D'Confirmatioun vun engem Roman Method souwuel HER2 immunohistochemistry an HER2 duebel-Faarf Sëlwer an situ hybridization op eng Rutsch fir gastric carcinoma Testen kombinéiert

D'Confirmatioun vun engem Roman Method souwuel HER2 immunohistochemistry an HER2 duebel-Faarf Sëlwer an situ VerfÜgung hybridization op eng Rutsch fir gastric carcinoma Testen VerfÜgung méiglech VerfÜgung Background VerfÜgung HER2 Status Foussgänger kombinéiert ass eng Viraussetzung fir d'Opstelle vun eng adequat Behandlung Strategie vun gastric Kriibs. Gastric Cancers si ganz heterogen a separat Evaluatioune vum Gene amplification an FAQ Ausdrock Féierung ze halen an isoléiert clones localizing a si vill Zäit. Dës Etude z'analyséieren der Relatioun vun den Roman Method souwuel Gentherapie an FAQ Quaien op eng Rutsch kombinéiert. VerfÜgung Method VerfÜgung Immunohistochemistry (IHC) an HER2 duebel-Faarf Sëlwer an situ hybridization (SISH) als eenzeg Methode (IHC /SISH) an der Gentherapie-FAQ Plattform souwuel Methoden op eng Rutsch (Gentherapie /FAQ) kombinéiert waren an zoufälleg gesammelt 100 Fäll vu gastric adenocarcinoma gesuergt. Resultater vun IHC /SISH mat Gentherapie /FAQ staining verglach goufen. VerfÜgung Resultater VerfÜgung 96 vun 100 Echantillon waren assessable. An der Gentherapie /FAQ staining, goufen pathologists gebass Gentherapie amplification a konsequent FAQ Ausdrock an der eenzeger Zell Niveau ze bewäerten. (; Kappa-souguer gemaach κ = 1.0 Accord 100%) Am Verglach Prozesser, Gentherapie amplification war an 14,6% vun deenen zwee, konventionell SISH an der Gentherapie /FAQ Plattform observéiert. Protein Ausdrock Fändelen vun IHC ware 70,8% (0), 10,4% (1+), 9,4% (2+), an 9,4% (Iwwer 3). Protein Ausdrock vun der Gentherapie /FAQ Method huet: 70,8% (0), 11,5% (1+), 7.3% (2+) an 10,4% (Iwwer 3) vun de Patienten. Et ware komplett concordances zu IHC Beurteelung vun Fäll mat 0 (100.0%; κ = 1). Héich concordances sinn zu stoung dës 1+ (98.96%; κ = 0.947) an Iwwer 3 (96.88%; κ = 0.825) Fäll a gutt concordances vun 2+ Fäll (95.83%; κ = 0.728). VerfÜgung Konklusiounen
Dëse Roman kombinéiert Plattform huet de Virdeel kënnen ze féieren béid Gentherapie an d'FAQ Status an der selwechter Kriibs Zell ze diskutéieren a vun allem Interessi fir Fuerschung an Patient d'Betreiung kënnen. Artikel Kategorie VerfÜgung Genau uweist VerfÜgung. VerfÜgung Schlësselwieder Gastric Kriibs HER2 Immunohistochemistry Silver zu situ hybridization Gene-FAQ assay Background VerfÜgung D'HER2 oncogene VerfÜgung (och bezeechent als HER2 /neu oder ERBB-2) op chromosome 17q21, encodes engem 185-Beien zB stéiert transmembrane tyrosine kinase receptor datt gehéiert zu der epidermal Wuesstem Faktor receptor (EGFR) Famill vun EGFR /HER1, HER2, HER3, an HER4 aus. HER2 Aktivéierung spillt eng zentral Roll am Zell Prolifératioun an Iwwerliewe, mediated haaptsächlech duerch d'RAS-MAPK Passerelle. Et bremst och Zell Doud duerch d'phosphatidylinositol 3'-kinase-AKT-mammalian Zilscheif vun rapamycin (mTOR) Passerelle. HER2 overexpression gouf zu enger Rei vu staark erhéijen gemellt [1-7]. Gene amplifications rar ginn an aner Krankheeten an Anti-HER2 Therapie Moment validéiert ass nëmmen zu Broscht an gastric Cancers. VerfÜgung Baséierend op de Resultater vun den ToGA Prozess [8], Stad war fir metastatic adenocarcinoma vun de Mo a gastroesophageal menaarbecht guttgeheescht an geschéckt Therapie an d'US an Europa. Viraussetzung ass de Beweis vun HER2 overexpression. An Europa, ass dëst duerch eng IHC Iwwer 3 Resultat oder eng IHC definéiert 2+ a positiv FISH oder SISH Resultat (Verhältnis ≥ 2.0). IHC war de primären Method well IHC negativ oder Wochenzeitung positiv geduecht (1+) Patienten aus Stad am ToGA Prozess profitéieren net, obwuel se nemen positiv waren. An der Literatur gëtt et awer, ass considérabel Variant vun der immunohistochemical komm alles. Hei, schwankt de Prozentsaz vun HER2 positive fortgeschratt gastric adenocarcinomas aus studéieren ze studéieren, vu 5% op 30% [9], déi meescht wahrscheinlech wéinst verschidden Analyse Ëmwelt- an Interpretatioun Critèren. VerfÜgung spéit substudies vun zwee vun de adjuvant zoufälleg Prozesser vun Stad versus Null an Broscht Kriibs bewisen, dass ongeféier 20% vun HER2 assays op-Site Institutiounen gesuergt (bei der Grondschoul wirklech Departement d'Behandlung Site) Guichet huet wann d'selwecht specimen du-bewäert huet an engem héije Volume, Mëtt Labo [10, 11 ]. VerfÜgung Géigesaatz Broscht Kriibs, ass de histopathology vun gastric Kriibs zu Conditioune vun HER2 als méi heterogen a Brennwäit overexpression vun der Gentherapie amplification gin ass dacks observéiert [12]. Dofir, si Schwieregkeeten am HER2 Status Bestëmmung erwaart méi ausgeschwat ginn wéi an Broscht Kriibs. Am Allgemengen, dës Resultater berücksichtege, méi zouverlässeg, reproducible an Zäit sparing Methode fir d'HER2 Status vun gastric Kriibs bewäert ginn waren. Nëmmen e puer publizéiert Etuden IHC an situ hybridization Methoden kombinéieren (awer net SISH) op eng Rutsch hunn gehaal ginn [13-16]. Theses Studien Standard IHC geheescht an chromogenic oder fluorescence zu situ hybridization (CISH oder FISH) als eenzege Methoden a Verglach si mat engem gläichzäiteg Analyse (op eng Rutsch kombinéiert) an fonnt gutt concordance mat de Resultater vun eenheetlechen staining. Fir de beschte vun eisem Wëssen, awer, et gi keng Studien déi direkt Resultater vun béiden immunohistochemistry (IHC) vergläichen an Sëlwer an situ hybridization (SISH) wann eenzel separat mat de Resultater vun andeems se an alleng op enger eenzeger Rubrik zu gastric benotzt gëtt carcinomas. am Moment studéieren, déi HER2 FAQ Ausdrock an der Gentherapie amplification Status vun 100 gastric adenocarcinomas an carcinomas vun der esophagogastric menaarbecht VerfÜgung sech duerch konventionell IHC an nemen eenzeg Methode (IHC /SISH) an zu parallel vun der Verfilmung Method iwwerpréift kombinéiert zwou Methoden (Gentherapie /FAQ). D'Zil vun dëser Etude war d'Relatioun vun den neie Gentherapie-FAQ Plattform am Verglach zu der eenzeg staining Methoden ze diskutéieren. VerfÜgung Method VerfÜgung kennen an Otemschwieregkeeten Echantillon VerfÜgung Formalin-fix paraffin-Ënnerbewosstsinn (FFPE) entholl Echantillon aus 100 Patienten mat adenocarcinoma gastric oder gastroesophageal menaarbecht sech aus engem Otemschwieregkeeten Archiv vun Echantillon um Institut wirklech um Krankenhaus Nordwest ausgewielt. De Projet gouf mat der Autorisatioun vun der responsabel ethnesch Comité gesuergt. Fir all Fall, huet véier verschidden staining Methode benotzt no der manufacturer's Kondom-guttgeheescht Prozeduren: hematoxylin an eosin (H & E) d'Prouf Confirmatioun ze evaluéieren an der histological subtype, immunohistochemistry (IHC) ze confirméieren der HER2 FAQ ze diskutéieren Ausdrock, sëlwer am situ hybridization (SISH) der Gentherapie amplification an der Verfilmung Gentherapie-FAQ Plattform ze diskutéieren, déi op eng Rutsch IHC an SISH kombinéiert. VerfÜgung Immunohistochemistry VerfÜgung IHC war mat der Kondom-guttgeheescht Ventana Passerelle Kanéngchen monoclonal antibody gesuergt 4B5 Klon an mat der ultraVIEW botzt Detektioun Kit (Ventana) op engem Ulass XT automatiséiert Stainer (Ventana, Tucson, AZ). 100 ° C an duerno mat der anti-HER2 Primärschoul antibody incubated fir - déi Otemschwieregkeeten Rubriken sech mat EZ Ëmfro bei 75 ° C an 76 ° C, Hëtzt pretreated zu Zell Konditioun 1 (CC1) fir antigen retrieval bei 76 ° C deparaffinized kuerz, 16 min bei 37 ° C an der inactivation vun der endogenous peroxidase mat UV-inhibitor fir 4 min bei 37 ° C. D'drënner waren mat enger Première antibody gefollegt vun der Applikatioun vun HRP Universal Multimer fir 8 min incubated. Antibodies benotzt chromogen (fir 38 min) fonnt. Ier Opriichte, sech drënner mat hematoxylin II fir 4 min an bluing reagent fir 4 min counterstained. Fir d 'Validitéit vun staining Ënnerstëtzung an experimentell Tour identifizéieren, e positive Kontroll war an all Course mat abegraff. VerfÜgung Silver zu situ hybridization VerfÜgung Dual Faarf SISH war no der informéieren HER2 Dual nemen DNAProbe Cocktail standing an ultraVIEW SISH DNP Detektioun Kit /ultraVIEW RED nemen übe Detektioun Kit fir HER2 an Chr 17 quantitation an Prozedur (Ventana /Roche). Béid Ämter sech mat 2,4-dinitrophenol (DNP) an digoxigenin (Déiren) gekennzeechent. D'Otemschwieregkeeten drënner waren mat EZ Ëmfro bei 65 ° C-76 ° C an Hëtzt pretreated mat EZ Ëmfro-verdënntem Zell Balsam 2 (CC2) bei 90 ° C, gefollegt vun protease unzereegen mat nemen Protease 3 fir 16 min bei 37 ° C deparaffinized. Déi Frankräich DNA Otemschwieregkeeten Rubriken an der-Nick iwwersat HER2 an Chr 17 Ämter goufen Co-denatured vun Hëtzt Behandlung fir 20 min bei 80 ° C, déi vun engem hybridization Schrëtt bei 44 ° C fir 6 h gefollegt. D'HER2 Signaler ware fir 20 min bei 37 ° C a fir 16 min mat engem HRP-conjugated Geess anti-Kanéngchen antibody incubated antibody Kanéngchen anti-DNP erwëscht andeems bei 37 ° C an der dräi 8 min stringency Mëtten. D'Signal war wéi Sëlwer Dépôten mat Sëlwer acetate, hydroquinone a Waasserstoff Hem fonnt. Fir 17 Chr erkennen, sech de drënner mat Maus anti-übe antibody fir 20 min bei 37 ° C an mat engem AP-conjugated Geess anti-Maus antibody fir 24 min bei 37 ° C incubated. Déi 17 Chr Signal war mat séier rout a naphthol phosphate als roude Punkt staining entwéckelt. D'drënner sech endlech mat hematoxylin II an bluing reagent virun Opriichte. VerfÜgung Gene /FAQ VerfÜgung Gene /FAQ Plattform kombinéiert IHC an SISH op eng Rutsch counterstained. Fir d 'Validitéit vun staining Ënnerstëtzung an experimentell Tour identifizéieren, e positive Kontroll war an all run.For HER2 FAQ staining agebaut a fir HER2 /Chr 17 hybridization, déi iVIEW botzt Detektioun Kit an ultraVIEW Detektioun Super sech benotzt. D'Echantillon waren ënnert puer vun assay Konditiounen Kierchefënster enger beschtméiglecher Protokoll ze realiséieren waren IHC /SISH staining Resultater ze Testen déi vun eenzelne IHC an SISH ähnlecher ze erreechen. D'Akeef gouf am Labo vu Ventana (Roche) an am Kader vun eegen Aarbecht gesuergt. Optimal Resultater huet vun enger performanter der IHC Prozedur virun der SISH Prozedur erreecht. VerfÜgung Echantillon waren deparaffinized mat EZ Ëmfro bei 72 ° C an 6 zouféieren. Fir HER2 FAQ staining, goufen d'Otemschwieregkeeten Rubriken Hëtzt fir antigen retrieval bei 95 ° C an CC1 pretreated an duerno mat der anti-HER2 Primärschoul antibody bei 37 ° C fir 48 min der inactivation vun der endogenous peroxidase mat UV-inhibitor fir 4 min incubated bei 37 ° C. D'drënner waren mat engem biotinylated Secondaire antibody gefollegt vun der Applikatioun vun HRP-conjugated streptavidin fir 8 min incubated. A Koffer verstäerkte botzt Reaktioun war fréier d'FAQ ze visualiséieren. Fir HER2 Gentherapie an 17 chr staining, goufen Echantillon Hëtzt pretreated mat EZ Ëmfro-verdënntem CC2 bei 90 ° C fir véier Zykle vun protease unzereegen duerno mat nemen Protease 2 fir 12 min bei 37 ° C. mat engem Cocktail vun DNP- an Déiren-Label Ämter Ämter goufen fir 4 min bei 80 ° C denatured a fir 6 h op 44 ° C hybridized. HybClear Léisung ugebaut der Interaktioun tëscht der DNP an der botzt Dreckstipp während hybridization ze blockéieren. Der Gentherapie Signaler ware fir 16 min bei 37 ° C a fir 16 min mat engem HRP-conjugated Geess anti-Kanéngchen antibody incubated antibody Kanéngchen anti-DNP erwëscht andeems bei 37 ° C no véier 8 min stringency Mëtten. D'Signal war vun der Sëlwer Depot mat Sëlwer acetate, hydroquinone a Waasserstoff Hem entwéckelt. Fir 17 Chr erkennen, sech de drënner mat Maus anti-übe antibody fir 16 min bei 37 ° C an mat engem AP-conjugated Geess anti-Maus antibody fir 24 min bei 37 ° C incubated. Déi 17 Chr Signal war mat séier rout a naphthol phosphate als roude Punkt staining entwéckelt. Ier Opriichte, sech drënner mat hematoxylin II fir 8 min an bluing reagent fir 4 min counterstained. VerfÜgung wirklech review VerfÜgung D'Echantillon onofhängeg vun engem pathologist interpretéiert goufen (AB) an e Biolog an gastric Kriibs Histologie trainéiert (perséinlech Meenung). D'Observateuren kruten d'Echantillonen zoufälleg, i.e. SISH, IHC, a kombinéiert Method huet am Veräin mat all aner, mee getrennt fir all Patient net bewäert. Konsens souwuel liesen war no all Evaluatioun fonnt. Well discordant Resultater tëscht zwou Methoden vläicht e Resultat vun Zollformalitéiten-Observatoire Verännerlechkeet ginn anstatt Differenzen an der staining Qualitéit, discordant Fäll vun engem drëtte Observateur reevaluated waren déi zu de Resultater vun der éischte Evaluatioun blinded war, mä Uschléi discordant Fäll (Methoden) am Veräin mat all aner. Endlech, Konsens war tëschent dem drëtten Observateur an der Primärschoul Observateuren etabléiert. VerfÜgung D'Resultater IHC interpretéiert goufen d'ukomm Schema benotzt fir gastric Kriibs vun Hofmann proposéiert et al. [17] an Rüschoff et al. [18]: 0, kee ofbaubar oder membranous ofbaubar zu &Si besteet; 10% vun entholl Zellen; 1+, wäiss /knapps uerg membranous ofbaubar zu > 10% vun entholl Zellen; 2+, schwaach komplett, lateral oder basolateral membranous ofbaubar zu > ze moderéiert; 10% vun entholl Zellen; a Iwwer 3, staark komplett, lateral oder basolateral membranous ofbaubar zu ≥ 10% vun entholl Zellen. VerfÜgung An SISH Resultater, déi total Zuel vun HER2 an chromosome 17 Signaler waren an op d'mannst 20 entholl Zell Käre vun zwou verschiddene Beräicher gezielt. D'HER2 /Chr 17 nennen sech am Aklang mat der ToGA FISH ukomm Schema fir HER2 Testen an gastric an gastroesophageal Potaschbierg (GEJ) Kriibs interpretéiert wéi follegt: &Si besteet; 2.0, HER2 Gentherapie net Implikatioune; ≥ 2.0, HER2 Gentherapie Implikatioune [17]. An der Moyenne Grof vu sechs oder méi war den Kick erauskoum. VerfÜgung statistique Analyse VerfÜgung D'Analyse gouf explorative mat kee predefinéiert Hypothes oder Prouf Gréisst rechnen. D'Zuel vun 100 Patienten huet genuch considéréiert der méiglecher statistesch Tester ze maachen. Kennenzeléieren tëscht IHC /SISH an der Gentherapie /FAQ benotzt Cohen's Kappa souguer gemaach ginn (к) geschat. D'Kappa Wäert Interpretatioun vun Altmann [19] war benotzt: к > 0,81, ganz gutt eens; 0.61-0.80, gutt Accord; 0.41-0.60 moderéiert Accord; 0.40-0.21, fair Accord; &Si besteet; 0,20, schmäerzhafte Accord. Statistique analyséiert goufen benotzt WinStat Software gesuergt (R.Fitch Software, Version 2009.1). VerfÜgung Resultater VerfÜgung Patienten- Charakteristiken VerfÜgung gleich erëm sechs vun der 100 Patient Fäll goufen assessable. Ee Fall war wéinst dem Fehlen vun entholl Zellen ausgeschloss an dräi Fäll fir aarm Signaler vun der eenzeger SISH staining. VerfÜgung D'Majoritéit vun de Patienten männlech waren (67.7%) an ≥ 65 Joer al (70.8%) (Table 1). D'Kohort besteet aus Patienten mat adenocarcinoma vun Mëtt distal Mo. (50.0%) oder GEJ (45,8%) mat méi Fäll vun Lauren`s intestinal (67.7%) wéi diffusen erhéijen (28.1%). D'senger Analyse vun der Majoritéit vun Echantillon war G3 (50.0%) duerno G2 (39.6%) an den G2-3 séiert erhéijen (10.4%). 85,7% vun resected Patienten (n = 28) zougedréckt lymph Node Metastasen (N Etapp) an 64.3% zougedréckt kee wäit Investitiounen (M Etapp). An der Halschent vun der resected Patienten, war T3 entholl Etapp observéiert, gefollegt vun T2 zu 28,6%, T1 zu 14,3% a T4 Etapp vun 7.1% vun patients.Table 1 Patient's Beméien an HER2 komm vun subgroups VerfÜgung
Total n = 96 (%)
komm * (IHC Iwwer 3 oder SISH +) eenzege n (%)
komm * (IHC Iwwer 3 oder SISH +) combi n (%)
Sex VerfÜgung Weiblech VerfÜgung 27 (28.1) zu 2 (7,4) VerfÜgung 1 (3,7) VerfÜgung Männlech VerfÜgung 65 (67.7) zu 11 (16.9) VerfÜgung 11 (16.9) VerfÜgung Onbekannt VerfÜgung 4 (4,2) VerfÜgung 3 (75.0) VerfÜgung 3 (75.0) VerfÜgung Alter VerfÜgung 18-94 erwaat (Paracetamol 69) VerfÜgung ≥ 65 zu 68 (70.8) zu 12 (17.6) zu 11 (16,2) VerfÜgung &Si besteet; 65 zu 28 (29.2) zu 4 (14.3) zu 4 (14.3) VerfÜgung primär entholl Standuert VerfÜgung Mëtt ze distal Mo. VerfÜgung 48 (50.0) VerfÜgung 5 (10.4)
4 (8.3) VerfÜgung GEJ VerfÜgung 44 (45,8) VerfÜgung 8 (18.2) zu 8 (18.2)
net uginn 4 (4,2) VerfÜgung 3 (75.0) VerfÜgung 3 (75.0) VerfÜgung Lauren Klassifikatioun VerfÜgung Firwat VerfÜgung 27 (28.1) VerfÜgung 3 (11.1) zu 2 (7,4) zu Bréissel VerfÜgung 4 (4,2)
1 (25.0) VerfÜgung 1 (25.0) VerfÜgung Intestinal VerfÜgung 65 (67.7) zu 12 (18.5) zu 12 (18.5) VerfÜgung Fro /resection VerfÜgung Fro VerfÜgung 68 (70.8) zu 10 (14,7) VerfÜgung 9 (13.2) VerfÜgung 28 VerfÜgung Resection (29.2) zu 6 (21.4) zu 6 (21.4) VerfÜgung T Etapp (n = 28) VerfÜgung T 1 VerfÜgung 4 (14.3) VerfÜgung 0 VerfÜgung 0 VerfÜgung T 2 VerfÜgung 8 (28.6) zu 2 (25.0) zu 2 (25.0)
T 3 VerfÜgung 14 (50.0) zu 4 (28.6) zu 4 (28.6) VerfÜgung T 4 VerfÜgung 2 (7.1) VerfÜgung 0 VerfÜgung 0 VerfÜgung N Etapp (n = 28) VerfÜgung N + VerfÜgung 24 (85.7) VerfÜgung 5 (20.8) VerfÜgung 5 (28.8) VerfÜgung N - VerfÜgung 4 (14.3) VerfÜgung 1 (25.0) VerfÜgung 1 (25.0) VerfÜgung M Etapp (n = 28) VerfÜgung M + VerfÜgung 5 (17.9) VerfÜgung 1 (20.0) VerfÜgung 1 (20.0) VerfÜgung M -
18 (64.3) VerfÜgung 3 (16.7) VerfÜgung 3 (16.7) VerfÜgung Accès zu 5 (17.9) zu 2 (40.0) zu 2 (40.0) zu senger Analyse
G2 VerfÜgung 38 (39.6) zu 6 (15.8) zu 6 (15.8) VerfÜgung G2-3 VerfÜgung 10 (10.4) zu 2 (20.0) zu 2 (20.0) VerfÜgung G3 VerfÜgung 48 (50.0) zu 8 (16.7) zu 7 (14.6) VerfÜgung Croix VerfÜgung: IHC VerfÜgung immunohistochemistry, SISH VerfÜgung sëlwer an situ hybridization T
Primärschoul entholl, N VerfÜgung lymph Wirbelen, M * VerfÜgung Investitiounen als IHC Iwwer 3 oder SISH ≥2.0 definéiert. VerfÜgung P VerfÜgung = 1 fir all Vergläicher tëschent IHC /SISH an der Gentherapie /FAQ Methoden (Fisher d'genee Test). VerfÜgung An Table 1 der HER2 komm vun subgroups ass och presentéiert. Nee groussen Ënnerscheed war zu HER2 komm bemierken wann Verglach zu subgroups a Methoden. VerfÜgung Staining Resultater fir HER2 FAQ Ausdrock an der Gentherapie amplification (Single staining Methoden) VerfÜgung Protein Ausdrock Fändelen vun IHC goufen 0 an 1 + zu 70,8% a 10,4% vun de Patienten (Table 2). 2,9% vun stoung 0 an 10.0% vun stoung 1 + Fäll goufen Kick. An 9,4% vun Fäll, eng moderéiert Ausdrock (stoung 2 +) mat 44,4% Implikatioune Fäll ass fonnt. 9,4% vun der Kierchefënster Echantillon zougedréckt engem staarken Ausdrock (3 + stoung) mat 77,8% Implikatioune Fäll. Figur 1 Sarkasmus Vertrieder Resultater aus Single staining.Table 2 Staining Resultater fir HER2 FAQ Ausdrock an der Gentherapie amplification VerfÜgung Single Method
Method VerfÜgung kombinéiert
IHC Punktzuel
IHC (n = 96)
SISH ≥ 2.0
IHC (n = 96)
SISH ≥ 2.0
n (%) VerfÜgung
n (%)
n (%)
n (%)
0 VerfÜgung 68 (70.8) zu 2 (2,9) VerfÜgung 68 (70.8) zu 2 (2,9) VerfÜgung 1+ VerfÜgung 10 (10.4) VerfÜgung 1 (10.0) zu 11 (11,5) VerfÜgung 1 (9.1) VerfÜgung 2+
9 (9.4) VerfÜgung 4 (44.4) zu 7 (7.3) VerfÜgung 2 (28.6) VerfÜgung Iwwer 3 VerfÜgung 9 (9.4) VerfÜgung 7 (77,8) VerfÜgung 10 (10.4) VerfÜgung 9 (90.9) VerfÜgung Croix VerfÜgung: IHC VerfÜgung immunohistochemistry, SISH VerfÜgung sëlwer an situ hybridization VerfÜgung 1 Vertriederin Resultater vun de verschiddene staining Methoden Dorënner.. Intestinal entholl (hematoxylin an eosin (H & E), A.1, 20x) mat IHC Iwwer 3 (immunohistochemistry (IHC), A.2, 20x; Gentherapie /FAQ, A.4, 20x) an amplification (Sëlwer an situ hybridization (SISH), A.3, 40x; Gentherapie /FAQ, A.4, 20x). IHC stoung 0 (IHC, B.2, 20x; Gentherapie /FAQ, B.4, 40x), intestinal Typ (H & E, B.1, 20x) an amplification (SISH, B.3, 40x; Gentherapie /FAQ , B.4, 40x). VerfÜgung Gene /FAQ (kombinéiert staining Method) VerfÜgung Protein Ausdrock Fändelen vun der Gentherapie /FAQ Method sech 0, 1+, 2+, a iwwer 3 zu 70,8%, 11,5%, 7.3 % an 10,4% (Table 2). Et waren 2,9% /9,1% Implikatioune Fäll zu Echantillon mat 0 /1+. 28,6% Implikatioune Fäll awer eng moderéiert staining (stoung 2+). Echantillon mat héije Ausdrock (Iwwer 3) zougedréckt a 90,9% Gentherapie amplification. Beispiller vun der Gentherapie /FAQ staining sinn zu Dorënner 1. VerfÜgung Evaluatioun vun Concordant an discordant Fäll VerfÜgung De Bilan vun IHC staining an de konventionelle eenzeg an der Gentherapie /FAQ Method bewisen huet net ëmmer congruent Resultater opzeweisen; (; Kappa-souguer gemaach κ = 1 Accord 100,0%) wéi och stoung 0 Accorde vu béiden Methoden sech och an Table 3 Et waren ganz gutt concordances zu Resultater vun Implikatioune Fäll opgezielt (100%; κ = 1), stoung 1+ ( 98,96%; κ = 0.947) an Iwwer 3 entholl Echantillon (96.88% stoung; κ = 0.825) an zwou Methoden. Fäll mat stoung 2+ zougedréckt a manner concordance, obwuel nach gutt (95.83%; κ = 0.728). Concordance tëschent de globale HER2 komm (definéiert als IHC Iwwer 3 oder SISH +) zu Standard oder Roman Method war ganz gutt (98.69%; κ = 0,963; 17,7% vs. 16,7%) Table 3 Concordances tëschent eenzelne Methode an kombinéiert Gentherapie /FAQ. Methode VerfÜgung Single vs. geschéckt
Concordance
Kappa-souguer gemaach к
Konventioun Altmann [[15]]
SISH VerfÜgung 100 Implikatioune % VerfÜgung 1 VerfÜgung ganz gutt VerfÜgung IHC stoung 0 zu 100% VerfÜgung 1 VerfÜgung ganz gutt VerfÜgung IHC stoung 1+ VerfÜgung 98,96% VerfÜgung 0,947 VerfÜgung ganz gutt VerfÜgung IHC stoung 2+ VerfÜgung 95,83% VerfÜgung 0,728 VerfÜgung Good VerfÜgung IHC stoung Iwwer 3 VerfÜgung 96,88% VerfÜgung 0,825 VerfÜgung ganz gutt VerfÜgung Croix VerfÜgung: IHC VerfÜgung immunohistochemistry, SISH VerfÜgung sëlwer an situ hybridization. VerfÜgung sech Et zwielef discrepant Fäll ier s-analyséiert vun engem drëtte Observateur (Donnéeën net gewisen). Nodeems du-Evaluatioun vun engem drëtte Observateur, blouf discrepant Resultater zu véier entholl Echantillon. De Grond fir d'aacht discrepant Fäll am provisoresch Analyse fonnt gouf Zollformalitéiten-Observatoire Verännerlechkeet gin. Resultater vun de leschte discordant Resultater sinn an Table 4.Table 4 Detailéiert Evaluatioun vun discordant Resultater tëscht Methoden dës VerfÜgung Single Methoden
Method VerfÜgung kombinéiert VerfÜgung Case
Histologie (Lauren)
IHC (Punktzuel)
SISH (≥ 2.0 /&Si besteet; 2.0)
IHC (Punktzuel)
SISH (≥ 2.0 /&Si besteet; 2.0)
6693 VerfÜgung i VerfÜgung 2+ VerfÜgung ≥2.0 VerfÜgung Iwwer 3 VerfÜgung ≥2.0 VerfÜgung 9924 VerfÜgung i VerfÜgung 2+
&Si besteet; 2.0 VerfÜgung 1+ VerfÜgung &Si besteet; 2.0 VerfÜgung 20209 VerfÜgung i VerfÜgung 2+ VerfÜgung ≥2.0 VerfÜgung Iwwer 3 VerfÜgung ≥2.0 VerfÜgung 1057 VerfÜgung d VerfÜgung Iwwer 3 VerfÜgung &si besteet; 2.0 VerfÜgung 2+ VerfÜgung &si besteet; 2.0 VerfÜgung Croix VerfÜgung: IHC VerfÜgung immunohistochemistry, Diskussiounsronn SISH VerfÜgung sëlwer an situ hybridization VerfÜgung. VerfÜgung d'Zil vun dëser Etude war d'Machbarkeet vun neie Gentherapie /FAQ Plattform am Verglach zu der eenzeg staining Methoden zu gastric adenocarcinomas an carcinomas vun der esophagogastric menaarbecht ze diskutéieren. VerfÜgung of der evaluable Echantillon 28,1% engem diffusen zougedréckt, 4,2 % e gemëschtent a 67,7% eng intestinal histological Typ. D'Majoritéit vun de Patienten goufen ≥65 Joer al (70.8%) an männlech (67.7%). Den Taux vun adenocarcinoma vun GEJ oder Mëtt distal Mo. war ähnlech (45,8% vs. 50,0%). An der Norm Method, 17,7% vun de Patienten goufen HER2 positiv. D'Majoritéit vun HER2-positiv erhéijen sech vun intestinal Histologie an der GE menaarbecht en der huet, dat deemolegt Weltbild gutt mat Date vu Literatur [20, 21]. Am Allgemengen, baséiert op Charakteristiken Patient an entholl souwéi HER2 komm, déi bewäert Grupp e Vertrieder Kollektiv ass. VerfÜgung Obwuel Erfahrungen fir HER2 Analyse vun IHC an nemen fir Broscht Kriibs disponibel ass, ass et net sécher ob kënnen se direkt ginn zu carcinomas vun der gastrointestinal TRACT transferéiert. Den Ausdrock vun HER2 FAQ, am Géigesaatz zu carcinoma vun der Broscht, ass heterogen an oft focally nozekommen. Fox et al. [12]. der HER2 Status vun 100 Otemschwieregkeeten Echantillon mat fortgeschratt Mo. Kriibs oder Kriibs vun der esophagogastric Échangeur zu verschiddene Laboratoiren sech festgestallte hir Mätscher ze testen. Fir dat, IHC an CISH (chromogenic zu situ hybridization) oder SISH applizéiert goufen. Et war e gutt Accord tëscht de verschiddene Laboratoiren iwwert CISH oder SISH, mä moderéiert concordance fir all IHC Fändelen war observéiert. Baséierend op de Resultater vun der Enquête, d'Meenung vum Auteur hat, datt eng Bestëmmung vun Status HER2 baséiert op IHC, gefollegt vun nemen (europäesch Norm) ass net eng optimal Evaluatioun Strategie a recommandéiert souwuel staining Methoden leeschtungsfäeg [12]. Aner Etude [22] getest der HER2 amplification an Ausdrock vun 148 Patienten mat fortgeschratt gastric carcinoma vun IHC an FISH /SISH. Positiv HER2 Fäll goufen an nëmmen 10% vun der IHC fonnt Verglach mat 18% bis 22% vun den am situ hybridization. Net nëmmen well et méi einfach ass ze reproduzéieren, den Auteur proposéiert d'zu situ hybridization Technik wéi d'besser Approche fir Bestëmmung vum HER2 komm [22]. Allerdéngs, baséiert op der TOGA Prozess [8], Patienten mat nemen positiv mee IHC negativ oder Wochenzeitung (1+) positiv erhéijen net aus Stad profitéieren. Also, ass d'Notzung vun FISH oder SISH wéi de primären an nëmmen Method net zu Europa ze recommandéieren an IHC ass nach als alleréischt Evaluatioun Method an villen Länner considéréiert. Fir de beschte vun eisem Wëssen VerfÜgung Ee, sinn et keng Studien dass direkt vergläichen Resultater vun béiden immunohistochemistry (IHC) an sëlwer an situ hybridization (SISH) wann eenzel separat mat de Resultater benotzt gëtt se op enger eenzeger Rubrik zu gastric carcinomas a Kombinatioun vun benotzt. Fir RNS an DNA Ziler an situ visualiséieren, et gi verschidde Méiglechkeeten vun Etikette Ämter benotzt fluorescence, chromogenic oder Sëlwer erkennen. All virdrun Studie mat Astellungen ähnlecher zu eiser Analyse benotzt chromogenic oder fluorescence zu situ hybridization (CISH oder FISH). Downs-Kelly et al. [14] kombinéiert Standard IHC mat engem Oflagerung vun Metallkugele Sëlwer vun EnzMetTM op engem Otemschwieregkeeten microarray (TMA) vun Broscht carcinomas an d'Resultater vun IHC an fluorescence zu situ hybridization Verglach (FISH) wann dësen gesuergt. An anere studéieren, huet den Auteuren Exemplar der Kombinatioun vun IHC an Sëlwer an situ hybridization (SISH) zu TMA vun Broscht an gastric Kriibs Echantillon benotzt, mee am Verglach d'Resultater vun deenen déi IHC an fluorescence zu situ hybridization (FISH) als eenzege staining kritt [16]. Reisenbichler et al. [15] Rapport d'Resultater vun de Verglach vun IHC an chromogenic zu situ hybridization (CISH) als eenzege stainings mat der duebel assay IHC /CISH. Gläichzäiteg Evaluatioun vun FAQ a Gentherapie Kombinatioune op enger eenzeger Rutsch offréiert eng héich reproducible a ganz sécherlech Method mat gutt concordances. VerfÜgung d 'Validitéit vun der neier Gentherapie /FAQ staining Fir Test Verglach mat de standardiséierte IHC an SISH, goufen d'concordances berechent baséiert op de Kappa ass souguer gemaach ginn. Laut der ASCO /CAP Richtlinnen fir Broscht Kriibs, soll eng nei Test weisen méi wéi 95% concordance mat engem validéiert Referenzmaterial assay [23]. An eiser Etude, huet den neie Method concordances iwwer 95%, wat vun all Test stin. Et waren ganz gutt concordances zu Resultater vun der Gentherapie amplification souwéi stoung 0 (all mat 100% Accord), stoung 1+ (98.96% Accord) a stoung Iwwer 3 entholl Echantillon (96.88% Accord). Fäll mat stoung 2+ zougedréckt a manner concordant Resultater, obwuel nach gutt (95.83% Accord). Schwieregkeeten zu Fäll mat moderaten Ausdrock vun de Foussgänger a Klassifikatioun ginn an der Literatur bekannt. Tafe et al. [24]. gewisen, datt et eng Finale stoung an der Evaluatioun vun der IHC wéinst Manktem am glaubwürdegsten Trennung vu Fäll mat engem HER2 Virsprong vun 1 + oder 2 + Schwieregkeeten huet an dorop. Examinateuren kéint vun subjectivity an aarme reproducibility limitéiert ginn. De Phänomen, datt discordant Resultater sinn an Patienten mat niddereg HER2 Ausdrock observéiert, déi heiansdo nach HER2 Gentherapie amplification hunn, huet zu esophageal Kriibs [24-26] gemellt ginn. De stäerkste eventuellen Grond fir dës discordance ass Zollformalitéiten-entholl heterogeneity vun HER2 Status vun gastric oder GEJ Kriibs [17, 27, 28]. An eiser Etude, goufen discordant IHC Resultater zu véier Patienten observéiert, mä dës hunn nëmmen an engem Patient zu engem klinesch relevant Ënnerscheed zu HER2 komm gefouert (Patienti7). De Patient huet diffusen Typ gastric Kriibs. D'Evaluatioun vun diffusen erhéijen schéngt méi schwéier wéi intestinal Typ erhéijen gin [29, 30]. Laut Rüschoff et al. [18]. nëmme 5% vun dësen erhéijen weisen HER2 komm; signet Ring Zell carcinomas sinn negativ. HER2 amplification ass extrem seelen zu diffusen gastric carcinoma déi mat Manque E-cadherin Ausdrock assoziéiert ass [13, 31-33]. VerfÜgung D'SISH fir d'Detectioun vum amplification vun der HER2 Gentherapie eng relativ nei Method ass. Vill Studien bestätegt eng héich concordance mat anere zu situ hybridization Methode wéi CISH an FISH [34]. Am Verglach zu de IHC, weist nemen eng héich Empfindlechkeet a Spezifizitéit an enger méi héijer reproducibility. Dës Ausso kann andeems een de concordance vun Implikatioune Fäll an eiser Methoden confirméiert ginn. Resultater réischt eng ganz gutt Accord tëschent zwou Methoden (100.0%; к = 1). Doriwwer eraus, ass de nemen manner sensibel wéi IHC wéinst engem relativ Stabilitéit vun DNA Verglach zu Differenzen an Otemschwieregkeeten zéien an Veraarbechtung. VerfÜgung Mir Moment op engem erweiderten Etude schafft Evaluéieren ob dës nei Method mat enger Reduktioun vun inter-Observatoire assoziéiert ass Verännerlechkeet vun der Determinatioun vun HER2 Status vun gastric Kriibs. Dës Etude och eng Komponent an der Zäit op der Sich waren Finale Resultater ze mellen. D'Resultater ginn an der Zäitschrëft als Bréif oder eng originell Rapport proposéiert ginn, soubal wéi se sinn. VerfÜgung Konklusiounen VerfÜgung An dëser Etude, hu mir kloer gewisen dass de kombinéiert Method benotzt HER2 FAQ Ausdrock an der Gentherapie amplification zu Leeschtunge op enger eenzeger Rutsch kann Resultater gläicht deenen produzéiere all Method individuell an kontrolléierter Etude Emsetze dräi onofhängeg Observateuren benotzt. All Auteuren liesen an guttgeheescht der Finale mëttelalterlech Handschrëft. VerfÜgung

• Langfristeg Auswierkunge vun laparoscopic Kopp gastrectomy versus Roux-en-Y gastric Contournement fir d'Behandlung vun Chinese Typ 2 Zockerkrank Patienten mat Kierper Mass Index 28-35 kg /m2
• Schiefgang vun TGFB1 an VEGF Genen an Iwwerliewe vu Patienten mat gastric cancer