Validering av en ny metod som kombinerar både HER2 immunohistokemi och HER2 tvåfärgad silver in situ hybridisering på en bild för magcancer testning

Validering av en ny metod som kombinerar både HER2 immunohistokemi och HER2 tvåfärgad silver in situ
hybridisering på en bild för magcancer testning Bild Sammanfattning
Bakgrund
bedömning HER2-status är en förutsättning för fastställandet av en lämplig behandlingsstrategi i magcancer. Gastric cancer är mycket heterogena och separata utvärderingar av genförstärkning och proteinuttryck leder till osäkerhet i lokalisera olika kloner och tidskrävande. Denna studie utvärderar likvärdigheten den nya metoden att kombinera båda gen- och proteinplattformar på en bild.
Metoder
Immunohistokemi (IHC) och HER2 tvåfärgad silver in situ hybridisering (SISH) som enskilda metoder (IHC /SISH) och gen-proteinplattform som kombinerar båda metoderna på en bild (gen /protein) utfördes i slumpvis insamlade 100 fall av magcancer. Resultat av IHC /SISH jämfördes med genen /protein färgning.
Resultat
96 av 100 prover var bedömas. I genen /proteinfärgning, patologer kunde bedöma genamplifiering och därav följande proteinuttryck på enkelcellnivå. I jämförelseförsök, var genamplifiering observerades hos 14,6% av både konventionella SISH och gen /protein plattform (överenskommelse 100%, Kappa-koefficient κ = 1,0). Protein Expression poäng genom IHC var 70,8% (0), 10,4% (1+), 9,4% (2 +), och 9,4% (3+). Proteinexpression genom gen /protein-metoden var: 70,8% (0), 11,5% (1+), 7,3% (2+) och 10,4% (3+) av patienterna. Det fanns kompletta konkordanser i IHC bedömning av fall med poängen 0 (100,0%; k = 1). Höga konkordanser visas i poäng 1+ (98,96%; κ = 0,947) och 3+ (96,88%; k = 0,825) fall och bra konkordanser i 2 + fall (95,83%, κ = 0,728).
Slutsatser
Denna nya kombinerade plattformen har fördelen av att kunna utvärdera både genen och proteinstatus i samma cancercellen och kan vara av särskilt intresse för forskning och patientens vård.
artikel kategori
Disease Biomarker.
nyckelord
Magcancer HER2 Immunohistokemi Silver in situ hybridisering Gene-proteinanalys bakgrund
HER2-onkogenen (även kallad HER2 /neu eller erbB-2) på kromosom 17q21, kodar för ett 185-kD transmembran tyrosinkinasreceptor som hör till epidermal tillväxtfaktorreceptor (EGFR) familj bestående av EGFR /HER1, HER2, HER3 och HER4. HER2-aktivering spelar en central roll i celltillväxt och överlevnad, till stor del förmedlas genom RAS-MAPK-vägen. Det hämmar också celldöd genom fosfatidylinositol 3'-kinas-AKT-mammalian target of rapamycin (mTOR) vägen. HER2 överuttryck har rapporterats i en mängd olika solida tumörer [1-7]. Gene förstärkningar är sällsynta i andra sjukdomar och anti-HER2 terapi för närvarande valideras endast i bröstet och gastric cancer.
Baserat på resultaten av ToGA rättegång [8], var trastuzumab godkänd för metastaserande adenocarcinom i magen och matstrupsövergången i kombinationsterapi i USA och Europa. Krav är ett bevis på HER2 överuttryck. I Europa är detta definieras av en IHC 3+ resultat eller en IHC 2+ och positivt FISH eller SISH resultat (förhållande ≥ 2,0). IHC ansågs vara den primära metoden eftersom IHC negativ eller vecko positiv (1+) patienter som inte drog nytta av trastuzumab i ToGA rättegång, trots att de var ISH positiv. I litteraturen finns det dock stora skillnader i immunohistokemiska positivitet fastställs. Här, den procentuella andelen av HER2 positiva avancerade gastriska adenokarcinom varierar mellan olika studier, från 5% till 30% [9], troligtvis på grund av olika analysprotokoll och tolkningskriterier.
Presumtiva delstudier från två av adjuvanset randomiserade prövningar av trastuzumab jämfört med noll bröstcancer visade att cirka 20% av HER2-analyser utförda på institutioner på plats (vid primär behandling platsens patologi institutionen) var felaktig när samma prov omvärderas i en hög volym, centralt laboratorium [10, 11 ].
skillnad bröstcancer, är histopatologi för magcancer i termer av HER2 anses vara mer heterogena och fokal överuttryck av genamplifiering observeras ofta [12]. Därför är svårt att bestämma HER2-status väntas bli mer uttalad än i bröstcancer. Sammantaget tagit dessa resultat i beaktande, behövs mer tillförlitliga, reproducerbara och tidssparande metoder för att bedöma den HER2-status i magcancer. Endast ett fåtal publicerade studier som kombinerar IHC och in situ hybridisering metoder (men inte SISH) på en bild har utförts [13-16]. Avhandlingar studier utnyttjade standard IHC och kromogena eller fluorescens in situ hybridisering (CISH eller FISH) som enskilda metoder och jämfört dem med en samtidig analys (kombinerad på en bild) och hittade bra överensstämmelse med resultaten av enkel färgning. Så vitt vi vet finns det dock inga studier som direkt jämför resultat av både immunohistokemi (IHC) och silver in situ hybridisering (SISH) när var och en används separat med resultatet av att använda dem i kombination på ett enda avsnitt i magsäcken karcinom.
i den aktuella studien har HER2 proteinuttryck och genamplifiering status 100 gastric adenokarcinom och karcinom i esophagogastric korsningen granskas av konventionell IHC och ISH enkla metoder (IHC /SISH) och parallellt med den nya metoden att kombinera båda metoderna (gen /protein). Syftet med denna studie var att utvärdera likvärdigheten den nya genen proteinplattform i jämförelse med de enskilda färgningsmetoder.
Metoder
Patienter och vävnadsprov
formalinfixerade paraffininbäddade (FFPE) tumörprover från 100 patienter med magsår eller matstrupsövergången adenokarcinom valdes från en vävnad arkiv av prover vid Institutet för patologi vid Krankenhaus Nordwest. Projektet genomfördes med tillstånd av ansvariga etik utskott. För varje fall, var fyra olika färgningsmetoder som används i enlighet med de tillverkar FDA-godkända förfaranden: hematoxylin och eosin (H & E) för att bedöma prov tillräckliga och att bekräfta histologiska subtyp, immunohistokemi (IHC) för att utvärdera HER2-proteinet uttryck, silver in situ hybridisering (SISH) för att utvärdera genamplifiering och den nya genen protein plattform som kombinerar IHC och SISH på en bild.
Immunhistokemi
IHC utfördes med FDA-godkända Ventana PATHWAY kanin monoklonal antikropp 4B5 klon och med Ultra DAB Detection Kit (Ventana) på ett riktmärke XT automatiserad Stainer (Ventana, Tucson, AZ). I korthet innebar detta vävnadssnitt avparaffinerades med EZ Prep vid 75 ° C och 76 ° C, värme förbehandlades i Cell Conditioning 1 (CC1) för antigenåtervinning vid 76 ° C - 100 ° C och inkuberades sedan med anti-HER2 primära antikroppen för 16 min vid 37 ° C efter inaktivering av endogen peroxidasaktivitet med användning av UV-inhibitor under 4 min vid 37 ° C. Objektglasen inkuberades med en sekundär antikropp, följt av tillämpning av HRP Universal Multimer i 8 min. Antikroppar detekterades med användning av kromogen (för 38 min). Innan montering, var diabilder motfärgades med hematoxylin II under 4 minuter och blåelse reagens för 4 min. Att stödja giltigheten av färgning och identifiera experimentella artefakter, var en positiv kontroll inkluderas i varje körning.
Silver in situ hybridisering
Dual color SISH utfördes enligt den INFORM HER2 Dual ISH DNAProbe cocktail och Ultra SISH DNP Detection Kit /Ultra RED ISH DIG Detection Kit för HER2 och Chr 17 kvantifiering och förfarande (Ventana /Roche). Båda sonderna märktes med 2,4-dinitrofenol (DNP) och digoxigenin (DIG). Vävnadsobjektglasen avparaffinerades med EZ Prep vid 65 ° C-76 ° C och värme förbehandlades med EZ Prep-utspätt Cell Condi 2 (CC2) vid 90 ° C följt av proteasdigestion med ISH Protease 3 för 16 min vid 37 ° C. De genomiska DNA-vävnadssnitten och de nick-translate HER2 och Chr 17 prober var sam-denaturerades genom värmebehandling under 20 min vid 80 ° C följt av ett hybridiseringssteg under 6 h vid 44 ° C. De HER2-signaler detekterades med användning av kanin-anti-DNP-antikropp under 20 min vid 37 ° C och inkuberades med en HRP-konjugerad get-anti-kanin-antikropp under 16 min vid 37 ° C efter tre 8 min stringenstvättar. Signalen detekterades som silver insättningar med silveracetat, hydrokinon och väteperoxid. För Chr 17 detektering, ades objektglasen inkuberades med mus-anti-DIG-antikropp under 20 min vid 37 ° C och med en AP-konjugerad get-anti-mus-antikropp för 24 min vid 37 ° C. Chr 17 signalen utvecklades som red dot färgning med snabb röd och naftol fosfat. Glasen slutligen motfärgades med hematoxylin II och blåelse reagens före montering.
Gene /protein
Gene /protein plattform som kombinerar IHC och SISH på en bild. För att stödja giltigheten av färgning och identifiera experimentella artefakter, var en positiv kontroll i varje run.For HER2 proteinfärgning och för HER2 /Chr 17 hybridisering, var iView DAB Detection Kit och Ultra Detection Kits används. Proverna färgades i enlighet med flera av analysförhållanden för att genomföra en optimal protokoll som krävs för att uppnå IHC /SISH färgningsresultat som är jämförbara med individuell IHC och SISH testning. Optimeringen genomfördes i laboratorium Ventana (Roche) och dels i eget arbete. Optimala resultat uppnåddes genom att utföra IHC förfarandet vid SISH förfarande.
Prover avparaffinerades med EZ Prep vid 72 ° C i 6 cykler. För HER2 proteinfärgning, var vävnadssnitt värme förbehandlades i CC1 för antigenåtervinning vid 95 ° C och inkuberades sedan med anti-HER2 primär antikropp vid 37 ° C under 48 min efter inaktivering av endogen peroxidasaktivitet med användning av UV-inhibitor för 4 min vid 37 ° C. Objektglasen inkuberades med en biotinylerad sekundär antikropp, följt av applicering av HRP-konjugerad streptavidin under 8 min. En koppar förbättrad DAB Reaktionen användes för att visualisera proteinet. För HER2-genen och CHR 17 färgning, prover var värme förbehandlats med EZ Prep-utspätt CC2 vid 90 ° C i fyra cykler, följt av proteasdigestion med ISH Protease 2 för 12 min vid 37 ° C. Proberna denaturerades under 4 min vid 80 ° C och hybridiserades under 6 h vid 44 ° C med användning av en cocktail av DNP- och DIG-märkta sönder. HybClear lösning tillsattes för att blockera interaktionen mellan DNP och DAB insättning under hybridisering. Gense signaler detekterades med användning av kanin-anti-DNP-antikropp under 16 min vid 37 ° C och inkuberades med en HRP-konjugerad get-anti-kanin-antikropp under 16 min vid 37 ° C efter fyra 8 min stringenstvättar. Signalen utvecklades av silver insättning med silveracetat, hydrokinon och väteperoxid. För Chr 17 detektering, ades objektglasen inkuberades med mus-anti-DIG-antikropp under 16 min vid 37 ° C och med en AP-konjugerad get-anti-mus-antikropp för 24 min vid 37 ° C. Chr 17 signalen utvecklades som red dot färgning med snabb röd och naftol fosfat. Innan montering, var diabilder motfärgades med hematoxylin II under 8 minuter och blåelse reagens för 4 min.
Pathology översyn
Proverna oberoende tolkas av en patolog (AB) och en biolog utbildad i magcancer histologi (DW). Observatörerna mottagna proverna slumpvis, dvs SISH, IHC, och kombinerad metod utvärderades inte i association med varandra, men var för sig för varje patient. Konsensus båda granskare hittades efter varje utvärdering. Eftersom överensstämmande resultat mellan de båda metoderna kan vara ett resultat av interna observatör variabilitet snarare än skillnader i färgningskvalitet, var disharmoniska fall omvärderas av en tredje observatör som var blind för resultatet av den första utvärderingen, men utvärderat disharmoniska fall (metoder) i association med varandra. Slutligen konsensus upprättats mellan tredje observatör och de primära observatörer.
IHC resultat tolkades med hjälp av scoring system föreslås för magcancer av Hofmann et al. [17] och Rüschoff et al. [18]: 0, ingen reaktivitet eller membran reaktivitet i < 10% av tumörceller; 1+, svag /knappt märkbar membran reaktivitet i > 10% av tumörceller; 2+, svag till måttlig, komplett, lateral eller basolateral membran reaktivitet i > 10% av tumörceller; och 3+, stark, komplett, lateral eller basolateral membran reaktivitet hos ≥ 10% av tumörcellerna.
SISH- resultat, var det totala antalet HER2 och kromosom 17 signalerna räknas i minst 20 tumörcellkärnor i två olika områden. De HER2 /Chr 17 förhållanden tolkades i enlighet med ToGA FISH system för HER2-testning i mag- och gastroesofageal korsning (GEJ) cancer poäng enligt följande: < 2,0, HER2-genen inte amplifieras; ≥ 2,0, HER2-genen förstärks [17]. En genomsnittlig räkningen på sex eller mer betraktades som förstärks.
Statistisk analys
Analysen var explorativ utan fördefinierade hypotes eller provstorlek beräkningar. Antalet 100 patienter ansågs tillräcklig för att utföra de föreslagna statistiska test. Samband mellan IHC /SISH och gen /protein uppskattades med hjälp av Cohen's kappa koefficient (к). Kappatalet tolkning av Altmann [19] användes: к > 0,81, mycket bra avtal; 0,61-0,80, god överensstämmelse; 0,41-0,60 måttlig överenskommelse; 0,40-0,21, rättvist avtal; ≪ 0,20, liten överenskommelse. Statistiska analyser utfördes med hjälp av WinStat programvara (R.Fitch Software, version 2009,1).
Resultat
patientkarakteristika
Nittio sex av de 100 patientfall var bedömas. Ett fall uteslöts på grund av avsaknad av tumörceller och tre fall för fattiga signaler på den inre SISH färgning.
Majoriteten av patienterna var män (67,7%) och ≥ 65 år (70,8%) (tabell 1). Den kohort består av patienter med adenokarcinom i mitten distala magen (50,0%) eller GEJ (45,8%) med fler fall av Lauren`s tarm (67,7%) än diffusa tumörer (28,1%). Graderingen av en majoritet av proverna var G3 (50,0%), följt av G2 (39,6%) och tumörer som klassificeras som G2-3 (10,4%). 85,7% av resekterade patienter (n = 28) visade lymfkörtel metastas (N steg) och 64,3% visade inga fjärrmetastaser (M stadiet). I hälften av de opererande patienterna var T3 tumörstadium observeras, följt av T2 i 28,6%, T1 i 14,3% och T4 steg i 7,1% av patients.Table 1 patientens egenskaper och HER2 positivitet av undergrupper

Totalt n = 96 (%)
Positivity * (IHC 3+ eller SISH +) enda n (%)
Positivity * (IHC 3+ eller SISH +) combi n (%)
Sex
Kvinna
27 (28,1) Review 2 (7,4) Review 1 (3,7) Review Male
65 (67,7) Review 11 (16,9)
11 (16,9) katalog Okänd
4 (4,2) Review 3 (75,0) Review 3 (75,0) Review Ålder
18-94 år (median 69) Review ≥ 65
68 (70,8) Review 12 (17,6) Review 11 (16,2) Hotel < 65
28 (29,2) Review 4 (14,3) Review 4 (14,3) Review primärtumör plats
Mid distala magen
48 (50,0) Review 5 (10,4)
4 (8,3) katalog GEJ
44 (45,8) Review 8 (18,2) Review 8 (18,2) katalog Ej specificerad
4 (4,2) Review 3 (75,0)
3 (75,0) Review Lauren klassificering
Diffusa
27 (28,1) Review 3 (11,1) katalog 2 (7,4) Review Mixed
4 (4,2)
1 (25,0) Review en (25,0) Review Intestinal
65 (67,7) Review 12 (18,5) Review 12 (18,5) Review biopsi /resektion
Biopsi
68 (70,8) Review 10 (14,7) Review 9 (13,2) Review Fri
28 (29,2) Review 6 (21,4) Review 6 (21,4) Review T-steget (n = 28) Review T 1
4 (14,3) katalog 0
0
T 2 Review 8 (28,6) Review 2 (25,0) Review 2 (25,0)
T3
14 (50,0) Review 4 (28,6) Review 4 (28,6) Review T 4
2 (7,1) katalog 0
0
N skede (n = 28) katalog N +
24 (85,7) Review 5 (20,8) Review 5 (28,8) Review N -
4 (14,3) Review en (25,0)
en (25,0) Review M stadium (n = 28) katalog M +
5 (17,9) Review en (20,0) Review en (20,0) Review M -
18 (64,3) Review 3 (16,7) Review 3 (16,7) Review Mx
5 (17,9) Review 2 (40,0) Review 2 (40,0) Review Betygs
G2
38 (39,6) Review 6 (15,8) Review 6 (15,8) Review G2-3
10 (10,4) Review 2 (20,0) Review 2 (20,0)
G3
48 (50,0) Review 8 (16,7) Review 7 (14,6) katalog Förkortningar
: IHC
immunohistokemi, SISH
silver in situ hybridisering T
primärtumör, N
lymfkörtlar, M
metastaser * definieras som IHC 3+ eller SISH ≥2.0.
P
= 1 för alla jämförelser mellan IHC /SISH och gen /protein metoder (Fisher exakta test).
i tabell 1 HER2 positivitet av subgrupper presenteras också. Ingen signifikant skillnad noterades i HER2 positivitet jämfört med undergrupper och olika metoder.
Färgningsresultat för HER2 proteinuttryck och genamplifiering (enkla färgningsmetoder) katalog proteinuttryck poäng genom IHC var 0 och 1 + i 70,8% och 10,4% av patienterna (Tabell 2). 2,9% av poängen 0 och 10,0% av poängen 1 + fall förstärktes. I 9,4% av fallen, en måttlig uttryck (poäng 2 +) med 44,4% förstärkta fall upptäcktes. 9,4% av de färgade proverna visade en starkt uttryck (betyg 3 +) med 77,8% förstärkta fall. Figur 1 visar representativa resultat från enstaka staining.Table 2 Färgning resultat HER2 proteinuttryck och genamplifiering
Enda metod
kombinerad metod
IHC Score
IHC (n = 96)
SISH ≥ 2,0
IHC (n = 96)
SISH ≥ 2,0
n (%) katalog
n (%)
n (%)
n (%)
0
68 (70,8) Review 2 (2,9) Review 68 (70,8) Review 2 (2,9) katalog 1+
10 (10,4) Review en (10,0) Review 11 (11,5) Review 1 (9,1) Review 2+
9 (9,4) Review 4 (44,4) Review 7 (7,3) Review 2 (28,6) katalog 3+
9 (9,4) Review 7 (77,8) Review 10 (10,4) Review 9 (90,9) katalog Förkortningar
: IHC
immunohistokemi, SISH
silver in situ-hybridisering
Figur 1 Representativa resultat av de olika färgningsmetoder.. Intestinal tumör (hematoxylin och eosin (H & E), A.1, 20x) med IHC 3+ (immunohistokemi (IHC), A.2, 20x; gen /protein, A.4, 20x) och förstärkning (silver in situ hybridisering (SISH), A.3, 40x; gen /protein, A.4, 20x). IHC poäng 0 (IHC, B.2, 20x; gen /protein, B.4, 40x), tarm typ (H & E, B.1, 20x) och förstärkning (SISH, B.3, 40x; gen /protein , B.4, 40x).
Gene /protein (kombinerad färgningsmetod) Review proteinuttryck poäng efter gen /protein metod var 0, 1+, 2+ och 3+ i 70,8%, 11,5%, 7,3 % och 10,4% (tabell 2). Det fanns 2,9% /9,1% förstärks fall i prover med poängen 0/1 +. 28,6% förstärkta fall visade en måttlig färgning (poäng 2+). Prover med hög expression (3+) visade i 90,9% genamplifiering. Exempel på gen /proteinfärgning demonstreras i Figur 1.
Utvärdering av samstämmiga och disharmoniska fall
Bedömningen av IHC färgning i den konventionella enstaka och genen /protein-metoden inte alltid avslöja kongruenta resultat; avtal båda metoderna var också anges i tabell 3 Det var mycket goda konkordanser i resultat av förstärkta fall (avtal 100,0%, Kappa-koefficient κ = 1) samt poäng 0 (100%; κ = 1), poäng 1+ ( 98,96%; κ = 0,947) och poäng 3+ tumörprover (96,88%; κ = 0,825) i båda metoderna. Fall med poäng 2+ visade mindre överensstämmelse, men fortfarande bra (95,83%; κ = 0,728). Överensstämmelse mellan den totala HER2 positivitet (definierad som IHC 3+ eller SISH +) i standard eller ny metod var mycket bra (98,69%; κ = 0,963; 17,7% jämfört med 16,7%) Tabell 3 Konkordanser mellan enskilda metoder och kombinerad gen /protein. metoder
Single vs kombination
Concordance
Kappa-koefficient к
avtal Altmann [[15]]
SISH förstärks
100 % 1
Mycket bra
IHC poäng 0
100% 1
Mycket bra
IHC poäng 1+
98,96%
0,947
Mycket bra
IHC poäng 2+
95,83%
0,728
bra
IHC poäng 3+
96,88%
0,825
Mycket bra
Förkortningar
: IHC
immunohistokemi, SISH
silver in situ hybridisering.
Det fanns tolv avvikande fall innan de analyse av en tredje observatör (data visas ej). Efter omvärdering av en tredje observatör, förblev avvikande resultat i fyra tumörprover. Anledningen till de åtta avvikande fall i interimsanalys visade sig vara inom observatör variabilitet. Resultaten av den slutliga överensstämmande resultat visas i tabell 4.Table 4 Detaljerad utvärdering av överensstämmande resultat mellan metoder
Enstaka metoder
kombinerad metod
Case
histologi (Lauren)
IHC (Score)
SISH (≥ 2,0 /< 2,0)
IHC (Score)
SISH (≥ 2,0 /< 2,0)
6693
i
2+
≥2.0
3+
≥2.0
9924
i
2+
< 2,0
1+ Hotel < 2,0
20209
i
2+
≥2.0
3+
≥2.0
1057
d
3+ Hotel < 2,0
2+ Hotel < 2,0
Förkortningar
: IHC
immunohistokemi, SISH Diskussion
silver in situ hybridisering
.
Syftet med denna studie var att utvärdera genomförbarheten av nya gen /protein plattform i jämförelse med de enskilda färgningsmetoder i mag adenokarcinom och karcinom i esophagogastric korsningen.
av de utvärderingsbara prover 28,1% visade en diffus, 4,2 % en blandad och 67,7% en intestinal histologiska typ. Majoriteten av patienterna var ≥65 år (70,8%) och manliga (67,7%). Hastigheten för adenokarcinom i GEJ eller mitten för att distala magen var liknande (45,8% mot 50,0%). I standardmetoden, var 17,7% av patienterna HER2-positiv. Majoriteten av HER2-positiva tumörer var av intestinal histologi och lokaliserades i GE korsningen korrelerar detta väl med data från litteraturen [20, 21]. Sammantaget bygger på patient- och tumör egenskaper samt HER2 positivitet, är en representativ kollektiv.
Även stor erfarenhet för HER2-analys av IHC och ISH för bröstcancer finns det utvärderade gruppen, är det inte säkert att de kan vara direkt överförs till karcinom i mag-tarmkanalen. Uttrycket av HER2-protein, till skillnad från i karcinom i bröst, är heterogen och ofta fokalt uttalas. Fox et al. [12]. fastställt HER2-status i 100 vävnadsprover som diagnostiseras med avancerad magsäckscancer eller cancer i esophagogastric korsningen i olika laboratorier för att testa sina matcher. För detta IHC och CISH (kromogen in situ hybridisering) eller SISH tillämpades. Det fanns en god överensstämmelse mellan de olika laboratorierna om CISH eller SISH, men måttlig överensstämmelse för alla IHC poäng observerades. Baserat på resultaten av undersökningen, var författarens uppfattning att en bestämning av HER2-status baserat på IHC, följt av ISH (europeisk standard) är inte en optimal strategi utvärdering och rekommenderade att utföra både färgningsmetoder [12]. En annan studie [22] testade HER2-förstärkning och uttryck i 148 patienter med avancerad magsäckscancer med IHC och FISH /SISH. Positiva HER2 fall upptäcktes i endast 10% av IHC jämfört med 18% till 22% i in situ hybridisering. Inte bara för att det var lättare att reproducera, föreslog författaren in situ hybridisering teknik som bättre metod för att bestämma HER2-positivitet [22]. Baserat på TOGA rättegång [8], patienter med ISH positiv men IHC negativ eller veckovis (1+) positiva tumörer inte dra nytta av trastuzumab. Därför är användningen av fisk eller SISH som den primära och enda metod rekommenderas inte i Europa och IHC fortfarande anses vara det primära utvärderingsmetoden i många länder.
Så vitt vi vet, men det finns inga studier som direkt jämföra resultaten av både immunohistokemi (IHC) och silver in situ-hybridisering (SISH) när var och används separat med resultaten av att använda dem i kombination på en enda sektion i gastriska karcinom. Att visualisera RNA- och DNA-mål in situ, det finns olika sätt att märkning av prober med hjälp av fluorescens, kromogen eller silver detektering. Alla tidigare studier med inställningar som är jämförbara med vår analys används kromogena eller fluorescens in situ hybridisering (CISH eller FISH). Downs-Kelly et al. [14] kombinerad standard IHC med en avsättning av metalliskt silver genom EnzMetTM på en vävnad microarray (TMA) av bröstkarcinom och jämförde resultaten av IHC och fluorescens in situ hybridisering (FISH) när de utförs ensam. I en annan studie har författarna verkligen används en kombination av IHC och silver in situ hybridisering (SISH) i TMA av bröst- och magcancer prover, men jämfört resultaten av sådana som erhållits genom IHC och fluorescens in situ hybridisering (FISH) som enda färgning [16]. Reisenbichler et al. [15] rapporterade resultaten av jämförelsen av IHC och kromogen in situ hybridisering (CISH) som enstaka färgningar med dubbla analysen IHC /CISH. Den samtidiga utvärderingen av protein och genkombinationer på en enda bild erbjuds en mycket reproducerbar och mycket robust metod med goda konkordanser.
Att testa giltigheten av den nya genen /proteinfärgning jämfört med den standardiserade IHC och SISH ades konkordanser beräknades baserad på kappa koefficienten. Enligt riktlinjerna ASCO /CAP för bröstcancer, bör ett nytt test visar mer än 95% överensstämmelse med en validerad referensanalys [23]. I vår studie, den nya metoden visade konkordanser över 95% i fråga om alla provresultat. Det var mycket bra konkordanser i resultat av genamplifiering, liksom poäng 0 (var och en med 100% överensstämmelse), ställning 1+ (98,96% överensstämmelse) och poäng 3+ tumörprover (96,88% avtal). Fall med poäng 2+ visade mindre samstämmiga resultat, men fortfarande bra (95,83% överensstämmelse). Svårigheter i fall med måttligt uttryck i bedömningen och klassificeringen är kända i litteraturen. TAFE et al. [24]. visade att det fanns svårigheter att tilldela en slutpoäng i utvärderingen av IHC på grund av brist på tillförlitlig separation av fall med en HER2 poäng på 1 + eller 2 +. Dessa kategorier kan begränsas av subjektivitet och dålig reproducerbarhet. Fenomenet att disharmoniska resultat hos patienter med låg HER2 uttryck, som ibland fortfarande har HER2 genamplifiering, har rapporterats i matstrupscancer [24-26]. Den troligaste orsaken till detta discordance är inom tumör heterogenitet HER2-status i magsäcken eller GEJ cancer [17, 27, 28]. I vår studie var motstridiga IHC resultat observerades i fyra patienter, men dessa har lett till en kliniskt relevant skillnad i HER2 positivitet i en patient (patienti7). Patienten hade diffus typ magsäckscancer. Utvärderingen av diffusa tumörer verkar vara svårare än tarm typ tumörer [29, 30]. Enligt Rüschoff et al. [18]. endast 5% av dessa tumörer visar HER2 positivitet; signetring cellscancer är negativa. HER2-amplifiering är extremt sällsynt i diffust magkarcinom som är associerad med onormal E-cadherin expression [13, 31-33].
SISH är en relativt ny metod för detektion av amplifiering av HER2-genen. Talrika studier bekräftade en hög överensstämmelse med annan in situ-hybridiseringsmetoder såsom CISH och FISH [34]. Jämfört med IHC visar ISH en högre känslighet och specificitet och högre reproducerbarhet. Detta uttalande kan bekräftas genom att jämföra överensstämmelse av förstärkta fall våra metoder. Resultaten visade en mycket god överensstämmelse mellan båda metoderna (100,0%; к = 1). Dessutom är mindre känslig än IHC ISH på grund av en relativ stabilitet av DNA jämfört med skillnader i vävnadsfixering och bearbetning.
Vi arbetar för närvarande på en utökad studie som utvärderar huruvida denna nya metod är förknippad med en minskning av inter-observatör variabilitet i bestämningen av HER2-status i magcancer. Studien innehåller också en komponent tittar på den tid som behövs för att redovisa slutresultatet. Resultaten kommer att överlämnas till tidskriften som brev eller ett ursprungliga rapporten, så snart de är tillgängliga.
Slutsatser
I denna studie har vi tydligt visat att användning av den kombinerade metoden för att utföra HER2 proteinuttryck och genamplifiering på en enda bild kan ge resultat som liknar de som använder varje metod för sig i en kontrollerad studie genomföra tre oberoende observatörer. Alla författare läst och godkänt den slutliga manuskriptet.

• Långsiktiga effekter av laparoskopisk sleeve gastrectomy kontra roux-en-Y gastric bypass för behandling av kinesiska typ 2-diabetes mellitus patienter med body mass index 28-35 kg /m2
• Polymorfism hos TGFB1 och VEGF gener och överlevnaden hos patienter med magsäcks cancer