vynesením prežívanie buď podľa SOX2 alebo stavu CDX2 sama priniesla významné prognostické odlišnosti pre bývalý, v niektorých parametroch (intestinal- a rozšírenie typu nádorov) a žiadne rozdiely pre CDX2 alone (Ďalší súbor 1: Číselné údaje S3 a S4). Výsledky z Cox proporcionálneho modelu sú prezentované v ďalšej súbor 1: Tabuľka S1. Ešte raz, využitie kombinovanej vyjadrenie SOX2 a CDX2 rafinované predchádzajúcich výsledkov (obrázok 3). SOX2 + /CDX2 - profil predpovedal výrazne horšie výsledky u pacientov s črevnej (str
= 0,005) a rozširujúci (p = 0,002)
nádory, s pomerom nebezpečnosti 3,18 a 4,84, respektíve az tých, bez známok žilovej invázie (p
= 0,009), čo predstavuje pomer rizika 3,84. Aj keď hraničné nevýznamné, podobný trend bol pozorovaný u pacientov bez metastáz lymfatických uzlín (p
= 0,08) (obrázok 3). pomery rizík a 95% intervaly spoľahlivosti pre všetky skupiny sú podrobne predstavené v tabuľke 2 a zostáva významným po úprave vzhľadom na vek a pohlavie v viacrozmerné analýzy. Obrázok 3 Kaplan-Meierove krivky ukazujúce pravdepodobnosť celkového prežitia u pacientov s rakovinou žalúdka podľa SOX2 molekulárnej fenotypmi - /CDX2 + a SOX2 + /CDX2 - rozložená podľa klinicko-parametrov: Lauren klasifikácia (A), Ming klasifikácia (B) , žilovej invázie (C) a lymfatických uzlín (D).
Tabuľka 2 Cox proporcionálneho rizika modely prežitie ako funkcia molekulárnych fenotypov (SOX2 + /CDX2- vs SOX2- /CDX2 +) pre každý parameter klinickopatologické
parametrov
Pomer rizika (95% CI)
neupravený
P
Adjusted
P

Celkovo
1,95 (15.1.-31.03.)
0,01
1,90 (10.1.-28.03.)
0,02
klasifikácie Laurena
črevnej typu
3,18 (1,33-7,58)
0,009
2,93 (21.01.-10.7.)
0,02
difúzny typ
1,35 (0,35-5,17)
0,7
nezaradené
1,34 (0,60-3,02)
0,5
Ming klasifikácie
Rozšírenie
4.84 (1.64-14.29)
0,004
4,53 (1.29-15.85)
0,02
infiltrative
1,13 (0,60-2,13)
0,7
vaskulárnej invázie
Negatívne
3,84 (1,30 - 11,35)
0,02
3,82 (1,29 - 11,40)
0,02
Pozitívne
1.10 (0.60- 2.02)
0,8
N etapu
N0
2,96 (0,82 - 10,65)
0,1
3,98 (0,72 - 21,83)
0,1
N +
1.29 ( 0,72-2,30)
0,4 ​​
Skratka: CI
interval spoľahlivosti
Po očistení o veku a pohlavia (analýza s mnohými premennými pomocou Cox regresie modelu) zosilneniu
SOX2
Vzhľadom na to, že gén .. zosilnenie je udalosť tumor-špecifické vlastnosti počas malígne transformácie, a že SOX2 lokus je podrobené tejto zmeny v iných nádorov, a to z pľúc a pažeráka [17], my sme predpokladali, že SOX2 amplifikácia môže vysvetliť jeho expresiu a heterogénnosť, a to ako vo vnútri, tak medzi gastrických nádorov. Podporujúce túto hypotézu, prieskum vykonáva na Oncomine databázu ukázali, že SOX2 zaradil medzi top 10% génov s počtom kópií zisky z rakoviny žalúdka (ďalší súbor 1: Obrázok S5).
Na imunohistochemické základe údajov, sme vybrali 14 prípadov s SOX2 výraz a 7 negatívne prípady analyzovať pomocou 2-farebnej FISH testu. Pozorovali sme, že SOX2 bol zosilnený u 14% (2/14) prípadov s expresiou a v žiadnom z týchto prípadov bez výrazu (0/7). Reprezentatívny pozitívny prípad ako pre SOX2 expresiu a zosilnenie je znázornené na obrázku 4A a B. prípad s SOX2 prejavu, ale bez amplifikácia je znázornené na obrázku 4C a D. Okrem toho, analýza FISH preukázala prítomnosť vysoký stupeň počtu kópií zisku a rôznorodosť v tumoroch, pozorovať nielen s cieľovou sonda pre SOX2
locus ale aj s referenčnou sondou, ktorá sa nachádza na 3p ramena (ďalší súbor 1: Obrázok S6). Obrázok 4 žalúdočné prípadov rakoviny s expresiou SOX2 proteínu (A a C) sa môže prejaviť aj bez SOX2 zosilnenia (B a D, v danom poradí) určí FISH. Green značené sondy zamerať SOX2
, zatiaľ čo červené značené sondy sa zameriavajú na 3p paži. Jadrá sú farbené DAPI (modrá). (E) Sixty-dva gDNA vzorky karcinómu žalúdka, boli vyhodnotené na stave SOX2 počte kópií a v porovnaní s normálnou žalúdočnej sliznice (kalibrátora). (F) počet kópií SOX2 bola významne spojená s expresiou proteínov, určené IHC (p
menšie ako 0,05).
Pre objasnenie frekvenciu SOX2
locus počtu kópií zmeny v karcinómu žalúdka, sme vykonali kópiu -počet PCR za použitia gDNA z 62 prípadov rakoviny žalúdka, s použitím RNase P
sondy sa nachádza v chromozóme 14 ako referencie. Väčšina vzoriek (93%), ktorá je do určitej miery SOX2
variácií v počte kópií, v rozmedzí od 3 do 9 kópií (obr 4E). Významný pozitívny vzťah medzi počtu kópií zisk a SOX2 výrazu (p Hotel < 0,05). Bolo pozorované (obr 4F) z China Diskusia
rakovinou žalúdka je ochorenie s niekoľkými výsledky, ktoré nemožno predvídať púhymi klinicko-funkciami [6]. V dôsledku toho je identifikácia molekulárnych biomarkerov, ktoré môžu umožniť ďalší výsledok stratifikácia a liečebných rozhodnutie má zásadný význam.
V tejto štúdii sme sa vyznačuje expresiu transkripčného faktoru SOX2 rakoviny žalúdka a súvisí to s klinicko-funkcií a diferenciačných markerov síce MUC5AC (žalúdočné značka) a CDX2 a MUC2 (črevné markery). To viedlo k identifikácii dvoch rôznych prognostických skupín podľa SOX2 expresiu, ktorá by mohla byť ďalej spresniť tým, že do úvahy v kombinácii s výraz CDX2. Nakoniec sme sa rozpadli rôznorodosť SOX2
oku a chromozómu 3 počet kópií rakoviny žalúdka, ktoré preukazujú súvislosť medzi zvýšeným počtom kópií a expresiu proteínu SOX2.
Hlavným zistením tejto štúdie bolo zistenie, že SOX2 výraz sám, a ďalej očistený kombinácii s CDX2, umožňuje stratifikácii pacientov do podskupiny s výrazne odlišnými klinickými výsledkami. Navyše, keď sme spojili tieto molekulárne profily s klinicko-dátami, vyšlo najavo, že SOX2 + /CDX2 - profil spojená s horšou prognózou, v rámci podmnožín nádorov, ktoré majú všeobecne lepšiu prognózu: črevnej typu , rozširujúce typu a bez známok žilovej inváziu [21, 22]. Aj keď nie štatisticky významná, rovnaký trend bol pozorovaný pre nádory, ktoré predstavujú bez metastáz lymfatických uzlín. Tieto molekulárnej profily ukazujú odlišné biologické správanie nádoru s najväčšou pravdepodobnosťou v dôsledku progresie ochorenia alebo liečby rezistencie a môžu byť použité pre pokyn efektívnejšie terapiu alebo následné plány.
Najmä, ako je lymfatických uzlín, je jedným z hlavných rizikových faktory pre žalúdočné recidívy rakoviny, po operácii R0, všetci pacienti prezentujúca metastáz do lymfatických uzlín dostávať adjuvantnej terapie [23]. Avšak, naše výsledky ukazujú, že pacienti bez tohto rizikového faktora, a teda nie je liečená, predstavovať výrazne horší výsledok, keď sa nádor prezentuje s SOX2 + /CDX2 - molekulárnej profil. Táto predkladá hypotézu, že v rámci N0 nádorov, pacienti v rámci tohto molekulárnej podskupiny by pravdepodobne prospech z adjuvantnej terapie. Avšak, tieto pozorovania vyžadujú overovanie na väčších kohorty a bolo by to tiež veľmi informatívny pridať klinické údaje o liečbe pacienta.
SOX2 tiež javí ako potenciálny cieľ pre nových liečebných zákrokov. Hoci transkripčné faktory nie sú klasické liekovej ciele, prístupy k liečbe SOX2 cielenú sú už riešené u karcinómu prsníka. V nedávnej štúdii, SOX2
gén bol selektívne cielené použitie zinkové prsty na báze umelej transkripčných faktorov prístup, čo má za následok jeho vysoko špecifické, silný a dlhotrvajúci down-regulácia, prekladať do oslabeného nádorového bujnenia, a to ako in vitro

• Glutatión S-transferázy gén GSTM1, gén-gen interakcie, a rakovina žalúdka citlivosť: dôkazy z aktualizovaného meta-analysis
• Závan čerstvého vzduchu: štúdie zvyšovanie kvality porovnaním vzduchu cirkulujúceho techniku ​​oproti konvenčným spôsobom, aby sa zabránilo nasogastrickou sondou dysfunction