Associação entre o estado HER2 no câncer gástrico e as características clinicopatológicas: um estudo retrospectivo utilizando secções de tecido inteiro

Associação entre o estado HER2 no câncer gástrico e as características clinicopatológicas: um estudo retrospectivo utilizando secções de tecido inteiro de Abstract
Fundo
O câncer gástrico é geralmente diagnosticada em um estágio avançado de opções doença e do tratamento são escassos. Trastuzumab foi recentemente aprovado para carcinomas metastáticos ou localmente avançados constituídos no estômago ou na junção gastroesofágico em pacientes com tumores positivos para HER2. No entanto, os dados sobre a frequência de casos de HER2-positiva entre os pacientes brasileiros são limitadas. Nosso objetivo foi caracterizar a proteína HER2 e estado do gene em uma série de pacientes brasileiros com câncer gástrico e avaliar sua associação com os dados clínico-patológicos.
Métodos
lâminas histológicas de 124 gastrectomias primários foram revistos e os seus relatórios patológicos foram recuperados a partir os arquivos em um hospital universitário brasileiro. imunoistoquímica automatizada para HER2 foi realizada em secções de tecido inteiro de cada tumor. casos HER2-equívoca por imuno-histoquímica foram submetidos a dupla automatizada in situ
hibridação para avaliação amplificação do gene. status de HER2 foi confrontado com os parâmetros clínico para avaliar associações estatisticamente significativas.

Resultados da análise de imuno-histoquímica revelou que 13/124 casos (10,5%) eram HER2 positivo (3+), 10/124 casos (8,1%) foram equívoca (2+) e 101/124 casos (81,4%) foram negativos, sendo 7 casos 1+. Nenhum dos casos duvidosos mostrou amplificação do gene. A taxa global de expressão de HER2 foi de 10,5%. Houve uma associação entre a expressão de HER2 e subtipo histológico intestinal de Lauren (P
= 0,048), tumores bem diferenciados para moderadamente (P
= 0,004) e presença de invasão linfática (P
= 0,031). Não foi encontrada associação entre o estado HER2 e topografia do tumor.
Conclusões
Confrontado com os dados publicados por outros autores, a menor percentagem de casos HER2-positivo encontrada em nossa série pode ser parcialmente explicado pela menor frequência de tumores que se colocam à a junção gastroesofágico em comparação com os carcinomas gástricos distais em pacientes brasileiros. Isto também poderia explicar a falta de associação estatisticamente significativa entre o estado HER2 e topografia do tumor em nosso estudo.
Palavras-chave
HER2 gástrica câncer Gene Imunohistoquímica amplificação características clínicopatológicos fundo
Cerca de um milhão de novos casos de câncer gástrico (GC ) estima-se que ocorrem cada ano em todo o mundo, o que corresponde a 8% de todos os diagnósticos de cancro em todo o mundo [1, 2]. GC também é considerado a segunda principal causa de mortes relacionadas ao câncer em todo o mundo e mais de 700.000 mortes são esperadas para ocorrer devido a esta doença anualmente [1, 3]. No entanto, a distribuição dos pacientes com GC em diferentes partes do globo não é homogênea: mais de 70% dos novos casos e mortes ocorrem em países em desenvolvimento. As taxas de incidência mais elevadas são encontradas no leste da Ásia, Europa Oriental e América do Sul [1]. O Instituto Nacional de Câncer do Brasil estima que GC compreende mais de 5% de todas as neoplasias malignas neste país [4]. Opções de tratamento para
GC são geralmente limitados, uma vez que geralmente é diagnosticada em um estágio avançado da doença e, portanto, a taxa de sobrevivência de cinco anos é consistentemente baixa, em torno de 20% na maioria das regiões do mundo [2, 5]. De acordo com o estudo toga, um estudo de fase III randomizado internacional recente, o tratamento de combinação de quimioterapia e trastuzumab (TZB) melhorou significativamente a sobrevivência em pacientes com GC avançado HER2-positivos [6]. TZB é um anticorpo monoclonal recombinante segmentação HER2, uma proteína transmembranar que pertence à família de receptores do factor de crescimento epidérmico humano [7]. HER2 domínio intracelular mostra a actividade de tirosina-cinase, capazes de gerar segundos mensageiros intracitoplasmáticas que coordenam expressão nuclear de genes associados com a angiogénese, proliferação celular, sobrevivência e [8]. A sobre-expressão da proteína HER2, um produto de um proto-oncogene situado no cromossoma 17, foi associado com a carcinogénese e progressão do tumor da mama, ovário, glândula salivar, próstata e cancros do tracto gastrointestinal [9]. Com base no ensaio
ToGA resultados, as agências reguladoras internacionais aprovaram recentemente o uso de TZB em metastático HER2-positivo ou carcinomas localmente avançados que surjam no estômago ou na junção gastroesofágico (JGE) [10]. Carcinomas de pacientes elegíveis para tratamento com TZB deve apresentar o status HER2-positivo, atestada pela superexpressão da proteína (escore 3+) por imuno-histoquímica (IHQ) ou amplificação do gene por in situ
hibridação (ISH) para tumores com resultados duvidosos IHC (pontuação 2+) [11, 12]. Desde então, muitos estudos têm-se centrado em apresentar a frequência de GC HER2-positiva em diferentes populações, com uma ampla variação de métodos utilizados para proteínas e detecção do gene. Portanto, os resultados variam extraordinariamente 2-45% de sobreexpressão de Her2 em série GC [13-17]. Uma grande revisão sistemática incluindo dados de 49 estudos encontraram uma taxa média de 18% da expressão de HER2 em 11,337 pacientes com GC [18]. No entanto, a prevalência de casos HER2 positivos entre os pacientes brasileiros permanece desconhecida, com poucos dados publicados [19-26]. Desde que o sistema de saúde pública brasileiro ainda não aprovou o uso de TZB para o tratamento GC neste país, acreditamos que a detecção de GC HER2-positiva em pacientes brasileiros pode fornecer uma base científica para o estabelecimento de novas políticas de saúde pública e definir melhor clínica protocolos para melhorar o tratamento desses pacientes no Brasil.
Portanto, no presente estudo, que teve como objetivo caracterizar a expressão HER2 no GC em uma série de pacientes brasileiros, utilizando secções de tumor do tecido inteiro de espécimes cirúrgicos, e avaliar a associação entre a proteína HER2 e estado do gene com os dados clínico-patológicos.
Métodos
o presente estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética da nossa instituição (Comitê de Ética e pesquisa COEP-UFMG), sob o protocolo de número CAAE 32898114.9.0000.5149. consentimento informado por escrito foi obtido de acordo com as diretrizes institucionais.
Foram estudados 142 pacientes consecutivos submetidos a gastrectomia primária entre 2007 e 2011 no Hospital das Clínicas, Universidade Federal de Minas Gerais, Brasil, cujo diagnóstico histopatológico foi GC. Nenhum dos pacientes tinha recebido quimioterapia neoadjuvante ou outro tipo de tratamento para o seu tumor antes da cirurgia. Todos os 142 casos tinham seus relatórios patológicos recuperado e, a fim de confirmar o diagnóstico de GC, as lâminas coradas por hematoxilina-eosina originais foram simultaneamente analisados ​​por dois patologistas (RSL e MMDAC), um dos quais é um especialista em patologia gastrointestinal (MMDAC) . Os dados clínicos (idade e sexo dos pacientes) e parâmetros patológicos (topografia do tumor, diâmetro máximo do tumor, estágio, grau histológico e subtipo, presença de linfovascular e sangue-embarcação invasão) foram registrados. Os tumores foram divididos em dois grupos de acordo com a topografia gástrica: tumores proximais e distais, esta última categoria incluiu carcinomas do JGE. Os critérios de sistema TNM e recomendações de a 7ª edição do American Joint Committee on Manual de estadiamento do câncer foram usados ​​para tumor estadiamento [27, 28]. O índice de glandular formação e citológico pleomorfismo foram consideradas para a classificação histológica para tumores bem, moderadamente ou pouco diferenciados. sistema de classificação histológica de Lauren foi usado para subtipos de tumor [29].
New 4 seções de tecido toda mm de espessura foram obtidos a partir de amostras de tumores embebidos em parafina fixadas em formalina e submetidas a IHC automatizada, utilizando uma plataforma BenchMark XT ™ (Ventana Medical Systems , Arizona, EUA) e o anticorpo monoclonal pré-diluído primário de coelho anti-HER2 /neu (4B5 clone). Todas as lâminas foram subsequentially contrastadas com hematoxilina. Uma amostra de câncer de mama HER2-positivo pré-testado foi utilizado como controle positivo externo. Dezoito casos não continham tecido tumoral suficiente para protocolos IHC subsequentes e foram excluídos do estudo, resultando em 124 casos apropriados para análise.
Três patologistas (RSL, HG e CBN) de uma só vez analisadas lâminas imunocoradas usando um multi-cabeça microscópio e obteve uma pontuação de consenso para a expressão HER2 de acordo com recomendações de Hofmann e Rüschoff é para espécimes cirúrgicos GC [11, 12]. Os casos foram classificados em quatro grupos (0, 1+, 2+ e 3+), dependendo da extensão e intensidade da expressão: 0, sem reactividade e de reatividade membranoso no < 10% das células; 1+, fraco /reactividade membranoso quase imperceptível em > 10% das células, e as células são reactivos apenas em parte da sua membrana; 2+, fraco a moderado reactividade membranoso completa ou basolateral em > 10% das células; 3+, forte reactividade membranoso completa ou basolateral em > 10% das células [11]. Apenas um padrão de expressão membranoso foi adequado para avaliação. Os casos incluídos na categoria 3+ foram considerados positivos para superexpressão da proteína HER2, ao passo que 0 e 1+ casos foram consideradas negativas.
Casos classificados como 2+ foram considerados equívoca para a expressão da proteína HER2 e novo 4 mm de espessura whole- cortes de tecidos foram submetidos a brightfield prata hibridização in situ
(SISH) usando a mesma plataforma automatizada (benchmark XT ™) e o ensaio Cocktail HER2 duplo ISH DNA Probe INFORM (Ventana Medical Systems, Arizona, EUA). O HER2 Comprar e cromossomo 17 (CEP17) copiar números foram contados em 20 núcleos nonoverlapping simultaneamente por dois observadores (RSL e CBN). HER2
perfil genómico foi definida como não amplificado, se o rácio significativo
HER2 /CEP17 foi < 2,0 e amplificado, se a relação de HER2
/CEP17 foi ≥2.0. Se a proporção caiu entre 1,8 e 2,2, um adicional de 20 núcleos foram marcados eo rácio global calculada. casos IHC 2+ mostrando amplificação do gene por sish e IHC 3+ casos foram ambos considerados positivos para HER2 estatuto final [11, 12].
A análise estatística foi realizada utilizando o software SPSS versão 19.0 (SPSS Inc., Chicago, IL ). O teste de Pearson qui-quadrado foi utilizado para correlacionar os resultados IHC e status final HER2 com os parâmetros clínico. Todos os valores
P foram em frente e verso, e P Art < . 0,05 foi considerado estatisticamente significativo
Resultados
características clínicas e sua associação com a pontuação status final HER2 e IHC são apresentados na Tabela 1. A idade dos pacientes no momento do diagnóstico variou de 28 a 92 anos (mediana: 62,33 anos), e havia 64 homens (51,6%) e 60 mulheres (48,4%) entre os 124 pacientes incluídos no estudo. Os tumores foram preferencialmente identificados no estômago distal (80,6%) em comparação com os tumores que surgem no cárdia gástrica ou do JGE. O tamanho do tumor variou entre 0,5 e 14,0 cm (média, 5,31 cm) e tumores avançados (categorias pt2, PT3 e pT4) foram responsáveis ​​por 107 casos (86,3%). De acordo com a gradação histológica, 13 casos (10,5%) foram bem diferenciado, 45 casos (36,3%) moderadamente diferenciados, e 66 casos (53,2%) tumores pouco diferenciados. subtipo histológico intestinal de Lauren foi o mais frequentemente diagnosticado, sendo responsável por 61 casos (49,2%). subtipos difusas e mistas foram observadas em 21 (16,9%) e 33 (26,6%) casos, respectivamente. Os nove casos restantes (7,3%) foram classificados como indeterminados. invasão linfovascular foi encontrado em 94 casos (75,8%), e 85 pacientes (68,5%) apresentaram linfonodo metástases ao diagnóstico, com uma média de 9,27 linfonodos positivos per case (variação de 1 a 63 linfonodos positivos) .table 1 Associação entre HER2 status e os parâmetros clínico

geral
HER2 positivo

HER2
valor P
negativo
HER2 (3 +)
HER2 (2+)
HER2 (0, 1+) ​​
P
valor
n =
124 ( %)
13 (10,5)
111 (89,5)
13 (10,5)
10 (8.1)

101 (81,4)
idade de diagnóstico
0,803
0,590
≥60 anos
82 (66,1)
9
73
9
8
65 Restaurant < 60 anos
42 (33,9) 4
38 4
2
36
Sexo
0,865
0,459
Masculino
64 (51,6)
7
57
7
7
50
Feminino
60 (48,4)
6
54
6 Sims 3
51
Tumor topografia
0,720
0,709
estômago distal
100 (80,6)
10
90
10
9
81
estômago proximal /JGE
24 (19,4)
3
21 Sims 3
1

• inserção de um tubo gástrico sob visão direta utilizando o laringoscópio vídeo Rei Visão ™: a, prospectivo, ensaio clínico randomizado
• Correlação entre coeficientes de difusão aparente e status HER2 no câncer gástrico: correlação study