Epstein-Barr virus del carcinoma gástrico asociado: un informe de Irán en las últimas cuatro décadas

Epstein-Barr virus del carcinoma gástrico asociado: un informe de Irán en las últimas cuatro décadas

Resumen Antecedentes
virus de Epstein-Barr se ha demostrado que se asocia con muchos de los tumores malignos humanos incluyendo carcinoma gástrico , uno de los tumores malignos humanos más importantes en el mundo. No ha habido ningún estudio sobre la presencia de VEB en el adenocarcinoma gástrico en Irán.
Métodos
Se examinó la presencia de EBV en 273 casos con formalina fijos en parafina de carcinoma gástrico del Instituto del Cáncer de la Universidad de Teherán, de 1969 a 2004. En la hibridación in situ de EBV-codificada pequeños ARN-1 (EBER-1) se llevó a cabo. La cepa de casos positivos se examinó mediante la reacción en cadena de la polimerasa y /o análisis de polimorfismo de longitud de fragmentos de restricción
Resultados
Encontramos 9. (3%; IC del 95% = 1,5%) casos positivos EBV. La diferencia de género no era statisticaly significativa. La proporción de casos VEB-GC en el tipo difuso fue mayor que la de tipo intestinal (OR = 0,08; IC del 95% = 0,002 a 0,64). casos VEB-GC tenían ninguna relación con la edad, la ubicación y la invasión. Seis de los 9 casos VEB-GC nacieron durante el periodo comprendido entre 1928 y 1930. Los 9 casos eran tipo A. Prototipo F se observó en 6 de los 8 casos. Tipo "i" se encontró en 8 casos y de tipo I en 1 caso. XhoI + y el polimorfismo XhoI- representaron 6 y 3 de los casos, respectivamente.
Conclusión
Nuestro estudio es el primero en describir la frecuencia de EBV-GC en Irán y Oriente Medio, destacando una prevalencia muy baja con el clínico patológica específica caracteristicas. El predominio de año del nacimiento EBV-GC en un período fijo, sugiere que la infección por VEB u otros eventos en la primera infancia pueden estar relacionados con el desarrollo de EBV-GC más tarde en la vida. El predominio del tipo "i" y XhoI + los casos son contradictorias con otros estudios realizados en Asia y es similar a lo que se informa de los países de América Latina.
Antecedentes
virus de Epstein-Barr (EBV) es un ADN de doble cadena ubicua virus de la familia herpes virus humano, que tiene B-linfotropismo [1]. Más del 90% de los adultos en el mundo tienen evidencia serológica de infección con este virus [1]. Se adquiere durante la primera infancia y la edad de la infección es mucho menor en los países no desarrollados con baja condición socioeconómica [1]. Después de la infección primaria, el virus establece una infección latente de toda la vida en los linfocitos de células B en el que está presente en 1 en 10 5-10 6 células circulantes [2]. Expresa algunos antígenos en esta fase latente, que se ha comprobado que tienen algunas propiedades oncogénicas [3-8]. Hay muchos documentos sobre la relación causal entre el VEB y neoplasias linfoides como el linfoma de Burkitt en África ecuatorial [9], el linfoma de células nasales T /NK [10], el linfoma de Hodgkin [11] y el linfoma de células B en pacientes inmunodeprimidos [12]. EBV tiene también la capacidad de infectar a las células epiteliales, y también tiene efecto tumorigénico en estas células de la que el carcinoma nasofaríngeo es uno de los prototipos importantes [13].
El primer informe de la participación de EBV en el carcinoma gástrico fue publicado en 1990 en carcinoma linfoepitelial del estómago [14]. En consecuencia, en 1992 Shibata y Weiss informaron de detección de EBV en 16% de carcinoma gástrico ordinaria en EE.UU. [15]. Desde entonces, la prevalencia de carcinoma gástrico asociado al EBV (EBV-GC) se ha investigado y reportado en varios países que oscilaban entre el 3 y el 18% [15-34] con la prevalencia más baja en Papua Nueva Guinea, Pakistán y Corea, que es entre el 1 y el 3% y el más alto en Alemania y Estados Unidos, que es de 16 a 18%
Hay muchas evidencias de la relación causal entre el EBV y el carcinoma gástrico, tales como:. monoclonalidad de los virus en las células neoplásicas que fue demostrado por el terminal único repetición de ADN del VEB [35]; presencia uniforme de EBV en todas las células tumorales detectadas por hibridación in situ de EBER-1, pero no en torno a las células epiteliales [15-34] y la elevación de los anticuerpos IgG e IgA contra el antígeno de la cápside viral varios meses antes de la presentación clínica de la enfermedad [36 .]
EBV-GC muestra algunas de las características clinicopatológicas característicos constantes tales como la predisposición a la superior de dos-tercio del estómago [15-17, 19-31]; un tubular moderadamente diferenciado de tipo sólido pobremente diferenciado de la histología [16-22, 32, 33]; que no tiene efecto en la invasión del estroma y la supervivencia [15, 16]; y el predominio masculino en la mayoría de los estudios. Sin embargo, el último no se ve en algunos estudios excepcionales que se realizan en México [32, 37], Chile [16] y China [38]. la dependencia de la edad no es evidente en la mayoría de los estudios. Sin embargo, estudios en Colombia [19], y Kazajstán [28] muestran una mayor prevalencia entre los pacientes más jóvenes.
EBV tiene dos grandes tipos, tipo 1 y tipo 2 que difieren en su capacidad de transformar los linfocitos B en un estado de continua la proliferación [39]. El tipo 1 es predominante en los países occidentales y asiáticos, mientras que el tipo B es predominante en África y es más frecuente en pacientes inmunodeprimidos [40, 41]. Además, hay otros tres variantes, que se distinguen por el polimorfismo de longitud de fragmentos de restricción (RFLP) usando BamHI y XhoI enzimas endonucleasas de restricción. En la región BamHI-F Prototipo F tiene la distribución en todo el mundo y la variante 'f' que tiene un sitio adicional para la enzima predominante en el sur de China y se asocia con el carcinoma nasofaríngeo [42, 43]. El polimorfismo en la región de frontera /I1 BamHI-W1 conduce a dos variantes; tipo I y 'i'. Tipo I, que es predominante en Japón y China no tiene sitio para la enzima BamHI [44, 45] y escriba 'i' con un sitio BamHI adicional es más frecuente en los países occidentales [46]. Por último, el polimorfismo en el sitio de restricción XhoI en el axón 1 del gen LMP1 define XhoI +, que es más frecuente en los países occidentales [47] y XhoI -., Que se ve con frecuencia en Asia [44]
Irán es uno de los países que tienen una alta incidencia de carcinoma gástrico con una incidencia anual de 26,1 por 100.000 para los hombres y 11,1 para las mujeres. Es el segundo cáncer más frecuente y la primera causa principal de muerte por cáncer en los hombres en Irán [48]. Sin embargo, no existe un estudio sobre la prevalencia o el genotipo de VEB en el cáncer gástrico en esta área. Por lo tanto, decidimos evaluar en el centro de referencia más antigua para el cáncer gástrico en Irán.
Métodos Las muestras

Hemos examinado 273 casos de cáncer gástrico resecado quirúrgicamente en este estudio. Los casos fueron seleccionados al azar de 1325 casos de cáncer gástrico registrados en los institutos de oncología de la Universidad de Teherán entre 1969-2004 que tienen bloques de parafina intactas e informes patológicos. Fijados con formol y tejido incluido en parafina a partir de estos casos fueron seleccionados y enviados a Kagoshima University Graduate School de Ciencias Médicas y Dentales, Japón, para las evaluaciones moleculares adicionales. patológicas de datos se obtuvieron con la re-evaluación de H & E diapositivas manchados por dos patólogos (AA & SGS). Todos los datos demográficos disponibles se obtuvieron de los informes patológicos y médicos disponibles de los pacientes.
Patología MyBestPlay Todos los especímenes fueron reclasificadas en relación de patrón histológico predominante como intestinal y tipo difuso de acuerdo con la clasificación de Lauren [49] y sub-clasificadas de acuerdo con las directrices de la sociedad japonesa de investigación para el cáncer gástrico [50] para el adenocarcinoma tubular bien diferenciado (tub1), adenocarcinoma moderadamente diferenciado (tub2), sólido adenocarcinoma pobremente diferenciado (POR1), sólidos no adenocarcinoma pobremente diferenciado (por2 ), carcinoma de células en anillo de sello (SIG), el carcinoma mucinoso (MUC) y el carcinoma linfoepitelial-como pobremente diferenciado (LE). México La ubicación de los tumores de acuerdo con la localización predominante de las lesiones fueron clasificadas como tercera o cardias superior, tercio medio o cuerpo y el tercio inferior o antro de acuerdo con las directrices de la sociedad japonesa de investigación para el cáncer gástrico [50]. No hubo ningún caso multifocal en nuestro estudio.
La profundidad de la invasión fue clasificada como la mucosa, submucosa, muscular propia y la participación de la serosa.
Hibridación in situ
EBV fue identificado por la expresión de EBV-codificada pequeños ARN-1 (EBER-1). La hibridación in situ con un oligómero de 30-base marcada con digoxigenina complementaria se utilizó para detectar la EBER-1 de acuerdo con el procedimiento previamente descrito por Chang et al [51]. secciones de 4-5 micras montados en portaobjetos de vidrio recubiertos de silano se prepararon para cada caso. El tejido en los portaobjetos se desparafinaron, se rehidrataron, predigerido con pronasa, prehibridó y después se hibridó durante la noche a 37 ° C con 0,5 sonda marcada con digoxigenina ng. La señal de hibridación fue detectado por un anticuerpo conjugado de fosfatasa alcalina antidigoxigenina. Secciones de un paciente con carcinoma gástrico conocida EBER-positiva se utilizaron para un control positivo y el sentido de la sonda de EBER-1 se utilizó para un control negativo para cada procedimiento.
Preparación de ADN comentario El fijado en formalina y parafina espécimen -embedded se cortó en 10 micras rodajas gruesas, y la muestra de ADN se preparó siguiendo el método descrito por Greer et al [52]. Brevemente, las rodajas se trataron con xileno y etanol y se centrifugaron a 22.000 g durante 20 min, y el sedimento resultante se resuspendió en 100 l de tampón de digestión (1 M Tris, pH 8,0, EDTA 50 mM, 0,5% de Tween 20) con 200 g /ml de proteinasa K y se incubó a 55 ° C durante la noche. Después de 10 min de ebullición a 100 ° C, la extracción y la precipitación de ADN se llevó a cabo con fenol-cloroformo y etanol, respectivamente.
Los cebadores y sondas
Cuatro regiones diferentes, EBNA-3C, BamHI-F, BamHI-W1 /I1, y XhoI sitio en LMP1, se utilizaron para determinar los genotipos virales. La Tabla 1 muestra la lista de conjuntos de cebadores y sondas utilizados en la presente study.Table 1 Lista de cebadores y sondas utilizados en este estudio
Genotipo
Secuencia
Tipo de sonda o tamaño después de la digestión RE1
referencia
EBNA-3C
cebadores sentido

5'-AGAAGGGGAGCGTGTGTTGT-3 '
antisentido
5'-3-GGCTCGTTTTTGACGTCGGC
Muestra et al. (53) Sondas

Tipo 1

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