Epstein-Barr vírus carcinoma gástrico associado: um relatório do Irã nos últimos quatro decades

vírus Epstein-Barr associado carcinoma gástrico: um relatório do Irã nas últimas quatro décadas
Abstract
Fundo
Epstein Barr tem sido provado ser associada com muitos dos malignidade humana, incluindo o carcinoma gástrico, uma das malignidades humanas mais importantes no mundo. Não houve nenhum estudo sobre a presença de EBV no adenocarcinoma gástrico no Irã.
Métodos
examinamos a presença do EBV em 273 formalina casos embebidos em parafina fixos de carcinoma gástrico Cancer Institute, da Universidade de Teerã, de 1969 a 2004. A hibridação in situ de codificados pelo EBV pequeno ARN-1 (EBER-1) foi realizada. A estirpe de casos positivos foi examinado por meio de reação em cadeia da polimerase e /ou análise de polimorfismo de tamanho de fragmentos de restrição
Resultado
Encontramos 9. (3%; IC95% = 1-5%) casos positivos EBV. A diferença entre os sexos não foi estatisticamente significativa. A proporção de casos EBV-GC em tipo difuso foi maior do que o tipo intestinal (OR = 0,08; IC95% = 0,002-0,64). casos EBV-GC não tinha nenhuma relação com a idade, localização e invasão. Seis em cada 9 casos EBV-GC nasceram durante o período entre 1928 e 1930. Todos os 9 casos foram Tipo A. Prototype F foi visto em 6 de 8 casos. Tipo "i" foi encontrado em 8 casos e do tipo I em 1 caso. XhoI + e polimorfismo XhoI- representaram 6 e 3 dos casos, respectivamente.
Conclusão
Nosso estudo é o primeiro a descrever a frequência de EBV-GC no Irão e no Médio Oriente, com destaque para uma prevalência muito baixa com clínico-patológico específico características. A predominância dos anos EBV-GC nascimento em um período fixo, sugere que a infecção por VEB ou outros eventos na primeira infância pode estar relacionada com o desenvolvimento de EBV-GC mais tarde na vida. A predominância do tipo "i" e XhoI + casos são contraditórias com outros estudos na Ásia e é semelhante ao que é relatado de países latino-americanos.
Fundo
vírus Epstein-Barr (EBV) é um DNA de cadeia dupla onipresente vírus de herpes humano família de vírus, o que tem B-lymphotropism [1]. Mais de 90% dos adultos no mundo têm evidência sorológica de infecção com este vírus [1]. É adquirida durante a primeira infância ea idade de infecção é muito menor em países subdesenvolvidos, com a condição socioeconômica baixa [1]. Após a infecção primária, o vírus estabelece uma infecção latente ao longo da vida nos linfócitos de células B, onde ele está presente em 1 em 10 5-10 6 células circulantes [2]. Ela expressa alguns antígenos nesta fase latente, que, comprovadamente, tenham algumas propriedades oncogênicas [3-8]. Há muitos documentos sobre a associação causal entre a EBV e doenças malignas linfóides, tais como linfoma de Burkitt na África equatorial [9], linfoma de células nasal T /NK [10], linfoma de Hodgkin [11] e linfoma de células B em pacientes imunossuprimidos [12]. EBV tem também a capacidade de infectar as células epiteliais, e também tem efeitos tumorogénicos nestas células a partir do qual o carcinoma da nasofaringe é um dos protótipos importantes [13].
O primeiro relatório de envolvimento de EBV no carcinoma gástrico foi publicado em 1990, em carcinoma do estômago lymphoepithelial [14]. Em consequência, em 1992 e Weiss Shibata relatado detecção de EBV em 16% de carcinoma gástrico normal em EUA [15]. Desde então, a prevalência de carcinoma gástrico associada ao EBV (EBV-GC) foi investigado e relatado em vários países que variaram entre 3 a 18% [15-34] com a menor prevalência em Papua Nova Guiné, Paquistão e Coréia, que é entre 1 a 3% eo maior na Alemanha e Estados Unidos, que é de 16 a 18%
Há muitas evidências de relação causal entre EBV e carcinoma gástrico, tais como:. monoclonalidade dos vírus nas células neoplásicas que foi demonstrado por terminais única repetição do DNA EBV [35]; presença de EBV uniforme em todas as células tumorais detectados por hibridização in situ de EBER-1, mas não em células epiteliais circundante [15-34] e elevação de anticorpos IgG e IgA contra o antigénio da cápside virai vários meses antes da apresentação clínica da doença [36 .]
EBV-GC mostra algumas características clínico-patológicas características constantes, como predisposição a parte superior de dois terços do estômago [15-17, 19-31]; um tubular moderadamente diferenciado com o tipo de sólido pouco diferenciado da histologia [16-22, 32, 33]; ter nenhum efeito na invasão estromal e sobrevivência [15, 16]; e predomínio do sexo masculino, na maioria dos estudos. No entanto, o último não é visto em alguns estudos excepcionais que são realizadas no México [32, 37], Chile [16] e da China [38]. dependência idade não é evidente na maioria dos estudos. No entanto, estudos na Colômbia [19] e Cazaquistão [28] mostram uma prevalência maior entre os pacientes mais jovens.
EBV tem dois tipos principais, tipo 1 e tipo 2 que diferem na sua capacidade de transformar os linfócitos B em um estado de contínua proliferação [39]. Tipo 1 é predominante nos países ocidentais e asiáticos enquanto o tipo B é predominante na África e é visto mais comumente em pacientes imunossuprimidos [40, 41]. Além disso, há três outras variantes, que se distinguem por polimorfismo de comprimento de fragmentos de restrição (RFLP), utilizando BamHI e XhoI enzimas endonucleases de restrição. Na região BamHI-F Protótipo F tem a distribuição mundial e variante de 'f' que tem um sítio adicional para a enzima é predominante no sul da China e está associado a carcinoma nasofaríngeo [42, 43]. Polimorfismo na região de fronteira /I1 BamHI-W1 conduz a duas variantes; tipo I e 'i'. Tipo I, que é predominante no Japão e na China não tem local para a enzima BamHI [44, 45] e digite 'i' com um local BamHI extra é visto mais comumente em países ocidentais [46]. Finalmente, polimorfismo no sítio de restrição XhoI no axônio 1 do gene LMP1 define XhoI + que é mais prevalente nos países ocidentais [47] e XhoI -., Que é frequentemente visto na Ásia [44]
o Irã é um dos países que têm uma alta incidência de carcinoma gástrico com uma incidência anual de 26,1 por 100.000 para os homens e 11,1 para as mulheres. É o segundo câncer mais prevalente e a primeira causa líder de mortes relacionadas ao câncer em homens no Irã [48]. No entanto, não há nenhum estudo sobre a prevalência ou genótipo do EBV no câncer gástrico nesta área. Portanto, decidimos para avaliá-lo no mais antigo centro de referência para câncer gástrico no Irã.
Métodos
espécimes
Nós examinados 273 cirurgicamente ressecados casos de câncer gástrico neste estudo. Os casos foram selecionados aleatoriamente a partir de 1325 casos de cancro gástrico registrados em institutos de oncologia da Universidade de Teerã entre 1969-2004 que têm blocos de parafina intactas e relatórios patológicos. Formol tecido embebido em parafina e fixado a partir destes casos foram selecionados e enviados para Kagoshima University Graduate School of Medical and Dental Sciences, Japão, de outras avaliações moleculares. dados patológicos foram obtidas com reavaliação da H & E lâminas coradas por dois patologistas (AA & SGS). Todos os dados demográficos disponíveis foram obtidos a partir dos relatórios patológicos e médicos disponíveis dos pacientes.
Patologia
Todos os espécimes foram reclassificadas em relação de padrão histológico predominante quanto intestinal e tipo difuso de acordo com a classificação de Lauren [49] e sub-classificados de acordo com as diretrizes da sociedade de pesquisa japonês para câncer gástrico [50] para adenocarcinoma tubular bem diferenciado (tub1), adenocarcinoma moderadamente diferenciado (tub2), sólido adenocarcinoma pouco diferenciado (por1),-sólido não adenocarcinoma pouco diferenciado (por2 ), carcinoma de células anel de sinete (SIG), carcinoma mucinoso (MUC) e carcinoma linfoepitelial-like pouco diferenciado (LE).
a tumores de localização de acordo com a localização predominante das lesões foram classificadas como terceiro ou cárdia superior, médio terceiro ou corpo e terço inferior ou antro de acordo com as diretrizes da sociedade de pesquisa japonês para câncer gástrico [50]. Não houve nenhum caso multifocal em nosso estudo.
A profundidade da invasão foi classificada como mucosa, sub-mucosa, muscular própria e envolvimento serosa. Online em hibridização in situ
EBV foi identificado pela expressão de EBV-codificado RNA pequeno-1 (EBER-1). A hibridação in situ com um oligómero de 30 bases complementar marcada com digoxigenina foi utilizado para detectar a EBER-1 de acordo com o procedimento previamente descrito por Chang et al [51]. secções de 4-5 ^ m-montadas em lâminas de vidro revestidas com silano foram preparadas para cada caso. O tecido em lâminas foi desparafinizadas, re-hidratadas, pré-digeridas com pronase, pré-hibridados, hibridados e depois durante a noite a 37 ° C com 0,5 ng de sonda de digoxigenina marcado. O sinal de hibridação foi detectada por um conjugado anticorpo-fosfatase alcalina conjugado antidigoxigenin. Secções de um paciente com carcinoma gástrico EBER-positiva conhecida foram utilizados para um controlo positivo, e detectar a sonda EBER-1 foi utilizado para um controlo negativo para cada procedimento.
Preparação de ADN O
fixado em formalina e parafina -embedded amostra foi cortada em 10 fatias uM de espessura, e a amostra de ADN foi preparado seguindo o método descrito por Greer et al [52]. Resumidamente, os cortes foram tratados com xileno e etanol e centrifugado a 22.000 g durante 20 minutos, e o sedimento resultante foi ressuspenso em 100 ul de tampão de digestão (Tris 1 M, pH 8,0, EDTA 50 mM, 0,5% de Tween 20) com 200 ug /ml de proteinase K e incubou-se a 55 ° C durante a noite. Depois de 10 minutos em ebulição a 100 ° C, extracção e precipitação do DNA foi realizada com fenol-clorofórmio e etanol, respectivamente.
Iniciadores e sondas
quatro regiões diferentes, EBNA-3C, BamHI-F, BamHI-W1 local /I1 e Xhol em LMP1, foram usadas para determinar os genótipos virais. A Tabela 1 mostra a lista de conjuntos de primers e sondas usadas no presente study.Table 1 Lista de primers e sondas utilizadas neste estudo
Genótipo
Sequence
tipo por sonda ou tamanho após RE1 digestão
Referência
EBNA-3C
Primers
Sense
5'-AGAAGGGGAGCGTGTGTTGT-3 '
Antisense
5'-GGCTCGTTTTTGACGTCGGC-3
Amostra et al. (53)
Sondas
tipo 1 | 5'-GAAGATTCATCGTCAGTGTC-3 '
153 BP2
tipo 2
5'-CCGTGATTTCTACCGGGAGT-3'
246 bp
BamHI-F
Primers
Sense
Prototype F '
5'-TCCCACCTGTTACCACATTC-3: 198 bp
Lung et al. (54)
Antisense
5'-GGCAATGGGACGTCTTGTAA-3 '
Variant "f": 127 + 71 pb
Probe
5'-AAGGCTACCGTGCTAATTACCTCC-3'
Hudson et al. (55)
BamHI-W1 /I1
Primers
Sense
5'-ACCTGCTACTCTTCGGAAAC-3 '
Tipo I: 205 bp
Lung et al. (54)
Antisense
5'-TCTGTCACAACCTCACTGTC-3 '
tipo "i": 130 + 75 pb
local Xhol na LMP1
Primers
Sense
5'- AACAGTAGCGCCAAGAGGAG-3 '
XhoI +: 113 bp
Sandvej et al. (56)
Antisense
5'-ATGGAACACGACCTTGAGAGG-3 '
XhoI-: 67 + 46 pb
enzima 1Restriction; pares 2Base
Tipos 1 e 2 foram reconhecidas por amplificação da região U2 do gene EBNA-3C por iniciadores descritos por Amostra et al [53] que originou fragmentos de 153 e 246 pb, respectivamente. Eles são reconhecidas por hibridização de mancha de Southern (SBH) com sondas internas específicas do tipo descrito por Amostra et al [53]. A região BamHI-F foi amplificado por o conjunto de iniciadores descrito por pulmonar et al [54]. A consequente fragmento de 198 pb foi digerido pela enzima de restrição BamHI que gritou um fragmento de 198 pb no caso do tipo selvagem F e 127 pb e 71 pb fragmentos no caso da variante de 'f'. A-F de tipo selvagem e as variantes de F foram confirmadas por SBH com uma sonda interna, tal como descrito antes [55]. Para distinguir /i variantes I, região /I1 a BamHI-W1 foi amplificada utilizando o conjunto de iniciadores descrito por Lung et al [54]. A digestão com a enzima de restrição BamHI gritou fragmento de 205 pb no tipo I e fragmentos de 130 pb e 75 pb no caso do 'i'. Eles também foram confirmadas por SBH com uma sonda de fragmento BamHI-I de ADN clonado. Análise de polimorfismo do exão 1 do gene LMP1 foi realizada utilizando um conjunto de iniciadores descrito por Sandvej et al [56] que resultou fragmentos de 113 pb. Após a digestão com a enzima de restrição Xhol, XhoI + casos que contêm local de clivagem XhoI (XhoI mantido) mostram fragmentos de 67 pb e 46 pb, mas XhoI - casos mostram o produto de PCR de 113 pb digerido originais. O fragmento de 113 pb do produto de PCR da linha de células B95-8 foi utilizada como sonda para confirmar local de clivagem Xhol de LMP1 por SBH [57]. Compra de tipo 1, F de tipo selvagem, do tipo I, e XhoI - vírus da linha de células B95-8 foi utilizada como controlo positivo. As linhas celulares AG786 e Akata eo BamHI-'f clonado "e BamHI" i "fragmentos de DNA serviu como controlos positivos para o tipo 2, XhoI -," f "variante, e digite" i "vírus, respectivamente. vírus do herpes humano 6 linha de células MOLT-4 infectadas usado como controlo negativo [58].
reacção em cadeia da polimerase
amplificação de ADN alvo foi realizada usando 2 ul de ADN e mistura de 10 mM de Tris-HCl, pH 8,0 50 mM de KCl, 1,5 mM MgCl 2, 200 uM de dNTP, 1 pM de cada iniciador e 1,0 U de polimerase Taq (Hot Star, Qiagen, Alemanha), num volume final de 25 ul de mistura. O protocolo utilizado para a amplificação do gene EBNA-3C foi um ciclo a 95 ° C durante 15 min, seguido de 40 ciclos de desnaturação a 95 ° C durante 1 min, emparelhamento a 46 ° C durante 1 min e alongamento a 72 ° C durante 1 min e finalmente terminou com 5 min a 72 ° C. O protocolo utilizado para BamHI-F, BamHI-W1 /I1 e amplificação local XhoI foi um ciclo a 95 ° C durante 5 min seguido por 40 ciclos de desnaturação a 95 ° C durante 1 min, emparelhamento a 43 ° C durante 1 min e alongamento a 72 ° C durante 1 min e, finalmente, terminou com 5 min a 72 ° C. Electroforese em gel de agarose 2% e coloração com 0,5 ug /ml de brometo de etídio foi realizado para identificar os produtos de PCR.
Análise de restrição polimorfismo do comprimento do fragmento de ADN amplificado
produtos (15 ul) foram digeridos com 10 U de BamHI ou enzimas de restrição Xhol, de acordo com as instruções do fabricante e visualizados por electroforese em gel de agarose a 2% corado com 0,5 ug /ml de brometo de etídio e transferidas para uma membrana de nylon para a SBH.
hibridação Southern blot
Especificidade de PCR reacção foi confirmado por SBH. O ADN de electroforese foi transferido para uma membrana de nylon Hybond N + (Amersham Pharmacia Biotech, Reino Unido) por transferência capilar utilizando uma solução 0,4 N de NaOH. As membranas foram pré-hibridadas com tampão de hibridação durante 1 hora a 42 ° C. Após a adição da sonda, a hibridação foi realizada durante a noite a 42 ° C. Sondas de tipos A e B, e BamH I-F foram marcadas com Dig kit de marcação de oligonucleótido da extremidade 3 'e detectado por escavação kit de detecção luminescente (Boehringer Mannheim, Alemanha). Para a detecção do fragmento BamHI-Xhol I e ​​polimorfismo em LMP1, a hibridação foi realizada usando o kit de detecção e marcação directa ECL (Amersham Pharmacia Biotech, Reino Unido) de acordo com as instruções do fabricante.
Análise estatística A análise estatística foi
feito usando LogExact 7,0 software (um pacote estatístico para o procedimento de regressão com método exato); Cytel Estúdio 7.0.0 pacote (Cytel Software Corporation, 2005). O teste exato de análise logística binária foi realizado para comparar a proporção de casos EBV positivos entre adenocarcinoma gástrico. Sexo, grupos de idade (< 50, 50-69 e ≥ 70 anos), localização anatômica do tumor (antro, corpo e cárdia), invasão de tumor (serosa, outros) e classificação histológica de Lauren foram incluídos como variáveis ​​independentes. variáveis ​​multinomial foram divididos em N-1 | variáveis ​​binominal fictícios (n
foi o número de categorias). odds ratio com intervalo de confiança de 95% foi calculado para cada categoria. Erro Tipo 1 (α) foi de 0,05. Todos os valores de p foram em frente e verso.
Resultados
Foram examinados 273 cancros gástricos, incluindo 196 (72%) do sexo masculino e 77 (28%) do sexo feminino. A idade média foi de 57,3 ± 11,3 (SD) anos (intervalo: 24-90; mediana: 58). A maioria deles (108 casos; 66%) tinham entre 50 e 69 anos, 54 (20%) casos estavam sob 50 e os restantes tinham mais de 70 anos. Cento e trinta casos (48%) foram localizados em antro, e 64 (23%) e 71 (26%) casos foram localizados no corpo e na cárdia, respectivamente. Em 5 dos casos, a localização não foi definido e em 3 casos toda a parede gástrica foram envolvidos (linite plástica) que não foram incluídos na análise estatística. Como mostrado na tabela 2, a maioria dos casos eram do tipo intestinal (56%). Tabela 2 Distribuição de Eber 1-carcinomas gástricos positivos por tipo histológico e sexo
Histology1
Masculino
Feminino
total

EBER + /N2 (%)
EBER + /N (%)
EBER + /N (%)
intestinal
1/113 (1)
0/39 (0)
1/152 (1)
pap
0/11 (0)
0/3 (0)
0/14 (0)
tub1
0/36 (0)
0/11 (0)
0/47 (0)
tub2
1/50 (2)
0/16 (0)
1/66 (1)
muc
0/16 ( 0)
0/9 (0)
0/25 (0)
difusa
7/83 (8)
1/38 (3)
8/121 (7 )
por1
3/34 (8)
1/16 (6)
4/50 (8)
por2
4/40 (10)
0 /18 (0)
4/58 (8)
sig
0/9 (0)
0/4 (0)
0/13 (0)
1 pap: adenocarcinoma papilar; tub1: adenocarcinoma tubular bem diferenciado; tub2: adenocarcinoma moderadamente diferenciado; por1: adenocarcinoma sólida pouco diferenciado; por2: não sólido adenocarcinoma pouco diferenciado; sig: carcinoma de células anel de sinete; muc: carcinoma mucinoso; 2 Número total de casos em cada grupo (Baseado na sociedade de pesquisa japonês para câncer gástrico)
Prevalência de casos EBV positivos
EBER-1 foi detectada em nove em cada 273 casos (3%) que foram consideradas como EBV GC. O sinal foi restringida apenas para os núcleos de células tumorais, mas não foi encontrado em células não tumorais (Fig. 1). Figura 1 Um caso de EBV carcinoma positivo gasrtric. Adenocarcinoma moderadamente diferenciado tubular com formação ocasional Tubul (A); sinal positivo EBER nucleares em todas as células tumorais detectadas com hibridação in situ (B)
. Fatores associados com casos positivos EBV
Tabela 3 mostra as frequências de EBV-GC por idade, sexo, localização, histologia e invasão bem como o resultado de logística analysis.Table 3 resultado da análise logística
Variáveis ​​
EBER + /N1
(%)
OR2
95% CI2
Sexo Feminino

1/76
(1)
1 | referência
Homem
8/188
(4)
0,3
0,01-2,96
P
= 0,595
Idade
≥ 70
1/36
(3)
1 | referência
(3) 50-69
5/180
0,8
,08-44,62 Art < 50
3 /54
(6)
1,3
,08-81,25
P Compra de tendência = 1.0
Localização
superior
1/71
(1)
1 | referência
meio
5/64
(8)
6,0
,1-77,86
Lower
3/130
(2)
1.4
,63-296,7
P Compra de heterogeneidade = 1,64
Histologia
difusa
8/121
(7)
1 | referência
intestinal
1/152
(1)
0,08
,002-0,64
P = 0,009

Invasion
Muscle
3/33
( 9)
1 | referência
serose
6/222
(3)
3,6
,47-24,03
P
= 0,243
número 1Total em cada grupo; 2ou e intervalo de confiança de 95% foram obtidos a partir do teste exato de análise logística binária.
Sexo e idade
Oito de 188 (4%) casos do sexo masculino e 1 de 76 (1%) casos do sexo feminino foram EBV positiva. Embora tenha havido uma predominância do sexo masculino neste estudo, não foi estatisticamente significativa (p
= 0,5). Também não houve relação entre idade e EBV-GC (p
= 1).
Localização do tumor
De acordo com a localização anatômica, 5 out of 64 (8%) tumores do corpo, 1 em cada 71 (1 %) tumores cardíacos e 3 de 130 (2%) antral tumores foram EBV associado. Embora a maioria de EBV-GC foram localizados em dois terços superiores, não foi estatisticamente significativa (p
= 0,1).
Tipo histológico
baseado na classificação de Lauren, 8 out of 121 (7%) difusa casos do tipo foram EBV associados, mas apenas 1 de 152 tipo intestinal foi EBV positiva, o que foi estatisticamente significativa (p
= 0,009). Segundo a classificação japonesa, por2 e por1 foram os tipos histológicos predominantes em EBV-GC (Tabela 2), mas em relação ao baixo número de casos em cada grupo de análise estatística não pôde ser executada.
Invasion
Neste estudo não apenas 2 casos que foram limitados a submucosa e nenhum deles mostra EBER-1 do sinal em ISH. Assim, considerando o número baixo, estes casos não foram considerados na análise estatística. Não houve diferença entre os casos EBV positivos e negativos sobre a invasão de serosa e muscular própria (p
= 0,24).
Outros achados
O ponto digno de nota em nosso estudo foi o fato de que 6 de 9 EBV pacientes GCs nasceram entre "1928-1930". No entanto, a análise estatística não foi feito por causa do número baixo.
Genotipagem
O subtipo do genoma EBV foi determinada em todos os 9 casos. Todos os nossos casos eram do tipo 1. A região BamHI-F foi amplificado com sucesso em 8 de 9 de EBV-GCs, que seis deles mostrou protótipo F (Fig. 2). A amplificação de BamHI-I /ICG1 foi bem sucedida em todos os casos e, excepto um; Todos os casos foram "i" tipo (Fig. 3). Análise de polimorfismo do exão 1 do gene LMP1 revelou que 3 casos foram Xhol - e 6 casos foram Xhol + (Figura 4). Tabela 4 resumidos todos os dados demográficos, patológicos e genotípicas do EBV-GC neste study.Table 4 características clínico-patológicas e genéticas de EBV-GC

ano Nascimento
ano de diagnóstico
Idade
Sexo
lacation
Invasion
Histologia Lauren /OMS
EBNA-3 tipo A /B
tipo BamHI-F F /"f"
BamHI-I tipo I /"i"
XhoI +/-

1
1949
1981
32
Male
Lower
Muscle
Diffuse/por1
A
F
"i"
+
2
1929
1982
53
Male
Middle
Muscle
Diffuse/por1
A
F
"i"
-
3
1928
1983
55
Male
Middle
Serosa
Intestinal/tub2
A
F
"i"
+
4
1928
1983
55
Male
Middle
Serosa
Diffuse/por2
A
F
I
+
5
1940
1983
43
Female
Lower
Muscle
Diffuse/por1
A
F
"i"
-
6
1930
1986
56
Male
Middle
Serosa
Diffuse/por2
A
ND1
"i"
+
7
1928
1988
60
Male
Upper
Serosa
Diffuse/por1
A
F
"i"
+
8
1928
2001
73
Male
Middle
Serosa
Difuse/por2
A
"f'
"i"
-
9
1953
2002
49
Male
Lower
Seroasa
Diffuse/por2
A
"f"
"i"
+
determinada 1Não; tub2: moderadamente diferenciada adenocarcinoma por1: adenocarcinoma sólida pouco diferenciado; por2: adenocarcinoma não sólida pouco diferenciado
Figura 2 Resultado da hibridação Southern blot para a região BamHI-F. Quatro espécimes são vistas nesta figura, cada amostra foi carregada em pistas 2 com e sem enzima, respectivamente, a partir da esquerda. O primeiro espécime não foi amplificado nesta experiência. Os outros três espécimes tenham sido clivada pela enzima Bam-HI que significa que são de tipo selvagem F. (+: controle positivo; + /Enz: controlo positivo com a enzima; -: controle negativo).
Figura 3 Resultado do sul blot hibridação para a região /I1 BamHI-W1. Cada amostra foi carregada em pistas 2 com e sem enzima, respectivamente, a partir da esquerda. Em uma amostra não há nenhuma banda na segunda pista que sugere que o produto de PCR foi digerido, mas não conseguimos detectar as bandas fragmentadas desde que a banda original continha pequeno número de cópias de DNA, por isso, considerou-o como tipo "i". As amostras 2, 5 e 6 são cortados, o que significa que eles são do tipo "i". Polimorfismo de amostras 3 e 4 não foram determinadas neste experimento. (+: Controle positivo; + /Enz: controlo positivo com a enzima; -: controle negativo).
Figura 4 Resultado da XhoI polimorfismo em hibridação de Southern blot. Cada amostra foi carregada em pistas 2 com e sem enzima, respectivamente, a partir da esquerda. A primeira e a segunda amostras são clivados com a enzima que significa que são XhoI +. O terceiro é XhoI-. (+: Controle positivo; + /Enz: controlo positivo com a enzima; -: controle negativo).
Discussão
O presente estudo detectou EBV-GCs em 3% dos carcinomas gástricos e sugeriu que a maioria dos carcinomas gástricos em Irã são EBV-negativo. Não houve LELCs, os quais são bem conhecidos para estar fortemente associado com o EBV [59]. rendado, que é uma morfologia única no carcinoma gástrico precoce EBV-positivos [60], não foi visto em nosso estudo. Esta freqüência está entre as frequências mais baixas do mundo. Como mencionado acima, de acordo com a classificação da OMS, o norte do Irã é considerada como uma das regiões com alta frequência carcinoma gástrico no mundo [61]. Os estudos esparsos no Irã mostram também esse fato, exceto que eles mostram mais ou menos a homogeneidade em todo o país [48, 62, 63]. Assim, a baixa frequência EBV-GC no Irã suporta a hipótese anterior de que os países de alto risco para GC têm baixas taxas de EBV-GC [64]. Isso também confirma a crença de que é baixo na Ásia como a prevalência de 3% na Coreia [25], 6% no Japão [24], 6% na China [26], 5% na Índia [18], de 2% no Paquistão [29] e máximo de 10% na Malásia [27], Taiwan [21] e Cazaquistão [28]. No entanto, isso é muito menor do que a frequência Cazaquistão, (o nosso país vizinho) com muitas semelhanças nas condições personalizadas e socioeconômicos.
A prevalência de EBV-GC no carcinoma gástrico tipo difuso foi mais em nosso estudo, um fato que foi visto na maioria dos estudos da América Latina [16, 32] e alguns países da Ásia, como a Coreia [25], China [26] e na Índia [18]. No entanto, existem muitos estudos contraditórios que não apresentem qualquer relação neste conceito [15, 17, 19, 23, 33]. Koriyama et al [23] em seu estudo clássico proposto que há muitos outros fatores que têm efeito sobre a incidência de câncer gástrico tipo difuso, como idade, sexo e localização e os resultados conflitantes em diferentes estudos pode ser explicada pela diferença na distribuição desses fatores.
Embora a proporção de macho /fêmea foi de aproximadamente 4 em nosso estudo, não foi significativa na análise estatística. A ausência de preferência por sexo foi observado em outros estudos no México [32, 37] Chile [16] e uma área na China [38]. No entanto, devemos considerar que o baixo número de casos positivos em nosso estudo poderia ser a razão do resultado insignificante na análise. Enquanto isso, Koriyama et al [23] mostram que a preferência do género para o EBV é restrito para difundir tipo GC e não é visto no tipo intestinal. No entanto, em relação ao número reduzido dos nossos casos, não foi possível realizar a análise separadamente para cada tipo.
Aumento de câncer da porção superior do estômago, apesar de diminuição da incidência total de câncer gástrico é visto em muitos estudos em todo o mundo [ ,,,0],65, 66]. Há também muitas evidências de que esse tipo de câncer gástrico tem diferentes fatores de risco [67-69]. EBV é um deles [15-31]. Abdirad et al [70] também mostram que existe esse aumento no câncer de terço superior do estômago no Irã. No entanto, apesar da nossa expectativa, este estudo não mostrou qualquer preferência de EBV para terço superior ou no meio do estômago. É importante notar que, apesar de muitos estudos confirmatórios, neste contexto, também não existe tal relação em nossos países vizinhos, ou seja, o Cazaquistão [28] e na Índia [18].
EBV em nosso estudo não mostraram qualquer relação com a idade e profundidade de invasão. Alguns estudos indicam que não há tendência de EBV-GC para ocorrer em idade inferior [19, 26, 33, 38]. No entanto, Koriyama et al [23] revelou que apenas tipo intestinal de EBV-GC mostra esta preferência idade, e proposto que esta diferença de idade de exposição a co-factores específicos para cada um destes tipos é a razão provável.
Um dos interessante achados do presente estudo é o fato de que 6 de nossos 9 casos EBV-GC que foram selecionados aleatoriamente, nasceram durante o período entre 1928 e 1930. Embora não poderia realizar qualquer análise no que diz respeito ao baixo número de casos positivos, este achado parece importante uma vez que um estudo epidemiológico sugerem que a infecção pelo EBV na primeira infância pode estar relacionada com o desenvolvimento de EBV-GC na idade adulta [71]. Embora não temos nenhuma evidência, algumas hipóteses poderia ser considerada. Por exemplo, condições ou eventos específicos, levando à infecção EBV na primeira infância ou resultantes da exposição a alguns fatores específicos co-risco que podem ter existido por volta dos anos 1920. Por isso, propomos um estudo caso-controle com foco em carcinoma gástrico em pacientes nascido por volta do final de 1920 para comparar a prevalência do EBV nestes pacientes com os outros.
Genotipagem do vírus revelou que o tipo 1 é o tipo exclusivo de toda a a EBV-GC. A predominância do tipo 1 está de acordo com outros estudos [18, 45, 58, 40]. Tipo 2 é visto principalmente na África [40] e há uma crença de que é mais fraca do tipo 2 e é visto principalmente em pacientes imunodeficientes [40, 72]. O protótipo F na BamHI-F foi o tipo mais comum neste estudo. Este tipo tem uma distribuição mundial, exceto no sul da China, que "f" variante é prevalente e faz com carcinoma nasofaríngeo [43, 45]. Nossa conclusão é os mesmos estudos como semelhantes em cânceres gástrico, na Índia [18], Japão [73], e do Chile [58]. análise de polimorfismo região /I1 BamHI-W1 mostra que 90% dos nossos casos eram do tipo "i". Estudos anteriores revelaram que o tipo I é a mais prevalente na Ásia [45, 54] e digite "i" é a mais nos países ocidentais [46]. Este padrão de distribuição foi também observado em estudos semelhantes em EBV-GC [18, 45, 73]. No entanto, a nossa conclusão parece ser semelhante a países ocidentais como resultados Corvalan na Colômbia e no Chile [58].

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