Validacija novu metodu koja kombinira oba HER2 imunohistokemija i HER2 srebro dual-boje in situ hibridizacije na jednom slajdu za ispitivanje karcinom želuca

Validacija novu metodu koja kombinira oba HER2 imunohistokemija i HER2 srebro dual-boje in situ hibridizacije pregled na jednom slajdu za ispitivanje karcinom želuca
apstraktne pregled pozadine
procjene stanja HER2 je preduvjet za uspostavu odgovarajuća strategija tretmana u raka želuca. Želučani karcinom su vrlo heterogene i odvojene ocjene genske amplifikacije i ekspresija proteina dovode do nesigurnosti u lokalizaciji različite klonove i dugotrajan. Ova studija procjenjuje jednakovaljanost novu metodu koja kombinira oba gena i proteinskih platforme na jedan slajd. Pregled Metode pregled imunohemije (IHH) i HER2 srebra dual-boje in situ hibridizacije (SISH) kao pojedinačnih metoda (IHH /SISH) a genski protein platforma kombinacijom oba postupka na jednu pločicu (gen /proteina) su provedena u nasumično sakupljenih 100 slučajevima želučanog adenokarcinoma. Rezultati IHC /SISH uspoređene su s gena /proteina bojenja. Pregled Rezultati
96 od 100 uzoraka bile oporeziv. U gena /proteina bojenje, patolozi su bili u stanju procijeniti amplifikacija gena i posljedica ekspresije proteina na razini jedne jedine stanice. Za usporedbu, ispitivanjima, gen pojačanje je zabilježena u 14,6% i od strane, konvencionalni SISH i gena /proteina platformi (Sporazum 100% kapa-koeficijent k = 1,0). Proteinski ekspresijski zgoditka IHC bila 70,8% (0), 10.4% (1+), 9,4% (2+), te 9,4% (3 +). Ekspresija proteina metodom gena /proteina su: 70,8% (0), 11.5% (1+), 7,3% (2+) i 10.4% (3 +) bolesnika. Bilo je kompletna konkordancije u IHC procjenu slučajeva s 0 (100,0%; k = 1). Visoke konkordancije prikazana su rezultat 1+ (98,96%; κ = 0,947) i 3+ (96,88%; k = 0,825) slučajevima i dobre konkordancijama u 2+ slučajeva (95,83%; κ = 0,728).
Zaključci
Ovaj roman u kombinaciji platforma ima prednost od bitak u mogućnosti za procjenu i gen i status proteina u istoj stanici raka, a može biti od posebnog interesa za istraživanje i pacijenta skrbi.
članak kategoriju pregled bolesti biomarker. pregled riječi
rak želuca HER2 imunohistokemijski srebro na situ hibridizacije Gene-protein assay Pozadina
HER2 onkogen (također se spominju kao HER2 /neu ili erbB-2) na kromosomu 17q21 kodira 185 kDa transmembranski receptor tirozin kinaze koji je to pripada receptor epidermalnog faktora rasta (EGFR), obitelj EGFR sastoji od /HER1, HER2, HER3 i HER4. HER2 aktivacija igra središnju ulogu u staničnoj proliferaciji i preživljavanju, uglavnom posredovani putem preko Ras-MAPK puta. On također inhibira smrt stanice fosfatidilinozitol 3'-kinaza AKT-sisavaca cilj rapamicina (mTOR) puta. HER2 prekomjerna ekspresija je prikazana u raznim solidnim tumorima [1-7]. Gene pojačanja su rijetki u drugim bolestima i anti-HER2 terapije trenutno se provjeravaju samo na dojke i želuca raka.
Na temelju rezultata toga suđenja [8], trastuzumab je odobren za metastatski adenokarcinom želuca i gastroezofagealnog spoja u kombinirana terapija u SAD-u i Europi. Uvjet je dokaz ekspresiju HER2. U Europi je definirana od strane IHC 3+ rezultat ili IHC 2+ i pozitivan FISH ili SISH rezultat (omjer ≥ 2.0). IHC smatrao primarnim način jer IHC negativna ili tjedno pozitivan (1+) pacijenti nisu koristi od trastuzumab na suđenju toga, iako su ISH pozitivni. U literaturi, međutim, ne postoji znatna varijacija u imunohistokemijske pozitivnost određena. Evo, postotak HER2 pozitivnim naprednih želučanog adenokarcinoma varira od studije do studije, od 5% do 30% [9], najvjerojatnije zbog različitih analiza protokola i kriterijima interpretacije.
Prospektivna substudies iz dva od adjuvantne randomiziranih ispitivanja trastuzumab naspram nula na rak dojke pokazala je da oko 20% HER2 testova provedenih u ustanovama na licu mjesta (na odjelu patologije primarni tretman lokacije) su netočne kad je isti uzorak je ponovno vrednovati u visokom volumenu, središnji laboratorij [10, 11 ]. pregled razliku raka dojke histopatologija karcinoma želuca u pogledu HER2 se smatra heterogenija i fokalne hiperekspresija amplifikacije gena često se opaža [12]. Stoga, poteškoće u određivanju stanja HER2 očekuje se da su izraženiji nego kod raka dojke. Sve u svemu, uzeti ove rezultate u obzir, potrebno je više pouzdana, ponovljiva i vrijeme štede metode za ocjenu stanja HER2 u raka želuca. Samo nekoliko objavljenih studija kombinirajući IHC i in situ metoda hibridizacije (ali ne SISH) na jednom slajdu su provedena [13-16]. Teze studije koriste standardni IHC i kromogena ili fluorescentne in situ hibridizacije (CISH ili riba) kao pojedinačnih metoda i usporedili ih s istovremenom analizom (u kombinaciji na jedan slajd) i našli dobro slaganje s rezultatima jednog bojenja. Koliko je nama poznato, međutim, ne postoje studije koje izravno usporediti rezultate oba imunohistokemijski (IHC) i srebrnih in situ hibridizacije (SISH) kad svaki se koristi pojedinačno s rezultatima njih koriste u kombinaciji u jednom dijelu u želučanom karcinomi.
u ovom istraživanju, HER2 ekspresija proteina i pojačanje gena status 100 želučane adenokarcinoma i karcinoma u esophagogastric spoj ispitani su konvencionalnom IHC i ISH jednog načina (IHC /SISH), te paralelno uz novi način kombiniranja obje metode (gena /proteina). Cilj ovog istraživanja bio je ocijeniti ekvivalentnost novog gena proteina platforme u odnosu na pojedinačne metode bojanja.
Metode pregled Pacijenti i uzorci tkiva
formalinom fiksne (FFPE) uzoraka tumora parafin uklopljenih od 100 bolesnika s želuca ili gastroezofagealnog spoja adenokarcinoma su odabrani iz arhive tkiva uzoraka u Institutu za patologiju u Krankenhaus Nordwest. Projekt je proveden uz dopuštenje nadležnog etičkog povjerenstva. Za svaki slučaj, četiri različite metode bojanja koriste se u skladu s manufacturer's FDA-odobreni postupci: hematoksilinom i eozinom (H &E) za procjenu prikladnosti uzorka i za potvrdu histološki podtip, imunohistokemijski (IHH) za procjenu HER2 proteina izraz, srebro in situ hibridizacije (SISH) procijeniti pojačanje gena i novi gen-proteina platforma koja kombinira IHC i SISH na jednom slajdu. pregled Imunohistokem pregled IHC je izvedena s FDA-odobreni Ventana PATHWAY zec monoklonskim antitijelima 4B5 klon i sa ultraVIEW Detection Kit DAB (Ventana) na mjerilo XT automatizirani Stainera (Ventana, Tucson, AZ). Ukratko, sekcije tkiva su deparafmizirani s EZ Prep na 75 ° C i 76 ° C, toplina prethodno tretira Cell uređajem 1 (CC1) za pronalaženje antigena na 76 ° C - 100 ° C i potom inkubiraju s anti-HER2 primarnog protutijela za 16 min na 37 ° C, nakon inaktivacije endogene peroksidaze pomoću UV inhibitor 4 min na 37 ° C. Rezovi su inkubirani sa sekundarnim protutijelom zatim primjenom HRP Universal multimer za 8 min. Antitijela su detektirana pomoću kromogen (za 38 min). Prije postavljanja, stakalca su prebrojane s hematoksilinom II za 4 min i vešplav reagensa 4 min. Za podršku valjanost bojenja i identificirati eksperimentalnih artefakte, pozitivna kontrola je bila uključena u svakoj vožnji. Pregled Silver in situ hibridizacija pregled Dual SISH boje provodi se u skladu s obavijestiti HER2 Dual ISH DNAProbe koktel i ultraVIEW SISH DNP Detection Kit /ultraVIEW RED ISH DIG Detection Kit za HER2 i Chr 17 kvantitativnim i postupku (Ventana /Roche). Obje sonde su obilježene s 2,4-dinitrofenol (DNP) i digoksigeninom (DIG). Predmetnice tkiva su deparafmizirani s EZ Prep na 65 ° C-76 ° C i zagrije se predtretira EZ preparativnu razrijeđenog Cell regenerator 2 (CC2) na 90 ° C, nakon čega slijedi proteaze digestijom s udarom proteaza 3 16 min na 37 ° C. Sekcije genomske DNA tkiva i nick-prevedene HER2 i CHR 17 sonde su bile ko-denaturira toplinske obrade kroz 20 min na 80 ° C, nakon čega slijedi hibridizacijske korak 6 sati pri 44 ° C. HER2 signali su detektirani pomoću anti-zečjeg antitijela DNP 20 min na 37 ° C i potom inkubiraene sa HRP-konjugiranim kozjim anti-zečjim antitijelom tijekom 16 min na 37 ° C, nakon tri 8 min rigoroznih ispiranja. Signal je otkriven kao srebrne depozita kod srebrnog acetata, hidrokinon i vodikovog peroksida. Za CHR 17 detekciju, slajdovi su inkubirani sa mišjim anti-DIG antitijelom tijekom 20 min na 37 ° C, sa AP-konjugiranim kozjim anti-mišjim antitijelom tijekom 24 min na 37 ° C. Komisije za ljudska prava 17. signal je razvijen kao red dot bojenje s brzim crvene i naftol fosfata. Rezovi su konačno negativno hematoksilinom II i vešplav reagensa prije montaže.
Gene /proteina pregled Gene /proteina platforma koja kombinira IHC i SISH na jednom slajdu. Za podršku valjanost bojenja i identificirati eksperimentalnih artefakte, pozitivna kontrola je bila uključena u svaku run.For HER2 proteina bojenja i HER2 /Chr 17 hibridizacije, korišteni su iView DAB Detection Kit i ultraVIEW Detection Kit. Uzorci su obojeni u nekoliko uvjetima ispitivanja provesti optimalan protokol potreban da bi se postigla IHC /SISH bojenje rezultate usporedive s onima iz pojedinog IHC i SISH testiranje. Optimizacija je provedena u laboratoriju Ventana (Roche), a dijelom u vlastitom radu. Optimalni rezultati ostvareni obavljanjem postupka IHC prije postupka SISH.
Uzorci su deparafmizirane s EZ Prep na 72 ° C u 6 ciklusa. Za HER2 proteina bojenja, sekcije tkiva su toplina prethodno tretira CC1 za dohvat antigena na 95 ° C i potom inkubiraju s primarnim antitijelom anti-HER2 na 37 ° C kroz 48 min nakon inaktivacije endogene peroksidaze UV-inhibitor za 4 minute na 37 ° C. Rezovi su inkubirani s biotiniliranim sekundarnim protutijelom zatim primjenom HRP-streptavidin konjugiran na 8 min. Bakra pojačan DAB reakcija se koristi za vizualizaciju proteina. Za HER2 gena i CHR 17 bojenje, uzorci toplinski tretirane s EZ preparativnu razrijeđenog CC2 na 90 ° C tijekom četiri ciklusa, nakon čega slijedi proteaze digestijom s udarom proteaza 2 za 12 min na 37 ° C. Sonde se denaturira tijekom 4 min na 80 ° C i hibridizirani 6 h na 44 ° C pomoću koktel DNP- i DIG-označene probe. HybClear otopina je dodana da blokira interakciju između DNP i DAB depozita tijekom hibridizacije. Genski signali su detektirani pomoću anti-zečjeg antitijela DNP 16 minuta na 37 ° C, i inkubirani s HRP-konjugiranim kozjim anti-zečjim antitijelom tijekom 16 min na 37 ° C, nakon četiri 8 min rigoroznih ispiranja. Signal je razvijen od strane srebrne depozita sa srebrnim acetatom, hidrokinon i vodikovog peroksida. Za CHR 17 detekciju, slajdovi su inkubirani sa mišjim anti-DIG antitijelom tijekom 16 min na 37 ° C i s AP-konjugiranim kozjim anti-mišjim antitijelom tijekom 24 min na 37 ° C. Komisije za ljudska prava 17. signal je razvijen kao red dot bojenje s brzim crvene i naftol fosfata. Prije montaže, slajdovi su prebrojane s hematoksilinom II za 8 minuta i vešplav reagens za 4 min. Pregled Patologija pregled
Uzorci su samostalno interpretirati od strane patologa (AB) i biolog obučeni u želučanom histologiju raka (DW). Promatrači dobila uzorke slučajno, tj SISH, IHC, te u kombinaciji metoda nisu procijenjeni u suradnji s drugima, ali posebno za svakog pacijenta. Konsenzus od oba recenzenta pronađen nakon svake procjene. Zbog oprečnim rezultatima između obje metode mogu biti rezultat unutar promatrača varijabilnosti, a ne razlike u kvaliteti bojenje, neusklađenih slučajeva reevaluated treća promatrač koji je bio slijep na rezultate prvog ocjenjivanja, ali ocjenjuju neusklađenih slučajevi (metode) u kombinaciji jedni s drugima. Na kraju, konsenzus je uspostavljen između trećeg promatrača i primarnih promatrača.
Rezultati IHC su interpretirani pomoću shema bodovanja predloženi za rak želuca by Hofmann i sur. [17] i Rüschoff et al. [18]: 0, nema reaktivnost ili membranski reaktivnost u < 10% tumorskih stanica; 1+, blijeda /jedva primjetan membranski reaktivnost u > 10% tumorskih stanica; 2+, slaba do umjerena kompletan, bočno ili bazolateralnu Membranozni reaktivnost u > 10% tumorskih stanica; i 3+, jaka potpuna, bočno ili bazolateralnu membranski reaktivnost u ≥ 10% tumorskih stanica.
U SISH rezultatima, ukupni broj HER2 i kromosomu 17 signali se mjeri u najmanje 20 staničnih jezgara u dva različita područja. HER2 /Chr 17 omjeri su interpretirani u skladu s toga FISH bodovanja shema za ispitivanje HER2 u želuca i gastroezofagealnog spoja (GEJ) rak kako slijedi: < 2.0, HER2 gena ne pojačavaju; ≥ 2,0, HER2 gen amplificiran [17]. Prosječan broj od šest ili više bio je smatran pojačavaju. Pregled, Statistička analiza pregled Analiza je istraživački bez unaprijed definiranih hipoteza ili uzoraka veličine izračune. Broj 100 bolesnika smatrao dostatno za obavljanje predloženih statističkih testova. Korelacija između IHC /SISH i gena /proteina procijenjene su korištenjem Cohen's koeficijent kapa (к). Tumačenje kappa vrijednost od Altmann [19] se koristi: к > 0,81, vrlo dobar sporazum; 0,61 - 0,80, dobro slaganje; 0,41-0,60 umjerena sporazum; 0,40 - 0,21, fer dogovor; ≪ 0.20, blago sporazuma. Statistička analiza je provedena pomoću WinStat softver (R.Fitch Software, verzija 2009,1). Pregled Rezultati
pacijenata karakteristikama
devedeset šest slučajeva 100 pacijenata su oporeziv. Jedan slučaj je bio isključen zbog nedostatka tumorskih stanica i tri slučaja za siromašne signala u jednom SISH bojenja.
Većina pacijenata su bili muškarci (67,7%), a ≥ 65 godina (70,8%) (Tablica 1). Kohorta sastoji od bolesnika s karcinomom sredine prema distalnom želucu (50.0%) ili GEJ (45,8%) s više slučajeva Lauren`s crijeva (67.7%) od šire tumora (28.1%). Ocjenjivanje većine uzoraka bila je G3 (50,0%), nakon čega slijedi G2 (39,6%) i tumorima klasificiranim kao G2-3 (10,4%). 85,7% od reseciranih bolesnika (n = 28) pokazala je limfni čvor metastaza (n faza) i 64,3% nisu pokazali udaljenih metastaza (M faza). U polovici resected bolesnika, stadij T3 tumor uočeno, nakon čega slijedi T2 u 28,6%, T1 u 14,3% i T4 fazi 7,1% patients.Table 1 Patient's karakteristikama i HER2 pozitivnosti koje podskupine pregled
Ukupno n = 96 (%)
pozitivnosti * (IHC 3+ ili SISH +) single n (%)
pozitivnosti * (IHC 3+ ili SISH +) combi n (%)
Sex pregled Ženski pregled 27 (28,1) pregled 2 (7.4) pregled, 1 (3,7) pregled Muški pregled 65 (67.7)
11 (16,9) pregled, 11 (16,9) pregled Nepoznati pregled 4 (4.2)
3 (75,0)
3 (75,0) pregled Age pregled 18-94 god (medijan 69) pregled ≥ 65 pregled, 68 (70,8)
12 (17,6)
11 (16,2) izvoznici < 65 pregled, 28 (29,2) pregled, 4 (14,3) pregled, 4 (14,3) pregled Primarna lokacija tumora pregled sredine do distalnog želudac pregled 48 (50,0) pregled 5 (10,4)
4 (8.3) pregled GEJ pregled 44 (45,8) pregled, 8 (18,2) pregled, 8 (18,2)
Nije specificirano
4 (4.2) pregled, 3 (75,0) pregled 3 (75,0) pregled, Lauren klasifikacija pregled difuznu pregled 27 (28,1) pregled, 3 (11,1)
2 (7,4)
Mixed
4 (4.2)
1 (25.0) pregled, 1 (25.0) pregled crijeva pregled 65 (67.7)
12 (18,5)
12 (18,5) pregled biopsije /resekcija pregled biopsija pregled 68 (70,8)
10 (14,7)
9 (13.2)
resekcija pregled, 28 (29,2) pregled 6 (21,4)
6 (21,4)
T fazu (n = 28) pregled, T 1 pregled 4 (14,3) pregled, 0
0 pregled T2 pregled 8 (28,6) pregled 2 (25.0) pregled 2 (25,0)
T3 pregled 14 (50,0) pregled, 4 (28,6) pregled, 4 (28,6) pregled, T 4 pregled 2 (7.1) pregled, 0
0 pregled N pozornici (n = 28) pregled, N + pregled, 24 (85,7) pregled 5 (20,8) pregled 5 (28,8) pregled, N - pregled 4 (14,3) pregled, 1 (25.0) pregled, 1 (25.0) pregled, M fazi (n = 28) pregled, M + pregled 5 (17,9) pregled, 1 (20.0) pregled, 1 (20.0) pregled, M -
18 (64,3) pregled, 3 (16,7)
3 (16,7) pregled Mx
5 (17,9)
2 (40.0)
2 (40.0) pregled, ocjenjivanja
G2 pregled 38 (39,6) pregled 6 (15,8) pregled 6 (15,8) pregled G2-3 pregled 10 (10,4) pregled 2 (20.0) pregled 2 (20.0) pregled G3 pregled 48 (50,0) pregled, 8 (16,7) pregled, 7 (14,6) pregled Kratice pregled: IHC pregled imunohistokemijski, SISH pregled srebra in situ hibridizacija T
primarni tumor, n pregled limfnih čvorova, m pregled, metastaze * definira kao IHC 3+ ili SISH ≥2.0. pregled P pregled = 1 za sve usporedbe između IHC /SISH i metode gena /proteina (Fisher egzaktni test).
U tablici 1 HER2 pozitivni po podgrupama je također predstavljena. Nije uočena značajna razlika u HER2 pozitivnosti u usporedbi s podskupinama i različitim metodama.
Bojenja rezultate za HER2 ekspresije proteina i gena pojačanje (single metode bojanja)
ekspresije proteina rezultate na temelju IHC su 0 i 1 + u 70,8%, a 10,4% bolesnika (Tablica 2). 2,9% rezultat 0 i 10,0% rezultat je 1 + slučajevima su povećani. U 9,4% slučajeva, umjereni izraz (ocjena 2 +) s 44,4% pojačanim predmetima bio otkriven. 9,4% od obojenih uzoraka pokazali jak izraz (ocjena 3 +) s 77,8% pojačanim predmetima. Slika 1 prikazuje reprezentativne rezultate od pojedinačnih staining.Table 2 rezultata bojenja za HER2 ekspresiju proteina i amplifikacije gena pregled pregled jedinstvenu metodu
Zajednička metoda pregled pregled IHC ocjenu
IHC (n = 96)
SISH ≥ 2,0
IHC (n = 96)
SISH ≥ 2,0
n (%) pregled
n (%)
n (%)
n (%)
0 pregled 68 (70,8) pregled 2 (2.9) pregled 68 (70,8) pregled 2 (2.9) pregled 1+ pregled 10 (10,4) pregled, 1 (10.0)
11 (11,5) pregled, 1 (9.1) pregled 2+
9 (9,4) pregled, 4 (44,4)
7 (7.3)
2 (28.6) pregled 3+ pregled 9 (9,4) pregled, 7 (77,8)
10 (10.4) pregled, 9 (90,9) pregled Kratice pregled: IHC pregled imunohistokemijski, SISH pregled srebra in situ hibridizacije
Slika 1 reprezentativne rezultate različitih metoda bojanja.. Crijevna tumora (hematoksilinom i eozinom (H &E) A. 1, 20x) sa IHC 3+ (imunohistokemija (IHH), A.2, 20x genski /protein, A.4, 20x) i pojačanje (srebro in situ hibridizacija (SISH), A.3, 40x gena /proteina, A.4, 20x). IHC 0 (IHC, B.2, 20x genski /protein, B.4, 40x), intestinalna tip (H &E B.1, 20x) i pojačanje (SISH, B.3, 40x, genski /protein , B.4, 40x). pregled, Gene /protein (kombinirana metoda bojanja) pregled ekspresije proteina postiže metodom gena /proteina su 0, 1+, 2+ i 3+ na 70,8%, 11,5%, 7,3 % i 10,4% (Tablica 2). Bilo je 2,9% /9,1% pojačan slučajeva u uzorcima s rezultatom 0 /1+. 28,6% umnoženi slučajeva pokazala umjerenu bojanje (score 2+). Uzorci s visokim izraz (3+) pokazali su u amplifikacije gena 90,9%. Primjeri gena /proteina bojenje su prikazani na slici 1.
Vrednovanje saglasan i oprečnim predmetima pregled i procjenu IHC bojenje u konvencionalne i metode gena /proteina nisu uvijek otkriti sukladna rezultate; sporazumi obje metode su također navedena u tablici 3 Bilo je jako dobrih konkordancije u rezultatima pojačanih predmeta (Sporazum 100,0%; Kappa-koeficijent κ = 1), kao i rezultat 0 (100%; κ = 1), rezultat 1+ ( 98,96%; κ = 0,947) i rezultat 3+ uzoraka tumora (96,88%; κ = 0,825) u obje metode. Slučajevi s rezultatom 2+ pokazali su manju podudarnost, iako je još uvijek dobar (95,83%; κ = 0,728). Podudarnost između cjelokupnog HER2 pozitivnosti (definiran kao IHC 3+ ili SISH +) u standardnoj ili nove metode bio je jako dobar (98,69%; κ = 0,963; 17,7% vs 16,7%) Tablica 3. Suglasnosti između pojedinih metoda i kombinirano gena /proteina. metode
jednu vs kombinaciju
Concordance
Kappa-koeficijent к
Sporazum Altmann [[15]]
SISH pojačan pregled 100 %
1 pregled Vrlo dobar pregled IHC rezultat 0 pregled 100%
1
Vrlo dobar
IHC ocjenu 1+
98.96%
0.947 pregled, vrlo dobar pregled IHC ocjena 2+ pregled 95,83%
0,728 pregled dobro
IHC rezultatom 3+
96,88%
0.825 pregled Vrlo dobar pregled Kratice pregled: IHC
imunohistokemijske SISH pregled srebra in situ hibridizacije.
bilo je dvanaest proturječni slučajevi prije ponovnog analiziranja pomoću treće promatrača (podaci nisu prikazani). Nakon ponovne procjene od strane trećih promatrača, proturječni rezultati su ostali u četiri uzorka tumora. Razlog za osam proturječne slučajeva u privremenoj analizi je utvrđeno da je varijabilnost unutar promatrač. Rezultati završnih oprečnim rezultatima prikazani su u tablici 4.Table 4 detaljnu evaluaciju oprečnim rezultatima između metoda pregled pregled pojedinačnih metoda
Kombinirana metoda
Case
Histologija (Lauren)
IHC (Ocjena)
SISH (≥ 2.0 /< 2,0)
IHC (Ocjena)
SISH (≥ 2.0 /< 2,0)
6693 pregled i pregled 2+ pregled ≥2.0 pregled 3+ pregled ≥2.0 pregled 9924 pregled i pregled 2+
< 2,0 pregled, 1+ izvoznici < 2,0 pregled, 20.209 pregled i pregled 2+ pregled ≥2.0 pregled 3+ pregled ≥2.0 pregled 1057 pregled d pregled 3+ izvoznici < 2,0 pregled, 2+ izvoznici < 2,0 pregled Kratice pregled. IHC pregled imunohistokemijski, SISH pregled srebra in situ hibridizacije pregled Rasprava pregled Cilj ovog istraživanja bio je procijeniti izvedivost novog gena /proteina platforme u odnosu na pojedinačne metode bojanja u želučanog adenokarcinoma i karcinoma u esophagogastric spoju. Netlogu od procjenjivati ​​uzoraka 28,1% je na difuznu, 4.2 % mješoviti i 67,7% crijevni histološki tip tumora. Većina pacijenata su bili stari (70,8%) i muški (67,7%), ≥65 godina. Stopa adenokarcinoma GEJ ili u sredini do distalnog želuca bila je slična (45,8% vs 50,0%). Standardnim postupkom, 17.7% pacijenata bilo HER2 pozitivni. Većina HER2-pozitivnim tumorima su crijevne histologiju i lokalizirane u GE spoju, to dobro korelira s podacima o literaturi [20, 21]. Sve u svemu, na temelju pacijenata i tumorskih karakteristikama kao i HER2 pozitivnosti je ocijenjena skupina je predstavnik kolektiva.
Iako značajan doživljaj za HER2 analizi IHC i ISH za rak dojke je dostupna, nije sigurno da li oni mogu biti izravno prenese karcinoma probavnog trakta. Ekspresija HER2 proteina, za razliku od karcinoma dojke, je heterogena i često fokalno izražen. Fox i sur. [12]. utvrđuje status HER2 u 100 uzoraka tkiva s uznapredovalim rakom želuca ili raka esophagogastric čvora u različitim laboratorijima za testiranje svoje utakmice dijagnozom. Za to, IHC i CISH (kromogeni hibridizacija in situ) ili SISH su primijenjene. Bilo je dobro slaganje između različitih laboratorija u vezi CISH ili SISH, ali uočeno je umjerena podudarnost za sve IHC rezultate. Na temelju rezultata istrage, autorovo mišljenje je da je određivanje HER2 statusa na temelju IHC, nakon čega slijedi ISH (europske norme) nije optimalna strategija evaluacije i preporuča izvođenje obje metode bojanja [12]. Druga studija [22] testirali HER2 pojačanje i izraz u 148 bolesnika s uznapredovalim karcinomom želuca temelju IHC i riba /SISH. Pozitivne HER2 slučajevi otkriveni su u samo 10% od IHC u usporedbi s 18% na 22% u in situ hibridizacije. Ne samo zato što je lakše reproducirati, autor predlaže in situ hibridizacije tehnike kao bolji pristup za određivanje HER2 pozitivnosti [22]. Međutim, na temelju toga suđenje [8], bolesnici s ISH pozitivan, ali IHC negativna ili tjedno (1+) pozitivni tumori nisu koristi od trastuzumab. Dakle, korištenje FISH ili SISH kao primarni i jedini način se ne preporuča u Europi, a IHC još uvijek smatra kao metoda primarne evaluacije u mnogim zemljama.
Koliko je nama poznato, međutim, ne postoje studije koje izravno usporediti rezultate oba imunohistokemijski (IHC) i srebrnih in situ hibridizacije (SISH) kad svaki se koristi pojedinačno s rezultatima njih koriste u kombinaciji u jednom dijelu u želučanog karcinoma. Kako vizualizirati RNA i DNA ciljeve in situ, postoje različiti načini označavanja sonde koriste fluorescentne, kromogenog ili srebrni otkrivanje. Sve prethodne studije s postavkama usporedive našoj analizi koristi kromogenog ili fluorescentna in situ hibridizacija (CISH ili ribe). Padovi-Kelly i sur. [14] u kombinaciji standardni IHC s taloženjem metalnog srebra po EnzMetTM na mikročipa tkiva (TMA) i karcinomi dojke i usporedili rezultate IHC i fluorescentne in situ hibridizacije (FISH) kada obavljaju sami. U drugoj studiji, autori su zaista ima koristi kombinaciju IHC i srebro u situ hibridizacije (SISH) u TMA dojke i uzoraka raka želuca, ali u odnosu na rezultate dobivene IHC-a i fluorescentne in situ hibridizacije (FISH) kao jednog bojenja [16]. Reisenbichler et al. [15] izvijestili o rezultatima usporedbe IHC i kromogenog in situ hibridizacije (CISH) kao jednu stainings s dvostrukom analizom IHC /CISH. Istovremena procjena proteina i gena kombinacijama na jednom slajdu ponudio vrlo ponovljiv i vrlo robustan metodu s dobrim konkordancijama.
Ispitati valjanost novog gena /proteina mrlja u odnosu na standardizirane IHC i SISH, a konkordancije su izračunati na temelju koeficijenta kapa. Prema smjernicama ASCO /kapa za rak dojke, novi test trebao pokazati više od 95% podudarnost s potvrdom referentnim testom [23]. U našoj studiji, nova metoda pokazala konkordancijama iznad 95% u odnosu na sve ispitne rezultate. Bilo je vrlo dobrih konkordancije u rezultatima amplifikacije gena, kao i rezultat 0 (svaka sa 100% dogovoru), ocjena 1+ (98,96% sporazum) i ocjenu 3+ uzorci tumora (96,88% sporazum). Slučajevi s rezultatom 2+ pokazuje manje podudarno rezultate, iako je još uvijek dobar (95,83% sporazumu). Teškoće u slučajevima s umjerenom izražavanja u ocjenjivanje i razvrstavanje su poznati u literaturi. TAFE et al. [24]. pokazala je da je bilo poteškoća pri dodjeljivanju konačni rezultat u ocjeni IHC zbog nedostatka u pouzdano razdvajanje predmeta s HER2 rezultatom 1 + ili 2 +. Te kategorije mogu biti ograničena subjektivnosti i loša reproducibilnost. Fenomen koji se oprečnim rezultatima zabilježen je u bolesnika s niskom ekspresijom HER2, koji se ponekad još uvijek imaju pojačanje HER2 gena, objavljeno je u raka jednjaka [24-26]. Najvjerojatniji razlog za ovaj razilaženja je unutar tumor heterogenost HER2 statusa u želučanom ili GEJ raka [17, 27, 28]. U našoj studiji, oprečnim rezultatima IHC zabilježen je u četiri pacijenata, no oni su doveli do klinički značajne razlike u HER2 pozitivnosti u jednog bolesnika (samo pacijenti7). Pacijent je imao difuzni tip karcinoma želuca. Procjena difuznih tumora čini se da je teže nego crijevnih tumora tipa [29, 30]. Prema Rüschoff sur. [18]. samo 5% tih tumora HER2 pozitivnost; pečatni stanica prsten karcinomi su negativni. HER2 pojačanje je izuzetno rijetka u difuznom želučanog karcinoma koji je povezan s abnormalnim izražavanja E-kadherina [13, 31-33].
SISH je relativno nova metoda za detekciju amplifikaciju gena HER2. Brojne studije potvrdile visoku podudarnost s drugim in situ metoda hibridizacije kao CISH i FISH [34]. U usporedbi s IHC, ISH pokazuje veću osjetljivost i specifičnost i veću ponovljivost. Ova izjava može potvrditi usporedbom slaganje pojačanih predmeta u našim metodama. Rezultati su pokazali vrlo dobru sporazum između obje metode (100,0%; к = 1). Nadalje, ISH je manje osjetljiva od IHC zbog relativne stabilnosti DNA u odnosu na razlike u fiksacije i obrade tkiva.
Trenutno radimo na proširenoj studiji procjenjivanja je li to nova metoda je povezana sa smanjenjem inter-promatrač varijabilnost u određivanju HER2 statusa u raka želuca. Ova studija također uključuje komponentu gleda na vrijeme potrebno prijaviti konačne rezultate. Rezultati će biti dostavljen časopisu kao pismo ili originalni izvještaj, čim oni postanu dostupni. Pregled Zaključci pregled U ovoj studiji smo jasno pokazali da koristite kombinirane metode za obavljanje HER2 ekspresije proteina i amplifikacije gena na jednom slajdu može proizvesti rezultate slične onima koji koriste svaku metodu pojedinačno u kontroliranoj studiji provedbenim tri neovisne promatrače.

• Dugoročni učinci laparoskopske rukav gastrektomije odnosu Roux-en-Y želučani bypass za liječenje kineskog tipa pacijenata 2 šećerne bolesti s indeksom tjelesne mase 28-35 kg /M2
• Polimorfizmi TGFB1 i VEGF gena i preživljavanje pacijenata sa želučanim cancer