Association mellan HER2-status i magcancer och kliniskt patologiska egenskaper: en retrospektiv studie med hela-vävnadssnitt

Association mellan HER2-status i magcancer och kliniskt patologiska egenskaper: en retrospektiv studie med hela-vävnadssnitt Bild Sammanfattning
Bakgrund
Gastric cancer diagnostiseras vanligen i ett framskridet stadium av sjukdom och behandlingsalternativ är gles. Trastuzumab godkändes nyligen för metastaserad eller lokalt avancerad karcinom som uppstår i magen eller i matstrupsövergången hos patienter med HER2-positiva tumörer. Men uppgifter om frekvensen av HER2-positiva fall bland brasilianska patienter är begränsade. Vårt mål var att karaktärisera HER2 protein och gen status i en rad brasilianska patienter med magcancer och att utvärdera dess samband med kliniskt patologiska data.
Metoder
Histologiska diabilder från 124 primära gastrectomies granskades och deras patologiska rapporter hämtas från filerna på en brasiliansk universitetssjukhus. Automatiserad immunohistokemi för HER2 utfördes på hel-vävnadssnitt från varje tumör. HER2-tvetydiga fall av immunohistokemi lämnades till automatiserad dubbel in situ
hybridisering för genförstärkning utvärdering. HER2-status konfronterades med kliniskt patologiska parametrar för att bedöma statistiskt säkerställda föreningar.
Resultat
Immunohistokemi analys visade att 13/124 fall (10,5%) var HER2-positiv (3+), 10/124 fall (8,1%) var tvetydig (2+) och 101/124 fall (81,4%) var negativa, är 7 fall 1+. Ingen av de tvetydiga fallen visade genamplifiering. Den totala HER2 positivitet takten var 10,5%. Det fanns ett samband mellan HER2 uttryck och Laurén tarm histologiska subtyp (P
= 0,048), och att måttligt differentierade tumörer (P
= 0,004) och närvaro av lymphovascular invasion (P
= 0,031). Inget samband sågs mellan HER2-status och tumör topografi.
Slutsatser
Inför uppgifter som publicerats av andra författare, kan den lägre procentsatsen av HER2-positiva fall återfinns i vår serie delvis förklaras av den lägre frekvensen av tumörer som uppstår på den matstrupsövergången i jämförelse med distala gastric karcinom i brasilianska patienter. Detta skulle också kunna redogöra för bristen på statistiskt signifikant samband mellan HER2-status och tumör topografi i vår studie.
Nyckelord
HER2 Magcancer Immunohistokemi Genamplifiering kliniskt patologiska egenskaper Bakgrund Allt om en miljon nya fall av magcancer (GC ) beräknas inträffar varje år i världen, vilket motsvarar 8% av alla cancerdiagnoser globalt [1, 2]. GC anses också vara den näst vanligaste orsaken till cancerrelaterade dödsfall i världen och över 700.000 dödsfall förväntas uppstå på grund av denna sjukdom årligen [1, 3]. Dock är fördelningen av patienter med GC i olika delar av världen inte homogen: över 70% av nya fall och dödsfall inträffar i utvecklingsländerna. De högsta incidensen finns i östra Asien, Östeuropa och Sydamerika [1]. National Institute of Cancer i Brasilien uppskattar att GC omfattar mer än 5% av alla maligniteter i detta land [4]. Alternativ
Behandling för GC är i allmänhet begränsade, eftersom det är oftast diagnostiseras i ett framskridet stadium av sjukdomen och därmed fem års överlevnad är genomgående låg, cirka 20% i de flesta delar av världen [2, 5]. Enligt ToGA studien, en nyligen genomförd fas III internationell randomiserad studie, behandling i kombination med kemoterapi och trastuzumab (TZB) har förbättrats avsevärt överlevnaden hos patienter med HER2-positiv avancerad GC [6]. TZB är en rekombinant monoklonal antikropp targeting HER2, ett transmembranprotein som tillhör familjen av humana epidermala tillväxtfaktorreceptorer [7]. HER2 intracellulära domänen visar tyrosinkinasaktivitet, med förmåga att generera intracytoplasmiska sekundära budbärare som samordnar nukleära uttrycket av gener associerade med angiogenes, cellproliferation, och överlevnad [8]. Överuttryck av HER2-proteinet, en produkt av en proto-onkogen beläget på kromosom 17, har associerats med karcinogenes och tumörprogression av bröst, äggstock, spottkörtlar, prostatan och mag-tarmkanalen cancer [9].
Baserat på ToGA trial resultat, har de internationella tillsynsmyndigheter nyligen godkänt användningen av TZB i HER2-positiv metastaserad eller lokalt avancerad karcinom som uppstår i magen eller i matstrupsövergången (GEJ) [10]. Karcinom från lämpliga patienter för behandling med TZB måste presentera HER2-positiv status, intygas av proteinuttryck (poäng 3+) genom immunhistokemi (IHC) eller genamplifiering genom in situ
hybridisering (ISH) för tumörer med osäkra IHC resultat (poäng 2+) [11, 12]. Sedan dess har många studier fokuserat på att presentera frekvensen av HER2-positiv GC i olika populationer, med en stor variation på metoder som används för protein och gen upptäckt. Därför resultat anmärkningsvärt variera från 2 till 45% av HER2 överuttryck i GC-serien [13-17]. En stor systematisk genomgång med data från 49 studier fann en medianhastigheten 18% av HER2 positivitet i 11,337 patienter med GC [18]. Ändå förekomsten av HER2-positiva fall bland brasilianska patienter är okänd, med få uppgifter publicerade [19-26]. Eftersom den brasilianska folkhälsosystemet ännu inte har godkänt användningen av TZB för GC behandling i detta land, anser vi att upptäckten av HER2-positiv GC i brasilianska patienter kan ge vetenskaplig grund för fastställandet av nya folkhälsopolitiken och definiera bättre klinisk protokoll för att förbättra behandlingen av dessa patienter i Brasilien.
Därför, i denna studie, som syftar vi att karakterisera HER2 uttryck i GC i en rad brasilianska patienter, med hjälp av hela vävnadstumörsnitt från kirurgiska prover, och att utvärdera föreningens mellan HER2 protein och genstatus med kliniskt patologiska data.
metoder
aktuella studien godkändes av etikkommittén vår institution (Comité de Etica e pesquisa COEP-UFMG) under CAAE protokoll nummer 32898114.9.0000.5149. Skriftligt informerat samtycke erhölls i enlighet med de institutionella riktlinjerna.
Vi studerade 142 konsekutiva patienter som genomgick primär gastrektomi mellan 2007 och 2011 vid kliniker Hospital, Federal University of Minas Gerais, Brasilien, vars histopatologisk diagnos var GC. Ingen av patienterna hade fått neoadjuvant kemoterapi eller någon annan typ av behandling för sin tumör före operation. Alla 142 fall hade sina patologiska rapporter hämtas och för att bekräfta diagnosen GC, var den ursprungliga hematoxylin-eosin färgade diabilder samtidigt granskas av två patologer (RSL och MMDAC), varav en är en expert på gastrointestinal patologi (MMDAC) . Kliniska data (patienternas ålder och kön) och patologiska parametrar (tumör topografi, maximal tumör diameter, Scen, histologiska kvalitet och subtyp, förekomst av lymphovascular och blodkärlsinvasion) registrerades. Tumörer delades in i två grupper beroende på gastrisk topografi: distala och proximala tumörer, inkluderade den senare kategorin karcinom från GEJ. Kriterierna TNM-systemet och recomendations från den 7: e upplagan av den amerikanska kommittén för cancer Staging Manual användes för tumör staging [27, 28]. Indexet av körtelbildning och cytologiska pleomorfism ansågs för histologisk gradering i väl, måttligt eller dåligt differentierade tumörer. Lauréns histologiska klassificeringssystem användes för tumörsubtyp [29].
New 4 um tjocklek av hela vävnadssnitt erhölls från formalinfixerade paraffin inbäddade tumörprover och överlämnas till automatiserad IHC, med hjälp av ett riktmärke XT ™ plattform (Ventana Medical Systems , Arizona, USA) och förspädda primära kanin monoklonal antikropp anti-HER2 /neu (4B5 klon). Alla Glasen subsequentially motfärgades med hematoxylin. En pre-testade HER2-positivt prov bröstcancer användes som extern positiv kontroll. Arton fall inte innehåller tillräckligt med tumörvävnad för efterföljande IHC protokoll och uteslöts från denna studie, vilket resulterar i 124 förekommande fall för analys.
Tre patologer (RSL, HG och CBN) allt på en gång analyserat immun diabilder med hjälp av en multi-head mikroskop och fick en konsensus poäng för HER2 uttryck enligt Hofmanns och Rüschoff rekommendationer för GC kirurgiska prover [11, 12]. Fallen kategoriseras i fyra grupper (0, 1 +, 2+ och 3+), beroende på förlängningen och intensiteten av uttrycket: 0, ingen reaktivitet eller membran reaktivitet i < 10% av cellerna; 1+, svag /knappt märkbar membran reaktivitet i > 10% av cellerna, och cellerna är reaktiva endast i en del av deras membran; 2+, svag till måttlig, komplett eller basolateral membran reaktivitet i > 10% av cellerna; 3+, stark, komplett eller basolateral membran reaktivitet i > 10% av celler [11]. Endast en membranexpressionsmönster var lämplig för utvärdering. Fallen inkluderas i 3+ kategorin betraktades som positiva för HER2-proteinöveruttryck, medan 0 och 1 + fall betraktades som negativt. Fodral gjorde som 2+ ansågs osäker för HER2 proteinuttryck och nya 4 um tjocklek grossist vävnadssnitt lämnades till silverljusfält in situ
hybridisering (SISH) med användning av samma automatiserade plattform (BenchMark XT ™) och INFORM HER2 Dual ISH DNA Probe Cocktail analys (Ventana Medical Systems, Arizona, USA). HER2 Mössor och kromosom 17 (CEP17) kopietal räknades i 20 icke överlappande kärnor samtidigt av två observatörer (RSL och CBN). HER2
iska profilen definieras som icke-förstärkt om medelvärdet HER2
/CEP17 förhållandet var < 2,0 och förstärks om HER2
/CEP17 förhållandet var ≥2.0. Om förhållandet föll mellan 1,8 och 2,2, har ytterligare 20 kärnor gjorde och den totala kvoten beräknas. IHC 2+ fall visar genamplifiering av SISH- och IHC 3+ fallen både vara positivt för HER2 slutliga status [11, 12].
Den statistiska analysen genomfördes med hjälp av SPSS version 19.0 programvara (SPSS Inc., Chicago, IL ). Pearson chi-square test användes för att korrelera IHC resultat och HER2 slutliga status med kliniskt patologiska parametrar. Alla P
värden var dubbelsidig, och P Hotel < . 0,05 ansågs statistiskt signifikant
Resultat och deras samarbete med HER2 slutliga status och IHC poäng
kliniskt patologiska egenskaper visas i tabell 1. Patientens ålder vid diagnos varierade från 28 till 92 år (median: 62,33 år), och det fanns 64 män (51,6%) och 60 kvinnor (48,4%) bland 124 patienter som ingår i studien. Tumörer identifieras företrädesvis vid den distala magen (80,6%) i jämförelse med tumörer som uppstår i den gastriska magmunnen eller från GEJ. Tumörstorlek varierade mellan 0,5 och 14,0 cm (genomsnitt, 5,31 cm) och avancerade tumörer (PT2, PT3 och PT4 kategorier) stod för 107 fall (86,3%). Enligt histologisk gradering, 13 fall (10,5%) var väl differentierade, 45 fall (36,3%) måttligt differentierade, och 66 fall (53,2%) dåligt differentierade tumörer. Laurén tarm histologiska subtypen var oftast diagnostiseras, som står för 61 fall (49,2%). Diffusa och blandade subtyper observerades i 21 (16,9%) och 33 (26,6%) fall, respektive. De nio återstående fallen (7,3%) klassificerades som obestämt. Lymphovascular invasion återfanns i 94 fall (75,8%), och 85 patienter (68,5%) hade lymfkörtel metastas vid diagnos, med ett genomsnitt på 9,27 positiva noder per case (intervall 1 till 63 positiva noder) .table en associering mellan HER2 status och kliniskt patologiska parametrar
Totalt
HER2-positiv
HER2 negativa
P
värde
HER2 (3 +)
vid HER2 (2+)
HER2 (0, 1 +)
P
värde
n =
124 ( %)
13 (10,5)
111 (89,5)
13 (10,5)
10 (8,1) katalog
101 (81,4)
Ålder vid diagnos
0,803
0.590
≥60 år
82 (66,1) katalog 9
73
9
8
65 Hotel < 60 år
42 (33,9) 4
38
4 2
36
Kön
0,865
0,459
Man
64 (51,6) katalog 7
57
7
7
50
Kvinna
60 (48,4) Review 6
54
6
3
51
Tumör topografi
0.720
0,709
Distal mage
100 (80,6) katalog 10
90
10
9
81
Proximal mage /GEJ
24 (19,4) katalog 3
21
3 1
20
Histologisk subtyp
0,048
0,009
Intestinal
61 (49,2) Review 11
50
11
9
41
Diffusa
21 (16,9)
0
21
0
0
21
Blandad
33 (26,6) 2
31
2 1
30
Unditermined
9 (7,3)
0 9
0
0
9
Histologisk klass
0,004 Hotel < 0,001
väl
13 (10,5) 4
9
4 1
8
Måttligt
45 (36,3) katalog 7
38
7
8
30
Dåligt
66 (53,2) 2
64
2 1
63
Lymphovascular invasion
0,031
0.060
Positiv
94 (75,8) katalog 13
81
13
6
75
Negativ
30 (24,2) Review 0
30
0 4
26
blodkärlsinvasion
0,395
0,170
Positiv
44 (35,5) katalog 6
38
6 1
37
Negativ
80 (64,5) katalog 7
73
7
9
64
pT status
0,271
0,165
PT1
17 (13,7) Review 0
17
0 1
16
pT2
32 (25,8) Review 3
29
3 2
27
pT3
69 (55,6) katalog 10
59
10
5
54
pT4
6 (4,9) Review 0
6
0 2
4
pN status
0,453 0,762
PN0
39 (31,5) 2
37 2
4
33
PN1
46 (37,1)
7 39
7
4
35
pN2
24 (19,3) katalog 3
21
3 1
20
PN3
15 (12,1) Review 1
14 1
en
13
pM status
0,548
0,705
PM0
121 (97,6) katalog 13
108
13
10
98
PM1
3 (2,4) katalog 0
3
0
0
3
Bold siffror representerar P
värden med statistisk signifikans
Immunhistokemisk analys visade 13 positiva fall (3+; 10,5%) för HER2-proteinöveruttryck (Fig 1a), 10 tvetydiga fall (2 +,.. 8,1%) (Fig 1b) och 101 negativa fall (81,4%), varav 7 skårade 1+ (5,6%) (Fig . 1c). Medianåldern vid diagnos tenderade att öka i enlighet med HER2-status (negativa, 61,76 år, tvetydig, 66,3 år, och positiv, 68,58 år), även om detta inte nådde statistisk signifikans. Ingen av patienterna i 3+ kategorin IHC var yngre än 46 år och den äldsta patienten i serien (en 92-årig kvinna) var bland dem. Det fanns inget samband mellan HER2 uttryck och patienternas kön. Fikon. 1 Immunhistokemisk analys av HER2 uttryck i mag karcinom med hjälp av 4B5 antikroppen i sin helhet-vävnadssnitt. (A) en HER2-positiv fall (3+); (B) en HER2-tvetydiga fall (2+); (C) en HER2-negativ fall (1+); (D) intratumoral protein heterogenitet i en HER2-positiv fall (3+). (AC: x400 fält förstoring; D: x200 fält förstoring) Review Det fanns ett positivt samband mellan HER2-proteinexpression och väl till moderatly differentierade tumörer (P
< 0,001), såväl som med Lauréns intestinal subtyp (P
= 0,009).
tumörer uppstår i den distala magen stod för 76,9% av IHC 3+ fall medan 23,1% där den hittades i gastric cardia eller i GEJ, men denna variation var inte statistiskt signifikant. Ingen IHC 3+ tumör visade en diffus eller obestämd morfologi och endast två (15,4%) ansågs dåligt differentierade karcinom. Varje IHC 3+ tumör visade lymphovascular invasion och de var alla diagnosen i ett framskridet stadium av sjukdomen, främst i pT3 kategori (76,9%). Elva fall (84,6%) var positiva för lymfkörtel metastas, med ett genomsnitt på 7,5 positiva noder per mål. Dock ingen statistisk signifikans observerades mellan HER2-proteinöveruttryck och PT, pN eller PM status.
Jämfört med IHC 3+ fall, HER2-tvetydiga tumörer (2+) visade en något liknande profil när morfologiska uppgifter har beaktats. Inga fall visade diffus eller obestämd histologi, med en dominans av tarm subtyp (9 fall, 90,0%) och måttligt differentierade tumörer (8 fall, 80,0%). Majoriteten av tumörer i den här inställningen äventyras även den distala magen och fick diagnosen i ett framskridet stadium av sjukdomen (9 fall 90,0%). Det fanns emellertid en minskning av andelen fall som uppvisar lymphovascular invasion och lymfkörtel metastas (6 fall, 60,0%) i jämförelse med siffror som har hittats bland IHC 3+ fall (13 fall, 100,0% och 11 fall, 84,6%, respektive) .
HER2-negativ karcinom (core 0 och 1+) samman alla tumörer med en diffus eller obestämd morfologi samt majoriteten av de med en dåligt differentierad histologiska grad och tidigt stadium av sjukdomen vid diagnos.
IHC 2 + fall överlämnades till sish men ingen genamplifiering upptäcktes. Därför fall med en slutlig HER2-positiv status var uteslutande består av IHC 3+ tumörer, vilket motsvarar 10,5% av alla GC i denna serie. HER2 positivitet var associerad med tarm subtyp (P
= 0,048), och att måttligt differentierade tumörer (P
= 0,004) och närvaro av lymphovascular invasion (P
= 0,031).
Beträffande intratumoral HER2 protein heterogenitet, förlängningen av IHC 3+ områden varierade från 10 till 99% av positiva neoplastiska celler (Fig. 1d). Det fanns också en variation i utvidgningen av HER2 immunoreaktiva områden i tvetydiga kategorin, som sträcker sig från 10 till 40% av tumörceller. I båda kategorierna, var intratumoral protein heterogenitet mestadels påträffats hos blandad typ karcinom, där HER2 uttryck starkt korrelerade med intestinal-typ områden.
Bortsett från deras HER2 poäng, visade många fall en cytoplasmisk immunoreaktivitet i normala magslemhinna celler (87 fall , 70,2%), metaplastiskt epitel (30 fall, 24,2%) och foki
av dysplasi (24 fall, 19,4%) (Fig. 2). Detta mönster av expression sågs i både metaplastiskt och dysplastiska epitel, trots den typ av metaplasi eller graden av dysplasi. Kärn uttryck ofta ses bland diffusa typ karcinom, men alla dessa immun områden inte beaktats för poängsättning av HER2 immunhistokemisk profil. Fikon. 2 möjliga fallgropar i immunhistokemisk analys av HER2 proteinuttryck med hjälp av 4B5 antikropp. Cytoplasmatisk icke specifik färgning i normal foveolar magslemhinna (till vänster) och i fokus
av gastric höggradig dysplasi (höger) (x200 fält förstoring) katalog Diskussion
I vår studie fann vi en slutlig HER2- positiv status 10,5%. Den totala HER2 positivitet priset som hittats i den ToGA studien var 810 av 3.665 patienter (22,1%) [6]. Dessa siffror representerar en av de största uppsättningarna av HER2 testdata i GC prover, erhållna från patienter från 24 olika länder i Asien, Europa och Latinamerika. Även 22,1% står för mer än dubbelt så mycket positiva tumörer vi hittade i vår serie, den ToGA rättegång HER2 positivitet screening kriterier ingår samtliga fall med proteinuttryck med IHC (3+ och 2 + fall) eller genamplifiering av ISH ensam. Närmare uppgifter om HER2-testning i ToGA studie har nyligen publicerats avslöjar att just 610 fall av 3.665 tumörprover (16,6%) var i själva verket anses HER2-positiv, antingen genom att göra poäng IHC 3+ eller IHC 2+ med genamplifiering genom fluorescens in situ
hybridisering (FISH) [30]. En post hoc
undersökande analys slutsatsen att patienter i dessa kategorier var de som helt gynnades mest av behandlingen med TZB [6]. Således, den exakta procentsatsen av patienter lämpliga för behandling med TZB enligt HER2 screening utförs på ToGA försöket var 16,6% och när IHC resultat anses ensam, endast 398 fall (10,9%) var faktiskt HER2-positiv (3+) [30 ]. I vår studie, eftersom ingen IHC 2+ fall visade genamplifiering genom SISH, fann vi en IHC 3+ hastighet och en slutlig HER2-positiv status 10,5% GC.
I brasilianska patienter tenderar att uppstå i antrum, i samband med Helicobacter pylori
kronisk infektion, därför är vår serie består huvudsakligen av karcinom i distala magen (80,6%). Eftersom HER2 uttryck har kraftigt i samband med GC i den övre magmunnen och GEJ [17, 30-33], förväntade vi oss att hitta en ännu lägre positivitet talet bland våra fall. Toga provresultat visade en skillnad i HER2-positivitet priser mellan Europa /Asien och Central- /Sydamerika (23,8 respektive 16,1%, inklusive all fisk-positiva och IHC 3+ fall). Författarna förknippas kontrasterande resultat som på grund av det lägre antalet patienter screenas i Latinamerika (484 av 3.665 patienter) i stället för en möjlig variation i tumörbiologi [30]. Tyvärr, vi kunde inte hitta information som särskilt om HER2 uttryck i GC av brasilianska patienter inskrivna i ToGA studien. Om kors data mellan tumör topografi och patienternas ursprungsländer kan hämtas, kan det också bidra till att förklara olika HER2-positiva GC priser i Latinamerika.
I likhet med våra resultat, i en nyligen stor europeisk serie [34], såväl som i en japansk kohort av 1,461 patienter [35], var det ingen skillnad i HER2-positivitet mellan proximala och distala gastriska tumörer. Men två stora kinesiska serien [17, 33] nyligen visade signifikant högre HER2 uttryck i proximal GC, i samförstånd med fynd ToGA försöks [30] och med resultaten från en serie av 2.798 sydkoreanska patienter [32]. Författarna har inneburit att intestinal typ cancer är oftast vanligare i GEJ och, eftersom olika etiologier kan spela en roll i cancer av tumörer från dessa två platser, kan detta delvis motivera distinkta HER2 uttryck priser enligt tumör topografi [30]. Förutom den genetiska anor enligt etnicitet, kan flera gastric carcinogenes vägar i hög grad påverkas av kostvanor och kronisk Helicobacter pylori
infektion [3]. Även om detta har sannolikt också ett visst inflytande på HER2-positivitet satser som finns i olika populationer med GC, förhållandet mellan dessa faktorer och HER2 uttryck är okänd, med några papper publicerats [36, 37].
Antalet IHC 3+ fall hittades i vår studie kan delvis förklaras av det faktum att hela-vävnadssnitt uteslutande användes för HER2 utvärdering, i stället för endoskopiska biopsier. En nyligen genomförd studie parade primära gastrectomies och deras endoskopiska biopsier att jämföra HER2 uttryck poäng och hittade en samstämmighet på endast 57%, främst på grund av intratumoral HER2 heterogenitet [38]. HER2 genetisk heterogenitet av ISH har tidigare visats på bröstcancer, men det verkar vara en mer komplex fråga om GC exemplar [39]. Proteinuttryck heterogenitet av IHC, vanligen kallat variabilitet i immunohistokemisk intensitet och utvidgning av HER2-positiva områden, är också ett problem som i hög grad skulle kunna påverka urvalet för HER2-testning i GC. I själva verket har HER2 uttryck heterogenitet visats inte bara av vår studie, men även av andra författare [39, 40], bland annat en studie omfattande 2.727 gastrectomies [32]. Som ett resultat kan hela-vävnadssnitt som erhållits från utskurna primära gastriska tumörer har en större representation av olika underkloncancercellpopulation som kan bidra till att undvika falskt negativa resultat på grund av HER2 heterogenitet. Eftersom patienter med lokalt avancerad eller metastaserande GC kanske inte genomgå primär gastrektomi, hela-vävnadssnitt är inte alltid tillgängliga och andra GC prov bör användas i stället, upp frågan om vilka är bäst lämpade för HER2-testning: endoskopiska biopsier kontra
metastaser. För endoskopiska biopsier, är rekommendationen ett lönsamt antal representativa tumörfragment (helst 6-8) och, om möjligt, bör patologen även utföra HER2-testning på ett annat prov när ett negativt resultat återfinns på en tumör endoskopisk biopsi [40].
Därutöver har GC prover från ToGA försöket testas för HER2 expression med HercepTest kit, som använder sig av en polyklonal kanin-anti-HER2-antikropp [6], medan en kanin monoklonal antikropp (4B5) användes i vår studie. Andra studier har rapporterat lägre känslighet priser för HercepTest jämfört med 4B5 klon för detektion av HER2-proteinuttryck [15, 41, 42]. Detta skulle också kunna redogöra för liknande IHC 3+ Data procent av fallen finns i vår serie och på ToGA rättegång, trots dominansen av tumörer från den distala magen hos våra patienter.
HER2 uttryck i brasilianska patienter med GC är mycket begränsad och det finns en stor variation på publicerade resultat. De första två studierna någonsin genomförts i Brasilien fann en HER2 överuttryck på 12 och 5,4%, inklusive IHC 3+ och 2 + fall adderas [23, 24]. Dock betygs betyget för bröstcancer som används för HER2-status bedömning, där hela cellmembranet bör färgas, och inte bara i sidled eller basolaterala väggar, vilket tyder på underskattning av HER2 positivitet. I nyare forskning med specifika HER2 poäng kriterier för GC, varierade IHC 3+ fall från 0,8% till 11,6% [19-22, 25, 26]. Studier som visar de lägsta priserna (0,8%, 3% och 6%) som används tumörvävnads microarrays (TMAS) erhållna från kirurgiska prover och andra anti-HER2 antikroppar i stället för 4B5 [19, 20, 22]. Dessa resultat är svåra att jämföra med vår på grund av metodskillnader, särskilt när TMA och tumörproteinuttryck heterogenitet konfronteras. Således, TMA kan utgöra prov mer liknar endoskopiska biopsier snarare än till större sektioner hela-vävnad från primär gastrectomies, som användes i vår studie.
Våra resultat bekräftar aktuell litteratur rön om brasilianska patienter med GC testas för HER2 uttryck med hjälp av en mycket känsliga anti-HER2-antikropp i hel-vävnadstumörsnitt. I själva verket, en färsk analys från en brasiliansk Cancer Center jämförde prestanda HercepTest, SP3 och 4B5-antikroppar mellan hel-vävnadssnitt och TMA i en serie av 199 gastrectomies [21]. Författarna fann högsta HER2 positivitet hastighet med samma parametrar i vår studie: 4B5 antikropp i hela vävnadstumörsnitt (11,6%), ett värde som mest liknar vår upptäckt (10,5%). Det lägsta HER2 positivitet hastighet identifierades bland TMA och HercepTest kit (3%) [21].
Trots den högre känsligheten hittade med 4B5-antikroppen, har vissa författare även rapporterat omfattande cytoplasmatisk bakgrundsfärgning av mag foveolar skiktet och foci
av intestinal metaplasi /dysplasi, som kan ses i vår studie, vilket tyder på en inneboende klon egenskap snarare än ett metodproblem [15, 21, 41, 42]. I själva verket har HER2-färgning av dysplastiska epitel korrelerats till genamplifiering genom ISH [43]. Även om det fanns några svårigheter i att särskilja HER2-positiv neoplastiska celler från dessa områden, betonar vi att färgningen av den senare inte måste beaktas när scoring HER2 uttryck.
Fram skrivandet av föreliggande manuskript författarna kunde bara hämta tre andra studier om ISH för genamplifiering detektering i GC prover från brasilianska patienter [19, 21, 25]. Begnami et al. fann en total förstärkning på 8% med fisk, men andelen IHC 2+ förstärkta fall nämndes inte [19]. I likhet med våra resultat, gjorde en annan grupp inte hitta några förstärkta fall bland IHC 2+ tumörer, men fisk var den använda metoden [25]. Förutom vår studie endast tillämpas en annan silver bright dubbla ISH i IHC 2+ fall [21]. Resultaten visade ett brett spektrum av förstärkningssatser (från noll till 100%), i enlighet med den primära antikroppen som används för IHC och vävnadsprov (avsnitt hel-vävnad kontra
TMAS). 4B5 antikropp på 198 hela-vävnadssnitt avslöjade 20 fall med en tvetydig HER2 poäng (10,1%) av vilka endast sex fall (30%) visade genamplifiering av SISH [21]. Procentandelen av fallen med en slutlig HER2-positiv status var 14,6%, en något högre takt än den vi upptäckt, som kan vara delvis på grund av den lägre frekvens av distala GC (43,2%) i sin serie. De har kommit fram till att den mest exakta IHC metod för att utvärdera HER2 uttryck i GC var att använda 4B5 antikroppen på hel-vävnadssnitt [21], vilket var exakt den metod som används i vår studie.
Dessutom fann vi en association mellan HER2-positiv tumörer och vissa patologiska parametrar, såsom Laurén tarm subtyp (P
= 0,048), och att måttligt differentierade tumörer (P
= 0,004) och förekomst av lymphovascular invasion (P
= 0,031). Tarm subtyp har visat sig vara den patologiska drag mest alltid förknippas med HER2-positivitet i flera studier [17, 32, 34, 35, 44, 45], inklusive ToGA rättegång [30] och en del med brasilianska patienter [19, 22 , 23, 26]. Eftersom HER2 positivitet förväntas finnas på intestinal-mutation, vi starkt rekommenderar att när det handlar om en blandad typ tumör, områden som visar en intestinal morfologi bör väljas för HER2 poäng.
Association of HER2 positivitet med histologiska grad och närvaro av lymphovascular invasion har också rapporterats av vissa författare [19, 25, 31, 46], men inte av andra [20, 47].

• Magsond införande under direkt syn med hjälp av kungen Vision ™ videolaryngoskop: en randomiserad, prospektiv, klinisk trial
• Korrelation mellan uppenbara diffusionskoefficienter och HER2-status i gastric cancer: pilot study