Epstein-Barr-virus associerad magcancer: en rapport från Iran under de senaste fyra decades

Epstein-Barr-virus associerad magcancer: en rapport från Iran under de senaste fyra decennierna
abstrakt
Bakgrund
Epstein- Barr-virus har visat sig vara associerade med många av den mänskliga malignitet inklusive gastrisk carcinom, en av de viktigaste humana maligniteter i världen. Det har inte skett någon studie om närvaron av EBV i magcancer i Iran.
Metoder
Vi undersökte förekomsten av EBV i 273 formalinfixerade paraffininbäddade fall av magsäckscancer från cancerinstitutet av Teherans universitet, från 1969 till 2004. In situ-hybridisering av EBV-kodade små RNA-en (EBER-1) utfördes. Stammen av positiva fall undersöktes med hjälp av polymerase chain reaction och /eller restriction fragment length polymorfism analys
Resultat
Vi hittade 9. (3%, 95% CI = 1-5%) EBV positiva fall. Skillnaden mellan könen var inte statisticaly signifikant. Andelen EBV-GC fall i diffus typ var högre än intestinal typ (OR = 0,08; 95% CI = 0,002 till 0,64). EBV-GC fall hade något samband med ålder, plats och invasion. Sex av nio EBV-GC fall föddes under perioden mellan 1928 och 1930. Alla 9 fall var typ A. Prototype F sågs i sex av åtta fall. Skriv "Jag" hittades i 8 fall och typ I i ​​ett fall. Xhol + och XhoI- polymorfism stod sex och tre av fallen, respektive.
Slutsats
Vår studie är den första att beskriva frekvensen av EBV-GC i Iran och Mellanöstern, belyser en mycket låg förekomst med specifik clinicopathologic funktioner. Dominans av EBV-GC födelseår i en viss tid, tyder på att EBV-infektion eller andra händelser i den tidiga barndomen kan vara relaterade till utvecklingen av EBV-GC senare i livet. Dominansen av typen "jag" och Xhol + fall är motsägelsefullt att andra studier i Asien och liknar vad som rapporteras från latinamerikanska länder.
Bakgrund
Epstein-Barr-virus (EBV) är en allestädes närvarande dubbelsträngad DNA virus från humant herpesvirus familjen, som har B-lymphotropism [1]. Mer än 90% av vuxna i världen har serologiska tecken på infektion med detta virus [1]. Det förvärvas under tidig barndom och åldern för infektion är mycket lägre i outvecklade länder med låg socioekonomisk tillstånd [1]. Efter primär infektion, etablerar viruset en livslång latent infektion i B-cell-lymfocyter där det förekommer i en i 10 5-10 6 cirkulerande celler [2]. Det uttrycker vissa antigener i denna latenta fas, som visat sig ha vissa onkogena egenskaper [3-8]. Det finns många dokument om orsakssamband mellan EBV och lymfoida maligniteter såsom Burkitts lymfom i Ekvatorialafrika [9], nasal T /NK-cellslymfom [10], Hodgkins lymfom [11] och B-cellslymfom hos patienter med nedsatt immunförsvar [12]. EBV har också kapacitet att infektera epitelceller, och har även tumorogenic effekt i dessa celler från vilka nasofaryngealt karcinom är en av de viktiga prototyper [13].
Den första rapporten av EBV inblandning i magkarcinom publicerades 1990 i lymphoepithelial karcinom i magen [14]. Följaktligen 1992 Shibata och Weiss rapporterade EBV upptäckt i 16% av ordinarie gastric carcinoma i US [15]. Sedan dess har förekomsten av EBV-associerad magcancer (EBV-GC) undersökts och rapporterats i olika länder som varierade mellan 3-18% [15-34] med lägst förekomst i Papua Nya Guinea, Pakistan och Korea som är mellan 1-3% och den högsta i Tyskland och USA som är 16-18%
det finns många bevis på orsakssamband mellan EBV och magcancer till exempel. monoklona av virus i neoplastiska celler som visades av unik terminal upprepning av EBV-DNA [35]; enhetlig närvaron av EBV i alla tumörceller detekteras genom in situ-hybridisering av EBER-1, men inte i omgivande epitelceller [15-34] och förhöjning av IgG- och IgA-antikroppar mot virala kapsiden antigen flera månader innan kliniska presentationen av sjukdomen [36 .]
EBV-GC visar några konstant karakteristiska clinicopathologic funktioner som anlag för övre två tredjedel av magen [15-17, 19-31]; en måttligt differentierad rörformad till dåligt differentierade fast typ av histologi [16-22, 32, 33]; har ingen effekt i stromal invasion och överlevnad [15, 16]; och manliga dominansen i de flesta av studierna. Emellertid är det sista man inte sett i vissa exceptionella studier som utförs i Mexiko [32, 37], Chile [16] och Kina [38]. Ålder beroende är inte självklart i de flesta studier. Men studier i Colombia [19], och Kazakstan [28] visar en högre prevalens bland yngre patienter.
EBV har två huvudtyper, typ 1 och typ 2 som skiljer sig i deras förmåga att omvandla B-lymfocyter i ett tillstånd av kontinuerlig spridning [39]. Typ 1 är dominerande i västerländska och asiatiska länder, medan B-typ är dominerande i Afrika och ses oftare hos patienter med nedsatt immunförsvar [40, 41]. Dessutom finns det tre andra varianter, som skiljer sig genom restriktionsfragmentlängd-polymorfism (RFLP) med användning av BamHI och Xhol restriktionsendonukleasenzymer. Vid BamHI-F regionen Prototyp F har den globala fördelningen och "f" variant som har en extra plats för enzym dominerar i södra Kina och är associerad med nasofarynxcancer [42, 43]. Polymorfism i BamHI-W1 /I1 gränsområdet leder till två varianter; typ I och "i". Typ I som är dominerande i Japan och Kina har ingen plats för BamHI enzym [44, 45] och skriv "i" med en extra BamHI ses oftare i västvärlden [46]. Slutligen definierar polymorfism i Xhol restriktionsställe i axon 1 i LMP1-genen Xhol + som är vanligare i västvärlden [47] och Xhol -., Som ofta ses i Asien [44]
Iran är ett av de länder som har en hög förekomst av magcancer med en årlig incidens på 26,1 per 100.000 för män och 11,1 för kvinnor. Det är den näst vanligaste cancer och den första ledande orsaken till cancerrelaterade dödsfall bland män i Iran [48]. Det finns dock ingen studie om förekomsten eller genotypen av EBV i magcancer i detta område. Därför bestämde vi oss för att utvärdera den i den äldsta remiss centrum för magcancer i Iran.
Metoder
Prover
Vi undersökte 273 kirurgiskt resekterade gastric cancerfall i denna studie. Fallen valdes slumpmässigt från 1325 magcancer fall registrerade i cancerinstitut i Teherans universitet mellan 1969 till 2004, som har intakta paraffinblock och patologiska rapporter. Formalinfixerade paraffininbäddade vävnad från dessa fall valdes ut och skickades till Kagoshima University Graduate School of Medical och Dental Sciences, Japan, för ytterligare molekylära utvärderingar. Patologiska data erhölls med omvärdering av H & E färgade diabilder av två patologer (AA & SGS). Alla tillgängliga demografiska data erhölls från de tillgängliga patologiska och medicinska rapporter om patienterna.
Patologi
Alla proverna omklassificeras i fråga om dominerande histologiska mönster som intestinal och diffus typ enligt Lauren klassificering [49] och underklassificeras enligt riktlinjerna i den japanska forskningssamhället för magcancer [50] väl differentierad rörformiga adenokarcinom (tub1), måttligt differentierad adenokarcinom (tub2), fast dåligt differentierad adenokarcinom (por1), icke-fasta dåligt differentierad adenokarcinom (por2 ), signetring cellscancer (SIG), mucinöst carcinoma (FRA) och dåligt differentierade lymphoepithelial liknande carcinoma (LE).
tumörer plats enligt dominerande platsen för skadorna klassificerades som övre tredjedelen eller den övre magmunnen, mellersta tredjedelen eller kropp och nedre tredjedelen eller antrum i enlighet med riktlinjerna i den japanska forskningssamhället för magcancer [50]. Det fanns ingen multifokal fallet i vår studie.
Djup invasion klassificerades som mucosal, sub-slemhinna, muscularis propria och serosala engagemang.
In situ hybridisering
EBV identifierades genom expression av EBV-kodade små RNA-en (EBER-1). In situ-hybridisering med en komplementär digoxigeninmärkt 30-bas-oligomeren användes för att detektera den EBER-1 enligt förfarandet som tidigare beskrivits av Chang et al [51]. 4-5-im sektioner monterade på silanbelagda objektglas framställdes för varje enskilt fall. Den vävnad på objektglasen var avparaffinerades, rehydratiserades, predigested med pronas, förhybridiserades och hybridiserades därefter över natten vid 37 ° C med 0,5 ng digoxigeninmärkt prob. Hybridiseringssignalen detekterades genom en antidigoxigenin antikropp-alkaliskt fosfatas-konjugat. Sektioner från en patient med känd EBER positiva magkarcinom användes för en positiv kontroll, och avkänna sond till EBER-1 användes för en negativ kontroll för varje förfarande.
Preparation av DNA
formalinfixerade och paraffin -embedded prov skars i 10 | im tjocka skivor, och DNA-prov framställdes enligt metoden beskriven av Greer et al [52]. I korthet innebar detta skivorna behandlades med xylen och etanol och centrifugerades vid 22.000 g under 20 minuter, och den resulterande pelleten återsuspenderades i 100 pl nedbrytningsbuffert (1 M Tris, pH 8,0, 50 mM EDTA, 0,5% Tween 20) med 200 | ig /ml proteinas K och inkuberades vid 55 ° C över natten. Efter 10 min som kokade vid 100 ° C, extraktion och utfällning av DNA utfördes med fenol-kloroform och etanol, respektive.
Primrar och prober
Fyra olika regioner, EBNA-3C, BamHI-F, BamHI-W1 /I1, och Xhol-ställe i LMP1, användes för att bestämma virala genotyper. Tabell 1 visar en lista över primeruppsättningar och prober som användes i föreliggande study.Table 1 Förteckning över primers och prober som används i denna studie
Genotyp
sekvens
typ av sond eller storlek efter RE1 uppslutning
Referens
EBNA-3C
Primers
Sense
5'-AGAAGGGGAGCGTGTGTTGT-3 '
Antisens
5'-GGCTCGTTTTTGACGTCGGC-3
Sample et al. (53) Review Probes
typ 1
5'-GAAGATTCATCGTCAGTGTC-3 '
153 BP2
typ 2 Review 5'-CCGTGATTTCTACCGGGAGT-3'
246 bp
BamHI-F
Primers
Sense sälja 5'-TCCCACCTGTTACCACATTC-3 '
prototyp F: 198 bp
Lung et al. (54) Review Antisense
5'-GGCAATGGGACGTCTTGTAA-3 '
Variant "f": 127 + 71 bp
Probe
5'-AAGGCTACCGTGCTAATTACCTCC-3'
Hudson et al. (55) Review BamHI-W1 /I1
Primers
Sense
5'-ACCTGCTACTCTTCGGAAAC-3 '
typ I: 205 bp
Lung et al. (54) Review Antisense
5'-TCTGTCACAACCTCACTGTC-3 '
Skriv "i": 130 + 75 bp
Xhol-ställe i LMP1
Primers
Sense
5'- AACAGTAGCGCCAAGAGGAG-3 '
Xhol +: 113 bp
Sandvej et al. (56) Review Antisens
5'-ATGGAACACGACCTTGAGAGG-3 '
XhoI-: 67 + 46 bp
1Restriction enzym; 2Base par
typ 1 och 2 igenkändes av amplifiering av U2 regionen av EBNA-3C-genen genom primrar beskrivna av Sample et al [53], vilket gav 153 och 246-bp fragment, respektive. De känns igen av Southern blot-hybridisering (SBH) med typspecifika interna prober som beskrivs av Sample et al [53]. BamHI-F-regionen amplifierades med primrarna uppsättningen beskrivits av Lung et al [54]. Den därav 198-bp-fragmentet digererades med BamHI-restriktionsenzym som yelled ett 198-bp fragment i fallet med vild typ F och 127-bp och 71-bp-fragmenten i fallet med "f" variant. Vildtypen F och f-varianterna bekräftades genom SBH med den inre sonden såsom beskrivits tidigare [55]. För att skilja I /i varianter, var BamHI-W1 /I1-regionen amplifierades med användning av primeruppsättningen beskriven av Lung et al [54]. Klyvning med BamHI restriktionsenzym yelled 205-bp-fragmentet i typ I och 130-bp och 75-bp-fragmenten i fallet med "i". De bekräftades också av SBH med en klonad BamHI-DNA-fragment-sond. Analys av polymorfism i exon 1 av LMP1-genen utfördes med användning av en primeruppsättning som beskrivs av Sandvej et al [56] som resulterade 113-bp fragment. Efter uppslutning med Xhol restriktionsenzym Xhol + fall som innehåller Xhol klyvningsställe (Xhol hålls) visar 67-bp och 46-bp fragment men Xhol - fall visa original osmält 113 bp PCR-produkten. 113 bp-fragmentet av PCR-produkt av B95-8 cellinje användes som prob för att bekräfta Xhol klyvningsstället i LMP1 genom SBH [57]. Idéer för typ 1, vild typ F, typ I, och Xhol - virus B95-8-cellinjen användes som positiv kontroll. Cellinjerna AG786 och Akata och det klonade BamHI-'f "och BamHI" i "DNA-fragment tjänade som positiva kontroller för typ 2, Xhol -" f "variant, och skriver" I "virus, respektive. Humant herpesvirus 6 infekterad cellinje MOLT-4 användes som negativ kontroll [58].
Polymeraskedjereaktion
Amplifiering av mål-DNA utfördes med användning av 2 | il av DNA och blandning av 10 mM Tris-HCl, pH 8,0 , 50 mM KCl, 1,5 mM MgCb 2, 200 ^ M dNTP, 1 pM av varje primer och 1,0 U Taq-polymeras (Hot Star, Qiagen, Tyskland) i en slutlig volym av 25 | il blandning. Det protokoll som används för amplifiering av EBNA-3C-genen var en cykel vid 95 ° C under 15 min, följt av 40 cykler av denaturering vid 95 ° C under 1 min, hybridisering vid 46 ° C under 1 min och förlängning vid 72 ° C under 1 min och slutligen slutade med 5 min vid 72 ° C. Det protokoll som används för BamHI-F, BamHI-W1 /I1 och Xhol-ställe amplifieringen var en cykel vid 95 ° C under 5 min följt av 40 cykler av denaturering vid 95 ° C under 1 min, hybridisering vid 43 ° C under 1 min och förlängning vid 72 ° C under 1 min och slutligen slutade med 5 min vid 72 ° C. Elektrofores i en 2% -ig agarosgel och färgning med 0,5 | j, g /ml av etidiumbromid genomfördes för att identifiera de PCR-produkter.
Restriction fragment length polymorphism analys
Amplified DNA-produkter (15 | il) digererades med 10 U av BamHI- eller Xhol-restriktionsenzymer, i enlighet med tillverkarens anvisningar och visualiserades genom elektrofores i en 2% agarosgel färgad med 0,5 | j, g /ml av etidiumbromid och överfördes på ett nylonmembran för SBH.
Southern blot-hybridisering
Specificitet för PCR reaktion bekräftades av SBH. Den elektroforetiska DNA överfördes på ett Hybond N + nylonmembran (Amersham, Pharmacia Biotech, UK) genom kapillär blotting med användning av 0,4 N NaOH-lösning. Membranen förhybridiserades med hybridiseringsbuffert under 1 h vid 42 ° C. Efter tillsats av sonden, var hybridisering utfördes över natt vid 42 ° C. Prober av typerna A och B, och BamHI-I F märktes med Dig oligonukleotid 3'-änden märkningskit och detekteras av Dig luminiscerande detektionskit (Boehringer Mannheim, Tyskland). För detektering av BamHI-fragmentet och Xhol polymorfism i LMP1, utfördes hybridisering utfördes med användning av ECL direkt märkning och detektionskit (Amersham, Pharmacia Biotech, UK) enligt tillverkarens instruktioner.
Statistisk analys
Statistisk analys var görs med hjälp av LogExact 7.0 (en statistisk paket för regressionsförfarande med exakt metod); Cytel Studio 7.0.0 paket (Cytel Software Corporation, 2005). Exakta test av binär logistisk analys utfördes för att jämföra andelen av EBV positiva fall bland magcancer. Sex, åldersgrupper (< 50, 50-69 och ≥ 70 år), anatomiska belägenhet tumör (antrum, kropp och magmunnen), invasion av tumör (serosa, andra) och Laurens histologiska klassificering ingick som oberoende variabler. Multinominal variabler delades till n-1
dummy binomiala variabler (n
var antalet kategorier). Odds ratio med 95% konfidensintervall beräknades för varje kategori. Typ 1 fel (α) fastställdes till 0,05. Alla p-värden var dubbelsidig.
Resultat
Vi undersökte 273 gastric cancer inklusive 196 (72%) män och 77 (28%) kvinnor. Medelåldern var 57,3 ± 11,3 (SD) år (intervall: 24-90; median: 58). De flesta av dem (108 fall, 66%) var mellan 50 till 69 år, var 54 (20%) fall under 50 och den återstående var över 70 år. Hundra trettio fall (48%) var belägna i antrum, och 64 (23%) och 71 (26%) fall var belägna i kroppen och magmunnen, respektive. I 5 fall var inte definierades och i 3 fall alla magväggen var inblandade (linitis plastica) som inte ingick i statistisk analys. Som framgår av tabell 2, var de flesta fall intestinal typ (56%). Tabell 2 Fördelning av Eber-1 positiva gastriska karcinom genom histologisk typ och kön
Histology1

Man
Kvinna
Totalt
vid EBER + /N2 (%)
EBER + /N (%)
EBER + /N (%)
Intestinal
1/113 (1) Review 0/39 (0) Review 1/152 (1) Review pap
0/11 (0)
0/3 (0)
0/14 (0) katalog tub1
0/36 (0)
0/11 (0)
0/47 (0) katalog tub2
1/50 (2) Review 0/16 (0) Review 1/66 (1) katalog muc
0/16 ( 0) Review 0/9 (0) Review 0/25 (0) Review Diffusa
7/83 (8) Review 1/38 (3) Review 8/121 (7 ) katalog por1
3/34 (8) Review 1/16 (6) Review 4/50 (8) katalog por2
4/40 (10) Review 0 /18 (0) Review 4/58 (8) katalog sig
0/9 (0) Review 0/4 (0) Review 0/13 (0) Review en pap: papillärt adenokarcinom; tub1: väl differentierat tubulär adenokarcinom; tub2: måttligt differentierad adenokarcinom; por1: fast dåligt differentierat adenokarcinom; por2: icke-fast dåligt differentierat adenokarcinom; Sig: signetring cell carcinoma; muc: mucinöst carcinoma; 2 totala antalet fall i varje grupp (Baserat på japanska forskarsamhället för magcancer) Review Förekomst av EBV positiva fall
EBER-1 upptäcktes i nio av 273 fall (3%) som ansågs som EBV GC. Signalen begränsas endast till kärnorna hos tumörceller men som inte finns i icke-tumörceller (Fig. 1). Figur 1 Ett fall av EBV positiva gasrtric carcinoma. Måttligt differentierade rörformiga adenokarcinom med enstaka tubul bildning (A); nukleär EBER positiv signal i alla tumörceller detekteras med in situ hybridisering (B).
faktorer som är förknippade med EBV positiva fall
Tabell 3 visar frekvenser av EBV-GC efter ålder, kön, plats, histologi och invasion samt till följd av logistiska analysis.Table 3 resultat av logistisk analys
Variabler
EBER + /N1
(%)
OR2
95% CI2
Kön
Kvinna
1/76
(1) 1
referens
Man
8/188
(4) Review 0,3
0,01-2,96
P
= 0,595
Ålder
≥ 70
1/36
(3) 1
referens
50-69
5/180
(3) Review 0,8
0,08-44,62 Hotel <
50 3 /54
(6) Review 1,3
0,08-81,25
P
för trend = 1,0
plats
Övre
1/71
(1)
1
referens
USA
5/64
(8) Review 6,0
,1-77,86
Lower
3/130
(2)
1,4
,63-296,7
P Idéer för heterogenitet = 1,64
Histologi
Diffus
8/121
(7) 1
referens
intestinal
1/152
(1) Review 0,08
,002-0,64
P
= 0,009
Invasion
Muscle
3/33
( 9) 1
referens
serose
6/222
(3) Review 3,6
0,47-24,03
P
= 0,243
1Total nummer i varje grupp; 2eller och 95% konfidensintervall erhölls från exakta test av binär logistisk analys.
Kön och ålder
Åtta av 188 (4%) manliga fall och en av 76 (1%) kvinnliga fallen var EBV positiv. Även om det fanns en manlig dominans i denna studie, var det inte statistiskt signifikant (p
= 0,5). Det fanns inte heller någon relation mellan ålder och EBV-GC (p
= 1).
Tumörlokalisation
Enligt anatomiska läge, 5 av 64 (8%) kroppstumörer, en av 71 (1 %) hjärt tumörer och 3 av 130 (2%) antral tumörer EBV associerade. Även om de flesta av EBV-GC var belägna i de övre två tredjedelar, var det inte signifikant statistiskt (p
= 0,1).
Histologisk typ
Baserat på Laurens klassificering, 8 av 121 (7%) diffus typ fall var EBV associerade men bara en av 152 intestinal typ var EBV positiv, vilket var statistiskt signifikant (p
= 0,009). Enligt japanska klassificering, por2 och por1 var de dominerande histologiska typer i EBV-GC (tabell 2), men om det låga antalet fall i varje grupp statistisk analys kunde inte utföras.
Invasion
I denna studie var endast två fall som var begränsade till submukosa och ingen av dem visar EBER-1-signal i ISH. Sålunda, med tanke på det låga antalet, dessa fall inte togs med i statistisk analys. Det fanns ingen skillnad mellan EBV positiva och negativa fall om invasion till serosa och muscularis propria (p
= 0,24).
Andra resultat
anmärkningsvärd punkt i vår studie var det faktum att sex av nio EBV GC patienter födda mellan "1928-1930". Emellertid var den statistiska analysen inte gjort på grund av det låga antalet.
Genotypning
subtyp av EBV-genomet bestämdes i alla 9 fall. Alla våra fall var typ 1. BamHI-F-regionen amplifierades framgångsrikt i åtta av nio av EBV-GC, varav sex av dem visade prototyp F (Fig. 2). Amplifiering av BamHI-I /WI1 var framgångsrik i alla fallen och, förutom en; samtliga fall var "i" typ (fig. 3). Analys av polymorfism i exon 1 av LMP1-genen visade att 3 fall var Xhol - och 6 fall var Xhol + (Fig 4). Tabell 4 sammanfattas alla demografiska, patologiska och genotypiska data för EBV-GC i denna study.Table 4 Clinico-patologiska och genetiska egenskaper hos EBV-GC
vid Födelseår
Diagnostic år
Ålder
Kön
Lacation
Invasion
Histologi Lauren /WHO
EBNA-3 typ A /B
BamHI-F typ F /"f"
BamHI-I typ I /"i"
Xhol +/-

1
1949
1981
32
Male
Lower
Muscle
Diffuse/por1
A
F
"i"
+
2
1929
1982
53
Male
Middle
Muscle
Diffuse/por1
A
F
"i"
-
3
1928
1983
55
Male
Middle
Serosa
Intestinal/tub2
A
F
"i"
+
4
1928
1983
55
Male
Middle
Serosa
Diffuse/por2
A
F
I
+
5
1940
1983
43
Female
Lower
Muscle
Diffuse/por1
A
F
"i"
-
6
1930
1986
56
Male
Middle
Serosa
Diffuse/por2
A
ND1
"i"
+
7
1928
1988
60
Male
Upper
Serosa
Diffuse/por1
A
F
"i"
+
8
1928
2001
73
Male
Middle
Serosa
Difuse/por2
A
"f'
"i"
-
9
1953
2002
49
Male
Lower
Seroasa
Diffuse/por2
A
"f"
"i"
+
1Not bestämmas; tub2: måttligt differentierade adenocarcinom por1: fast dåligt differentierat adenokarcinom; por2: icke-fast dåligt differentierad adenokarcinom
Figur 2 Resultat av southern blöt hybridisering för BamHI-F-regionen. Fyra prover ses i denna figur, varje prov laddades på 2 körfält med och utan enzym, respektive från vänster. Den första provkroppen var inte amplifieras i detta experiment. De andra tre proven var inte klyvs av Bam-HI enzym som innebär att de är av vildtyp F. (+: positiv kontroll; + /enz: positiv kontroll med enzym; -: negativ kontroll).
Figur 3 Resultat av sydlig blot-hybridisering för BamHI-W1 /I1-regionen. Varje prov laddades på 2 körfält med och utan enzym, respektive från vänster. I prov ett det inte finns något band i andra körfält vilket tyder på att PCR-produkten klövs men vi kunde inte upptäcka splittrade banden eftersom det ursprungliga bandet innehöll litet antal DNA-kopior, så vi betraktade det som typ "i". Proverna 2, 5 och 6 klyvs vilket innebär att de är av typen "i". Polymorfism av prover 3 och 4 bestämdes inte i detta experiment. (+: Positiv kontroll; + /Enz: positiv kontroll med enzym; -: negativ kontroll).
Figur 4 Resultat av Xhol polymorfism i södra blot-hybridisering. Varje prov laddades på 2 körfält med och utan enzym respektive från vänster. De första och andra prover klyvs med enzym vilket innebär att de är Xhol +. Den tredje är XhoI-. (+: Positiv kontroll; + /Enz: positiv kontroll med enzym; -: negativ kontroll).
Diskussion
aktuella studien upptäckt EBV-GC i 3% av gastriska karcinom och föreslog att majoriteten av gastriska karcinom i Iran är EBV-negativa. Det fanns inga LELCs, som är väl kända för att vara starkt förknippad med EBV [59]. Hålmönster, som är en unik morfologi i EBV-positiv tidig gastric cancer [60], sågs inte i vår studie. Denna frekvens är bland de lägsta frekvenserna i världen. Som nämnts ovan, enligt WHO: s klassificering, norra Iran betraktas som en av de regioner med hög gastric carcinoma frekvens i världen [61]. De glesa studier i Iran visar också detta faktum med undantag av att de visar mer eller mindre homogenitet i hela landet [48, 62, 63]. Således låg EBV-GC frekvens i Iran stöder tidigare hypotesen att riskländer för GC höga har låga EBV-GC [64]. Detta bekräftar också tron ​​att det är lågt i Asien som förekomsten av 3% i Korea [25], 6% i Japan [24], 6% i Kina [26], 5% i Indien [18], 2% i Pakistan [29] och maximal 10% i Malaysia [27], Taiwan [21] och Kazakstan [28]. Detta är dock mycket lägre än Kazakstan frekvens (våra närliggande land) med många likheter i de anpassade och socioekonomiska förhållanden.
Förekomsten av EBV-GC i diffus typ magcancer var mer i vår studie, ett faktum som sågs i de flesta studier i Latinamerika [16, 32] och vissa länder i Asien som Korea [25], Kina [26] och Indien [18]. Men det finns många motstridiga studier som inte visat något samband i detta begrepp [15, 17, 19, 23, 33]. Koriyama et al [23] i sin klassiska studie föreslog att det finns många andra faktorer som har inverkan på förekomsten av diffusa typ magcancer såsom ålder, kön och plats och de motstridiga resultat i olika studier kan förklaras av skillnaden i fördelningen av dessa faktorer.
Fastän förhållandet män /kvinnor var cirka 4 i vår studie, var det inte betydande i statistisk analys. Frånvaron av kön preferens sågs i andra studier i Mexiko [32, 37] Chile [16] och ett område i Kina [38]. Dock bör vi anser att det låga antalet positiva fall i vår studie kan vara orsaken till obetydliga resultat i analysen. Samtidigt Koriyama et al [23] visar att köns preferens för EBV är begränsat till diffus typ GC och inte sett i tarm typ. Ändå om det låga antalet våra fall, vi kunde inte utföra analysen separat för varje typ. Review Öka i cancer i övre delen av magsäcken trots minskningen av den totala förekomsten av gastric cancer ses i många studier runt om i världen [ ,,,0],65, 66]. Det finns också många bevis att denna typ av magcancer har olika riskfaktorer [67-69]. EBV är en av dem [15-31]. Abdirad et al [70] visar också att det finns en sådan ökning av cancer i övre tredjedelen av magen i Iran. Men trots våra förväntningar, denna studie visade ingen preferens av EBV för övre eller mellersta tredjedelen av magen. Det är viktigt att notera att trots många bekräftande studier i detta sammanhang finns det också något sådant samband i våra närliggande länder, det vill säga Kazakstan [28] och Indien [18].
EBV i vår studie visade inte någon relation med ålder och djup på invasion. Vissa studier tyder på att det finns tendens hos EBV-GC att förekomma i lägre ålder [19, 26, 33, 38]. Men Koriyama et al [23] visade att endast intestinal typ av EBV-GC visar denna ålder preferens, och föreslog att åldersskillnad exponering för specifika kofaktorer för var och en av dessa typer är den troliga orsaken. Review, en av de intressanta resultaten av denna studie är att sex av våra 9 EBV-GC fall som valdes ut slumpmässigt, föddes under perioden mellan 1928 och 1930. Även om vi inte kunde göra någon analys med avseende på det låga antalet positiva fall, detta fynd verkar viktigt eftersom en epidemiologisk studie antydde att EBV-infektion i den tidiga barndomen kan vara relaterade till utvecklingen av EBV-GC i vuxen ålder [71]. Även om vi har inga bevis, kan vissa hypotes övervägas. Till exempel, särskilda villkor eller händelser, vilket leder till EBV-infektion i den tidiga barndomen eller till följd av exponering för vissa specifika co-riskfaktorer som kan ha funnits runt slutet av 1920-talet. Därför föreslår vi en fallkontrollstudie med fokus på magcancer hos patienter som är födda runt slutet av 1920-talet för att jämföra förekomsten av EBV i dessa patienter med de andra.
Genotypning av viruset visade att typ 1 är den enda typ i alla vår EBV-GC. Dominansen av typ 1 är i överensstämmelse med andra studier [18, 45, 58, 40]. Typ 2 är oftast ses i Afrika [40] och det finns en tro att det är svagare än typ 2 och är oftast ses i patienter med nedsatt immunförsvar [40, 72]. Prototypen F vid BamHI-F var den vanligaste typen i denna studie. Denna typ har en världsomspännande distribution utom i södra Kina som "f" variant är utbredd och orsakar nasofarynxcancer [43, 45]. Vår slutsats är samma som liknande studier i gastric cancer i Indien [18], Japan [73], och Chile [58]. BamHI-W1 /I1 regionen polymorfism analys visar att 90% av våra fall var typ "i". Tidigare studier har visat att typ I är den vanligast förekommande i Asien [45, 54] och skriv "i" är det mest i västvärlden [46]. Detta fördelningsmönster hade också sett i liknande studier på EBV-GC [18, 45, 73]. Dock verkar vår upptäckt att likna västländer som Corvalan fynd i Colombia och Chile [58].

• Laparoskopisk versus öppen resektion för gastric gastrointestinala stromacellstumörer: en uppdaterad systematisk genomgång och metaanalys
• En möjlig inblandning av Nrf2-medierad heme oxygenas-1 uppreglering i skyddande effekten av protonpumpshämmare pantoprazol mot indometacin-inducerad gastrisk skada hos råttor