Associazione tra stato HER2 nel carcinoma gastrico e le caratteristiche clinico-patologici: uno studio retrospettivo utilizzando sezioni di tutto il tessuto

Associazione tra stato HER2 nel carcinoma gastrico e le caratteristiche clinico-patologici: uno studio retrospettivo utilizzando sezioni di tutto il tessuto
Abstract
sfondo
cancro gastrico è di solito diagnosticata in uno stadio avanzato di malattia e del trattamento opzioni sono scarsi. Trastuzumab è stato recentemente approvato per carcinomi metastatici o localmente avanzati derivanti nello stomaco o della giunzione gastroesofagea nei pazienti con tumori HER2-positivi. Tuttavia, i dati sulla frequenza dei casi di HER2-positivo tra i pazienti brasiliani sono limitati. Il nostro obiettivo era quello di caratterizzare HER2 proteine ​​e stato del gene in una serie di pazienti con cancro gastrico brasiliani e per valutare la sua associazione con i dati clinico-patologici.
Metodi
vetrini istologici da 124 gastrectomie primari sono stati rivisti e le relazioni patologiche sono stati recuperati da i file in un ospedale universitario brasiliano. immunoistochimica automatizzata per HER2 è stata eseguita su sezioni di tessuto intero da ogni tumore. casi HER2-equivoco di immunoistochimica sono stati sottoposti a doppia automatizzata in situ
ibridazione per la valutazione amplificazione genica. stato HER2 è stata confrontata con i parametri clinico-patologici al fine di valutare statisticamente associazioni significative.
Risultati
analisi immunoistochimica hanno rivelato che 13/124 casi (10,5%) sono stati HER2 positivo (3+), 10/124 casi (8,1%) sono stati equivoci (2+) e 101/124 casi (81,4%) sono risultati negativi, essendo 7 casi 1+. Nessuno dei casi dubbi mostrato amplificazione genica. Il tasso complessivo di HER2 positività è stata del 10,5%. C'era una associazione tra l'espressione di HER2 e intestinale sottotipo istologico di Lauren (P
= 0,048), tumori ben differenziati a moderatamente (p = 0,004)
e la presenza di invasione linfovascolare (P = 0,031
). Nessuna associazione è stata trovata tra lo status di HER2 e la topografia del tumore.
Conclusioni
Di fronte a dati pubblicati da altri autori, la percentuale più bassa di casi HER2-positivo trovato nella nostra serie potrebbe essere in parte spiegato con la frequenza più bassa di tumori derivanti a giunzione gastroesofagea in confronto con carcinomi gastrici distali nei pazienti brasiliani. Questo potrebbe anche spiegare la mancanza di statisticamente significativa associazione tra stato HER2 e la topografia del tumore nel nostro studio.
Parole
HER2 cancro gastrico immunoistochimica Gene amplificazione caratteristiche clinico-patologiche Sfondo
Circa un milione di nuovi casi di cancro gastrico (GC ) si stima che si verificano ogni anno nel mondo, pari a 8% di tutte le diagnosi di cancro a livello mondiale [1, 2]. GC è anche considerato la seconda causa di decessi correlati al cancro in tutto il mondo e sono attesi oltre 700.000 decessi a verificarsi a causa di questa malattia ogni anno [1, 3]. Tuttavia, la distribuzione di pazienti con GC in diverse parti del globo non è omogeneo: oltre il 70% dei nuovi casi e decessi avviene nei paesi in via di sviluppo. I tassi di incidenza più elevati si trovano in Asia orientale, Europa dell'Est e Sud America [1]. L'Istituto Nazionale del Cancro del Brasile ha stimato che GC comprende oltre il 5% di tutti i tumori maligni in questo paese opzioni [4].
Di trattamento per GC sono generalmente limitate, dal momento che è di solito diagnosticata in una fase avanzata della malattia e, di conseguenza, il tasso di sopravvivenza a cinque anni è costantemente bassa, intorno al 20% nella maggior parte del mondo [2, 5]. Secondo lo studio ToGA, un recente fase III internazionale randomizzato, il trattamento in combinazione di chemioterapia e trastuzumab (TZB) ha migliorato significativamente la sopravvivenza nei pazienti con HER2-positivo GC avanzata [6]. TZB è un anticorpo monoclonale ricombinante target HER2, una proteina transmembrana che appartiene alla famiglia del fattore di crescita epidermico recettori umani [7]. HER2 dominio intracellulare mostra l'attività della tirosin-chinasi, in grado di generare secondi messaggeri intracitoplasmatici che coordinano l'espressione nucleare di geni associati con l'angiogenesi, la proliferazione cellulare e la sopravvivenza [8]. Sovraespressione della proteina HER2, un prodotto di un proto-oncogene situato sul cromosoma 17, è stata associata a carcinogenesi e tumore progressione della mammella, dell'ovaio, ghiandole salivari, della prostata e tumori del tratto gastrointestinale [9].
Sulla base di prova ToGA risultati, agenzie di regolamentazione internazionali hanno recentemente approvato l'uso di TZB in metastatico HER2-positivo o carcinomi localmente avanzati derivanti nello stomaco o della giunzione gastroesofagea (GEJ) [10]. I carcinomi da pazienti eleggibili per il trattamento con TZB devono presentare lo stato HER2-positivo, attestato da proteine ​​sovraespressione (score 3+) mediante immunoistochimica (IHC) o amplificazione genica in situ
ibridazione (ISH) per i tumori con risultati equivoci IHC (punteggio 2+) [11, 12]. Da allora, molti studi si sono concentrati sulla presentazione frequenza di GC HER2-positive in diverse popolazioni, ad un'ampia variazione metodi utilizzati per la proteina e la rilevazione del gene. Pertanto, i risultati variano notevolmente 2-45% di HER2 in serie GC [13-17]. Una grande revisione sistematica compresi i dati da 49 studi ha trovato un tasso medio del 18% di positività HER2 in 11.337 pazienti con GC [18]. Tuttavia, la prevalenza dei casi di HER2-positivo tra i pazienti brasiliano rimane sconosciuta, con i pochi dati pubblicati [19-26]. Dal momento che il sistema sanitario pubblico brasiliano non ha ancora approvato l'uso di TZB per il trattamento GC in questo paese, noi crediamo che il rilevamento di GC HER2-positivo in pazienti brasiliani può fornire una base scientifica per la creazione di nuove politiche di sanità pubblica e di definire meglio clinica protocolli per migliorare il trattamento di questi pazienti in Brasile.
Pertanto, nel presente studio, abbiamo voluto caratterizzare l'espressione di HER2 in GC in una serie di pazienti brasiliani, utilizzando sezioni tumorali intero tessuto da campioni chirurgici, e per valutare l'associazione tra HER2 proteine ​​e stato del gene con i dati clinico-patologici.
Metodi
il presente studio è stato approvato dal Comitato Etico della nostra istituzione (comité de Etica e Pesquisa COEP-UFMG) sotto CAAE numero di protocollo 32898114.9.0000.5149. Consenso informato scritto è stato ottenuto in conformità con le linee guida istituzionali.
Abbiamo studiato 142 pazienti consecutivi, sottoposti a gastrectomia primaria tra il 2007 e il 2011 presso l'Ospedale Clinica, Università Federale di Minas Gerais, in Brasile, la cui diagnosi istopatologica era GC. Nessuno dei pazienti aveva ricevuto chemioterapia neoadiuvante o altro tipo di trattamento per la loro tumore prima della chirurgia. Tutti i 142 casi erano i loro rapporti patologici recuperati e, al fine di confermare la diagnosi di CG, le diapositive colorate originali ematossilina-eosina sono stati simultaneamente esaminate da due patologi (RSL e MMDAC), uno dei quali è un esperto in patologia gastrointestinale (MMDAC) . sono stati registrati dati clinici (età e sesso dei pazienti) e parametri patologici (topografia del tumore, diametro massimo del tumore, stadio, grado istologico e sottotipo, presenza di linfovascolare e vasi sanguigni invasione). I tumori sono stati divisi in due gruppi in base alla topografia gastrica: tumori distali e prossimali, quest'ultima categoria inclusi carcinomi dalla GEJ. I criteri di sistema TNM e Raccomandazioni della 7 ° edizione del Joint Committee on Cancer Staging Manual sono stati utilizzati per la messa in scena del tumore [27, 28]. L'indice di ghiandolare formazione e citologico pleiomorfismo sono stati considerati per la classificazione istologica in tumori ben differenziati moderatamente o scarsamente. sistema di classificazione istologica di Lauren è stato utilizzato per sottotipo tumorale [29].
Nuovi 4 sezioni con tutto il tessuto micron spessore sono stati ottenuti da campioni di tumore paraffina fissate in formalina e presentata al automatizzata IHC, utilizzando una piattaforma BenchMark XT ™ (Ventana Medical Systems , Arizona, USA) e il prediluito anticorpi di coniglio primario monoclonale anti-HER2 /neu (4B5 clone). Tutti i vetrini sono stati subsequentially di contrasto con ematossilina. Un campione di tumore al seno HER2-positivo pre-testati è stato utilizzato come controllo esterno positivo. Diciotto casi non contenevano tessuto tumorale sufficiente per i protocolli IHC successivi e sono stati esclusi da questo studio, con conseguente 124 casi appropriati per l'analisi
. Tre patologi (RSL, HG e CBN) tutto in una volta analizzate le diapositive immunostained utilizzando un multi-testa microscopio e ha ottenuto un punteggio di consenso per l'espressione di HER2 secondo le raccomandazioni di Hofmann e Rüschoff è per GC campioni chirurgici [11, 12]. I casi sono stati suddivisi in quattro gruppi (0, 1+, 2+ e 3+), a seconda dell'estensione e l'intensità dell'espressione: 0, nessuna reattività o reattività membranosa in < 10% di cellule; 1+, debole /appena percettibile reattività di membrana a > 10% delle cellule, e le cellule sono reattive soltanto in una parte della membrana; 2+, debole a moderata reattività membranosa completa o basolaterale in > 10% di cellule; 3+, forte reattività membranosa completa o basolaterale in > 10% delle cellule [11]. Solo un modello membranosa di espressione era adatto per la valutazione. I casi inclusi nella categoria 3+ sono stati considerati positivi per iperespressione della proteina HER2, mentre 0 e 1+ casi sono stati considerati come negativi.
Casi segnati come 2+ sono stati considerati equivoci per l'espressione della proteina HER2 e nuovo 4 micron di spessore all'in- grosso sezioni di tessuto sono stati sottoposti a campo chiaro argento nella ibridazione in situ
(SISH) utilizzando la stessa piattaforma automatizzata (BenchMark XT ™) e il dosaggio del cocktail INFORM HER2 doppio ISH DNA Probe (Ventana Medical Systems, Arizona, USA). L'HER2
e cromosoma 17 (CEP17) copiare i numeri sono stati contati in 20 nuclei non sovrapposti contemporaneamente da due osservatori (RSL e CBN). HER2
profilo genomico è stato definito come non amplificato se la media rapporto di HER2
/CEP17 era < 2.0 e amplificato se il rapporto HER2
/CEP17 era ≥2.0. Se il rapporto è sceso tra 1,8 e 2,2, un ulteriore 20 nuclei sono stati segnati e il rapporto globale calcolato. casi IHC 2+ che mostrano amplificazione genica per SiSh e IHC 3+ casi sono stati entrambi considerati positivi per HER2 status finale [11, 12].
L'analisi statistica è stata effettuata utilizzando il software SPSS versione 19.0 (SPSS Inc., Chicago, IL ). Il test di Pearson chi-quadrato è stato utilizzato per correlare IHC risultati e HER2 status finale con parametri clinico-patologici. Tutti i valori di P
erano a due code, e P
< . 0.05 è stato considerato statisticamente significativo
Risultati
caratteristiche clinico-patologiche e la loro associazione con HER2 status definitivo e IHC punteggi sono riportati nella tabella 1. età dei pazienti al momento della diagnosi variava da 28 a 92 anni (mediana: 62.33 anni), e ci sono stati 64 maschi (51,6%) e 60 femmine (48,4%) tra 124 pazienti inclusi in questo studio. I tumori sono stati preferibilmente identificate a stomaco distale (80.6%) rispetto a tumori originati nel cardias o dal GEJ. Le dimensioni del tumore varia tra 0,5 e 14,0 cm (in media, 5,31 centimetri) e tumori avanzati (pT2, pT3 e pT4 categorie) ha rappresentato il 107 casi (86,3%). Secondo la classificazione istologica, 13 casi (10,5%) sono stati ben differenziati, 45 casi (36,3%) moderatamente differenziato, e 66 casi (53,2%) tumori scarsamente differenziati. sottotipo istologico intestinale di Lauren è stato il più frequentemente diagnosticato, la contabilità per 61 casi (49,2%). sottotipi diffusa e misti sono stati osservati in 21 (16,9%) e 33 casi (26,6%), rispettivamente. I nove casi rimanenti (7,3%) sono stati classificati come indeterminato. invasione linfovascolare è stato trovato in 94 casi (75,8%), e 85 pazienti (68,5%) aveva metastasi linfonodali al momento della diagnosi, con una media di 9,27 nodi positivi per caso (range da 1 a 63 linfonodi positivi) .table 1 associazione tra HER2 stato e parametri clinico-patologici
complesso
HER2 positivo

negativo HER2
valore P
HER2 (3 +)
HER2 (2+)
HER2 (0, 1+) ​​
P
valore
n = 124
( %)
13 (10.5)
111 (89,5)
13 (10.5)
10 (8.1)

101 (81,4)
età alla diagnosi
0,803
0.590
≥60 anni
82 (66,1)
9
73
9 Pagina 8
65
< 60 anni
42 (33,9) 4
38 Pagina 4 2
36
genere
0,865
0.459
Maschio
64 (51,6) 7
57
7 7
50
femminile
60 (48,4)
6
54
6 3
51
Tumore topografia
0,720 0,709

distale dello stomaco
100 (80,6) 10
90
10
9
81
prossimale dello stomaco /GEJ
24 (19.4) 3
21 3
1
20
sottotipo istologico
0,048 0,009

intestinale
61 (49,2)
11
50

• inserimento del tubo gastrico sotto visione diretta usando il video laringoscopio Re Vision ™: una, prospettico, trial
• Correlazione tra i coefficienti apparenti di diffusione e lo stato HER2 nei tumori gastrici: pilota study