Naujo metodo, apimantį HER2 imunohistocheminis ir HER2 dvejopo sidabrinė in situ hibridizacijos ant vienos skaidrės skrandžio karcinoma bandymų patvirtinimas

Naujo metodo, apimantį HER2 imunohistocheminis ir HER2 dvejopo sidabrinė in situ hibridizacijos
nuo vienos skaidrės skrandžio karcinoma bandymų pervežimas tezės
Background pervežimas HER2 būklės įvertinimo patvirtinimas yra būtina sąlyga, kad įsisteigimo tinkama gydymo taktika skrandžio vėžio. Skrandžio vėžio yra labai įvairūs ir atskirus vertinimus genų amplifikacijos ir baltymų ekspresijos sukelti neaiškumų lokalizuoti atskirus klonai ir laiko. Šis tyrimas įvertina romano metodo lygiavertiškumą apjungianti genų ir baltymų platformas vienoje skaidrėje.
Metodai
imunohistocheminis (IHC) ir HER2 dvejopo sidabrinė in situ hibridizacijos (SISH) viengubi metodai (IHC /SISH) ir genų baltymų platforma derinant abu metodus ant vienos skaidrės (genas /baltymas) buvo atliekami atsitiktinai surinktų 100 atvejų skrandžio adenokarcinoma. Rezultatai IHC /SISH buvo lyginami su genas /baltymas dažymo.
Rezultatai
96 100 mėginiai buvo išmatuojamą. Į genas /baltymas dažymo, patologai galėjome įvertinti genų amplifikacija ir dėl to baltymo ekspresija ne vieno ląstelių lygiu. Lyginant tyrimų, genų amplifikacija buvo stebimas 14,6% tiek, tradiciniais SISH ir genų /baltymų platforma (Susitarimo 100%; kapa koeficientas κ = 1,0). Baltymo ekspresiją balų pagal IHC buvo 70,8% (0), 10,4% (1+), 9,4% (2+), ir 9,4% (3+). Baltymo ekspresiją genų /baltymas buvo: (0) 70,8%, 11,5% (1+), 7,3% (2+) ir 10,4% (3+) pacientų. Nebuvo visiškai Atitikimai į IHC vertinimo atvejų 0 balų (100,0%; κ = 1). Aukštos Atitikimai rodomi rezultatas 1+ (98,96%; κ = 0,947) ir 3+ (96,88%; κ = 0,825) atvejais ir geros atitikimai į 2+ atvejais (95,83%; κ = 0,728).
Išvados
Šis romanas kartu platforma turi, kad galėtų įvertinti tiek genų ir baltymų būklę toje pačioje vėžio ląstelių ir gali būti ypač svarbus mokslinių tyrimų ir ligonio priežiūros pranašumą.
kategoriją straipsnis
ligų žymenų.
Raktiniai žodžiai
skrandžio vėžio HER2 imunohistocheminis Silver in situ hibridizacijos Genų baltymų bandymo Background Viesbutis The HER2 onkogeno (taip pat vadinama HER2 /neu ar erbB-2) chromosomos 17q21, koduoja 185-kDa transmembraninis tirozino kinazės receptorius, siejamas su epidermio augimo faktoriaus receptoriaus (EGFR) šeimos, kurią sudaro EGFR /HER1, HER2, HER3, ir HER4. HER2 aktyvacijos vaidina pagrindinį vaidmenį ląstelių proliferaciją ir išlikimo, daugiausia tarpininkaujant per RAS-MAPK keliu. Jis taip pat slopina ląstelių žūtį per fosfatidil 3'-kinazės AKT žinduolių rapamicino taikinio (mTOR) keliu. HER2 raiška buvo pranešta apie kietųjų navikų [1-7] įvairovė. Genų amplifikacijos yra reti kitų ligų ir anti-HER2 terapija šiuo metu patvirtintas tik krūties ir skrandžio vėžio.
Remiantis iš TOGA teismą [8] rezultatus, trastuzumabu buvo patvirtintas metastazavusio adenokarcinoma skrandžio ir skrandžio jungties į kombinuotas gydymas JAV ir Europoje. Reikalavimas yra įrodymas HER2 raiškos. Europoje, tai apibrėžiama IHC 3+ rezultatas arba IHC 2+ ir teigiamas FISH ar rezultatas SISH (santykis ≥ 2,0). IHC buvo laikomas pagrindinis metodas, nes IHC neigiamas arba kas savaitę teigiamas (1+) pacientai neturėjo naudos iš trastuzumabu į TOGA teismą, nors jie buvo ish teigiamas. Literatūroje, tačiau yra dideli skirtumai į imunohistocheminio pozityvumo nustatyti. Čia HER2 teigiamą išplitusiu skrandžio adenokarcinomos procentas svyruoja nuo studijų mokytis, nuo 5% iki 30% [9], greičiausiai dėl skirtingų analizės protokolų ir žodžiu kriterijų.
Norintiems substudies iš dviejų adjuvantui atsitiktinių imčių tyrimų metu trastuzumabu palyginti nuliniu krūties vėžio parodė, kad maždaug 20% ​​HER2 tyrimai, atliekamos vietoje institucijų (bent pirminio valymo svetainės patologijos skyrius) buvo neteisingi, kai tas pats egzempliorius buvo iš naujo įvertintas didelės apimties, centrinis laboratorija [10, 11 ].
Skirtingai krūties vėžio, skrandžio vėžio histopatologiniai kalbant apie HER2 yra laikomas labiau įvairiarūšis ir židinio raiškos genų amplifikacijos dažnai pastebėta [12]. Todėl, nustatymo sunkumai HER2 būklę yra tikimasi, kad būti didesnis, negu į krūties vėžio. Apskritai, imtasi šių rezultatų atsižvelgti, reikia daugiau patikimų, atkuriami ir laiko negailėdami vertinimo metodai HER2 būklės skrandžio vėžiu. buvo atlikta tik keletas paskelbti tyrimai derinant IHC ir in situ hibridizacijos metodais (bet ne SISH) iš vienos skaidrės [13-16]. Disertacija tyrimai naudojami standartinis IHC ir chromogeninių arba chromosomų dažymas (CISH ar žuvies), kaip atskirų metodų ir palyginti juos su tuo pačiu metu analizės (kartu nuo vienos skaidrės) ir rasti gerą sutapimą su rezultatais vieną dažymo. Kiek mums žinoma, tačiau nėra tyrimų, kurie tiesiogiai palyginti rezultatus tiek imunohistocheminis (IHC) ir sidabro in situ hibridizacijos (SISH), kai kiekviena iš jų naudojama atskirai su juos naudojant kartu rezultatus viename skyriuje skrandžio karcinomos.
šioje studijoje, HER2 baltymo ekspresija ir genų amplifikacija statusas 100 skrandžio adenokarcinomos ir karcinoma esophagogastric sankryžos išnagrinėjo įprastinių IHC ir ish vieno metodai (IHC /SISH) ir lygiagrečiai romano metodu derinant abu metodai (genas /baltymas). Šio tyrimo tikslas buvo įvertinti naujos genų baltymų platformos lygiavertiškumą lyginant su bendru dažymo metodus.
Metodai
Pacientai ir audinių mėginių
formalinu fiksuotų parafino įterptųjų (FFPE) navikų mėginiuose iš 100 pacientų, sergančių skrandžio arba gastroezofaginio sankryžos adenokarcinoma buvo atrinkti iš audinių archyvo mėginių prie patologijos instituto Krankenhaus Nordwest. Projektas buvo atliktas su atsakingo etikos komiteto leidimo. Kiekvienu atveju, keturi skirtingi dažymo metodai buvo naudojami pagal manufacturer's FDA patvirtintas procedūras: hematoksilinu ir eozinas (H & e) įvertinti imties adekvatumo ir patvirtinti histologiškai potipį imunohistocheminis (IHC) įvertinti HER2 baltymo išraiška, sidabro in situ hibridizacijos (SISH) įvertinti genų amplifikacija ir naujų genų baltymų platforma, kuri sujungia IHC ir SISH vienoje skaidrėje.
imunohistocheminis
IHC buvo atliktas su FDA patvirtintas Ventana kelią triušio monokloninis antikūnas 4B5 klonas ir su Ultraview DAB Detection Kit (Ventana) dėl etalonas XT automatizuoto STAINER (Ventana, Tucson, AZ). Trumpai tariant, audinio dalys buvo deparaffinized su EZ Prep esant 75 ° C ir 76 ° C, šilumos iš anksto apdorotas Mobilusis kondicionavimo 1 (CC1) antigeno paimti 76 ° C - 100 ° C temperatūroje, ir inkubuojami su anti-HER2 pirminiais antikūnais dėl 16 min, esant 37 ° C temperatūroje po dezaktyvavimo endogeninio peroksidazės, naudojant UV-inhibitoriaus kiekis, skirtas 4 min 37 ° C temperatūroje. Skaidres buvo inkubuojamos su antriniu antikūnu, ir po to HRP Universal multimeras taikymo 8 min. Antikūnai buvo aptikta naudojant Chromogenas (38 min). Prieš montuodami, skaidres buvo counterstained hematoksilinu II už 4 min ir Bluing reagentas 4 min. Remti dažymo galiojimą ir nustatyti eksperimentinius artefaktus, teigiama kontrolė buvo įtraukta į kiekvieną perspektyvoje.
Sidabrinė in situ hibridizacijos
Dviejų spalvų SISH buvo atlikta pagal Informuoti HER2 Dvigubas ISH DNAProbe kokteilis ir Ultraview SISH DNP nustatymo rinkinys /Ultraview RAUDONA ISH dig aptikimo rinkinys HER2 ir Chr 17 kiekybinio ir tvarka (Ventana /Roche "). Abu zondai buvo paženklinti 2,4-dinitrofenolio (DNP) ir digoxigenin (DIG). Audinių skaidres buvo deparaffinized su EZ Prep 65 ° C-76 ° C ir šilumos iš anksto apdoroti EZ Prep praskiesto Mobilusis Conditioner 2 (CC2) 90 ° C temperatūroje, po to proteazės skaidymosi kartu su ISH proteazės, 3 už 16 min 37 ° C temperatūroje. Genomo DNR audinio atkarpos ir nick-išversti HER2 ir CHR 17 zondai buvo bendrai denatūruotas termiškai apdorojama 20 min, esant 80 ° C, lydimas hibridizacijos žingsnis 6 h 44 ° C temperatūroje. HER2 signalai buvo aptikta, naudojant triušio anti-DNP antikūną 20 min 37 ° C temperatūroje ir inkubuojamos su HRP-konjuguoto ožkos anti-triušio antikūno už 16 min 37 ° C temperatūroje po tris 8 min griežtumo plauna. Signalas buvo atpažintas kaip sidabro indėlių sidabro acetatas, hidrochinono ir vandenilio peroksidu. Chr 17 aptikimo, skaidres buvo inkubuojamos su pelės anti-DIG antikūno už 20 min 37 ° C temperatūroje ir su AP-konjuguoto ožkos anti-pelės antikūno už 24 min 37 ° C temperatūroje. Chr 17 signalas buvo sukurtas kaip "red dot dažant greitai raudonos ir naftolio fosfato. Skaidrės pagaliau buvo counterstained hematoksilinu II Bluing reagentą, prieš montuojant.
Gene /baltymų
Genų /baltymų platforma derinant IHC ir SISH vienoje skaidrėje. Remti dažymo galiojimą ir nustatyti eksperimentinius artefaktus, teigiama kontrolė buvo įtraukta į kiekvieną run.For HER2 baltymo dažymo ir HER2 /Chr 17 hibridizacijos, buvo naudojamas Iview TBP aptikimas komplektas ir Ultraview aptikimo rinkiniai. Mėginiai buvo tamsintas pagal keletą tyrimų sąlygas įgyvendinti optimalų protokolą reikia pasiekti IHC /SISH dažymo rezultatus, panašias į individualios IHC ir SISH bandymai. Optimizavimas buvo atliktas iš Ventana (Roche) laboratorijoje ir iš dalies pačių darbą. Optimalūs rezultatai buvo pasiekti atliekant IHC procedūrą prieš SISH tvarka.
Mėginiai buvo deparaffinized su EZ Prep 72 ° C 6 ciklų. Už HER2 baltymo dažymo, audinių dalys buvo šilumos iš anksto apdorotas į CC1 antigeno paimti 95 ° C temperatūroje, ir inkubuojami su anti-HER2 pirminės antikūno 37 ° C temperatūroje 48 min, po dezaktyvavimo endogeninio peroksidazės naudojant UV-inhibitoriaus kiekis, skirtas 4 min 37 ° C temperatūroje. Skaidres buvo inkubuojamos su biotinilintu antrinio antikūno, ir po to HRP-konjuguota streptavidinu taikymo 8 min. Iš vario sustiprintas DAB reakcija buvo naudojamas vizualizuoti baltymų. Dėl HER2 geno ir CHR 17 dažymą, mėginiai buvo šilumos išvalytos su EZ prep praskiesto CC2 90 ° C keturių ciklų, po kurių proteazės virškinimui su ISH proteazės 2 12 min 37 ° C temperatūroje. Zondai buvo denatūruotas už 4 min 80 ° C temperatūroje ir hibridizuoti 6 val 44 ° C naudojant DNP- ir kasti-žymėtųjų zondai kokteilį. HybClear tirpalas buvo įtraukta į blokuoti tarp DNP ir DAB deponavimo hibridizacijos metu sąveiką. Genų signalai buvo aptikta, naudojant triušio anti-DNP antikūną 16 min 37 ° C temperatūroje ir inkubuojamos su HRP-konjuguoto ožkos anti-triušio antikūno už 16 min 37 ° C temperatūroje po keturių 8 min griežtumo plauna. Signalas buvo sukurtas sidabro indėliai sidabro acetatas, hidrochinono ir vandenilio peroksidu. Chr 17 aptikimo, skaidres buvo inkubuojamos su pelės anti-DIG antikūno už 16 min 37 ° C temperatūroje ir su AP-konjuguoto ožkos anti-pelės antikūno už 24 min 37 ° C temperatūroje. Chr 17 signalas buvo sukurtas kaip "red dot dažant greitai raudonos ir naftolio fosfato. Prieš montuodami, skaidres buvo counterstained hematoksilinu II 8 min ir Bluing reagentas 4 min.
Patologijos apžvalga Viesbutis The mėginiai buvo nepriklausomai aiškina patologas (AB) ir biologas apmokyti skrandžio vėžio histologiją (DW). Stebėtojai gavo mėginius atsitiktine tvarka, t.y. SISH, IHC, ir bendras metodas nebuvo vertinti kartu su viena su kita, bet atskirai kiekvienam pacientui. Konsensusas abiejų recenzentų buvo rastas po kiekvieno vertinimo. Kadangi prieštaringi rezultatai tarp abiejų metodų gali būti viduje stebėtojo kintamumo, o ne skirtumai dažymo kokybės, prieštaringi atvejai buvo perkainotas trečiosios stebėtojas, kuris buvo apakintas prie pirmojo įvertinimo rezultatai rezultatas, bet vertinamos prieštaringi atvejai (metodai) kartu su viena su kita. Galiausiai, sutarimas buvo įkurta tarp trečiojo stebėtojo ir pirminių stebėtojai.
IHC rezultatai buvo interpretuojami naudojant siūlomą skrandžio vėžio Hofmann et al taškų schemą. [17] ir Rüschoff ir kt. [18]: 0, ne reaktyvumas arba membraninis reaktyvumas < 10% naviko ląstelių; 1+ Blyškiai /vos pastebimas membraninis reaktyvumas > 10% naviko ląstelių; 2+, silpnas ar vidutinio sunkumo pilną, šoninė arba basolateral membraninis reaktyvumas > 10% naviko ląstelių; ir 3+, stiprus baigtas, šoninės arba basolateral membraninis reaktyvumas ≥ 10% vėžinių ląstelių.
SISH rezultatus, viso skaičius HER2 ir 17 chromosomos signalai buvo skaičiuojami ne mažiau kaip 20 naviko ląstelių branduolių dviejų skirtingų sričių. HER2 /CHR 17 rodikliai buvo aiškinama laikantis TOGA FISH balais sistemą HER2 tyrimo skrandžio ir gastroezofaginio sankryžos (seks) vėžio taip: < 2.0, HER2 genas nėra išplėtoti; ≥ 2,0, HER2 genas papildyta [17]. Vidutinis skaičius šeši ar daugiau buvo laikomas papildomi.
Statistinė analizė
analizė buvo Pažintinė be iš anksto Hipotezė ar imties dydis skaičiavimus. pakako atlikti siūlomus statistinius tyrimus iš 100 pacientų skaičius. Koreliacija tarp IHC /SISH ir genų /baltymų buvo apskaičiuotas naudojant Cohen's kapa koeficientą (K). Kappa vertės išaiškinimas Altmann [19] buvo naudojami: к > 0.81, labai geras susitarimas; 0,61-0,80, geras susitarimas; 0,41-0,60 vidutinio susitarimas; 0,40-0,21, sąžininga susitarimas; ≪ 0,20, tiek sutartis. Statistinė duomenų analizė atlikta naudojant WinStat programinę įrangą (R.Fitch Software versija 2009,1).
Rezultatai
pacientų charakteristikas
devyniasdešimt šeši iš 100 pacientų atvejais buvo išmatuojamą. Vienas atvejis buvo atmesti dėl to, kad vėžinių ląstelių ir trimis atvejais neturtingų signalų vienu SISH dažymo nėra.
Dauguma pacientų buvo vyrai (67,7%) ir ≥ 65 metų amžiaus (70,8%) (1 lentelė). Kohortos sudaro pacientams, sergantiems adenokarcinoma vidurio iki distalinio skrandžio (50,0%) arba seks (45,8%), daugiau atvejais Lauren`s žarnyno (67,7%), nei difuzinis navikų (28,1%). Iš mėginių dauguma rūšiavimo buvo G3 (50,0%), po to G2 (39,6%) ir auglių, klasifikuojamos kaip G2-3 (10,4%). 85,7% nuo rezekcijos pacientų (n = 28) parodė, limfmazgių metastazių (N etapas) 64.3% parodė tolimų metastazių nėra (M etapas). Atsižvelgiant į rezekcijos pacientų pusę, buvo pastebėta, T3, naviko stadijos, po T2 28,6%, T1 14,3% ir T4 stadijos 7.1% nuo patients.Table 1 Patient's charakteristikas ir HER2 pozityvumo iki pogrupių

> Iš viso, n = 96 (%)
Pozityvumas * (IHC 3+ arba SISH +), vienas N (%)
Pozityvumas * (IHC 3+ arba SISH +) Combi N (%)
Lytis
Moteris
27 (28,1)
2 (7.4)
1 (3,7)
Vyras
65
(67,7) 11 (16,9)
11 (16,9)
nežinoma
4 (4.2)
(75,0)
3 3 (75,0)
Amžius
18-94 yrs (mediana 69)
≥ 65
68 (70,8)
12 (17,6)
11 (16,2)
< 65
28 (29,2)
4 (14,3)
4 (14,3)
pirminio naviko vietą
vidurio iki distalinio skrandžio
(50,0)
48 5 (10,4)
4 (8.3)
seks
44 (45,8)
(18,2)
8 8 (18,2)
Nenurodyta
4 (4.2)
3 (75,0)
3 (75,0)
Lauren klasifikacija
Difuzinė
27 (28,1)
3 (11,1)
2 (7.4)
mišrus
4 (4.2)
> 1 1 (25,0)
Žarnų
65 (67,7)
12 (18,5)
12 (18,5)
biopsija /rezekcija
biopsija
68 (70,8)
(14,7)
10 9 (13,2)
rezekcija
28 (29,2)
(21,4)
6 6 (21,4)
T etapą (N = 28)
T 1
4 (14,3)
0
0
T 2
8 (28,6)
2 (25,0)
2 (25,0)
T 3
14 (50,0)
4 (28,6)
4 (28,6)
T 4
2 (7.1)
0
0
N. etapas (n = 28)
n +
24 (85,7)
5 (20,8)
5 (28,8)
N - CR.LT 4 (14,3)
1 (25,0)
1 (25,0)
M etapas (n = 28)
M +
5 (17,9)
1 (20,0)
1 (20,0)
m -
18 (64,3)
3 (16,7)
3 (16,7)
Mx
5 (17,9)
(40,0)
2 2 (40,0)
rūšiavimas
G2
38 (39,6)
(15,8)
6 6 (15,8)
G2-3
10 (10,4)
(20,0)
2 2 (20,0)
G3
(50,0)
(16,7)
48 8 7 (14,6)
Santrumpos
: IHC
imunohistocheminis, SISH
sidabro in situ hibridizacijos T
pagrindinis navikas, n
limfmazgiai, m
metastazių * apibrėžiamas kaip IHC 3+ arba SISH ≥2.0.
P
= 1 visiems palyginimų tarp IHC /SISH ir genų /baltymų metodų (Fišerio tikslusis testas).
1 HER2 pozityvumo lentelėje pagal pogrupius taip pat pateikti. Nėra didelio skirtumo buvo pažymėta navikas HER2 teigiamas, lyginant su pogrupių ir skirtingais metodais.
Dažymo rezultatus HER2 baltymo raiškos ir genų amplifikacijos (vienviečiai dažymo metodai) pervežimas baltymo ekspresija balai IHC buvo 0 ir 1 + in 70,8% ir 10,4% pacientų (2 lentelė). 2,9% rezultatas 0 ir 10,0% Balo 1 + atvejais buvo papildyta. 9.4% atvejų, vidutinio išraiška (rezultatas 2 +) su 44,4% stiprintuvu atvejais buvo aptikta. 9,4% iš tamsintas mėginių parodė stiprus išraiška (rezultatas 3 +) su 77,8% stiprintuvu atvejais. 1 pav rodo atstovybes rezultatų vienišų staining.Table 2 Dažymo rezultatus HER2 baltymo raiškos ir genų amplifikacijos
vienintelį metodą
bendras metodas
IHC balas
IHC (n = 96)
SISH ≥ 2,0
IHC (n = 96)
SISH ≥ 2,0
N (%)

N (%)
N (%)
N (%)
0 68 (70,8)
2 (2,9) 68 (70,8)
2 (2,9)
1+
10 (10,4)
1 (10.0)
11 (11,5)
1 (9,1)
2+
9 (9.4)
4 (44,4)
(7.3)
7 2 (28.6)
3+
9 (9.4)
7 (77,8)
10 (10,4)
9 (90,9)
Santrumpos
: IHC
imunohistocheminis, SISH
sidabro situ hibridizacijos
1 pav reprezentatyvius rezultatus įvairių dažymo metodus.. Žarnų navikas (hematoksilinu ir eozinas ( "H & R) A.1, 20x) su IHC 3+ (imunohistocheminis (IHC) A.2 20x; genas /baltymas, A.4, 20x) ir stiprinimas (sidabras in situ hibridizacija (SISH), A.3, 40x; genas /baltymas, A.4, 20x). IHC rezultatas 0 (IHC B.2, 20x; genas /baltymas, B.4 40x), žarnyno tipas (H & El B.1, 20x) ir stiprinimas (SISH, B.3, 40x; genų /baltymų , B.4 40x).
genų /baltymų (kartu dažymo metodas)
baltymo ekspresija partitūrų genas /baltymas buvo 0, 1+, 2+ ir 3+ į 70,8%, 11,5%, 7,3 % ir 10,4% (2 lentelė). Nebuvo 2,9% /9,1% sustiprina atvejai mėginių rezultatas 0 /1+. 28,6% amlifikuoti atvejai parodė, vidutinio dažymo (Finišavo 2+). Mėginiai, kurių didelės raiškos (3+) parodė 90,9% geno. Pavyzdžiai genas /baltymas dažymo yra įrodytas 1 paveiksle
vertinimas Współbrzmieniowy ir prieštaringo atvejais
iš IHC dažymo vertinimo paprastųjų vieno ir genų /baltymo ne visada atskleidžia lygiagretumo rezultatus; susitarimai abiejų metodų taip pat buvo nurodyta 3 lentelėje buvo labai geri Atitikimai į rezultatus stiprintuvu atvejais (susitarimas 100,0%; kapa koeficientas κ = 1), taip pat rezultatas 0 (100%; κ = 1), rezultatas 1+ ( 98,96%; κ = 0,947) ir rezultatas 3 + navikų mėginiuose (96,88%; κ = 0,825) abiem metodais. Atvejai su balas 2+ parodė mažiau sutapimą, nors dar geras (95,83%; κ = 0,728). Atitikimas tarp bendro navikas HER2 teigiamas (ty, IHC 3+ ar SISH +) standartiniu arba nauju metodu buvo labai gera (98,69%; κ = 0,963; 17,7% vs 16,7%) 3 lentelė Atitikimai tarp atskirų metodų ir kartu genų /baltymų. metodai
Single vs derinys
Concordance
Kappa koeficiento к
sutartis Altmann [[15]]
SISH sustiprina
100 %
1
Labai geras
IHC rezultatas 0
100%
1
Labai geras
IHC rezultatą 1+
98.96%
0.947
Labai geras
IHC rezultatas 2+
95.83%
0.728
geras pervežimas IHC rezultatas 3+ pervežimas 96.88% pervežimas 0.825
Labai geras
Santrumpos
: IHC
imunohistocheminis, SISH
sidabro in situ hibridizacija.
nebuvo dvylika prieštaringi atvejai prieš pakartotinį analizuoti pagal trečiojo stebėtojo (duomenys neparodyti). Po pakartotinio įvertinimo pagal trečiojo stebėtojo, prieštaringi rezultatai išliko keturiuose navikų mėginiuose. Už aštuonis prieštaringą atvejais tarpinės analizės priežastis buvo nustatyta, kad vidaus stebėtojas kintamumas. Rezultatai galutinių prieštaringi rezultatai rodomi 4.Table 4 lentelė Detali vertinimą prieštaringi rezultatai tarp metodų
Viengulės metodus
bendras metodas
dėklas
Histologija (Laura)
IHC (Partitūra)
SISH (≥ 2,0 /"< 2.0)
IHC (Partitūra)
SISH (≥ 2,0 /< 2.0)
6693
i
2+
≥2.0
3+
≥2.0
9924
i
2+
< 2,0
1+
< 2,0
20209
i
2+
≥2.0
3+
≥2.0
1057
d
3+
< 2,0
2+
< 2,0
Santrumpos
:. IHC
imunohistocheminis, SISH
sidabro situ hibridizacijos
Diskusijos Viesbutis The šio tyrimo tikslas buvo įvertinti naujų genų /baltymų platformos galimybes, palyginti su bendru dažymo metodų skrandžio adenokarcinomos ir karcinoma esophagogastric sankryžos.
iš vertintas mėginių 28,1% parodė pasklidųjų 4.2 % mišrus ir 67,7% žarnyno histologinis tipas. Dauguma pacientų buvo ≥ 65 metai (70,8%) ir vyrų (67,7%). Iš adenokarcinoma seks ar viduryje norma distalinės skrandžio buvo panašus (45,8% vs 50,0%). Standartinio metodo, 17,7% pacientų buvo HER2 teigiami. HER2 teigiami navikai dauguma buvo žarnyno histologijos ir buvo lokalizuotas GE sankryžos, tai gerai koreliuoja su duomenimis literatūros [20, 21]. Apskritai, remiantis paciento ir vėžinių savybių, taip pat ar navikas HER2 teigiamas, The įvertino grupė yra atstovas kolektyvas.
Nors nemaža patirtis HER2 analizės IHC ir ISH krūties vėžys yra prieinama, neaišku, ar jie gali būti tiesiogiai perkelti į karcinoma virškinimo trakte. HER2 baltymo ekspresija, skirtingai nei krūties karcinomos, yra nevienalytė ir dažnai iš pagrindų ryškus. Lapė ir kt. [12]. nustatoma HER2 būklės 100 audinių pavyzdžių diagnozuotas Išplėstinė skrandžio vėžio ar vėžio esophagogastric sankryžos įvairiose laboratorijose, išbandyti savo rungtynes. Už tai, IHC ir CISH (chromogeniniais in situ hibridizacijos) arba SISH buvo taikomos. Buvo gera susitarimas skirtingose ​​laboratorijose dėl CISH ar SISH, tačiau buvo stebimas vidutinio atitikimas visiems IHC balai. Remiantis tyrimo rezultatais, autoriaus nuomonė, kad HER2 būklės nustatymas remiantis IHC, po ISH (Europos standartas) nėra optimalus vertinimo strategija ir rekomenduojami atlikti tiek dažymo metodus [12]. Kitas tyrimas [22] išbandė HER2 amplifikacija ir raiška 148 pacientams, sergantiems išplitusiu skrandžio karcinoma pagal IHC ir FISH /SISH. Teigiami HER2 atvejų buvo aptikta tik 10% nuo IHC, palyginti su 18% iki 22% į in situ hibridizacija. Ne tik todėl, kad buvo lengviau atgaminti, autorius pasiūlė in situ hibridizacijos metodą, kaip geriau požiūrio nustatant ar navikas HER2 teigiamas [22]. Tačiau, remiantis TOGA teismą [8], pacientams, sergantiems ISH teigiamas, bet IHC neigiamas arba savaitę (1+) teigiami navikai neturėjo naudos iš trastuzumabu. Todėl žuvies arba SISH kaip pagrindinis ir vienintelis būdas vartoti nerekomenduojama Europoje ir IHC dar laikomas pirminio vertinimo metodu daugelyje šalių.
Į mūsų žiniomis, tačiau nėra tyrimų, kurie tiesiogiai palyginti rezultatus tiek imunohistocheminiu (IHC) ir sidabro hibridizacija in situ (SISH), kai kiekviena iš jų naudojama atskirai su naudojimosi juos kartu ant vieno skyriuje skrandžio karcinomos rezultatus. Vizualizuoti RNR ir DNR tikslus in situ, yra įvairių būdų ženklinimo zondai fluorescencijos, chromogeniniais arba sidabrinį aptikimo. Visi ankstesni tyrimai su nustatymais panašios į mūsų analizės naudojamas chromogeninį arba chromosomų dažymas (CISH ar žuvies). Downs-Kelly et al., [14] kartu standartas IHC su metalinio sidabro nusodinimo EnzMetTM dėl audinių microarray (TMA) krūties karcinoma ir palygino IHC rezultatus ir chromosomų dažymas (žuvis), kai atliekama viena. Atliekant kitą tyrimą, autoriai iš tiesų naudojo IHC derinys ir sidabro in situ hibridizacijos (SISH) į PMA krūties ir skrandžio vėžio pavyzdžių, tačiau, palyginti su rezultatais, gautais IHC ir fluorescencijos rezultatus situ hibridizacijos (FISH), kaip vieną dažymo [16]. Reisenbichler ir kt. [15] pranešė apie iš IHC palyginimo ir chromogeniniais in situ hibridizacijos (CISH) viengubi stainings su dviguba tyrimo IHC /CISH rezultatus. Vienu metu vertinimas baltymų ir genų kombinacijų į vieną skaidrę pasiūlė labai atkuriamas ir labai tvirtą būdą geros atitikimai.
Norėdami išbandyti naują geną /baltymų dažymo galiojimą, palyginti su standartine IHC ir SISH, kad Atitikimai buvo apskaičiuotos remiantis kappa koeficiento. Pagal ASCO /BŽŪP gaires dėl krūties vėžio, naujas testas turėtų parodyti daugiau nei 95% sutapimą su įteisintais pamatiniais tyrimą [23]. Mūsų tyrimo duomenimis, naujasis metodas parodė atitikimai didesnis kaip 95%, kalbant apie visų testų rezultatus. Nebuvo labai geri Atitikimai į rezultatus geno taip pat rezultatas 0 (kiekvienas su 100% sutartį), rezultatas 1+ (98,96% susitarimas) ir rezultatas 3+ navikų mėginiuose (96,88% susitarimas). Atvejai su balas 2+ parodė mažiau Współbrzmieniowy rezultatus, nors dar geras (95,83% susitarimas). Sunkumai atvejais vidutinio sunkumo raiškos vertinimo ir klasifikavimo yra žinomi literatūroje. Tafe ir kt. [24]. parodė, kad buvo sunku priskirti galutinį rezultatą, atsižvelgiant į IHC vertinimo dėl trūkumo patikimai atskirti atvejais su HER2 rezultatas 1 + arba 2 +. Šios kategorijos gali būti apribota subjektyvumo ir prastos pasikartojimu. Šis reiškinys, kad prieštaringi rezultatai stebimi pacientams, sergantiems mažo HER2 raiškos, kurie kartais vis dar turi HER2 geno ekspresija, buvo pranešta stemplės vėžio [24-26]. Labiausiai tikėtina priežastis, dėl šio disonansas yra viduje navikas heterogeniškumas HER2 būklės skrandžio ar seks vėžio [17, 27, 28]. Mūsų tyrimo duomenimis, prieštaringi IHC rezultatai buvo pastebėtas keturių pacientų, tačiau tai lėmė kliniškai svarbių skirtumų HER2 teigiamas, tik vienas pacientas (pacientasi7). Pacientas buvo išplitęs tipo skrandžio vėžiu. Atrodo, pasklidusių navikų vertinimo, kad būtų sunkiau nei žarnyno tipo navikų [29, 30]. Pagal Rüschoff et al. [18]. tik 5% šių navikų parodyti ar navikas HER2 teigiamas; Sygnet ląstelių karcinoma yra neigiamas. HER2 stiprinimas yra labai reta difuzinio skrandžio karcinoma, kuri yra susijusi su nenormaliu El cad išraiškos [13, 31-33].
SISH yra palyginti naujas metodas iš HER2 geno aptikti. Daugybė tyrimų patvirtino aukštą sutapimą su kitomis in situ hibridizacijos metodus, pavyzdžiui, CISH ir žuvų [34]. Palyginti su IHC ISH rodo didesnį jautrumą ir specifiškumą ir didesnę atgaminimas. Šis teiginys gali būti patvirtintas lyginant stiprintuvu atvejais sutapimą mūsų metodus. Rezultatai atskleidė labai gerą sutartį tarp abiejų metodų (100,0%; к = 1). Be to, "ISH yra mažiau jautri nei IHC dėl santykinio stabilumo DNR palyginti skirtingų audinių fiksavimo ir apdorojimo.
Mes šiuo metu dirba apie išplėstinį tyrimą įvertinant, ar tai naujas metodas yra susijęs su inter-stebėtojo mažinimo nepastovumas HER2 statuso nustatymo skrandžio vėžio. Šis tyrimas taip pat apima komponentas ieško tuo metu, kai reikia pranešti apie galutinius rezultatus. Rezultatai bus pateikti žurnale kaip laišku ar originalia ataskaitoje, kai tik jie yra prieinami.
Išvadas
Šiame tyrime mes aiškiai parodė, kad naudojant kombinuotą metodą atlikti HER2 baltymo ekspresija ir genų amplifikacija ant vieno stiklelio gali duoti rezultatų, panašių į tuos, kurie naudoja kiekvieną metodą atskirai kontroliuojamoje tyrimo įgyvendinimo tris nepriklausomus stebėtojus. Visi autoriai skaityti ir patvirtino galutinį rankraštį.

• Ilgalaikis poveikis laparoskopinės rankovių pašalintas skrandis, palyginti su Roux-en-Y skrandžio aplinkkelio dėl kinų 2 tipo cukriniu diabetu sergančių pacientų gydymui, kurių kūno masės …
• Polimorfizmas iš TGFB1 ir VEGF genai ir išlikimas pacientams, sergantiems skrandžio cancer