Epstein-Barr virus assosiert magekreft: en rapport fra Iran i løpet av de siste fire tiårene

Epstein-Barr virus assosiert magekreft: en rapport fra Iran i løpet av de siste fire tiårene
Abstract
Bakgrunn
Epstein-Barr viruset har vist seg å være assosiert med mange av den menneskelige malignitet inkludert magekreft , en av de viktigste humane ondartede sykdommer i verden. Det har ikke vært noen undersøkelse om tilstedeværelse av EBV i gastrisk adenokarsinom i Iran.
Metoder
Vi undersøkte tilstedeværelse av EBV i 273 formalinfiksert parafin-embedded tilfeller av magekreft fra Cancer Institute i Teheran University, fra 1969 til 2004. In situ hybridisering av EBV-kodet små RNA-en (EBER-1) ble gjennomført. Stammen av positive tilfeller ble undersøkt ved hjelp av polymerase kjedereaksjon og /eller rflp analyse
Resultater
Vi har funnet 9. (3%, 95% CI = 1-5%) EBV-positive tilfeller. Kjønnsforskjellen var ikke statisticaly betydelig. Andelen av EBV-GC tilfeller i diffuse typen var høyere enn intestinal type (OR = 0,08; 95% CI = 0,002 til 0,64). EBV-GC tilfeller ikke har sammenheng med alder, plassering og invasjon. Seks av ni EBV-GC saker ble født i perioden mellom 1928 og 1930. Alle 9 tilfellene var type A. Prototype F ble sett i seks av åtte saker. Skriv "jeg" ble funnet i 8 tilfeller og skriv jeg i en sak. XhoI + og XhoI- polymorfisme utgjorde seks og tre av tilfellene, henholdsvis.
Konklusjon
Vår studie er den første til å beskrive hyppigheten av EBV-GC i Iran og Midtøsten, fremhever en svært lav prevalens med spesifikk clinicopathologic egenskaper. Overvekt av EBV-GC fødsel år i en fast periode, antyder at EBV-infeksjon eller andre hendelser i tidlig barndom kan være relatert til utviklingen av EBV-GC senere i livet. Overvekt av typen "jeg" og XhoI + tilfeller er motstridende til andre studier i Asia, og er i likhet med det som er rapportert fra latinamerikanske land.
Bakgrunn
Epstein-Barr virus (EBV) er en allestedsnærværende dobbelttrådet DNA virus fra humant herpesvirus-familien, som har B-lymphotropism [1]. Mer enn 90% av alle voksne i verden har serologisk bevis på infeksjon med dette viruset [1]. Det er ervervet i tidlig barndom og i en alder av smitte er mye lavere i utviklingsland med lav sosioøkonomisk tilstand [1]. Følgende primærinfeksjon, etablerer viruset en livslang latent infeksjon i B-celle lymfocytter hvor det er til stede i en i 10 5-10 6 sirkulerende celler [2]. Det uttrykker noen antigener i dette latent fase, som viste seg å ha noen onkogene egenskaper [3-8]. Det er mange dokumenter om årsakssammenheng mellom EBV og lymfoide maligniteter som Burkitt lymfom i Ekvatorial-Afrika [9], nasal T /NK-celle lymfom [10], Hodgkins lymfom [11] og B-cellelymfom hos immunsupprimerte pasienter [12]. EBV har også kapasitet til å infisere epitelceller, og har også tumorogene effekt i disse cellene hvorfra nasopharyngeal carcinoma er en av de viktige prototyper [13].
Første rapporten om EBV engasjement i magekreft ble publisert i 1990 i lymphoepithelial karsinom i magen [14]. Følgelig, i 1992 Shibata og Weiss rapportert EBV deteksjon i 16% av ordinær magekreft i USA [15]. Siden da har utbredelsen av EBV-assosiert gastrisk karsinom (EBV-GC) undersøkt og rapportert i ulike land som varierte mellom 3-18% [15-34] med lavest prevalens i Papua Ny-Guinea, Pakistan og Korea som er mellom 1 og 3%, og den høyeste i Tyskland og US som er 16 til 18%
det finnes mange bevis på årsakssammenheng mellom EBV og gastrisk karsinom slik som:. monoklonalitet av virusene i neoplastiske celler som ble demonstrert av unik terminal gjentakelse av EBV DNA [35]; jevn tilstedeværelse av EBV i alle tumorceller påvises ved in situ hybridisering Eber-1, men ikke i området epitel-celler [15-34] og heving av IgG- og IgA-antistoffer mot virale kapsid-antigen flere måneder før klinisk presentasjon av sykdommen [36 .]
EBV-GC viser noen konstant karakteristiske clinicopathologic funksjoner som predisposisjon for to øverste tredjedel av magen [15-17, 19-31]; en moderat differensiert rørformet til dårlig differensiert fast form for histologi [16-22, 32, 33]; som ikke har noen virkning i stromal invasjon og overlevelse [15, 16]; og mannlig dominans i de fleste av studiene. Imidlertid er den siste som ikke har sett i noen spesielle studier som utføres i Mexico [32, 37], Chile [16] og Kina [38]. Alder avhengighet er ikke tydelig i de fleste studier. Men studier i Colombia [19], og Kasakhstan [28] viser en høyere prevalens blant yngre pasienter.
EBV har to hovedtyper, type 1 og type 2 som varierer i deres evne til å forvandle B-lymfocytter inn i en tilstand av kontinuerlig spredning [39]. Type 1 er dominerende i vestlige og asiatiske land, mens B-typen er dominerende i Afrika og er sett oftere hos immunsupprimerte pasienter [40, 41]. Dessuten er det tre andre varianter, som utmerker seg ved rflp (RFLP) ved hjelp av BamHI og Xhol restriksjonsendonuklease enzymer. På BamHI-F region Prototype F har verdensomspennende distribusjon og 'f' variant som har en ekstra side for enzymet er dominerende i det sørlige Kina, og er assosiert med nasopharyngeal carcinoma [42, 43]. Polymorfisme i BamHI-W1 /I1 grenseområdet fører til to varianter; type I og 'i'. Type I som er dominerende i Japan og Kina har ingen område for BamHI enzym [44, 45] og skriv 'i' med en ekstra BamHI nettstedet er sett oftere i vestlige land [46]. Til slutt, polymorfisme i XhoI restriksjonssete i axon en av lmp1 genet definerer XhoI + som er mer utbredt i vestlige land [47] og XhoI -., Som er ofte sett i Asia [44]
Iran er et av de landene som har en høy forekomst av magekreft med en årlig insidens på 26,1 per 100 000 for menn og 11,1 for kvinner. Det er den nest vanligste kreftsykdommen og den første ledende årsak til kreft dødsfall hos menn i Iran [48]. Men det er ingen studier om forekomst eller genotype av EBV i magekreft i dette området. Derfor bestemte vi oss for å vurdere det i den eldste henvisningen senter for magekreft i Iran.
Metoder
Prøver
Vi undersøkte 273 kirurgisk resected magekrefttilfeller i denne studien. Sakene ble tilfeldig utvalgt fra 1325 mage krefttilfeller registrert i kreft institutter i Teheran universitet mellom 1969-2004 som har intakte parafinblokker og patologiske rapporter. Formalinfiksert parafin-embedded vev fra disse sakene ble valgt ut og sendt til Kagoshima Universitetet Graduate School of Medical og Dental Sciences, Japan, for ytterligere molekylære evalueringer. Patologiske data ble oppnådd med revurdering av H & E beiset lysbilder av to patologer (AA & SGS). Alle tilgjengelige demografiske data ble innhentet fra de tilgjengelige patologiske og medisinske rapporter om pasientene.
Pathology
Alle prøvene ble re-klassifisert i forhold til dominerende histologisk mønster som intestinal og diffus type i henhold til Lauren klassifisering [49] og sub-klassifisert i henhold til retningslinjene for det japanske forskningssamfunnet for magekreft [50] til godt differensiert rørformet adenokarsinom (tub1), moderat differensiert adenokarsinom (tub2), solid dårlig differensiert adenokarsinom (por1), non-solid dårlig differensiert adenokarsinom (por2 ), signetring cell carcinoma (sig), mucinous karsinom (MUC) og dårlig differensiert lymphoepithelial lignende karsinom (LE).
svulster plasseringen etter dominerende plassering av lesjonene ble klassifisert som over tredje eller Cardia, midtre tredjedel eller kropp og lavere tredje eller antrum i henhold til retningslinjene for det japanske forskningssamfunnet for magekreft [50]. Det var ingen multifokal tilfelle i vår studie.
Dybden av invasjonen ble klassifisert som slimhinnene, under slimhinnene, muskularis propria og serøse engasjement.
In situ hybridisering
EBV ble identifisert av uttrykket av EBV-kodet små RNA-en (EBER-1). In situ hybridisering med en komplementær digoxigeninmerket 30-base-oligomer ble brukt til å påvise den EBER-en ifølge fremgangsmåten som tidligere er beskrevet av Chang et al [51]. 4-5-mikrometer seksjoner montert på silane-belagte glassplater ble utarbeidet for hvert enkelt tilfelle. Vevet på skinnene ble deparaffinized, rehydrert, predigested med pronase, prehybridisert, hybridisert og deretter over natten ved 37 ° C med 0,5 ng digoksygenin-merket probe. Hybridiseringen signal ble detektert ved en antidigoxigenin antistoff-alkalisk fosfatasekonjugat. Seksjoner fra en pasient med kjent EBER-positive gastrisk karsinom ble brukt til en positiv kontroll, og avføle sonde Eber-1 ble benyttet i en negativ kontroll for hver prosedyre
. Fremstilling av DNA
formalinfiksert og parafin -embedded prøve ble kuttet i 10 um tykke skiver, og DNA-prøve ble fremstilt ved å følge fremgangsmåten beskrevet av Greer et al [52]. I korthet skivene ble behandlet med xylen og etanol og sentrifugert ved 22000 g i 20 min, og den resulterende pellet ble resuspendert i 100 pl fordøyelse buffer (1 M Tris, pH 8,0, 50 mM EDTA, 0,5% Tween 20) med 200 ug /ml proteinase K, og inkubert ved 55 ° C over natten. Etter 10 minutters koking ved 100 ° C, ekstrahering og utfelling av DNA ble utført med fenol-kloroform og etanol, respektivt.
Primere og prober
Fire forskjellige regioner, EBNA-3C, BamHI-F, BamHI-W1 /I1, og XhoI området i LMP1, ble brukt til å bestemme viral genotyper. Tabell 1 viser en liste over primersett og prober som brukes i dagens study.Table en Liste over primere og prober som brukes i denne studien
Genotype
Sequence
Type av sonde eller størrelse etter RE1 fordøyelse
Reference
EBNA-3C
Grunning
Sense
5'-AGAAGGGGAGCGTGTGTTGT-3 '
Antisense
5'-GGCTCGTTTTTGACGTCGGC-3
Sample et al. (53)
sonder
Type 1
5'-GAAGATTCATCGTCAGTGTC-3 '
153 BP2
Type 2
5'-CCGTGATTTCTACCGGGAGT-3'
246 bp
BamHI-F
Grunning
Sense
5'-TCCCACCTGTTACCACATTC-3 '
Prototype F: 198 bp
Lung et al. (54)
Antisense
5'-GGCAATGGGACGTCTTGTAA-3 '
Variant "f": 127 + 71 bp
Probe
5'-AAGGCTACCGTGCTAATTACCTCC-3'
Hudson et al. (55)
BamHI-W1 /I1
Grunning
Sense
5'-ACCTGCTACTCTTCGGAAAC-3 '
Type I: 205 bp
Lung et al. (54)
Antisense
5'-TCTGTCACAACCTCACTGTC-3 '
Type "jeg": 130 + 75 bp
Xhol sete i LMP1
Grunning
Sense
5' AACAGTAGCGCCAAGAGGAG-3 '
XhoI +: 113 bp
Sandvej et al. (56)
Antisense
5'-ATGGAACACGACCTTGAGAGG-3 '
XhoI-: 67 + 46 bp
1Restriction enzym; 2Base parene
type 1 og 2 ble gjenkjent av amplifikasjon av U2 region av EBNA-3C-genet ved primere som beskrevet av Sample et al [53] som ga 153 og 246 bp-fragmenter, respektivt. De er anerkjent av Southern blot hybridisering (SBH) med typespesifikke interne prober beskrevet av Sample et al [53]. BamHI-F region ble amplifisert med primerne som er beskrevet av Lung et al [54]. Den påfølgende 198-bp-fragment ble spaltet med BamHI restriksjonsenzym som ropte en 198-bp-fragment i tilfelle av villtype F og 127-bp og 71 bp-fragmenter i tilfelle av "f" variant. Villtype F og F-varianter ble bekreftet ved SBH med den indre sonde som beskrevet tidligere [55]. For å skille I /I-varianter, ble BamHI-W1 /I1 region amplifisert ved bruk av primeren som er beskrevet av Lung et al [54]. Kutting med BamHI restriksjonsenzym ropte 205-bp-fragment i type I og 130 bp og 75 bp-fragmenter i tilfelle av 'i'. De ble også bekreftet ved SBH med en klonet BamHI-I-DNA-fragmentet probe. Analyse av polymorfisme i ekson 1 av lmp1-genet ble utført ved anvendelse av en primer som er beskrevet av Sandvej et al [56] som resulterte 113-bp-fragmenter. Etter fordøyelse med XhoI restriksjonsenzym, Xhol + saker som inneholder XhoI kuttesete (XhoI holdt) viser 67-bp og 46-bp fragmenter men XhoI - tilfeller viser opprinnelige ufordøyd 113-bp PCR produkt. Det 113 bp fragmentet fra PCR-produktet fra B95-8-cellelinjen ble anvendt som probe for å bekrefte Xhol spaltningssetet til lmp1 ved SBH [57].
For type 1, villtype F, type I, og Xhol - virus den B95-8-cellelinjen ble brukt som positiv kontroll. Cellelinjene AG786 og Akata og klonet BamHI-'f 'og BamHI- "i" DNA-fragmenter tjente som positive kontroller for type 2, XhoI -, "f" variant, og skriv "I" virus, henholdsvis. Human herpes virus 6 infisert cellelinje MOLT-4 anvendt som negativ kontroll [58].
Polymerase kjedereaksjon
amplifisering av mål-DNA ble utført ved anvendelse av 2 ul DNA og blanding av 10 mM Tris-HCl, pH 8,0 , 50 mm KCl, 1,5 mM MgCl 2, 200 uM dNTP, 1 uM av hver primer og 1,0 U Taq polymerase (Hot Star, Qiagen, Tyskland) i et sluttvolum på 25 ul blanding. Protokollen anvendt for amplifikasjon av EBNA-3C-genet var en syklus ved 95 ° C i 15 min, etterfulgt av 40 sykluser med denaturering ved 95 ° C i 1 minutt, hybridisering ved 46 ° C i 1 minutt og forlengelse ved 72 ° C i 1 min og til slutt endte med 5 min ved 72 ° C. Den protokoll som brukes for BamHI-F, BamHI-W1 /I1 og Xhol sete amplifisering var en syklus ved 95 ° C i 5 minutter etterfulgt av 40 sykluser med denaturering ved 95 ° C i 1 minutt, hybridisering ved 43 ° C i 1 min og forlengelse ved 72 ° C i 1 minutt og til slutt endte med 5 min ved 72 ° C. Elektroforese på en 2% agarosegel og farging med 0,5 ug /ml etidiumbromid ble utført for å identifisere de PCR-produktene.
Rflp analyse
amplifiserte DNA-produkter (15 ul) ble spaltet med 10 U BamHI eller Xhol restriksjonsenzymer, ifølge produsentens instruksjoner og visualisert ved elektroforese på en 2% agarosegel farget med 0,5 pg /ml etidiumbromid og overført på en nylonmembran for SBH.
Southern blot hybridisering
Spesifisitet av PCR reaksjonen ble bekreftet ved SBH. Den elektroforetiske DNA ble overført på et Hybond N + nylonmembran (Amersham, Pharmacia Biotech, UK) ved kapillær blotting ved bruk av 0,4 N NaOH-løsning. Membranene ble prehybridisert med hybridiseringsbuffer i 1 time ved 42 ° C. Etter tilsetning av proben, ble hybridiseringen utført over natten ved 42 ° C. Sonder av type A og B, og BamH-I-F ble merket med Dig oligonukleotid 3'-enden merkingskit og detekteres av Dig luminescerende påvisning kit (Boehringer Mannheim, Tyskland). For detektering av BamHI-fragmentet og Xhol polymorfisme i lmp1, ble hybridisering utført ved anvendelse av ECL direkte merking og deteksjon kit (Amersham, Pharmacia Biotech, UK) i henhold til produsentens instruksjoner.
Statistisk analyse Statistisk analyse var
gjøres ved hjelp av LogExact 7.0 (en statistikkpakke for regresjon prosedyre med nøyaktige metoden); Cytel Studio 7.0.0 pakke (Cytel Software Corporation, 2005). Exact test av binær logistisk analyse ble utført for å sammenligne andelen EBV positive tilfeller blant adenokarsinom i ventrikkel. Sex, aldersgrupper (< 50, 50-69 og ≥ 70 år), anatomisk lokalisering av tumor (antrum, kropp og Cardia), invasjon av tumor (serosa, andre) og Lauren histologiske klassifikasjon ble inkludert som uavhengige variabler. Multinominal variabler ble delt til N-1
dummy binominal variabler (n
var antall kategorier). Odds ratio med 95% konfidensintervall ble beregnet for hver kategori. Type 1-feil (α) ble satt til 0,05. Alle p-verdiene var tosidig.
Resultater
Vi undersøkte 273 mage kreft inkludert 196 (72%) menn og 77 (28%) kvinner. Gjennomsnittsalderen var 57,3 ± 11,3 (SD) år (range: 24-90; median: 58). De fleste av dem (108 tilfeller; 66%) var mellom 50 til 69 år, 54 (20%) tilfellene var under 50, og den gjenværende var over 70 år. Ett hundre og tretti tilfeller (48%) ble plassert i antrum, og 64 (23%) og 71 (26%) tilfeller ble plassert i legemet, og Cardia, respektivt. I 5 tilfeller plasseringen ikke ble definert og i 3 tilfeller hele mageveggen var involvert (linitis plastica) som ikke ble inkludert i statistisk analyse. Som vist i tabell 2, de fleste av tilfellene var intestinal type (56%). Tabell 2 Fordeling av Eber-1 positive mage karsinom av histologisk type og kjønn
Histology1 <.no> Mann
Kvinne
Total

EBER + /N2 (%)
EBER + /N (%)
EBER + /N (%)
Tarm
1/113 (1)
0/39 (0)
1/152 (1)
pap
0/11 (0)
0/3 (0)
0/14 (0)
tub1
0/36 (0)
0/11 (0)
0/47 (0)
tub2
1/50 (2)
0/16 (0)
1/66 (1)
muc
0/16 ( 0)
0/9 (0)
0/25 (0)
Diffuse
7/83 (8)
1/38 (3)
8/121 (7 )
por1
3/34 (8)
1/16 (6)
4/50 (8)
por2
4/40 (10)
0 /18 (0)
4/58 (8)
sig
0/9 (0)
0/4 (0)
0/13 (0)
en pap: papillær adenokarsinom; tub1: godt differensiert rørformet adenokarsinom; tub2: moderat differensiert adenokarsinom; por1: fast dårlig differensiert adenokarsinom; por2: non-solid dårlig differensiert adenokarsinom; sig: signetring cell carcinoma; muc: mucinous karsinom; 2 totalt antall tilfeller i hver gruppe (Basert på japansk forskning samfunnet for magekreft)
Utbredelse av EBV positive tilfeller
EBER-1 ble påvist i ni av 273 tilfeller (3%) som ble ansett som EBV- GC. Signalet var begrenset bare til kjernen av tumorceller, men ikke funnet i ikke-tumorceller (Fig. 1). Figur 1 Et tilfelle av EBV positiv gasrtric karsinom. Moderat differensiert rørformet adenokarsinom med sporadiske rørformede dannelse (A); kjernekraft EBER positivt signal i alle tumorceller oppdages med in situ hybridisering (B).
Faktorer assosiert med EBV positive tilfeller
Tabell 3 viser frekvensen av EBV-GC etter alder, kjønn, sted, histologi og invasjon i tillegg som følge av logis analysis.Table 3 resultat av logistikk analyse
variabler
EBER + /N1 product: (%)
OR2
95% CI2
Kjønn
Kvinne
1/76 product: (1)
1 referansen
male 8/188 product: (4)
0,3
0,01 til 2,96
P
= 0,595
Age
≥ 70
1/36
(3)
1 referansen
50-69
5/180 product: (3)
0,8
0,08 til 44,62
< 50
3 /54 product: (6)
1,3
0,08 til 81,25
P
for trend = 1,0
beliggenhet
Øvre
1/71 product: (1)
1
henvisning
Middle
5/64 plakater (8)
6,0
0,1 til 77,86
Nedre
3/130 plakater (2)
1,4
0,63 til 296,7
P
for heterogenitet = 1.64
Histologi
Diffuse
8/121 plakater (7)
1 referansen
tarm~~POS=TRUNC
1/152 product: (1)
0,08
0,002 til 0,64
P
= 0,009
Invasion
Muscle
3/33 product: ( 9)
1 referansen
serose
6/222 product: (3)
3,6
0,47 til 24,03
P
= 0,243
1Total nummer i hver gruppe; 2eller og 95% konfidensintervall ble hentet fra eksakte test av binær logistisk analyse.
Kjønn og alder
Åtte av 188 (4%) mannlige tilfeller og en ut av 76 (1%) kvinnelige tilfellene var EBV positive. Selv om det var en mannlig overvekt i denne studien, var ikke statistisk signifikant (p
= 0,5). Det var heller ingen sammenheng mellom alder og EBV-GC (p
= 1).
Tumor plassering
Ifølge anatomisk plassering, 5 av 64 (8%) kropps svulster, en av 71 (1 %) hjerte svulster og 3 ut av 130 (2%) antrum svulster ble EBV tilknyttet. Selv om de fleste av EBV-GC ble plassert i øvre to tredjedeler, det var ikke signifikant statistisk (p
= 0,1).
Histologisk typen
Basert på Lauren klassifisering, 8 av 121 (7%) diffus typen tilfeller var EBV-assosiert, men bare en av 152 tarmtypen var EBV-positive, noe som var statistisk signifikant (p
= 0,009). Ifølge japanske klassifisering, por2 og por1 ble de dominerende histologiske typer i EBV-GC (tabell 2), men når det gjelder lavt antall tilfeller i hver gruppe statistisk analyse kunne ikke utføres.
Invasion
I denne studien er det var bare to saker som var begrenset til submucosa og ingen av dem viser EBER-1 signal i ISH. Således, tatt i betraktning av den lave tall, disse tilfellene ble ikke tatt med i den statistiske analysen. Det var ingen forskjell mellom EBV positive og negative saker om invasjon til serosa og muskularis propria (p
= 0,24).
Andre funn
bemerkelsesverdig punkt i vår studie var det faktum at 6 av 9 EBV- GCS pasienter ble født mellom "1928-1930". Men den statistiske analysen ble ikke gjort på grunn av lavt antall.
Genotyping
subtype av EBV-genom ble bestemt i alle 9 tilfeller. Alle våre tilfeller var type 1. BamHI-F region ble amplifisert med suksess i 8 av 9 av EBV-gcs, som seks av dem viste prototyp F (fig. 2). Amplifikasjon av BamHI-I /WI1 var vellykket i alle tilfeller og, bortsett fra en; alle tilfellene var "jeg" type (Fig. 3). Analyse av polymorfisme i ekson 1 av lmp1 gen viste at 3 tilfeller var XhoI - og 6 tilfeller var XhoI + (fig 4). Tabell 4 oppsummert alle de demografiske, patologiske og genotypiske data for EBV-GC i denne study.Table 4 klinisk-patologiske og genetiske egenskapene til EBV-GC

Født år
Diagnostic år
Age
Kjønn
Lacation
Invasion
Histologi Lauren /WHO
EBNA-3 type A /B
BamHI-F type F /"f"
BamHI-I type I /"i"
XhoI +/-

1
1949
1981
32
Male
Lower
Muscle
Diffuse/por1
A
F
"i"
+
2
1929
1982
53
Male
Middle
Muscle
Diffuse/por1
A
F
"i"
-
3
1928
1983
55
Male
Middle
Serosa
Intestinal/tub2
A
F
"i"
+
4
1928
1983
55
Male
Middle
Serosa
Diffuse/por2
A
F
I
+
5
1940
1983
43
Female
Lower
Muscle
Diffuse/por1
A
F
"i"
-
6
1930
1986
56
Male
Middle
Serosa
Diffuse/por2
A
ND1
"i"
+
7
1928
1988
60
Male
Upper
Serosa
Diffuse/por1
A
F
"i"
+
8
1928
2001
73
Male
Middle
Serosa
Difuse/por2
A
"f'
"i"
-
9
1953
2002
49
Male
Lower
Seroasa
Diffuse/por2
A
"f"
"i"
+
1Ikke fastsettes; tub2: moderat differensiert adenokarsinom por1: solid dårlig differensiert adenokarsinom; por2: non-solid dårlig differensiert adenokarsinom
Figur 2 Resultat av Southern blot hybridisering for BamHI-F regionen. Fire eksemplarer er sett i dette tallet, ble hver prøve lastet i 2 baner med og uten enzym, henholdsvis fra venstre. Den første prøven ble ikke forsterket i dette eksperimentet. De tre andre prøvene ble ikke spaltes av Bam-HI enzym som betyr at de er villtype F. (+: positiv kontroll; + /Enz: positiv kontroll med enzym, -: negativ kontroll).
Figur 3 Resultat av Sør- blot hybridisering for BamHI-W1 /I1 region. Hver prøve ble lagt i 2 baner med og uten enzym, henholdsvis fra venstre. I prøven en er det ingen band i andre kjørefelt som tyder på at PCR-produktet ble fordøyd, men vi kunne ikke oppdage de fragmenterte band siden den opprinnelige bandet inneholdt lite antall DNA-kopier, så vi anså det som type "i". Prøvene 2, 5 og 6 er spaltet som betyr at de er type "i". Polymorfisme av prøvene 3 og 4 ble ikke bestemt i dette eksperimentet. (+: Positiv kontroll; + /Enz: positiv kontroll med enzym, -: negativ kontroll).
Figur 4 Resultat av XhoI polymorfisme i Sør-blot hybridisering. Hver prøve ble lagt i 2 baner med og uten enzym henholdsvis fra venstre. Den første og den andre prøver spaltes med enzym som betyr at de er XhoI +. Den tredje er XhoI-. (+: Positiv kontroll, + /enz: positiv kontroll med enzym, -: negativ kontroll).
Diskusjon
Den foreliggende studien oppdaget EBV-GCer i 3% av gastriske karsinomer og foreslo at flertallet av gastriske karsinomer i Iran er EBV-negative. Det var ingen LELCs, som er godt kjent for å være sterkt assosiert med EBV [59]. Hullmønster, som er en unik morfologi i EBV-positive tidlig magekreft [60], ble ikke sett i vårt studium. Denne frekvensen er blant de laveste frekvensene i verden. Som nevnt ovenfor, i henhold til WHO klassifisering, og det nordlige Iran betraktet som en av de regioner med høy gastrisk karsinom frekvens i verden [61]. De spredte studier i Iran viser også dette faktum, bortsett fra at de viser mer eller mindre homogenitet i hele landet [48, 62, 63]. Dermed blir lav EBV-GC frekvens i Iran støtter den forrige hypotesen om at høyrisikoland for GC har lave priser av EBV-GC [64]. Dette bekrefter også den tro at det er lav i Asia som utbredelsen av 3% i Korea [25], 6% i Japan [24], 6% i Kina [26], 5% i India [18], 2% i Pakistan [29] og maksimal 10% i Malaysia [27], Taiwan [21] og Kasakhstan [28]. Men dette er mye lavere enn i Kasakhstan frekvens, (vår nærliggende land) med mange likheter i de tilpassede og sosioøkonomiske forhold.
Forekomsten av EBV-GC i diffuse typen magekreft var mer i vår studie, noe som ble sett i de fleste studier av Latin-Amerika [16, 32] og enkelte land i Asia som Korea [25], Kina [26] og India [18]. Det er imidlertid mange motstridende studier som ikke viser noen sammenheng i dette konseptet [15, 17, 19, 23, 33]. Koriyama et al [23] i sin klassiske studie foreslått at det er mange andre faktorer som har innvirkning på forekomsten av diffuse typen magekreft som alder, kjønn og plassering, og de motstridende resultater i ulike studier kan forklares med forskjellen i fordelingen av disse faktorene.
Selv om forholdet mellom mann /kvinne var ca 4 i vår studie, var det ikke signifikant i statistisk analyse. Fraværet av kjønn preferanse ble sett i andre studier i Mexico [32, 37] Chile [16] og ett område i Kina [38]. Men bør vi vurdere at den lave antall positive tilfeller i vår studie kan være grunnen av ubetydelig resultat i analysen. I mellomtiden, Koriyama et al [23] viser at kjønn preferanse for EBV er begrenset til diffuse typen GC og er ikke sett i intestinal type. Likevel, når det gjelder lavt antall av våre saker, vi kunne ikke utføre analysen separat for hver type.
Økning i kreft i øvre del av magen til tross for nedgang i total forekomst av magekreft er sett i mange studier rundt om i verden [ ,,,0],65, 66]. Det er også mange bevis på at denne typen magekreft har ulike risikofaktorer [67-69]. EBV er en av dem [15-31]. Abdirad et al [70] viser også at det er en slik økning i kreft i øvre tredjedel av magen i Iran. Likevel, til tross for vår forventning, denne studien viste ingen preferanse for EBV for øvre eller midtre tredjedel av magen. Det er viktig å legge merke til at til tross for mange bekreftende studier i denne sammenheng, er det heller ingen slik sammenheng i våre nærliggende land, dvs. Kasakhstan [28] og India [18].
EBV i vår studie viste ingen sammenheng med alder og dybde av invasjon. Enkelte undersøkelser tyder på at det er tendens til EBV-GC til å oppstå i lavere alder [19, 26, 33, 38]. Imidlertid, Koriyama et al [23] viste at bare intestinal type EBV-GC viser denne alder preferanse, og foreslått at forskjellen i tid for eksponering til spesifikke kofaktorer for hver av disse typer er den sannsynlige årsak.
En av de interessante funnene i denne studien er at seks av våre 9 EBV-GC saker som ble valgt tilfeldig, ble født i perioden mellom 1928 og 1930. Selv om vi ikke kunne utføre noen analyse i forhold til det lave antall positive tilfeller dette funn synes viktig siden en epidemiologisk studie antydet at EBV-infeksjon i tidlig barndom kan være relatert til utviklingen av EBV-GC i voksen alder [71]. Selv om vi ikke har noen bevis, kunne noen hypotese vurderes. For eksempel, spesifikke forhold eller hendelser som fører til EBV infeksjon i tidlig barndom eller som følge av eksponering for enkelte co-risikofaktorer som kan ha eksistert rundt slutten av 1920-tallet. Derfor foreslår vi en kasus-kontrollstudie med fokus på mage karsinom hos pasienter født rundt slutten av 1920 for å sammenligne forekomsten av EBV i disse pasientene med de andre.
Genotyping av viruset viste at type 1 er den eksklusive typen i hele vår EBV-GC. Overvekt av type 1 er i overensstemmelse med andre studier [18, 45, 58, 40]. Type 2 er mest sett i Afrika [40], og det er en oppfatning at den er svakere enn type 2 og er mest sett i pasienter med immunsvikt [40, 72]. Prototypen F ved BamHI-F var den vanligste typen i denne studien. Denne typen har en verdensomspennende distribusjon unntatt i det sørlige Kina som "f" variant er utbredt og forårsaker nasopharyngeal carcinoma [43, 45]. Våre funn er de samme som tilsvarende studier i mage kreft i India [18], Japan [73], og Chile [58]. BamHI-W1 /I1 region polymorfisme analyse viser at 90% av våre tilfeller var type "i". Tidligere studier viser at type I er den mest utbredt i Asia [45, 54] og skriv "jeg" er det mest i vestlige land [46]. Dette mønsteret av fordelingen var også sett i tilsvarende undersøkelser på EBV-GC [18, 45, 73]. Men synes våre funn til å være lik vestlige land som Corvalan funn i Colombia og Chile [58]. XhoI + var den mest utbredte typen på XhoI restriksjonssete i ekson en av lmp1 genet i denne studien.

• Laparoskopisk versus åpen reseksjon for mage gastrointestinal stromal tumor: en oppdatert systematisk oversikt og meta-analysis
• En mulig involvering av Nrf2-mediert heme oksygenase-1 oppregulering i beskyttende effekt av protonpumpeinhibitoren pantoprazol mot indometacin-indusert gastrisk skade i rats