De validatie van een nieuwe werkwijze voor het combineren van zowel HER2 immunohistochemie en HER2 dual-kleur zilver in situ hybridisatie op een glijbaan voor maagcarcinoom testing

de validatie van een nieuwe werkwijze voor het combineren van zowel HER2 immunohistochemie en HER2 dual-kleur zilver in situ
hybridisatie op een glijbaan voor maagcarcinoom testen
Abstracte achtergrond
HER2-status assessment is een voorwaarde voor de oprichting van een passende behandeling strategie bij maagkanker. Gastric kankers zijn zeer heterogeen en aparte evaluaties van genamplificatie en eiwit expressie leiden tot onzekerheid in het lokaliseren van verschillende klonen en worden tijdrovend. Deze studie evalueert de gelijkwaardigheid van de nieuwe methode een combinatie van beide genen en eiwitten platforms op één dia.
Methods
Immunohistochemie (IHC) en HER2 dual-kleur zilver in situ hybridisatie (SISH) als enkele methoden (IHC /SISH) en gen-eiwit platform combinatie van beide methoden op één dia (gen /eiwit) werden uitgevoerd in willekeurig verzamelde 100 gevallen van adenocarcinoom van de maag. De resultaten van IHC /SISH werden vergeleken met gen /eiwit kleuring.
Resultaten
96 van de 100 monsters waren beoordeelbaar. In het gen /eiwit kleuring pathologen konden genamplificatie en daaropvolgende eiwitexpressie beoordeeld op de enkele cel niveau. In vergelijking studies werd genamplificatie bij 14,6% waargenomen door zowel conventionele SISH en gen /eiwit platform (overeenkomst 100%, Kappa-coëfficiënt κ = 1.0). Eiwit expressie scores door IHC waren 70,8% (0), 10,4% (1 +), 9,4% (2+) en 9,4% (3+). Eiwit expressie door gen /eiwit werkwijze waren: 70,8% (0), 11,5% (1+), 7,3% (2+) en 10,4% (3+) patiënten. Er waren volledige concordanties in IHC beoordeling van zaken met een score 0 (100,0%; κ = 1). Hoge concordanties worden getoond in score 1+ (98,96%; κ = 0,947) en 3+ (96,88%; κ = 0,825) gevallen en goede concordanties in 2+ gevallen (95,83%; κ = 0,728).
Conclusies
Deze nieuwe gecombineerde platform heeft het voordeel dat zowel gen en het eiwit status dezelfde kankercel en evalueren van bijzonder belang voor onderzoek en patiëntenzorg kan zijn.
Artikelcategorie
Disease Biomarker.
sleutelwoorden
Maagkanker HER2 Immunohistochemie Zilver in situ hybridisatie Gen-eiwit assay Achtergrond
HER2-oncogen (ook aangeduid als HER2 /neu of erbB-2) op chromosoom 17q21, codeert voor een 185 kD transmembraan receptor tyrosine kinase dat behoort tot de familie epidermale groeifactor receptor (EGFR) bestaande uit EGFR /HER1, HER2, HER3 en HER4. HER2 activering speelt een centrale rol in celproliferatie en overleving, voornamelijk gemedieerd door de RAS-MAPK pathway. Het remt ook celdood door het fosfatidylinositol 3'-kinase-AKT-zoogdieren doelwit van rapamycin (mTOR) route. HER2 overexpressie gerapporteerd in diverse vaste tumoren [1-7]. Gene amplificaties zijn zeldzaam bij andere ziekten en anti-HER2 therapie aanbevelen gevalideerd alleen in borst- en maagkanker.
Basis van de resultaten van de proef ToGA [8], werd trastuzumab goedgekeurd voor metastatische adenocarcinoom van de maag en gastro-oesofageale overgang in combinatietherapie in de VS en Europa. Voorwaarde is het bewijs van HER2-overexpressie. In Europa wordt dit bepaald door een IHC 3+ resultaat of een IHC 2+ en positief FISH of SISH resultaat (verhouding ≥ 2,0). IHC werd beschouwd als de primaire methode omdat IHC negatieve of wekelijks positieve (1+) van de patiënten niet profiteren van trastuzumab in de ToGA proces, hoewel ze ISH positief waren. In de literatuur, maar er is aanzienlijke variatie in de immunohistochemische positiviteit vastgesteld. Hier, het percentage positieve HER2 advanced gastrische adenocarcinomen varieert van studie, gaande van 5% tot 30% [9], waarschijnlijk door andere analyse protocollen en interpretatiecriteria.
Prognose substudies uit twee gerandomiseerde studies van adjuvans trastuzumab versus nihil bij borstkanker aangetoond dat ongeveer 20% van HER2 testen uitgevoerd in plaatselijke instellingen (in pathologieafdeling de primaire behandeling site) onjuist wanneer hetzelfde monster werd opnieuw geëvalueerd in een hoog volume, centraal laboratorium [10, 11 ].
Unlike borstkanker, is de histopathologie van maagkanker qua HER2 beschouwd heterogener en focale overexpressie van genamplificatie wordt vaak waargenomen [12]. Daarom leidt de vaststelling van de HER2-status worden verwacht duidelijker dan bij borstkanker is. Over het algemeen genomen van deze resultaten in aanmerking genomen, zijn betrouwbaarder, reproduceerbare en tijd sparende methoden voor de beoordeling van de HER2-status bij maagkanker nodig. Slechts weinig gepubliceerde studies combineren IHC en in situ hybridisatie methoden (maar niet SISH) aan de ene dia zijn uitgevoerd [13-16]. Theses studies gebruikte standaard IHC en chromogene of fluorescentie in situ hybridisatie (CISH of FISH) als enkele methoden en vergeleken met een gelijktijdige analyse (gecombineerd op één dia) en vond goede overeenstemming met de resultaten van enkele kleuring. Voor zover ons bekend, maar er zijn geen studies die direct resultaten van beide immunohistochemie (IHC) en zilver in situ hybridisatie (SISH) vergelijk wanneer elk afzonderlijk wordt gebruikt met de resultaten van het gebruik ervan in combinatie een enkele sectie gastrische carcinomen.
in de huidige studie, de HER2-eiwit expressie en genamplificatie status van 100 maag adenocarcinomen en carcinomen van de esofagogastrische kruising werden onderzocht door conventionele IHC en ISH enkele methoden (IHC /SISH) en, parallel door de nieuwe werkwijze te combineren beide methoden (gen /eiwit). Het doel van deze studie was om de gelijkwaardigheid van het nieuwe gen-eiwit platform in vergelijking met de enkele vlekken methoden te evalueren.
Methoden
Patiënten en weefselmonsters
formaline gefixeerde in paraffine ingebedde (FFPE) tumor samples van 100 patiënten met maag- of gastro-oesofageale overgang adenocarcinoom werden geselecteerd uit een weefsel archief van de monsters aan het Instituut voor Pathologie van Krankenhaus Nordwest. Het project werd uitgevoerd met de toestemming van de bevoegde ethische commissie. Per geval werden vier verschillende kleuringen gebruikt volgens de merk gebruikt FDA-goedgekeurde procedures: hematoxyline en eosine (H &E) aan het monster toereikend is en de histologische subtype, immunohistochemie (IHC) het HER2 eiwit evalueren bevestigen expressie, zilver in situ hybridisatie (SISH) naar de genamplificatie en het nieuwe gen-eiwit platform dat IHC en SISH combineert op een dia te evalueren.
Immunohistochemie
IHC werd uitgevoerd met de FDA goedgekeurde Ventana PATHWAY konijn monoklonaal antilichaam 4B5 kloon en met Ultraview DAB Detection Kit (Ventana) op een benchMark XT geautomatiseerde stainer (Ventana, Tucson, AZ). Kort samengevat, werden de weefselcoupes paraffine ontdaan met EZ Prep bij 75 ° C en 76 ° C, warmte voorbehandeld Cell Conditioning 1 (CC1) voor antigen herstel bij 76 ° C - 100 ° C en vervolgens geïncubeerd met het primaire antilichaam tegen HER2 te 16 min bij 37 ° C na inactivatie van het endogene peroxidase met UV-inhibitor gedurende 4 min bij 37 ° C. De plaatjes werden geïncubeerd met een secundair antilichaam, gevolgd door de toepassing van HRP Universal multimeer gedurende 8 min. Antilichamen werden gedetecteerd met chromogeen (gedurende 38 min). Vóór het opzetten objectglaasjes werden tegengekleurd met hematoxyline II gedurende 4 min en blauwen reagens voor 4 min. Om de geldigheid van kleuring te ondersteunen en te identificeren experimentele artefacten, werd een positieve controle in elke run.
Zilver in situ hybridisatie
Dual kleur SISH werd uitgevoerd volgens de INFORM HER2 Dual ISH DNAProbe cocktail en Ultraview SISH DNP Detection Kit /Ultraview RED ISH DIG Detection Kit voor HER2 en Chr 17 kwantificering en procedure (Ventana /Roche). Beide probes werden gemerkt met 2,4-dinitrofenol (DNP) en digoxigenine (DIG). Het weefsel objectglaasjes werden van paraffine ontdaan met EZ Prep bij 65 ° C-76 ° C en warmte voorbehandeld met EZ Prep-verdunde Cell Conditioner 2 (CC2) bij 90 ° C gevolgd door protease digestie met ISH Protease 3 gedurende 16 min bij 37 ° C. De genomische DNA weefselsecties en het nick-getranslateerde HER2 en Chr 17 probes werden tezamen gedenatureerd door warmtebehandeling gedurende 20 minuten bij 80 ° C gevolgd door een hybridisatiestap gedurende 6 uur bij 44 ° C. De HER2 signalen werden gedetecteerd met konijn anti-DNP antilichaam gedurende 20 minuten bij 37 ° C en geïncubeerd met een HRP-geconjugeerd geit anti-konijn antilichaam gedurende 16 minuten bij 37 ° C na drie 8 min stringentie wassen. Het signaal werd gedetecteerd als zilver deposito's met zilveren acetaat, hydrochinon en waterstofperoxide. Voor Chr 17 detectie werden de objectglaasjes geïncubeerd met muizen anti-DIG antilichaam gedurende 20 minuten bij 37 ° C en een AP-geconjugeerd geit anti-muis antilichaam gedurende 24 minuten bij 37 ° C. De Chr 17 signaal werd ontwikkeld als red dot vlekken met een snelle rode en naftol fosfaat. De dia's werden uiteindelijk met hematoxyline II en blauwen reagens voor de montage.
Gene /eiwit
Gene /eiwit-platform te combineren IHC en SISH op één dia. Om de geldigheid van kleuring ondersteunen en experimentele artefacten identificeren, werd een positieve controle in elke run.For HER2 eiwit kleuring en HER2 /Chr 17 hybridisatie, de iVIEW DAB Detection Kit en Ultraview detectiekits gebruikt. De monsters werden gekleurd onder verschillende testomstandigheden een optimale protocol nodig IHC /SISH kleuringen vergelijkbaar met die van de afzonderlijke IHC testen en SISH bereiken voeren. De optimalisatie werd uitgevoerd in het laboratorium van Ventana (Roche) en deels in eigen werk. Optimale resultaten werden bereikt door het uitvoeren van de procedure voor de IHC SISH procedure.
Monsters werden van paraffine ontdaan met EZ Prep bij 72 ° C in 6 cycli. HER2 eiwit kleuring werden de weefselcoupes warmte voorbehandeld CC1 voor antigen herstel bij 95 ° C en vervolgens geïncubeerd met het primaire antilichaam tegen HER2 bij 37 ° C gedurende 48 minuten na inactivatie van het endogene peroxidase met UV-inhibitor gedurende 4 min bij 37 ° C. De schijfjes werden geïncubeerd met gebiotinyleerd secundair antilichaam gevolgd door het aanbrengen van HRP-geconjugeerd streptavidine gedurende 8 min. Een koperen verbeterde DAB reactiemengsel werd gebruikt om het eiwit te visualiseren. HER2 gen en CHR 17 kleuring, monsters werden voorbehandeld met warmte EZ Prep-verdunde CC2 bij 90 ° C gedurende vier cycli, gevolgd door digestie met protease ISH Protease 2 gedurende 12 minuten bij 37 ° C. De probes werden gedenatureerd gedurende 4 minuten bij 80 ° C en gehybridiseerd gedurende 6 uur bij 44 ° C met een cocktail van DNP- en DIG-gelabelde probes. HybClear oplossing werd toegevoegd om de interactie tussen de DNP en de borg DAB tijdens hybridisatie te blokkeren. Het gen signalen werden gedetecteerd met konijn anti-DNP antilichaam gedurende 16 minuten bij 37 ° C en geïncubeerd met een HRP-geconjugeerd geit anti-konijn antilichaam gedurende 16 minuten bij 37 ° C na vier 8 min stringentie wassen. Het signaal werd ontwikkeld door de zilveren storting met zilveracetaat, hydrochinon en waterstofperoxide. Voor Chr 17 detectie werden de objectglaasjes geïncubeerd met muizen anti-DIG antilichaam gedurende 16 minuten bij 37 ° C en een AP-geconjugeerd geit anti-muis antilichaam gedurende 24 minuten bij 37 ° C. De Chr 17 signaal werd ontwikkeld als red dot vlekken met een snelle rode en naftol fosfaat. Vóór de montage, werden dia's met hematoxyline II gedurende 8 min en blauwen reagens voor 4 min.
Pathologie beoordeling Ondernemingen De monsters werden onafhankelijk van elkaar door een patholoog (AB) en een bioloog opgeleid in maagkanker histologie (DW) geïnterpreteerd. De waarnemers kregen de monsters willekeurig, d.w.z. SISH IHC en gecombineerde methode werden niet geëvalueerd in combinatie met elkaar, maar afzonderlijk voor elke patiënt. Consensus van beide beoordelaars werd gevonden na elke evaluatie. Omdat strijdige resultaten tussen beide methoden gevolg van intra-observer variabiliteit en geen verschillen in de kleuring kwaliteit, discordante gevallen opnieuw beoordeeld door een derde waarnemer die was geblindeerd voor de resultaten van de eerste evaluatie kan, maar beoordeelde de tegenstrijdige gevallen (methoden) in samenwerking met elkaar. Tenslotte consensus werd tot stand gebracht tussen de derde waarnemer en de primaire waarnemers. Ondernemingen De IHC resultaten werden geïnterpreteerd met behulp van de voor maagkanker voorgesteld door Hofmann et al scoring systeem. [17] en Rüschoff et al. [18]: 0, geen reactiviteit of membraanreactiviteit in < 10% van de tumorcellen; 1+, zwakke /nauwelijks waarneembare membraanreactiviteit in > 10% van de tumorcellen; 2+, zwakke tot matige volledige, laterale of basolaterale membraanreactiviteit in > 10% van de tumorcellen; en 3+, sterke volledige, laterale of basolaterale membraanreactiviteit bij ≥ 10% van de tumorcellen.
SISH resultaten werden de totale aantallen HER2 en chromosoom 17 signalen geteld in ten minste 20 tumorcellen kernen in twee verschillende gebieden. De HER2 /Chr 17 verhoudingen werden als volgt uitgelegd in overeenstemming met de ToGA FISH scoring regeling voor HER2 testen in de maag en gastro-oesofageale overgang (GEJ) kanker: < 2.0, HER2-gen niet versterkt; ≥ 2,0, HER2 gen geamplificeerd [17]. Een gemiddelde telling van zes of meer werd beschouwd als versterkt.
Statistische analyse
De analyse was exploratieve zonder vooraf gedefinieerde hypothese of sample size berekeningen. Het aantal van 100 patiënten was voldoende om de voorgestelde statistische tests uit te voeren beschouwd. Correlaties tussen IHC /SISH en gen /eiwit werden geschat met behulp van Cohen's kappa-coëfficiënt (к). De kappa waarde interpretatie van Altmann [19] werd gebruikt: к > 0,81, zeer goede overeenkomst; 0,61-0,80, goede overeenkomst; 0,41-0,60 matige overeenkomst; 0,40-0,21, eerlijke overeenkomst; ≪ 0.20, lichte overeenkomst. Statistische analyses werden uitgevoerd met behulp van WinStat software (R.Fitch Software, versie 2009.1).
Resultaten
Patient kenmerken
Negentig zes van de 100 patiëntjaren gevallen waren beoordeelbaar. Eén zaak werd uitgesloten vanwege het ontbreken van tumorcellen en drie gevallen voor de slechte signalen in de interne SISH kleuring. Ondernemingen De meerderheid van de patiënten waren mannen (67,7%) en ≥ 65 jaar (70,8%) (tabel 1). Het cohort bestaat uit patiënten met adenocarcinoom van midden om distale maag (50,0%) of GEJ (45,8%) met meer gevallen van Lauren`s intestinale (67,7%) dan diffuse tumoren (28,1%). De indeling van de meerderheid van de monsters was G3 (50,0%), gevolgd door G2 (39,6%) en tumoren geclassificeerd als G2-3 (10,4%). 85,7% van gereseceerd patiënten (n = 28) vertoonden lymfeklier (N-stadium) en 64,3% vertoonde geen metastasen (M fase). In de helft van de resectie patiënten werd T3 tumor stadium geobserveerd, gevolgd door T2 in 28,6%, T1 in 14,3% en T4 fase in 7,1% van de patients.Table 1 Patient's kenmerken en HER2 positiviteit door subgroepen

Totaal n = 96 (%)
Positiviteit * (IHC 3+ of SISH +) enkele n (%)
Positiviteit * (IHC 3+ of SISH +) combi n (%)
Sex
Vrouw
27 (28,1) Pagina 2 (7.4)
1 (3.7)
Man
65 (67,7)
11 (16,9)
11 (16,9)
Unknown verhuur 4 (4.2)
3 (75.0)
3 (75,0)
Age
18-94 jaar (mediaan 69)
≥ 65
68 (70,8)
12 (17,6)
11 (16.2) Restaurant < 65
28 (29,2) verhuur 4 (14,3) verhuur 4 (14,3)
primaire tumor locatie
Mid to distale maag
48 (50,0)
5 (10.4)
4 (8.3)
GEJ
44 (45,8)
8 (18,2)
8 (18,2)
Niet gespecificeerd verhuur 4 (4.2)
3 (75,0)
3 (75,0)
Lauren indeling
Zend
27 (28,1)
3 (11,1) Pagina 2 (7.4)
Mixed verhuur 4 (4.2)
1 (25,0)
1 (25,0)
Intestinale
65 (67,7)
12 (18,5)
12 (18,5)
Biopsie /resectie
Biopsie
68 (70,8)
10 (14,7)
9 (13,2)
resectie
28 (29,2)
6 (21,4)
6 (21,4)
T-stadium (n = 28)
T 1 verhuur 4 (14.3)
0
0
T 2
8 (28,6) Pagina 2 (25,0) Pagina 2 (25.0)
T 3
14 (50,0) verhuur 4 (28,6) verhuur 4 (28,6)
T 4 Pagina 2 (7.1)
0
0
N-stadium (n = 28)
N +
24 (85,7)
5 (20.8)
5 (28,8)
N - verhuur 4 (14.3)
1 (25,0)
1 (25,0)
M fase (n = 28)
M +
5 (17,9)
1 (20.0)
1 (20,0)
M -
18 (64,3)
3 (16,7)
3 (16,7)
Mx
5 (17,9) Pagina 2 (40.0) Pagina 2 (40.0)
Grading
G2
38 (39,6)
6 (15,8)
6 (15,8)
G2-3
10 (10.4) Pagina 2 (20.0) Pagina 2 (20.0)
G3
48 (50,0)
8 (16,7)
7 (14,6)
Afkortingen Twitter: IHC
immunohistochemie, SISH
zilver in situ hybridisatie T
primaire tumor, N
lymfeklieren, M
metastasen * gedefinieerd als IHC 3+ of SISH ≥2.0.
P
= 1 voor alle vergelijkingen tussen IHC /SISH en gen /eiwit methoden (Fisher 's Exact Test).
In tabel 1 van de HER2 positiviteit door subgroepen wordt ook gepresenteerd. Geen significant verschil werd opgemerkt in HER2 positiviteit in vergelijking met subgroepen en verschillende methoden.
Kleuringen voor HER2 eiwitexpressie en genamplificatie (één kleuringen)
scores eiwitexpressie IHC waren 0 en 1 + 70,8% en in 10,4% van de patiënten (Tabel 2). 2,9% van de score 0 en 10,0% van de score 1 + gevallen werden versterkt. Bij 9,4% van de gevallen, een matige expressie (score 2 +) met 44,4% geamplificeerde gevallen gedetecteerd. 9,4% van de gekleurde monsters vertoonden een sterke expressie (score 3 +) met 77,8% versterkt gevallen. Figuur 1 toont representatieve resultaten van enkele staining.Table 2 kleuring resultaten voor HER2-eiwit expressie en genamplificatie
Enige methode
gecombineerde methode
IHC Score
IHC (n = 96)
SISH ≥ 2,0
IHC (n = 96)
SISH ≥ 2,0
n (%)

n (%)
n (%)
n (%)
0
68 (70,8) Pagina 2 (2.9)
68 (70,8) Pagina 2 (2.9)
1+
10 (10.4)
1 (10.0)
11 (11,5)
1 (9.1)
2+
9 (9.4) verhuur 4 (44.4)
7 (7.3) Pagina 2 (28.6)
3+
9 (9.4)
7 (77,8)
10 (10.4)
9 (90,9)
Afkortingen Twitter: IHC
immunohistochemie, SISH
zilver in situ hybridisatie
Figuur 1 vertegenwoordiger resultaten van de verschillende kleuring methoden.. Darmtumor (hematoxyline en eosine (H &E), A.1, 20x) met IHC 3+ (immunohistochemie (IHC), A.2, 20x, gen /eiwit, A.4, 20x) en amplificatie (zilver in situ hybridisatie (SISH), A.3, 40x, gen /eiwit, A.4, 20x). IHC score 0 (IHC, B.2, 20x, gen /eiwit, B.4, 40x), intestinale type (H &E, B1, 20x) en amplificatie (SISH, B.3, 40x, gen /eiwit , B.4, 40x).
Gene /eiwit (gecombineerde kleuring methode)
eiwit expressie scores door gen /eiwit methode was 0, 1+, 2+, 3+ en in 70,8%, 11,5%, 7,3 % en 10,4% (Tabel 2). Er waren 2,9% /9,1% versterkt gevallen monsters met een score 0/1 +. 28,6% versterkt gevallen vertoonden een matige kleuring (score 2+). Monsters met hoge expressie (3+) toonde in 90,9% genamplificatie. Voorbeelden van gen /eiwit kleuring worden gedemonstreerd in Figuur 1.
Evaluatie van Concordant en dissonante cases
De beoordeling van IHC kleuring in de conventionele single en het gen /eiwit methode niet altijd congruent resultaten tonen; overeenkomsten van beide methoden werden ook vermeld in tabel 3 Er waren zeer goed concordanties in het resultaat van versterkte gevallen (overeenkomst 100,0%, Kappa-coëfficiënt κ = 1) als score 0 (100%; κ = 1), score 1+ ( 98,96%; κ = 0,947) en de score van 3+ tumor monsters (96,88%; κ = 0,825) in beide methoden. Gevallen met score 2+ vertoonden minder concordantie, hoewel nog steeds goed (95,83%; κ = 0,728). Overeenstemming tussen de totale HER2 positiviteit (gedefinieerd als IHC 3+ of SISH +) in standaard of nieuwe werkwijze was erg goed (98,69%; κ = 0,963; 17,7% versus 16,7%) Tabel 3 Concordanties tussen enkele methoden en gecombineerde gen /eiwit. methoden
Single vs. combinatie
concordantie
Kappa-Coefficient к
overeenkomst Altmann [[15]]
SISH versterkt
100 % 1
Zeer goede kwaliteit IHC score 0
100% 1
Zeer goede kwaliteit IHC score 1+
98,96%
0,947
Zeer goede kwaliteit IHC score 2+
95,83%
0,728
goede kwaliteit IHC score 3+
96,88%
0,825
Zeer goede kwaliteit Afkortingen bestellen: IHC
immunohistochemie, SISH
zilver in situ hybridisatie.
Er waren twaalf afwijkende gevallen alvorens opnieuw te analyseren door een derde waarnemer (gegevens niet getoond). Na re-evaluatie door een derde waarnemer, afwijkende resultaten bleven in vier tumor samples. De reden voor de acht afwijkende gevallen in de tussentijdse analyse bleek intra-observer variabiliteit zijn. De resultaten van de laatste tegenstrijdige resultaten zijn weergegeven in tabel 4.Table 4 Gedetailleerde evaluatie van tegenstrijdige resultaten tussen methoden
Single methoden
gecombineerde methode
Case
histologie (Lauren)
IHC (Score)
SISH (≥ 2,0 /< 2,0)
IHC (Score)
SISH (≥ 2,0 /< 2,0)
6693
i
2+
≥2.0
3+
≥2.0
9924
i
2+
< 2,0
1+ Restaurant < 2,0
20.209
i
2+
≥2.0
3+
≥2.0
1057
d
3+ Restaurant < 2,0
2+ Restaurant < 2,0
Afkortingen extra's:. IHC
immunohistochemie, SISH
zilver in situ hybridisatie
Discussion
het doel van deze studie was om de haalbaarheid van nieuwe genen /eiwitten platform ten opzichte van de interne kleuringen gastrische adenocarcinomen en carcinomen van de oesofageale overgang.
van de evalueerbare steekproeven die 28,1% vertoonde een diffuse, 4,2 % gemengd en 67,7% een intestinale weefseltype. De meerderheid van de patiënten waren ≥65 jaar oud (70,8%) en mannen (67,7%). De snelheid van adenocarcinoom van GEJ of midden om distale maag was vergelijkbaar (45,8% vs. 50,0%). In de standaard methode, 17,7% van de patiënten was HER2-positief. De meerderheid van HER2-positieve tumoren van de darm histologie en werden gelokaliseerd in het GE knooppunt, dit correleert goed met gegevens van de literatuur [20, 21]. Over het geheel genomen op basis van de patiënt en tumor kenmerken, evenals HER2 positiviteit, de geëvalueerde groep is een vertegenwoordiger collectief.
Hoewel veel ervaring voor HER2 analyse door IHC en ISH voor borstkanker beschikbaar is, is het niet zeker of ze rechtstreeks kunnen worden overgebracht naar carcinomen van het maagdarmkanaal. De expressie van HER2-eiwit, in tegenstelling mammacarcinoom, heterogeen en vaak focaal uitgesproken. Fox et al. [12]. bepaalden de HER2 status 100 weefselmonsters gediagnosticeerd met gevorderde maagkanker en kanker van de esofagogastrische kruising in verschillende laboratoria om hun wedstrijden te testen. Hiervoor en IHC CISH (chromogene in situ hybridisatie) of SISH toegepast. Er was een goede overeenkomst tussen de verschillende laboratoria over CISH of SISH maar matig concordantie voor IHC score waargenomen. Op basis van de resultaten van het onderzoek, de mening van de auteur was dat een bepaling van HER2-status op basis van IHC, gevolgd door ISH (Europese norm) geen optimale evaluatie strategie en aanbevolen het uitvoeren van zowel kleuring methoden [12]. Een andere studie [22] testte de HER2-amplificatie en expressie in 148 patiënten met gevorderd maagcarcinoom door IHC en FISH /SISH. HER2 positieve gevallen werden slechts 10% van de IHC vergeleken met 18% tot 22% van de in situ hybridisatie. Niet alleen omdat het gemakkelijker te reproduceren was, stelde de auteur de in situ hybridisatie techniek een betere benadering voor het bepalen van de HER2 positiviteit [22]. Echter, op basis van de TOGA proef [8], patiënten met ISH positief, maar IHC negatief of wekelijks (1+) positieve tumoren niet kon profiteren van trastuzumab. Daarom wordt het gebruik van FISH of SISH als primaire en enige methode niet aanbevolen in Europa en IHC wordt nog steeds beschouwd als primaire evaluatiemethode in vele landen.
Voor zover ons bekend, maar er zijn geen studies die rechtstreeks vergelijk resultaten van beide immunohistochemie (IHC) en zilver in situ hybridisatie (SISH) wanneer elk afzonderlijk wordt gebruikt met de resultaten van het gebruik ervan in combinatie op een enkel in maagcarcinomen. RNA en DNA doelwitten visualiseren situ, zijn er verschillende manieren voor het merken probes via fluorescentie, chromogene of zilver detectie. Alle studies met vergelijkbare instellingen onze analyse gebruikte chromogene of fluorescentie in situ hybridisatie (CISH of FISH). Downs-Kelly et al. [14] standaard IHC gecombineerd met een neerslag van metallisch zilver door EnzMetTM op een tissue microarray (TMA) van borsttumoren en vergeleken de resultaten van IHC en fluorescentie in situ hybridisatie (FISH) wanneer alleen uitgevoerd. In een andere studie werd de auteurs Het samenbrengen van de IHC en zilver in situ hybridisatie (SISH) in TMA van borst- en maagkanker monsters gebruikt, maar vergeleken met de resultaten van die verkregen door IHC en fluorescentie in situ hybridisatie (FISH) als afzonderlijke vlekken [16]. Reisenbichler et al. [15] heeft de resultaten van de vergelijking van IHC en chromogene in situ hybridisatie (CISH) als afzonderlijke kleuringen met de dubbele assay IHC /CISH. De gelijktijdige evaluatie van eiwit en genencombinaties op één dia bood een zeer reproduceerbare en zeer robuuste methode met goede concordanties. Belgique Om de geldigheid van de nieuwe gen /eiwit kleuring vergeleken met de standaard IHC en SISH testen, werden de concordanties berekend gebaseerd op de kappa coëfficiënt. Volgens de richtlijnen van ASCO /CAP voor borstkanker, moet een nieuwe test meer dan 95% concordantie met een gevalideerde referentie-assay [23] tonen. In onze studie, de nieuwe methode toonde concordanties boven de 95% in termen van alle testscores. Er waren zeer goed concordanties in het resultaat van genamplificatie evenals score 0 (elk met 100% overeenkomst), score 1+ (98,96% akkoord) en de score 3+ tumor monsters (96,88% overeenkomst). Gevallen met score 2+ vertoonden minder overeenstemmende resultaten, hoewel nog steeds goed (95,83% overeenkomst). Moeilijkheden bij gevallen met matige expressie in de beoordeling en indeling zijn bekend in de literatuur. Tafe et al. [24]. gebleken dat er moeilijkheden bij het toekennen van een eindscore in de evaluatie van de IHC gevolg van een gebrek in de veilige scheiding van de gevallen met een HER2 score van 1 + of 2 +. Deze categorieën kunnen worden beperkt door de subjectiviteit en slechte reproduceerbaarheid. Het verschijnsel dat tegenstrijdige resultaten worden waargenomen bij patiënten met een lage HER2 expressie, die soms nog HER2 genamplificatie, is gemeld bij slokdarmkanker [24-26]. De meest waarschijnlijke reden voor deze discrepantie is intra-tumor heterogeniteit van HER2 status maag- of GEJ kanker [17, 27, 28]. In onze studie werden tegenstrijdige IHC resultaten waargenomen in vier patiënten, maar deze hebben geleid tot een klinisch relevant verschil in HER2 positiviteit bij één patiënt alleen (patiënti7). De patiënt had diffuse soort maagkanker. De evaluatie van diffuse tumoren lijkt moeilijker dan Type intestinale tumoren [29, 30] zijn. Volgens Rüschoff et al. [18]. slechts 5% van deze tumoren HER2 positiviteit; zegelring cell carcinoma zijn negatief. HER2 amplificatie uiterst zeldzaam in diffuus maagcarcinoom die is geassocieerd met abnormale E-cadherine [13, 31-33]. Ondernemingen De SISH is een relatief nieuwe werkwijze voor het detecteren van de amplificatie van het HER2-gen. Talrijke studies bevestigde een hoge concordantie met andere in situ hybridisatie methoden zoals CISH en FISH [34]. Vergeleken met de IHC, ISH toont een hogere gevoeligheid en specificiteit en een hogere reproduceerbaarheid. Deze verklaring kan worden bevestigd door vergelijking van de concordantie van versterkte gevallen in onze werkwijze. Resultaten bleek een goede overeenstemming tussen beide methoden (100,0%; к = 1). Bovendien is de ISH minder gevoelig dan IHC als gevolg van een relatieve stabiliteit van DNA ten opzichte van verschillen in weefsel fixatie en verwerking.
We zijn momenteel aan een uitgebreide studie ter evaluatie of deze nieuwe methode gaat gepaard met een vermindering van de inter-observer variabiliteit in de bepaling van HER2 status maagkanker. Deze studie omvat ook een component kijken naar de tijd die nodig is om eindresultaten rapporteren. De resultaten zullen aan het tijdschrift als letter of een origineel verslag zodra ze beschikbaar zijn
worden ingediend.
Conclusies In deze studie hebben we duidelijk aangetoond dat het gebruik van de gecombineerde methode om HER2-eiwit expressie en genamplificatie te voeren op een enkele dia kunnen de resultaten vergelijkbaar met die met behulp van elke methode afzonderlijk in een gecontroleerde studie de uitvoering van drie onafhankelijke waarnemers te produceren. Alle auteurs gelezen en goedgekeurd het definitieve manuscript.

• Lange-termijn effecten van laparoscopische sleeve gastrectomie versus Roux-en-Y gastric bypass voor de behandeling van Chinese type 2 diabetes mellitus patiënten met een body mass index 28-35 kg /m2
• Polymorfismen van TGFB1 en VEGF genen en overleving van patiënten met maagkanker