Вирус Эпштейна-Барр, связанный карциномы желудка: отчет из Ирана в течение последних четырех десятилетий

Вирус Эпштейна-Барр, связанный карциномы желудка: отчет из Ирана в последние четыре десятилетия

Аннотация
фон
вирус Эпштейна-Барр было доказано, связано со многими из человеческого злокачественной опухоли, включая рак желудка , один из наиболее важных человеческих злокачественных опухолей в мире. Там не было ни в одном исследовании о присутствии EBV в аденокарциномы желудка в Иране.
Методы
Мы исследовали присутствие EBV в 273 формалином фиксированных залитых парафином случаев рака желудка от рака института Тегеранского университета, с 1969 по 2004. В месте гибридизации EBV-закодирован малых РНК-1 был проведен (EBER-1). Штамм положительных случаев исследовали с помощью полимеразной цепной реакции и /или фрагментов рестрикции анализа полиморфизма длины
Результаты
Найдено 9. (3%; 95% ДИ = 1-5%) EBV положительные случаи. Гендерные различия не statisticaly значительным. Доля случаев EBV-GC в диффузного типа был выше, чем кишечного типа (OR = 0,08; 95% ДИ = 0.002-0.64). случаи EBV-GC не имел никакого отношения к возрасту, месту проживания и вторжения. в период между 1928 и 1930 годами Все 9 случаев Шесть из 9 случаев EBV-GC родились были типа А. Прототип F был замечен в 6 из 8 случаев. Типа "я" был найден в 8 случаях и типа I в 1 случае. XhoI + и XhoI- полиморфизм составляли 6 и 3 случаев, соответственно.
Заключение
Наше исследование является первым, чтобы описать частоту EBV-GC в Иране и на Ближнем Востоке, выделяя очень низкий показатель распространенности со специфической клиникопатологическими функции. Преобладание ЭБВ-GC года рождения в определенный период, свидетельствует о том, что EBV инфекции или другие события в раннем детстве, могут быть связаны с развитием EBV-GC позже в жизни. Преобладание типа "я" и XhoI + случаи противоречат другим исследованиям в Азии, и похоже на то, как сообщается из стран Латинской Америки.
Фон
вирус Эпштейна-Барр (EBV) является повсеместным двухцепочечной ДНК вирус герпеса человека от вируса семейства, который имеет B-lymphotropism [1]. Более 90% взрослого населения в мире имеют серологические признаки инфицирования этим вирусом [1]. Он приобретается в раннем детстве и возраст инфекции значительно ниже в слаборазвитых странах с низким социально-экономическим состоянием [1]. После первичной инфекции вирус устанавливает пожизненный латентной инфекции в В-клеточных лимфоцитов, где он присутствует в 1 в 10 5-10 6 циркулирующие клетки [2]. Он выражает некоторые антигены в этой латентной фазе, которые доказали иметь некоторые онкогенными свойствами [3-8]. Есть много документов о причинно-следственной связи между EBV и лимфоидных злокачественных опухолей, таких как лимфома Беркитта в экваториальной Африке [9], клеточная лимфома назального T /NK [10], лимфома Ходжкина [11] и В-клеточной лимфомы у пациентов с иммуносупрессией [12]. EBV имеет также способность инфицировать эпителиальные клетки, а также имеет tumorogenic эффект в этих клетках, из которых карцинома носоглотки является одним из важных прототипов [13].
Первый доклад участия EBV в раке желудка была опубликована в 1990 году лимфоэпителиальных рак желудка [14]. Следовательно, в 1992 году Шибата и Вайс сообщили обнаружение EBV в 16% обычного рака желудка в США [15]. С тех пор распространенность EBV-ассоциированных рака желудка (EBV-GC) были исследованы и представлены в различных странах, которые варьировались в пределах от 3 до 18% [15-34] с низкой распространенностью в Папуа-Новой Гвинеи, Пакистана и Кореи, которая от 1 до 3%, а самая высокая в Германии и США, которая 16 до 18%
есть много свидетельств причинно-следственной связи между EBV и рака желудка, таких как:. моноклональности вирусов в опухолевых клеток, которые были продемонстрированы с помощью уникального терминала повторение ДНК EBV [35]; равномерное присутствие EBV во всех опухолевых клеток, обнаруженных на месте гибридизации EBER-1 в, но не в окружающих эпителиальных клеток [15-34] и повышение IgG и IgA антител против вирусного капсида антигена за несколько месяцев до клинических проявлений заболевания [36 .]
EBV-GC показывает некоторые постоянные характерные клинико-функции, такие как предрасположенности к верхней две трети желудка [15-17, 19-31]; умеренно дифференцированной трубчатая к слабо дифференцированы твердый тип гистологии [16-22, 32, 33]; не имея никакого эффекта в инвазии стромы и выживаемость [15, 16]; и преобладание мужчин в большинстве исследований. Тем не менее, последний из которых не видно в некоторых исключительных исследований, которые выполняются в Мексике [32, 37], Чили [16] и Китая [38]. Возраст зависимость не проявляется в большинстве исследований. Однако исследования, проведенные в Колумбии [19], и Казахстан [28], показывают более высокую распространенность среди молодых пациентов.
EBV имеет два основных типа, тип 1 и тип 2, которые различаются по своей способности к трансформации В-лимфоцитов в состояние непрерывного пролиферации [39]. Тип 1 преобладает в западных и азиатских странах, в то время как тип В является преобладающим в Африке и чаще встречается у пациентов с иммуносупрессией [40, 41]. Кроме того, есть три других варианта, которые отличаются полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (ПДРФ) с использованием BamHI и XhoI эндонуклеаз рестрикции ферментов. В BamHI-F области прототипа F имеет распространение во всем мире и "F" вариант, который имеет дополнительный сайт для фермента преобладает в южной части Китая и ассоциируется с раком носоглотки [42, 43]. Полиморфизм в BamHI-W1 /I1 граничной области приводит к двум вариантам; тип I и 'I'. Тип I, который преобладает в Японии и Китае не имеет места для BamHI фермента [44, 45] и типа 'я' с дополнительный сайт BamHI чаще встречается в западных странах [46]. Наконец, полиморфизм сайт рестрикции XhoI в аксона 1 гена LMP1 определяет XhoI +, которая является более распространенным в западных странах [47] и XhoI -., Которая часто встречается в Азии [44]
Иран является одной из стран, имеющих высокую частоту рака желудка с ежегодной заболеваемости 26,1 на 100000 для мужчин и 11,1 для женщин. Это является вторым наиболее распространенным раком и первой ведущей причиной смертности от онкологических заболеваний у мужчин в Иране [48]. Тем не менее, не существует какого-либо исследования о распространенности или генотипа EBV при раке желудка в этой области. Поэтому мы решили оценить его в старейшей специализированного центра для рака желудка в Иране.
Методы
Образцы
Мы обследовали 273 хирургическим резецировали желудка случаев рака в данном исследовании. Случаи были выбраны случайным образом из желудка 1325 случаев рака, зарегистрированных в онкологических институтах Тегеранского университета в период с 1969 - 2004, которые имеют неповрежденные парафиновые блоки и патологические отчеты. Фиксированные формалином парафин ткани из этих случаев были отобраны и отправлены в Кагосима университета Высшая школа медицинских и стоматологических наук, Япония, для дальнейших молекулярных оценок. Патологические данные были получены при повторной оценке H &Amp; E окрашивали слайды двумя патологи (AA &Amp; SGS). Все имеющиеся демографические данные были получены из имеющихся патологических и медицинских отчетов пациентов.
Патология
Все образцы были переквалифицируется в отношении преобладающей гистологической картине как кишечная и диффузного типа в соответствии с Лорен классификации [49] и подразделены в соответствии с руководящими принципами японского исследовательского общества по поводу рака желудка [50] к хорошо дифференцированной трубчатой ​​аденокарциномы (tub1), умеренно дифференцированной аденокарциномы (tub2), твердый слабо дифференцированы аденокарциномы (por1), нетвердой слабо дифференцированы аденокарциномы (por2 ), перстень-клеточная карцинома (сиг), коллоидный рак (MUC) и слабо дифференцированы лимфоэпителиальных, как рак (LE).
Опухоли расположение в соответствии с преимущественной локализации очагов поражения были классифицированы как верхняя треть или кардии, средней трети или тела и нижней трети или Антрум в соответствии с руководящими принципами японского исследовательского общества по поводу рака желудка [50]. Там не было никакого мультифокальной случай в нашем исследовании.
Глубина вторжения была классифицирована как через слизистую оболочку, к югу от слизистых оболочек, мышечная и вовлечением серозной.
В гибридизация
EBV идентифицировали по экспрессии EBV-кодированный небольшой РНК-1 (EBER-1). В месте гибридизации с комплементарной 30-базовой олигомера дигоксигенин-меченых использовался для обнаружения Еверовых-1 в соответствии с процедурой, описанной ранее Chang и др [51]. 4-5 мкм секций, установленных на силана покрытием предметные стекла были подготовлены для каждого конкретного случая. Ткань на слайдах была депарафинировали, регидратации, предварительно переваренный проназой, предгибридизовали, а затем гибридизовали в течение ночи при 37 ° С с использованием 0,5 нг дигоксигенин-меченым зондом. Сигнал гибридизация был обнаружен с помощью antidigoxigenin фосфатазы конъюгат антитело-щелочная. Срезы пациента с известными Еверовых-положительным раком желудка были использованы для положительного контроля, и смысл зонд Евера-1 был использован для отрицательного контроля для каждой процедуры.
Приготовление ДНК
формалином фиксированных и парафина -вложено образец был разрезан на 10 мкм ломтики толщиной, и образец ДНК получали в соответствии с методикой, описанной Гриром и др [52]. Вкратце, срезы обрабатывали ксилолом и этанолом и центрифугировали при 22000 г в течение 20 мин, и полученный осадок ресуспендировали в 100 мкл сбраживания буфера (1 М Трис, рН 8,0, 50 мМ ЭДТА, 0,5% Tween 20) с 200 мкг /мл протеиназы К и инкубировали при 55 ° С в течение ночи. Через 10 мин кипячения при 100 ° C, для экстракции и осаждения ДНК проводили с фенолом-хлороформом и этанолом, соответственно.
Праймеры и зонды
Четыре различных регионах, EBNA-3C, BamHI-F, BamHI-W1 сайт /I1 и XhoI в LMP1, были использованы для определения вирусных генотипов. В таблице 1 приведен список наборов праймеров и зондов, используемых в настоящем study.Table 1 Список праймеров и зондов, используемых в данном исследовании
генотипа

Sequence

Тип зондом или размер после rE1 переваривания
справочнике

EBNA-3C
Грунтовки
Sense
5'-AGAAGGGGAGCGTGTGTTGT-3 '<бр> Антисенс
5'-GGCTCGTTTTTGACGTCGGC-3
образца и др. (53)
зондами
Тип 1
5'-GAAGATTCATCGTCAGTGTC-3 '
153 bp2
Тип 2
5'-CCGTGATTTCTACCGGGAGT-3'
246 п.н.
BamHI-F
Грунтовки
Sense
5'-TCCCACCTGTTACCACATTC-3 '
прототип F: 198 пар оснований
легких и др. (54)
Антисенс
5'-GGCAATGGGACGTCTTGTAA-3 '
Вариант "F": 127 + 71 п.н.
Probe
5'-AAGGCTACCGTGCTAATTACCTCC-3'
Хадсон и др. (55)
BamHI-W1 /I1
праймеры
Sense
5'-ACCTGCTACTCTTCGGAAAC-3 '
Тип I: 205 п.н.
легких и др. (54)
Антисенс
5'-TCTGTCACAACCTCACTGTC-3 '
тип "я": 130 + 75 п.н.
сайта XhoI в LMP1
Грунтовки
Sense
5'- AACAGTAGCGCCAAGAGGAG-3 '
XhoI +: 113 п.н.
Sandvej и др. (56)
Антисенс
5'-ATGGAACACGACCTTGAGAGG-3 '
XhoI-: 67 + 46 п.н.
1Restriction фермента; 2Base пар
типов 1 и 2 были признаны амплификации U2 области гена EBNA-3с праймеров, описанных в образце и др [53], который дал 153 и 246 п.о., фрагменты, соответственно. Они признаны блот гибридизации (SBH) с типоспецифичными внутренних зондов, описанных образцов и др [53]. BamHI-F область амплифицировали с помощью набора праймеров, описанного легочными и др [54]. Последующий фрагмент 198 п.н. расщепляли BamHI ферментом рестрикции, который прокричал 198 п.н. фрагмент в случае дикого типа F и 127 п.н. и 71 п.н. фрагментов в случае 'F' вариант. Дикого типа F и F варианты были подтверждены SBH с внутренним зондом, как описано ранее [55]. Чтобы отличить I /I варианты, то /I1 область BamHI-W1, амплифицировали с использованием набора праймеров, описанного Lung и др [54]. Переваривание с ферментом рестрикции BamHI завопил 205 п.н. фрагмент в типа I и 130 п.н. и 75 п.н. фрагментов в случае 'я'. Они также были подтверждены SBH с клонированного фрагмента зонда BamHI-I ДНК. Анализ полиморфизма в экзоне 1 гена LMP1 проводили с использованием набора праймеров, описываемую Sandvej и др [56] в результате чего 113 п.о., фрагменты. После расщепления рестрикции XhoI ферментом XhoI + случаи, содержащие сайт расщепления XhoI (XhoI сохранился) показывают 67-ВР и 46 п.н. фрагментов, но XhoI - случаи показывают оригинальный непереваренной 113 п.н. продукта ПЦР. Фрагмент 113 п.о.-РСR-продукта линии клеток В95-8 была использована в качестве зонда для подтверждения сайт расщепления XhoI из LMP1 по SBH [57].
для типа 1, дикий тип F, тип I, и XhoI, - вирусы линия клеток В95-8 была использована в качестве положительного контроля. Клеточные линии AG786 и Akata и клонированный BamHI-'f 'и BamHI- "я" ДНК-фрагменты служили в качестве положительного контроля для 2-го типа, XhoI - "F" вариант, и тип "I" вирусы, соответственно. Вирус герпеса 6 человек инфицированных клеток линии MOL Т-4 используется в качестве отрицательного контроля [58].
Полимеразная цепная реакция
амплификация мишеней ДНК проводили с использованием 2 мкл ДНК и смеси 10 мМ Трис-HCl, рН 8,0 , 50 мМ КСl, 1,5 мМ MgCl <суб> 2, 200 мкМ дНТФ, 1 мкМ каждого праймера и 1,0 U Taq-полимераза (горячая звезда, Qiagen, Германия) в конечном объеме 25 мкл смеси. Протокол, используемый для амплификации гена EBNA-3C был один цикл при 95 ° С в течение 15 мин, затем 40 циклов денатурации при 95 ° С в течение 1 мин, отжиг при 46 ° С в течение 1 мин и удлинение при 72 ° С в течение 1 мин и, наконец, закончилась 5 мин при 72 ° с. Протокол, используемый для BamHI-F, BamHI-W1 /I1 и XhoI сайт амплификации был один цикл при 95 ° С в течение 5 мин, затем 40 циклов денатурации при 95 ° С в течение 1 мин, отжиг при 43 ° С в течение 1 мин и Относительное удлинение при 72 ° с в течение 1 мин и, наконец, закончилась 5 мин при 72 ° с. Электрофорез в геле 2% агарозном геле и окрашиванием 0,5 мкг /мл этидий-бромида проводят с целью идентификации продуктов ПЦР.
Ограничение анализа полиморфизма длины фрагмента
продуктов амплифицированной ДНК (15 мкл) переваривали 10 ед BamHI-XhoI или ферментами рестрикции, в соответствии с инструкцией изготовителя и визуализировали с помощью электрофореза в агарозном геле 2% окрашивают 0,5 мкг /мл этидий-бромида и переносили на нейлоновую мембрану для SBH.
Саузерн-блот-гибридизацией
Специфичность ПЦР реакция была подтверждена SBH. Электрофоретическую ДНК переносили на нейлоновую мембрану Hybond N + (Amersham, Pharmacia Biotech, Великобритания) с помощью капиллярного блоттинга с использованием 0,4 н раствора NaOH. Мембраны предгибридизовали с буфером для гибридизации в течение 1 ч при 42 ° С. После добавления зонда, гибридизацию проводили в течение ночи при 42 ° С. Зонды типов А и В, и BamH-I F метили Dig олигонуклеотида 3'-конца мечения набора и обнаруживаться Dig люминесцентного комплект обнаружения (Boehringer Mannheim, Германия). Для обнаружения фрагмента BamHI-I и XhoI полиморфизм в LMP1, гибридизацию проводили с использованием прямой маркировки и обнаружения набора ECL (Amersham, Pharmacia Biotech, Великобритания) в соответствии с инструкциями изготовителя.
Статистический анализ
Статистический анализ был сделано с помощью LogExact 7.0 программного обеспечения (статистический пакет для процедуры регрессионного с изображением точный метод); Cytel Студия 7.0.0 пакет (Cytel Software Corporation, 2005). Точное испытание бинарной логистической анализа было проведено сравнение доли EBV положительных случаев среди аденокарциномы желудка. Секс, возрастные группы (&л; 50, 50-69 и ≥ 70 лет), анатомическое расположение опухоли (Антрум, тела и кардиального), инвазия опухоли (серозный, другие) и гистологической классификации Лорен были включены в качестве независимых переменных. Полиномиальных переменные были разделены на п-1
фиктивных биноминальной переменных (п
было количество категорий). Отношение шансов с 95% доверительный интервал рассчитывали для каждой категории. Ошибка типа 1 (α) была установлена ​​на уровне 0,05. Все значения р были двусторонними.
Результаты
Мы обследовали 273 рак желудка, включая 196 (72%) мужчин и 77 (28%) женщин. Средний возраст пациентов составил 57,3 ± 11,3 (SD) лет (диапазон: 24-90; медиана: 58). Большинство из них (108 случаев; 66%) были в возрасте от 50 до 69 лет, 54 (20%) случаев были моложе 50 лет, а остающийся были старше 70 лет. Сто тридцать случаев (48%) были расположены в антральном, и 64 (23%) и 71 (26%) случаев были расположены в теле и кардии, соответственно. В 5 случаях местоположение не определено и в 3 случаях все стенки желудка были вовлечены (linitis Plastica), которые не были включены в статистический анализ. Как показано в таблице 2, большинство случаев были кишечного типа (56%). Таблица 2 Распределение Эбер-1 положительных желудочных карцином гистологического типа и пола
Histology1

Мужской

Женский

Total

<й>
EBER + /N2 (%)

EBER + /N (%)

EBER + /N (%)

кишечными
1/113 (1)
0/39 (0)
1/152 (1)
PAP
0/11 (0)
0/3 (0)
0/14 (0)
tub1
0/36 (0)
0/11 (0)
0/47 (0)
tub2
1/50 (2)
0/16 (0)
1/66 (1)
MUC
0/16 ( 0)
0/9 (0)
0/25 (0)
Диффузный
7/83 (8)
1/38 (3)
8/121 (7 )
por1
3/34 (8)
1/16 (6)
4/50 (8)
por2
4/40 (10)
0 /18 (0)
4/58 (8)
сиг
0/9 (0)
0/4 (0)
0/13 (0)
1 PAP: папиллярная аденокарцинома; tub1: хорошо дифференцированы трубчатые аденокарциномы; tub2: умеренно дифференцированной аденокарциномы; por1: твердый слабо дифференцированы аденокарциномы; por2: нетвердой слабо дифференцированы аденокарциномы; Sig: печатка карцинома кольцо клеток; MUC: коллоидный рак; 2 Общее количество случаев в каждой группе (на основе японского исследовательского общества по поводу рака желудка)
Распространенность EBV положительных случаев
EBER-1 был обнаружен в девяти из 273 случаев (3%), которые рассматривались как EBV- GC. Сигнал был ограничен только для ядер опухолевых клеток, но не найдены в не-опухолевые клетки (рис. 1). Рисунок 1 Случай EBV положительным gasrtric карциномы. Умереннодифференцированная трубчатую аденокарциномы с образованием случайного TUBUL (А); ядерный EBER положительный сигнал во всех опухолевых клеток, обнаруженных с помощью гибридизация (В).
Факторы, связанные с EBV положительных случаев
В таблице 3 приведены частоты EBV-GC по возрасту, полу, местоположению, гистологии и вторжения, а также в результате логистического analysis.Table 3 результат логистического анализа
переменных

EBER + /N1

(%)

OR2

95% CI2

Гендер
Female
1/76
(1)
1
справочнике
Мужской
8/188
(4)
0,3
0.01-2.96
P = 0,595

Возраст
Результаты ≥ 70
1/36
(3)
1
ссылка
50-69
5/180
(3)
0,8
0.08-44.62
&50; ЛТ
3 /54
(6)
1.3
0.08-81.25
P
для тренда = 1,0
Местоположение
верхней
1/71
(1) <бр> 1
ссылка
Middle
5/64
(8)
6,0
0.1-77.86
Нижняя
3/130
(2) <бр> 1.4
0.63-296.7
P
гетерогенности = 1,64
гистологии
Диффузный
8/121
(7)
1
справочнике
Кишечные
1/152
(1)
0,08
0.002-0.64
P = 0,009

Вторжение
Мышцы
3/33
( 9)
1
ссылка
serose
6/222
(3)
3,6
0.47-24.03
P = 0,243

1Total номер в каждой группе; 2или и 95% доверительный интервал были получены из точного критерия бинарного логистического анализа.
Пол и возраст
восемь из 188 (4%) мужчин и случаев 1 из 76 (1%) женские случаи были EBV положительными. Хотя был преобладание мужчин в данном исследовании, не было статистически значимым (р
= 0,5). Там также не было связи между возрастом и EBV-GC (р
= 1).
Опухоль расположение
По анатомической локализации, 5 из 64 (8%) опухолей тела, 1 из 71 (1 %) кардиальные опухоли и 3 из 130 (2%) антральных опухоли ЭБВ связаны. Хотя большинство из EBV-GC были расположены в верхних двух третей, это не было статистически значимым статистически (р
= 0.1).
Гистологического типа
На основе классификации Лорен, 8 из 121 (7%) диффузного случаи типа были связаны ЭБВ, но только 1 из 152 кишечного типа был ЭБВ положительным, что было статистически значимым (р = 0,009
). Согласно японской классификации, por2 и por1 были преобладающими гистологические типы в EBV-GC (таблица 2), но в связи с низким числом случаев в каждой группе статистический анализ не мог быть выполнен.
Invasion
В этом исследовании были только 2 случая, которые были ограничены подслизистой и ни один из них не показывает EBER-1 сигнал в ИСГ. Таким образом, принимая во внимание из-за низкого числа, эти случаи не рассматриваются в статистическом анализе. Там не было никакой разницы между EBV положительных и отрицательных случаев относительно вторжения в серозной и мышечная (р
= 0,24).
Другие выводы
примечательных точки в нашем исследовании был тот факт, что 6 из 9 EBV- пациенты GCS родились между "1928-1930". Тем не менее, статистический анализ не был сделан из-за низкого числа.
Генотипирование
Подтип EBV генома была определена во всех 9 случаях. Все наши дела были типа 1. BamHI-F область успешно усиливается в 8 из 9 EBV-ШС, что шесть из них показал прототип F (рис. 2). Усиление BamHI-I /wi1 был успешным во всех случаях и, кроме одного; все случаи были "я" типа (рис. 3). Анализ полиморфизма в экзоне 1 гена LMP1 показал, что 3 случая были XhoI - и 6 случаев были XhoI + (рис 4). В таблице 4 представлены все демографические, патологические и генотипические данные EBV-GC в этом study.Table 4 Клинико-патологические и генетические характеристики EBV-GC
<й>
год рождения

диагностический год

Возраст

Пол

Lacation

Вторжение

гистологии Lauren /ВОЗ

EBNA-3 типа A /B

типа BamHI-F F /"F" на
BamHI-я типа I /"я" на
XhoI +/-

1
1949
1981
32
Male
Lower
Muscle
Diffuse/por1
A
F
"i"
+
2
1929
1982
53
Male
Middle
Muscle
Diffuse/por1
A
F
"i"
-
3
1928
1983
55
Male
Middle
Serosa
Intestinal/tub2
A
F
"i"
+
4
1928
1983
55
Male
Middle
Serosa
Diffuse/por2
A
F
I
+
5
1940
1983
43
Female
Lower
Muscle
Diffuse/por1
A
F
"i"
-
6
1930
1986
56
Male
Middle
Serosa
Diffuse/por2
A
ND1
"i"
+
7
1928
1988
60
Male
Upper
Serosa
Diffuse/por1
A
F
"i"
+
8
1928
2001
73
Male
Middle
Serosa
Difuse/por2
A
"f'
"i"
-
9
1953
2002
49
Male
Lower
Seroasa
Diffuse/por2
A
"f"
"i"
+
1Не определяется; tub2: умеренно дифференцированная аденокарцинома por1: твердый слабо дифференцированы аденокарциномы; por2: нетвердой слабо дифференцированы аденокарциномы Рисунок 2
Результат южного блотгибридизации для BamHI-F области. Четыре особи видно на этом чертеже, каждый образец был загружен в 2-х полос с и без фермента, соответственно слева. Первый образец не был амплифицирован в этом эксперименте. Остальные три образца не расщепляется Bam-HI фермента, который означает, что они являются дикого типа F. (+: положительный контроль; + /Enz: положительный контроль с ферментом; -: отрицательный контроль). Рисунок 3
Результат южная блотгибридизации для BamHI-W1 /I1 области. Каждый образец был загружен в 2-х полос движения и без фермента, соответственно слева. В образце одного нет полосы во второй полосе, которая наводит на мысль о том, что продукт ПЦР расщепляли, но мы не смогли обнаружить фрагментированных полосы, так как оригинальная группа содержала небольшое количество копий ДНК, таким образом, мы рассматривали его как тип "я". Образцы 2, 5 и 6 расщепляются означает, что они относятся к типу "я". Полиморфизм образцов 3 и 4 не были определены в этом эксперименте. (+: Положительный контроль; + /Enz: положительный контроль с ферментом; -: отрицательный контроль).
Рисунок 4 Результат XhoI полиморфизма в южной блот-гибридизации. Каждый образец был загружен в 2-х полос движения и без фермента соответственно слева. Первая и вторая образцы расщепляются с ферментом, что означает, что они являются XhoI +. Третий является XhoI-. (+: Положительный контроль; + /ENZ: положительный контроль с ферментом -: отрицательный контроль).
Обсуждение
Настоящее исследование обнаруженных EBV-ШС в 3% желудочных карцином и предположил, что большинство желудочных карцином в Иран являются EBV-отрицательными. Там не было LELCs, которые хорошо известны, тесно связано с EBV [59]. Кружевной узор, который является уникальным в морфологии EBV-позитивных ранней карциномы желудка [60], не было видно в нашем исследовании. Эта частота является одним из самых низких частот в мире. Как уже упоминалось выше, в соответствии с классификацией ВОЗ, к северу от Ирана считается одним из регионов с высокой частотой карциномы желудка в мире [61]. Редкие исследования в Иране также показывают этот факт кроме того, что они показывают более или менее Однородность по всей стране [48, 62, 63]. Таким образом, низкая частота EBV-GC в Иране поддерживает предыдущую гипотезу о том, что страны с высоким риском для GC имеют низкие показатели EBV-GC [64]. Это также подтверждает мнение о том, что он является низким в Азии распространенность 3% в Корее [25], 6% в Японии [24], 6% в Китае [26], 5% в Индии [18], 2% в Пакистан [29] и максимальная 10% в Малайзии [27], Тайвань [21] и Казахстан [28]. Тем не менее, это значительно ниже, чем Казахстан частоты, (наша страна) рядом с многими общими чертами в таможенных и социально-экономических условиях.
Распространенность EBV-GC при раке желудка диффузного типа было больше в нашем исследовании, факт, который был замечен в большинстве исследований Латинской Америки [16, 32] и некоторых странах Азии, таких как Корея [25], Китай [26] и Индии [18]. Тем не менее, существует много противоречивых исследований, которые не показали каких-либо отношений в этой концепции [15, 17, 19, 23, 33]. Koriyama и др [23] в своем классическом исследовании предположил, что существует много других факторов, которые имеют влияние на частоту диффузного типа рака желудка, таких как возраст, пол и место и противоречивые результаты различных исследований можно объяснить различиями в распределении из этих факторов.
Хотя соотношение мужчины /женщины составляла приблизительно 4 в нашем исследовании, это не было статистически значимым в статистическом анализе. Отсутствие гендерного предпочтения наблюдалось в других исследованиях в Мексике [32, 37] Чили [16] и одну область в Китае [38]. Тем не менее, следует учитывать, что низкое число положительных случаев в нашем исследовании может быть причиной незначительного результата в анализе. В то же время, Koriyama и др [23] показывают, что гендерное предпочтение EBV ограничивается диффузного типа GC и не рассматривается в кишечном типа. Тем не менее, относительно небольшое число наших случаев, мы не смогли выполнить анализ отдельно для каждого типа.
Увеличение числа заболеваний раком верхней части желудка, несмотря на снижение общего числа случаев рака желудка наблюдается во многих исследованиях по всему миру [ ,,,0],65, 66]. Есть также много доказательств того, что этот тип рака желудка имеет различные факторы риска [67-69]. EBV является одним из них [15-31]. Abdirad и др [70] также показывают, что существует такое увеличение заболеваемости раком верхней трети желудка в Иране. Тем не менее, несмотря на наши ожидания, это исследование не показали предпочтение EBV для верхней или средней трети желудка. Важно отметить, что, несмотря на множество исследований, подтверждающих в этом контексте также нет такого отношения в наших соседних странах, то есть Казахстан [28] и Индия [18].
EBV в нашем исследовании не показали никакого отношения с возрастом и глубиной инвазии. Некоторые исследования показывают, что существует тенденция к EBV-GC происходит в более раннем возрасте [19, 26, 33, 38]. Тем не менее, Koriyama и др [23] показал, что только кишечный тип EBV-GC показывает этот возраст предпочтение, и предложил, что разница в возрасте воздействия специфических кофакторов для каждого из этих типов является вероятной причиной.
Одним из интересных результаты настоящего исследования является тот факт, что 6 из наших 9 случаев EBV-GC, которые были выбраны случайным образом, родились в период между 1928 и 1930 годами Хотя мы не смогли выполнить любой анализ в отношении низкого числа положительных случаев, этот вывод представляется важным, поскольку эпидемиологическое исследование показало, что EBV инфекции в раннем детском возрасте может быть связано с развитием EBV-GC во взрослом возрасте [71]. Хотя у нас нет никаких доказательств того, некоторые гипотезы можно было бы рассмотреть. Например, конкретных условий или событий, приводящих к EBV инфекции в раннем детстве или в результате воздействия некоторых специфических факторов риска совместного которые могли бы существовать примерно в конце 1920-х годов. Поэтому мы предлагаем исследование случай-контроль упором на рак желудка у пациентов, родившихся примерно в конце 1920-х годов, чтобы сравнить распространенность EBV у этих больных с другими.
Генотипирование вируса показал, что тип 1 является эксклюзивным типом во всех наша EBV-GC. Преобладание типа 1 находится в согласии с результатами других исследований [18, 45, 58, 40]. Тип 2 в основном рассматривается в Африке [40], и существует мнение, что она слабее, чем 2-го типа и в основном рассматривается в иммунодефицитных пациентов [40, 72]. Прототип F в BamHI-F был наиболее распространенным типом в данном исследовании. Этот тип имеет распространение во всем мире, за исключением на юге Китая, который "F" вариант преобладает и вызывает рак носоглотки [43, 45]. Наш вывод такой же, как аналогичные исследования в рака желудка в Индии [18], Япония [73], и Чили [58]. BamHI-W1 анализ /I1 область полиморфизм показывает, что 90% наших случаев были типа "я". Предыдущие исследования показали, что тип I является наиболее распространенной в Азии [45, 54] и типа "я" является наиболее в западных странах [46]. Такая схема распределения была также видели в аналогичных исследованиях на EBV-GC [18, 45, 73]. Тем не менее, наша находка, кажется, похож на западные страны, как Корвалан выводы в Колумбии и Чили [58]. XhoI + был самым распространенным типом на сайт рестрикции XhoI в экзоне одного гена LMP1 в настоящем исследовании.

• Лапароскопическая по сравнению с открытой резекции желудка желудочно-кишечных стромальных опухолей: обновл…
• Возможное участие Nrf2-опосредованной гемоксигеназы-1 повышающей регуляции в защитном эффекте протонного насо…