Validoinnin uutta menetelmää yhdistyvät sekä HER2 immunohistokemia ja HER2 dual-väri hopea in situ yhtä dia mahakarsinoo- testing

validoinnin uutta menetelmää yhdistyvät sekä HER2 immunohistokemia ja HER2 dual-väri hopea in situ
hybridisaatio yhteen dia mahakarsinoo- testaus
tiivistelmä
tausta
HER2 tila arviointi on edellytys sille, että perustetaan asianmukaisen hoidon strategia mahasyövän. Syöpien ovat hyvin heterogeenisiä ja erilliset arvioinnit geenimonistuman ja proteiinin ilmentyminen johtaa epävarmuuden paikallistamisen erillisiä klooneja ja aikaa vievää. Tutkimuksessa arvioidaan vastaavuuden uuden menetelmän yhdistää molemmat geenin ja proteiinin alustat yksi levy. Tool Menetelmät
immunohistokemia (IHC) ja HER2 dual-väri hopea in situ -hybridisaatio (SISH) yksittäisinä menetelmät (IHC /SISH) ja geeni-proteiini alustan käytettävä molempia menetelmiä yhtä dia (geeni /proteiini) suoritettiin sattumanvaraisesti kerättyjen 100 tapausta mahalaukun adenokarsinoomaa. Tulokset IHC /SISH verrattiin geenin /proteiinin värjäys.
Tulokset
96 100 näytettä olivat arvioitavissa. Geenissä /proteiinivärjäys, patologit pystyivät määrittämään geenin monistaminen ja siitä proteiinin ilmentymistä yhteismarkkinavaiheessa solutasolla. Vertailun tutkimuksissa geenimonistuksen havaittiin 14,6% sekä perinteisiä SISH ja geeni /proteiini alustan (sopimus 100%, Kappa-kerroin κ = 1,0). Proteiinin ilmentyminen partituureja IHC oli 70,8% (0), 10,4% (1+), 9,4% (2 +), ja 9,4% (3 +). Proteiinin ilmentyminen geenin /proteiinin menetelmä oli: 70,8% (0), 11,5% (1+), 7,3% (2 +) ja 10,4% (3+) potilaista. Oli täydellinen konkordansseja in IHC arvioinnissa tapauksissa pisteet 0 (100,0%; κ = 1). Korkea konkordansseja esitetään pisteet 1 + (98,96%; κ = 0,947) ja 3+ (96,88%; κ = 0,825) tapauksissa ja hyvä konkordansseja in 2+ tapauksissa (95.83%; κ = 0,728).
Johtopäätökset
Tämä uusi yhdistetty alustan on se etu, että pystyy arvioimaan sekä geenin ja proteiinin asema samassa syöpäsolun ja ne voivat olla erityisen kiinnostavia tutkimus- ja potilaan hoitoa.
Esineluokka
Disease biomarkkereiden.
avainsanat
Mahasyöpää HER2 immunohistokemia Silver in situ -hybridisaatio Gene-proteiinin määritys Taustaa
HER2-onkogeeni (kutsutaan myös HER2 /neu tai erbB-2) kromosomissa 17q21, koodaa 185 kD: n transmembraaninen tyrosiinikinaasireseptori, että kuuluu kasvutekijän reseptorin (EGFR) perhe koostuu EGFR /HER1, HER2, HER3 ja HER4. HER2 aktivointi on keskeinen rooli solujen lisääntymisen ja eloonjäämisen, pitkälti välittyvät RAS-MAPK-reitin. Se estää myös solukuoleman kautta fosfatidyyli 3'-kinaasi-AKT-nisäkkään rapamysiinin kohde (mTOR) kautta. Yli-ilmentävät HER2 on raportoitu erilaisia ​​kiinteitä kasvaimia [1-7]. Gene monistukset ovat harvinaisia ​​muiden sairauksien ja anti-HER2-hoidon parhaillaan validoitu ainoastaan ​​rinta- ja syöpien.
Tulosten perusteella on TOGA tutkimus [8], trastutsumabin hyväksyttiin metastasoituneen adenokarsinooman mahan ja ruokatorven risteyksessä yhdistelmähoito Yhdysvalloissa ja Euroopassa. Vaatimus on osoitus yli-ilmentävät HER2. Euroopassa tämä on määritelty jota IHC 3+ tulos tai IHC 2+ ja positiivinen FISH tai SISH tulos (suhde ≥ 2,0). IHC pidettiin ensisijainen tapa, koska IHC negatiivinen tai viikoittain positiivinen (1+) potilaat eivät hyötyneet trastutsumabi Toga tutkimuksessa, vaikka ne olivat ISH positiivisia. Kirjallisuudessa on kuitenkin huomattavaa vaihtelua immunohistokemiallista positiivisuus määritettiin. Tässä prosenttiosuus HER2 positiivista kehittyneiden mahalaukun adenokarsinooman vaihtelee tutkimusten väliseen, 5%: sta 30% [9], todennäköisesti johtuu eri analyysi protokollia ja tulkintakriteerejä.
Mahdollinen osatutkimuksesta kahdesta adjuvanttia satunnaistettiin tutkimuksissa trastutsumabi vs. nollassa rintasyövän osoitti, että noin 20% HER2 määrityksiä suoritetaan paikan päällä toimielimiä (at ensisijainen hoito sivuston patologian osaston) olivat virheellisiä, kun samasta näytteestä arvioitiin uudelleen korkean volyymin keskuslaboratoriossa [10, 11 ].
Toisin rintasyöpä, histopatologisen mahasyövän suhteen HER2 katsotaan olevan heterogeenisiä ja polttoväli yliekspressio geenimonistuman havaitaan usein [12]. Siksi vaikeudet määrittämisessä HER2 aseman odotetaan olevan voimakkaampaa kuin rintasyöpä. Kaiken ottanut nämä tulokset huomioon, luotettavampia, toistettavissa ja aikaa säästävien menetelmiä, joilla arvioidaan HER2 tilan mahasyövässä tarvitaan. Vain harvat julkaistut tutkimukset yhdistetään IHC ja in situ hybridisaatio menetelmät (mutta ei SISH) yhdessä dia on tehty [13-16]. Opinnäytteet tutkimuksissa käytettiin standardin IHC ja kromogeenisen tai fluoresenssi in situ -hybridisaatiolla (CISH tai FISH) yksittäisinä menetelmiä ja verrattiin niitä samanaikaisesti analyysin (yhdistetty yhdelle dia) ja löytänyt hyviä yhdenmukaiset tulokset yhden värjäystä. Parhaan tietomme kuitenkaan ole olemassa tutkimuksia, jotka suoraan vertailla tuloksia sekä immunohistokemiallinen (IHC) ja hopea in situ -hybridisaatio (SISH), kun kukin on käytetty erikseen tulosten käyttää niitä yhdessä Yhteen maha- karsinoomat.
Tässä tutkimuksessa, HER2-proteiinin ilmentymisen ja geenin monistamisen tilan 100 mahalaukun adenokarsinoomien ja karsinoomat esophagogastric risteyksestä tutkittiin tavanomaisilla IHC ja ISH yhden menetelmistä (IHC /SISH) ja rinnakkain uuden menetelmän yhdistäminen molemmat menetelmät (geeni /proteiini). Tutkimuksen tavoitteena oli arvioida vastaavuutta uuden geenin proteiinia alustan verrattuna yhden värjäyksen menetelmiä. Tool Menetelmät
Potilaat ja kudosnäytteiden
Formaliinifiksoidusta parafinoidut (FFPE) kasvainnäytteestä 100 potilaalla mahalaukun tai ruokatorven risteyksessä adenokarsinooman valittiin kudoksesta arkisto näytteitä instituutin patologian Krankenhaus Nordwest. Projekti suoritettiin luvalla vastaavan eettisen komitean. Kunkin tapauksessa, neljä erilaista värjäys menetelmiä käytettiin mukaisesti val- mistajan FDA-hyväksyttyjä menettelyjä: hematoksyliinillä ja eosiinilla (H &E) arvioimaan näytteen riittävyyden ja vahvistaa histologinen alatyyppi, immunohistokemia (IHC) arvioida HER2-proteiinia ilme, hopea in situ -hybridisaatio (SISH) arvioida geenimonistusmäärityksessä ja geenisiirtoja-proteiinia alusta, joka yhdistää IHC ja SISH yhdellä dian.
immunohistokemia
IHC suoritettiin FDA-hyväksytty Ventana PATHWAY kani monoklonaalinen vasta-aine 4B5 klooni ja jossa Ultraview DAB Detection Kit (Ventana) on benchMark XT automatisoitu värjäyslaitteesta (Ventana, Tucson, AZ). Lyhyesti, kudosleikkeet parafiini EZ Prep 75 ° C: ssa ja 76 ° C, lämmön esikäsitelty Cell Conditioning 1 (CC1) antigeenin haku 76 ° C - 100 ° C: ssa ja inkuboitiin sitten anti-HER2-primaarinen vasta-aine ja 16 min 37 ° C: ssa sen jälkeen, kun inaktivaatio endogeenisen peroksidaasin käyttäen UV-estäjän 4 min 37 ° C: ssa. Levyjä inkuboitiin sekundaarisen vasta-aineen ja sen jälkeen soveltamalla HRP Universal Multimer 8 min. Vasta-aineita todettiin käyttäen kromogeenilla (38 min). Ennen asennusta, diat vasta- värjättiin hematoksyliinillä II 4 minuuttia ja sinistysai- reagenssi 4 min. Tukeakseen pätevyyden värjäys ja tunnistaa kokeellisen esineitä, positiivinen kontrolli sisällytettiin kussakin ajossa.
Hopea in situ -hybridisaatio
kaksiväri SISH suoritettiin INFORM HER2 Dual ISH DNAProbe cocktail ja Ultraview SISH DNP Detection Kit /UltraView RED ISH DIG Detection Kit HER2 ja Chr 17 määritysrajan ja menettely (Ventana /Roche). Molemmat koettimet leimattiin 2,4-dinitrofenoli (DNP) ja digoksigeniini (DIG). Kudos levyt poistettiin parafiini EZ Prep 65 ° C-76 ° C ja lämmön esikäsitelty EZ Prep-laimennettiin Cell hoitoaine 2 (CC2) 90 ° C, minkä jälkeen proteaasilla pilkkomalla ISH proteaasi 3: ssa 16 minuutin ajan 37 ° C: ssa. Perimän DNA kudosleikkeiden ja lovitranslaatiolla HER2 ja Chr 17-koettimet olivat yhdessä denaturoitiin lämpökäsittely 20 minuutin ajan 80 ° C: ssa, jota seuraa hybridisaatio vaihe 6 h ajan 44 ° C: ssa. HER2-signaalit havaittiin käyttäen kanin anti-DNP-vasta-ainetta 20 minuutin ajan 37 ° C: ssa, ja inkuboitiin HRP-konjugoitua vuohen anti-kani-vasta-ainetta 16 minuutin ajan 37 ° C: ssa kolmen 8 min pesuja. Signaali detektoitiin hopea talletukset hopea-asetaatilla, hydrokinonin ja vetyperoksidia. Sillä Chr 17 havaitsemista, levyt inkuboitiin hiiren anti-DIG-vasta-ainetta 20 minuutin ajan 37 ° C: ssa ja AP-konjugoitua vuohen anti-hiiri-vasta-aineella 24 minuutin ajan 37 ° C: ssa. Chr 17 signaali kehitettiin red dot värjäyksen nopea punainen ja naftoli fosfaatti. Objektilasit lopuksi vastavärjättiin hematoksyliinillä II ja sinistysai- reagenssi ennen asennusta.
Gene /proteiini
Gene /proteiini alustan yhdistäminen IHC ja SISH yhdellä dia. Tukeakseen pätevyyden värjäys ja tunnistaa kokeellisen esineitä, positiivinen kontrolli sisällytettiin kuhunkin run.For HER2 proteiinivärjäys ja HER2 /Chr 17 Hybridisaation iView DAB Detection Kit ja Ultraview Detektiokitit käytettiin. Näytteet värjättiin useita on määritysolosuhteissa toteuttaa optimaalinen protokolla saavuttamiseksi tarvitaan IHC /SISH värjäyksen tuloksia kuin yksittäisten IHC ja SISH testaus. Optimointi suoritettiin laboratoriossa Ventana (Roche) ja osittain oman työn. Optimaalinen tuloksia saavutettiin suorittamalla IHC menettely ennen SISH menettelyä.
Näytteet parafiini EZ Prep 72 ° C: ssa 6 jaksoa. HER2-proteiinin värjäys, kudosleikkeet oli lämmön esikäsitelty CC1 antigeenin haku 95 ° C: ssa ja inkuboitiin sitten anti-HER2-primäärinen vasta-aine 37 ° C: ssa 48 minuutin ajan sen jälkeen, kun inaktivaatio endogeenisen peroksidaasin käyttäen UV-inhibiittoria 4 min 37 ° C: ssa. Levyjä inkuboitiin biotinyloidun sekundaarisen vasta-aineen, jonka jälkeen sovellus on HRP-konjugoitu streptavidiini 8 min. Kuparin parannettu DAB reaktio visualisoida proteiinin. HER2-geeni ja CHR 17 värjäys, näytteet lämmön esikäsitelty EZ Prep-laimennettiin CC2 90 ° C: ssa neljä sykliä proteaasilla pilkkomalla ISH proteaasi 2 12 minuutin ajan 37 ° C: ssa. Koettimet denaturoitiin 4 min 80 ° C: ssa ja hybridisoitiin 6 h ajan 44 ° C: ssa käyttäen cocktail DNP- ja DIG-leimattuja koettimia. HybClear lisättiin estää vuorovaikutusta DNP ja DAB talletus hybridisaation aikana. Geenin signaalit havaittiin käyttäen kanin anti-DNP-vasta-ainetta 16 minuutin ajan 37 ° C: ssa, ja inkuboitiin HRP-konjugoitua vuohen anti-kani-vasta-ainetta 16 minuutin ajan 37 ° C: ssa sen jälkeen, kun neljä 8 min pesuja. Signaali kehitettiin hopea talletuksen hopea-asetaatilla, hydrokinonin ja vetyperoksidia. Sillä Chr 17 havaitsemista, levyt inkuboitiin hiiren anti-DIG-vasta-ainetta 16 minuutin ajan 37 ° C: ssa ja AP-konjugoitua vuohen anti-hiiri-vasta-aineella 24 minuutin ajan 37 ° C: ssa. Chr 17 signaali kehitettiin red dot värjäyksen nopea punainen ja naftoli fosfaatti. Ennen asennusta, diat vasta- värjättiin hematoksyliinillä II 8 min ja sinistysai- reagenssi 4 min.
Patologia tarkastelu
Näytteet itsenäisesti tulkitsee patologi (AB) ja biologi koulutettu mahasyövässä histologia (DW). Tarkkailijat saivat näytteet satunnaisesti, eli SISH, IHC, ja yhdistetyt menetelmä ei arvioitu yhdessä toistensa kanssa, mutta erikseen kullekin potilaalle. Konsensus Molempien arvioijat havaittiin jokaisen arvioinnin. Koska ristiriitainen tuloksia molempien menetelmät voivat olla seurausta sisäisten tarkkailijan vaihtelun sijaan eroja värjäys laatua, ristiriitainen tapausta reevaluated kolmas tarkkailija, joka sokaisi tuloksiin ensimmäisen arvioinnin, mutta arvioi discordant tapausta (menetelmät) yhdessä toistensa kanssa. Lopulta päästiin välille kolmannen tarkkailija ja ensisijaisen tarkkailijat.
IHC Tulokset tulkittiin käyttäen pisteytys järjestelmän ehdotettu mahasyövän Hofmannin et al. [17] ja Rüschoff et ai. [18]: 0, ei reaktiivisuus tai kalvo reaktiivisuus < 10% kasvainsolujen; 1+, heikko /tuskin havaittavissa kalvomainen reaktiivisuus > 10% kasvainsolujen; 2+, heikko tai kohtalainen täydellinen, sivu- tai basolateraalisessa kalvo reaktiivisuus > 10% kasvainsolujen; ja 3+, vahvat täydellinen, sivu- tai basolateraalisessa kalvo reaktiivisuus ≥ 10% syöpäsoluja.
SISH tuloksia, kokonaismäärät HER2 ja kromosomi 17 signaalit laskettiin vähintään 20 kasvainsolun ytimien kaksi eri alueilla. HER2 /Chr 17 suhteet tulkittiin mukaisesti TOGA FISH pisteytys järjestelmän HER2 testaus mahalaukun ja ruokatorven risteyksessä (GEJ) syöpä seuraavasti: < 2.0, HER2-geenin ei monistettu; ≥ 2,0, HER2-geenin monistettu [17]. Keskimäärin lasken kuusi tai enemmän pidettiin monistettiin.
Tilastollinen analyysi
analyysi oli tutkivan ilman ennalta hypoteesi tai otoskoon laskelmia. Lukumäärä 100 potilasta katsottiin riittäväksi suorittaa ehdotetun tilastolliset testit. Korrelaatiot IHC /SISH ja geenin /proteiinin arvioitiin käyttäen Cohen's kappa kerroin (к). Kappa-arvo tulkitsemisesta Altmann [19] käytettiin: к > 0,81, erittäin hyvä sopimus; 0,61-0,80, hyvä sopimus; 0,41-0,60 maltillinen sopimus; +0,40-,21, Oikeudenmukaisen sopimuksen; ≪ 0,20, vähäinen sopimus. Tilastolliset analyysit tehtiin käyttäen WinStat ohjelmistoa (R.Fitch Software, versio 2009.1).
Tulokset
Potilasominaisuudet
Yhdeksänkymmentä kuusi 100 potilaan tapauksista oli arvioitavissa. Yksi tapaus sulkeminen johtui puuttuminen kasvainsolujen ja kolmessa tapauksessa köyhien signaalien yhden SISH värjäytymistä.
Valtaosa potilaista oli miehiä (67,7%) ja ≥ 65-vuotias (70,8%) (taulukko 1). Kohortti koostuu potilailla, joilla adenokarsinooma keski distaalisen vatsaan (50,0%) tai GEJ (45,8%) ja enemmän tapauksia Lauren`s suoliston (67,7%) kuin hajanainen kasvaimet (28,1%). Luokittelu enemmistön näytteiden oli G3 (50,0%), jota seurasi G2 (39,6%) ja kasvaimet luokitellaan G2-3 (10,4%). 85,7% of resektoitiin potilaista (n = 28) osoitti imusolmuke etäpesäke (N vaihe) ja 64,3% ei osoittanut etäispesäkkeitä (M vaihe). Vuoden puolet resektoidun potilaista, T3 kasvain vaiheessa havaittiin, seurasi T2 28,6%, T1 14,3% ja T4 vaiheessa 7,1% patients.Table 1 Potilaan ominaisuuksista ja HER2-positiivisuuden alaryhmittäin

Yhteensä n = 96 (%)
Positivity * (IHC 3+ tai SISH +) yksittäinen n (%)
Positivity * (IHC 3+ tai SISH +) combi n (%)
Sukupuoli
Nainen
27 (28,1) B 2 (7,4) B-1 (3,7) B Mies
65 (67,7)
11 (16,9)
11 (16,9) B Unknown
4 (4,2)
3 (75,0) B 3 (75,0) B Age
18-94 v (mediaani 69) B ≥ 65
68 (70,8)
12 (17,6)
11 (16,2) B < 65
28 (29,2) B 4 (14,3) B 4 (14,3) B Ensisijainen kasvain sijainti
Mid distaaliseen mahaan
48 (50,0) B 5 (10,4)
4 (8,3) B GEJ
44 (45,8) B 8 (18,2) B 8 (18,2) B Ei määritelty
4 (4,2) B-3 (75,0)
3 (75,0) B Lauren luokitus
Diffuusi
27 (28,1) B 3 (11,1)
2 (7,4) B Mixed
4 (4,2)
1 (25,0) B 1 (25,0) B Suoliston
65 (67,7)
12 (18,5)
12 (18,5) B Biopsia /resektio
Biopsia
68 (70,8)
10 (14,7) B 9 (13,2) B Kaarileikkaus
28 (29,2) B 6 (21,4) B 6 (21,4) B T vaihe (n = 28) B T1
4 (14,3) B 0
0
T 2
8 (28,6) B 2 (25,0) B 2 (25,0)
T 3
14 (50,0) B 4 (28,6) B 4 (28,6) B T 4
2 (7.1) B 0
0
N vaiheessa (n = 28) B N +
24 (85,7) B 5 (20,8) B 5 (28,8) B N -
4 (14,3) B 1 (25,0)
1 (25,0) B M vaihe (n = 28) B M +
5 (17,9) B 1 (20,0) B 1 (20,0) B M -
18 (64,3) B 3 (16,7) B 3 (16,7) B Mx
5 (17,9) B 2 (40,0) B 2 (40,0) B Arvostelu
G2
38 (39,6) B 6 (15,8) B 6 (15,8) B G2-3
10 (10,4) B 2 (20,0) B 2 (20,0)
G3
48 (50,0) B 8 (16,7) B 7 (14,6) B lyhenteet
: IHC
immunohistokemian SISH
hopea in situ -hybridisaatio T
primaarikasvaimen, N
imusolmukkeet, M
etäpesäkkeet * määritellään IHC 3+ tai SISH ≥2.0.
P
= 1 kaikille vertailuja IHC /SISH ja geeni /proteiini menetelmät (Fisher eksakti testi).
taulukossa 1 HER2 positiivisuuden alaryhmittäin on myös esitetty. Mitään merkittävää eroa ei todettu HER2 positiivisuuden verrattuna alaryhmiin ja eri menetelmiä.
Värjäys tulokset HER2-proteiinin ilmentymisen ja geenin monistaminen (single värjäysmenetelmät) B Proteiiniekspressio partituureja IHC olivat 0 ja 1 + 70,8% ja 10,4%: lla potilaista (taulukko 2). 2,9% pisteet 0 ja 10,0% pisteet 1 + tapausta monistettiin. Vuonna 9,4%: ssa tapauksista, kohtalainen lauseke (pisteet 2 +), jossa 44,4% monistettu tapauksista havaittiin. 9,4% värjättyä näytteessä oli vahva ilmaus (pisteet 3 +), jossa 77,8% monistettiin tapauksista. Kuva 1 osoittaa edustavia tuloksia yksinkertaisesta staining.Table 2 Värjäys haulle HER2-proteiinin ilmentymisen ja geenin monistamisen
Yhden menetelmän
Yhdistetty menetelmä
IHC Score
IHC (n = 96)
SISH ≥ 2,0
IHC (n = 96)
SISH ≥ 2,0
n (%) B
n (%)
n (%)
n (%)
0
68 (70,8) B 2 (2,9) B 68 (70,8) B 2 (2,9) B 1+
10 (10,4) B 1 (10,0)
11 (11,5) B 1 (9,1) B 2+
9 (9,4) B-4 (44,4)
7 (7,3) B-2 (28,6) B 3+
9 (9,4) B-7 (77,8)
10 (10.4) B 9 (90,9) B lyhenteet
: IHC
immunohistokemian SISH
hopea in situ -hybridisaatio.
Kuvio 1 edustaja tuloksia eri värjäys menetelmiä. Suoliston kasvain (hematoksyliinillä ja eosiinilla (H &E), A.1, 20x) kanssa IHC 3+ (immunohistokemia (IHC), A.2, 20x, geeni /proteiini, A.4, 20x) ja vahvistus (hopea in situ hybridisaatio (SISH), A.3, 40x, geeni /proteiini, A.4, 20x). IHC pisteet 0 (IHC, B.2, 20x, geeni /proteiini, B.4, 40x), suoliston tyyppi (H &E, B.1, 20x) ja vahvistus (SISH, B.3, 40x, geeni /proteiini , B.4, 40x).
Gene /proteiini (yhdistetty värjäys menetelmä) B Proteiiniekspressio partituureja geeni /proteiini menetelmällä olivat 0, 1+, 2+, ja 3+ 70,8%, 11,5%, 7,3 % ja 10,4% (taulukko 2). Oli 2,9% /9,1% monistettiin tapauksista näytteissä kanssa pisteet 0/1 +. 28,6% monistettu tapauksista oli maltillinen ja värjäytymistä (pisteet 2 +). Näytteet, joilla on suuri lauseke (3 +) osoitti 90,9%: geenimonistuman. Esimerkkejä geenin /proteiinivärjäys osoitetaan kuvassa 1.
arviointi yhdenmukaisia ​​ja ristiriitainen tapauksissa
arviointi IHC värjäytymistä tavanomainen yhden ja geeni /proteiini menetelmä ei aina paljasta yhteneviä tuloksia; sopimukset molempien menetelmien myös taulukossa 3 Oli erittäin hyviä konkordansseja tuloksissa monistettua tapauksista (sopimus 100,0%, Kappa-kerroin κ = 1) sekä pisteet 0 (100%; κ = 1), pisteet 1+ ( 98,96%; κ = 0,947) ja pisteet 3+ kasvainnäytteet (96,88%; κ = 0,825) molemmissa menetelmissä. Tapaukset, joissa pisteet 2+ osoittivat vähemmän konkordanssin, vaikka silti hyvä (95,83%; κ = 0,728). Välistä yhdenmukaisuutta yleisen HER2 positiivisuuden (määritelty IHC 3+ tai SISH +) vakio- tai uusi menetelmä oli erittäin hyvä (98,69%; κ = 0,963; 17,7% vs. 16,7%). Taulukko 3 Konkordanssit yksi- menetelmiä ja yhdistetty geeni /proteiini menetelmiä
Single vs. yhdistelmä
Concordance
Kappa-kerroin к
sopimuksen Altmann [[15]]
SISH monistetaan
100 %
1
Erittäin hyvä
IHC pisteet 0
100%
1
Erittäin hyvä
IHC pisteet 1+
98,96%
0,947
Erittäin hyvät
IHC pisteet 2+
95.83%
0,728
Good
IHC pisteet 3+
96,88%
0,825
Erittäin hyvä
lyhenteet
: IHC
immunohistokemia, SISH
hopea in situ -hybridisaatio.
oli kaksitoista poikkeava tapauksissa ennen uudelleen analysointi, jonka kolmasosa tarkkailija (tuloksia ei ole esitetty). Uudelleenarvioinnin jälkeen kolmas tarkkailija, poikkeavia tuloksia jäi neljä kasvain näytteissä. Syynä kahdeksan discrepant tapausten välianalyysi havaittiin olevan sisäistä tarkkailija vaihtelua. Tulokset lopulliset ristiriitainen tulokset on esitetty taulukossa 4.Table 4 yksityiskohtainen arviointi ristiriitainen tulosten niveltyvät
Single menetelmiä
Yhdistetty menetelmä
Case
Histologia (Lauren)
IHC (Score)
SISH (≥ 2,0 /< 2,0)
IHC (Score)
SISH (≥ 2,0 /< 2,0)
6693
i
2+
≥2.0
3+
≥2.0
9924
i
2+
< 2,0
1+
< 2,0
20209
i
2+
≥2.0
3+
≥2.0
1057
d
3+
< 2,0
2+
< 2,0
lyhenteet
: IHC
immunohistokemian SISH
hopea in situ -hybridisaatio.
keskustelu
tämän tutkimuksen tavoitteena oli arvioida mahdollisuuksia uusien geenin /proteiinin alustan verrattuna yhden värjäyksen menetelmiä mahalaukun adenokarsinooman ja karsinoomat esophagogastric risteyksessä.
arvioitavissa näytteistä 28,1% oli hajanainen, 4,2 % sekoitettu ja 67,7% suoliston histologinen tyyppi. Suurin osa potilaista oli ≥65 vuotias (70,8%) ja miesten (67,7%). Nopeus adenokarsinooma GEJ tai keski distaaliseen vatsa oli samanlainen (45,8% vs. 50,0%). Varsinaisessa menetelmässä, 17,7% potilaista oli HER2 positiivisia. Valtaosa HER2-positiiviset kasvaimet olivat suoliston histologian ja olivat paikallisia GE risteyksessä, tämä korreloi hyvin tietoihin kirjallisuuden [20, 21]. Kaiken perustuu potilaan ja kasvaimen ominaisuudet sekä HER2-positiivisuuden, arvioidun ryhmä on edustava kollektiivinen.
Vaikka huomattavaa kokemusta HER2 analyysiä IHC ja ISH rintasyövän on käytettävissä, ei ole varmaa, ovatko ne voivat olla suoraan siirretään karsinoomat ruoansulatuskanavassa. Ilmaisu HER2-proteiinin, toisin kuin rintasyöpä, on heterogeeninen ja usein fokaalisesti lausutaan. Fox et ai. [12]. määritti HER2 tila 100 kudosnäytteistä diagnosoitu kehittynyt mahasyöpä tai syöpä esophagogastric risteyksen eri laboratorioissa testata ottelut. Tätä varten IHC ja CISH (kromogeeninen in situ -hybridisaatio) tai SISH sovellettiin. Oli hyvä sopimus eri laboratorioiden suhteen CISH tai SISH, mutta kohtalainen concordance kaikille IHC tulokset havaittiin. Tulosten perusteella tutkimuksen, tekijän mielestä oli, että määrittäminen HER2 tila perustuu IHC, jonka jälkeen ISH (eurooppalainen standardi) ei ole optimaalinen arviointistrategian ja suositteli suorittavat sekä värjäyksen menetelmiä [12]. Toisessa tutkimuksessa [22] testattu HER2 vahvistusta ja ilmaisun 148 potilailla, joilla on edennyt mahasyöpä IHC ja FISH /SISH. Positiiviset HER2 tapauksia todettiin vain 10% IHC verrattuna 18%: sta 22%: in situ -hybridisaatio. Ei vain siksi, että se oli helpompi jäljentää, kirjailija ehdotti in situ -hybridisaatio tekniikkaa parempi lähestymistapa määrittämiseksi HER2-positiivisuuden [22]. Kuitenkin perustuu TOGA tutkimus [8], potilaalla on ISH positiivinen mutta IHC negatiivinen tai viikoittain (1+) kasvaimia ei ole hyötynyt trastutsumabi. Siksi käyttöä kalaa tai SISH ensisijaisena ja ainoa menetelmää ei suositella Euroopassa ja IHC pidetään edelleen ensisijaisena arviointimenetelmä monissa maissa.
Parhaan tietomme kuitenkaan ole olemassa tutkimuksia, jotka suoraan vertailla tuloksia sekä immunohistokemiallinen (IHC) ja hopea in situ -hybridisaatio (SISH), kun kukin on käytetty erikseen tulosten käyttää niitä yhdessä yhteen osio mahakarsinoomat. Visualisoida RNA ja DNA-kohteiden in situ, on olemassa erilaisia ​​tapoja leimauskoettimien fluoresenssi, kromogeenista tai hopea havaitsemiseen. Kaikki aikaisemmat tutkimukset asetukset verrattavissa meidän analyysiä käytetään kromogeenisia tai fluoresenssi in situ -hybridisaatiolla (CISH tai FISH). Downs-Kelly et ai. [14] yhdistettynä standardin IHC kanssa laskeuman metallista hopeaa jonka EnzMetTM on kudos microarray (TMA) ja rintakarsinoomista ja verrattiin tuloksia IHC ja fluoresenssi in situ hybridisaatio (FISH), kun suoritetaan yksin. Toisessa tutkimuksessa, kirjoittajat on käyttänyt yhdistelmä IHC ja hopea in situ -hybridisaatio (SISH) TMA rinta- ja mahasyövän näytteitä, mutta verrattuna tuloksiin jotka on saatu IHC ja fluoresenssi in situ hybridisaatio (FISH) yksittäisinä värjäys [16]. Reisenbichler et ai. [15] raportoi tuloksista vertailun IHC ja kromogeenisen in situ -hybridisaatio (CISH) yksittäisinä värjäykset kanssa dual määrityksen IHC /CISH. Samanaikainen arviointi proteiinin ja geeniyhdistelmiä yhdellä dian tarjosi hyvin toistettavissa ja hyvin yksinkertaista menetelmää hyvän konkordansseja.
Testaamiseksi pätevyyden uuden geenin /proteiinivärjäys verrattuna standardoitu IHC ja SISH The konkordansseja laskettiin perustuvat kappa kerroin. Mukaan ASCO /CAP ohjeet rintasyövän, uusi testi pitäisi näyttää yli 95% yhteensopivuutta validoidun viitaten määritys [23]. Tutkimuksessamme uusi menetelmä osoitti konkordansseja yli 95% mitattuna kaikkien testin tulokset. Oli erittäin hyviä konkordansseja tuloksissa geenimonistuman sekä pisteet 0 (kukin 100% sopimus), pisteet 1+ (98,96% sopimus) ja pisteet 3+ kasvainnäytteet (96,88% sopimus). Tapaukset, joissa pisteet 2+ osoittivat vähemmän yhdenmukaisia ​​tuloksia, vaikka silti hyvä (95,83% sopimus). Vaikeudet tapauksissa kohtalainen ilme arvioinnissa ja luokittelu ovat tunnettuja kirjallisuudessa. Tafe et ai. [24]. osoittivat, että oli vaikeuksia määrittämällä lopullinen pistemäärä arvioinnissa IHC puutteen vuoksi, että luotettava erottaminen tapausta, joiden HER2 pistemäärä 1 + tai 2 +. Nämä luokat voidaan rajoittaa subjektiivisuus ja huono toistettavuus. Ilmiö että ristiriitainen tuloksia havaitaan potilailla, joilla on alhainen HER2 ilme, joka joskus vielä HER2-geenin monistamisen, on raportoitu ruokatorven syöpä [24-26]. Todennäköisin syy tähän discordance on sisäinen kasvain heterogeenisuus HER2 tila mahalaukun tai GEJ syöpä [17, 27, 28]. Tutkimuksessamme ristiriitainen IHC tuloksia havaittiin neljällä potilaalla, mutta nämä ovat johtaneet kliinisesti merkittävää eroa HER2 positiivisuuden vain yhden potilaan (potilasi7). Potilaalla oli hajanainen tyyppi mahasyövän. Arviointi hajanainen kasvaimia tuntuu olevan vaikeampaa kuin suoliston tyypin kasvaimissa [29, 30]. Mukaan Rüschoff et al. [18]. vain 5% näistä kasvaimista osoittavat HER2-positiivisuuden; sinettisormus solukarsinoomat ovat negatiivisia. HER2-vahvistus on erittäin harvinainen diffuusi mahalaukun karsinooma, johon liittyy epänormaali E-kadheriinin ilmentymisen [13, 31-33].
SISH on suhteellisen uusi menetelmä havaitsemiseksi HER2-geeniä. Lukuisat tutkimukset vahvistivat korkea yhteensopivuutta muiden in situ menetelmiä kuten CISH ja FISH [34]. Verrattuna IHC, ISH osoittaa suurempi herkkyys ja spesifisyys ja korkeampi toistettavuus. Tämä toteamus voidaan vahvistaa vertaamalla konkordanssin monistettu tapausten menetelmämme. Tulokset paljastivat erittäin hyvä sopimus molempien menetelmien (100,0%; к = 1). Lisäksi ISH on vähemmän herkkä kuin IHC vuoksi suhteellinen vakaus DNA verrattuna eroja kudosten kiinnitys ja käsittely.
Olemme parhaillaan laajennetun tutkimuksen arvioidaan, onko tämä uusi menetelmä liittyy vähentäminen inter-tarkkailijan vaihtelua määrittämiseksi HER2 mahasyövän. Tutkimus sisältää myös komponentin katsomalla aikaa ilmoittaa lopulliset tulokset. Tulokset toimitetaan lehden kuin kirjain tai alkuperäisen raportin, heti kun ne ovat saatavilla.
Johtopäätökset
Tässä tutkimuksessa olemme selvästi osoittaneet, että käyttämällä yhdistettyä menetelmää suorittamaan HER2-proteiinin ilmentymisen ja geenin monistaminen yhden dian voi tuottaa samanlaisia ​​tuloksia kuin käyttämällä kutakin menetelmää erikseen kontrolloidussa tutkimuksessa toteutetaan kolme itsenäistä yhteenlaskua tarkkailijaa. Kaikki kirjoittajat luettu ja hyväksytty lopullinen käsikirjoitus.

• Pitkän aikavälin vaikutukset laparoskooppisten holkin gastrectomy versus Roux-en-Y mahalaukun ohitusleikkaus hoitoon Kiinan tyypin 2 diabetesta sairastavien potilaiden painoindeksi 28-35 kg /m2
• Polymorfismia TGFB1 ja VEGF-geenien ja selviytymistä potilaalla on mahasyöpä