Assoziation zwischen HER2-Status bei Magenkrebs und klinisch-pathologischen Eigenschaften: eine retrospektive Studie von ganzem Gewebe sections

Assoziation zwischen HER2-Status bei Magenkrebs und klinisch-pathologischen Eigenschaften mit: eine retrospektive Studie mit Ganzgewebeschnitten
Zusammenfassung
Hintergrund
Gastric Krebs ist in der Regel in einem fortgeschrittenen Stadium der Erkrankung und Behandlungsmöglichkeiten diagnostiziert wird, sind spärlich. Trastuzumab wurde bei metastasierendem oder lokal fortgeschrittenen Karzinomen im Magen oder in der gastroösophagealen Übergang bei Patienten mit HER2-positiven Tumoren entstehen vor kurzem genehmigt. Allerdings sind die Daten über die Häufigkeit von HER2-positiven Fälle unter den brasilianischen Patienten sind begrenzt. Unser Ziel war es HER2-Protein und Gen-Status in einer Reihe von brasilianischen Patienten mit Magenkrebs und zu bewerten, seine Verbindung mit klinisch-pathologischen Daten.
Methoden
Histologische Dias von 124 primären gastrectomies wurden überprüft zu charakterisieren und ihre pathologischen Berichte wurden von dort abgerufen die Dateien in einem brasilianischen Universitätsklinik. Automatisierte Immunhistochemie für HER2 wurde von jedem Tumor auf Vollgewebeschnitten durchgeführt. HER2-zweideutigen Fällen durch Immunhistochemie wurden automatisierten Doppel vorgelegt in situ Hybridisierung
für Genamplifikation Auswertung. HER2-Status wurde mit klinischen Parametern, um konfrontiert statistisch signifikante Assoziationen beurteilen.
Ergebnisse | Immunhistochemie Analyse ergab, dass 13/124 Fällen (10,5%) waren HER2-positivem (3+), 10/124 Fällen (8,1%) wurden zweideutig (2+) und 101/124 Fällen (81,4%) waren negativ, wobei 7 Fälle 1+. Keine der zweideutigen Fällen zeigte Genamplifikation. Die Gesamt HER2-Positivität Rate betrug 10,5%. Es war ein Zusammenhang zwischen dem HER2-Expression und Laurens intestinalen histologischen Subtyp (P
= 0,048), gut bis mäßig differenzierten Tumoren (P
= 0,004) und das Vorhandensein von lymphovascular Invasion (P
= 0,031). Kein Zusammenhang zwischen HER2-Status und Tumor Topographie gefunden wurde.
Schlussfolgerungen
mit Daten Konfrontiert von anderen Autoren veröffentlicht, desto geringer Prozentsatz von HER2-positiven Fälle in unserer Serie gefunden könnten teilweise durch die geringere Häufigkeit von Tumoren erklärt werden, die sich an der gastroösophagealen Übergang im Vergleich zu distalen Magenkarzinomen in der brasilianischen Patienten. Dies könnte auch die Ursache für den Mangel an statistisch signifikanter Zusammenhang zwischen HER2-Status und Tumor Topographie in unserer Studie.
Schlüsselwörter HER2 Magenkrebs Immunhistochemie Genamplifikation klinisch-pathologischen Eigenschaften Hintergrund Über eine Million neue Fälle von Magenkrebs
(GC ) sind Schätzungen zufolge jedes Jahr in der Welt auftreten, global zu 8% aller Krebsdiagnosen entsprechen [1, 2]. GC ist auch die zweithäufigste Ursache der durch Krebs verursachten Todesfälle weltweit betrachtet und mehr als 700.000 Todesfälle erwartet aufgrund dieser Krankheit auftreten jährlich [1, 3]. Jedoch ist die Verteilung von Patienten mit GC in verschiedenen Teilen der Welt nicht homogen: mehr als 70% der neuen Fälle und Todesfälle treten in den Entwicklungsländern. Die höchsten Inzidenzraten sind in Ost-Asien, Osteuropa und Südamerika [1]. Das National Institute of Cancer von Brasilien schätzt, dass GC umfasst mehr als 5% aller bösartigen Tumoren in diesem Land [4].
Behandlungsoptionen für GC im Allgemeinen begrenzt sind, da sie in der Regel in einem fortgeschrittenen Stadium der Erkrankung und damit diagnostiziert wird, die fünf-Jahres-Überlebensrate ist konstant niedrig, etwa 20% in den meisten Teilen der Welt [2, 5]. Nach der ToGA-Studie einer aktuellen Phase-III internationale randomisierte Studie, die Behandlung in Kombination von Chemotherapie und Trastuzumab (TZB) hat das Überleben bei Patienten mit fortgeschrittenem HER2-positivem GC deutlich verbessert [6]. TZB ist ein rekombinanter monoklonaler Antikörper Targeting HER2, ein Transmembranprotein, das aus humanen epidermalen Wachstumsfaktor-Rezeptoren zu der Familie gehört [7]. HER2 intrazelluläre Domäne zeigt Tyrosinkinase-Aktivität, fähig intrazytoplasmatische second messengers erzeugen, die Kern Expression von Genen, die mit Angiogenese, der Zellproliferation und Überlebenszeit [8] koordinieren. Die Überexpression des HER2-Proteins, ein Produkt eines Proto-Onkogens auf Chromosom 17 befindet, wurde mit der Karzinogenese und Tumorprogression von Brust-, Eierstock-, Speicheldrüsen, Prostata und Magen-Darm-Krebsarten [9]. Vergleich basierend auf ToGA Studie Ergebnisse haben internationale Aufsichtsbehörden genehmigte vor kurzem die Verwendung von TZB in im Magen oder in der gastro-Kreuzung (GEJ), die sich mit HER2-positivem metastasierendem oder lokal fortgeschrittenen Karzinomen [10]. Karzinome von in Frage kommenden Patienten für die Behandlung mit TZB müssen HER2-positiven Status, bescheinigt durch Proteinexpression (Score 3+) durch Immunhistochemie (IHC) oder Genamplifikation durch in situ
Hybridisierung (ISH) für Tumoren mit zweideutigen IHC Ergebnisse (score präsentieren 2 +) [11, 12]. Seitdem haben sich viele Studien konzentrierten sich auf die Häufigkeit von HER2-positivem GC in verschiedenen Populationen zu präsentieren, mit einer breiten Variation über die Methoden zur Protein und Gen-Nachweis verwendet. Daher reichen Ergebnisse bemerkenswert 2 bis 45% der HER2-Überexpression in der GC-Serie [13-17]. Eine große systematische Überprüfung einschließlich der Daten aus 49 Studien mit einer mittleren Rate von 18% der HER2-Positivität in 11.337 Patienten mit GC [18]. Dennoch bleibt die Prävalenz von HER2-positiven Fälle unter den brasilianischen Patienten unbekannt, mit wenigen Daten veröffentlicht [19-26]. Da das brasilianische System der öffentlichen Gesundheit hat noch nicht die Verwendung von TZB für die GC-Behandlung in diesem Land unterstützt, glauben wir, dass der Nachweis von HER2-positivem GC in der brasilianischen Patienten für die Schaffung neuer öffentlicher Gesundheitspolitik wissenschaftliche Grundlage liefern können und definieren bessere klinische Protokolle Behandlung dieser Patienten in Brasilien zu verbessern.
Daher soll in der vorliegenden Studie haben wir HER2-Expression in GC in einer Reihe von brasilianischen Patienten, unter Verwendung von Voll-Gewebe Tumorschnitte von chirurgischen Proben und zu bewerten, um die Zuordnung zu charakterisieren zwischen HER2-Protein und Gen-Status mit klinisch-pathologischen Daten.
Methoden
die vorliegende Studie von der Ethikkommission der Institution genehmigt wurde (Comité de Ética e Pesquisa COEP-UFMG) unter CAAE Protokollnummer 32898114.9.0000.5149. Eine schriftliche Einverständniserklärung wurde in Übereinstimmung mit den Richtlinien des Instituts erhalten.
Wir untersuchten 142 konsekutive Patienten, die an den Kliniken Hospital, Bundesuniversität Minas Gerais, Brasilien, deren histopathologische Diagnose war GC primäre Gastrektomie zwischen 2007 und 2011 unterzog. Keiner der Patienten hatte neoadjuvant Chemotherapie oder eine andere Art der Behandlung für den Tumor vor der Operation erhalten. Alle 142 Fälle hatten ihre pathologischen Berichte abgerufen und, um die Diagnose von GC, die ursprünglichen Hämatoxylin-Eosin-Objektträger wurden gleichzeitig von zwei Pathologen (RSL und MMDAC), einer davon ist ein Experte in der Magen-Darm-Pathologie (MMDAC) überprüft, um zu bestätigen . Klinische Daten (Patienten Alter und Geschlecht) und pathologische Parameter (Tumor Topographie, die maximale Tumordurchmesser, Stadium, Grading und Subtyp, die Anwesenheit von lymphovascular und Blutgefäßinvasion) wurden aufgezeichnet. Tumore wurden in zwei Gruppen eingeteilt nach magen Topographie: distalen und proximalen Tumoren, letztere Kategorie Karzinome vom GEJ enthalten. Die TNM-System Kriterien und recomendations aus der 7. Ausgabe des American Joint Committee on Cancer Staging-Handbuch wurden für die Tumor-Staging verwendet [27, 28]. Der Index der Drüsenbildung und zytologischen pleomorphism wurden in gut für die histologische Einstufung betrachtet, mäßig oder schlecht differenzierten Tumoren. Laurens histologische Klassifikationssystem wurde für die Tumor Subtyping verwendet [29]., Neue 4 &mgr; m Dicke ganze Gewebeschnitte wurden aus Formalin fixierten und in Paraffin eingebetteten Tumorproben und vorgelegt automatisierten IHC erhalten, was eine BenchMark XT ™ Plattform (Ventana Medical Systems , Arizona, USA) und der vorverdünnten primären Kaninchen monoklonale Antikörper anti-HER2 /neu (4B5 Klon). Alle Folien wurden subsequentially mit Hämatoxylin gegengefärbt. Eine vorgetesteten HER2-positivem Brustkrebs Probe wurde als externe positive Kontrolle verwendet. Achtzehn Fälle enthielt nicht genügend Tumorgewebe für eine nachfolgende IHC-Protokolle und wurden von dieser Studie ausgeschlossen, was zu 124 geeigneten Fällen für die Analyse.
Drei Pathologen (RSL, HG und CBN) auf einmal immunogefärbten Dias mit einem Mehrkopf analysiert Mikroskop und erhalten einen Konsens-Score für HER2-Expression nach Hofmanns und Rüschoff Empfehlungen für GC chirurgischen Proben [11, 12]. Die Fälle wurden in vier Gruppen eingeteilt (0, 1+, 2+ und 3+), abhängig von der Verlängerung und der Intensität des Ausdrucks: 0, keine Reaktivität oder membranöse Reaktivität in < 10% der Zellen; 1+, schwach /kaum wahrnehmbare membranöse Reaktivität in > 10% der Zellen und die Zellen sind reaktiv nur in einem Teil ihrer Membran; 2+, schwach vollständige oder basolateralen membranöse Reaktivität in >bis mäßig; 10% der Zellen; 3+, starke vollständige oder basolateralen membranöse Reaktivität in > 10% der Zellen [11]. Nur eine membranartige Muster der Expression war für die Auswertung geeignet. Die Fälle enthalten, in die 3+ Kategorie positiv angesehen wurden für HER2-Protein-Überexpression, während 0 und 1 + Fälle als negativ bewertet wurden. Hüllen erzielt als 2+ für HER2-Protein-Expression nicht eindeutig angesehen wurden und neue 4 &mgr; m-Dicke Whole Gewebeschnitte wurden in situ Hybridisierung
(SISH) zu Silber Hell- vorgelegt die gleiche automatisierte Plattform (BenchMark XT ™) verwenden und die INFORM HER2 Dual-ISH-DNA-Sonde Cocktail-Test (Ventana Medical Systems, Arizona, USA). Die HER2
und Chromosom 17 (CEP17) Kopienzahlen wurden in 20 nicht überlappenden Kerne gleichzeitig durch zwei Beobachter (RSL und CBN) gezählt. HER2
genomische Profil wurde definiert als nicht verstärkt, wenn die mittlere HER2
/CEP17 Verhältnis war < 2,0 und verstärkt, wenn der HER2
/CEP17 Verhältnis ≥2.0 war. Wenn das Verhältnis fiel zwischen 1,8 und 2,2, weitere 20 Kerne wurden erzielt und das Gesamtverhältnis berechnet. IHC 2+ Fälle zeigen Gen-Amplifikation von SISH und IHC 3+ Fälle wurden sowohl positiv für HER2 endgültigen Status [11, 12].
Die statistische Analyse wurde mit Hilfe der SPSS Version 19.0 Software (SPSS Inc., Chicago, IL ). Die Pearson-Chi-Quadrat-Test wurde verwendet, IHC Ergebnisse und HER2 Endstatus mit klinischen Parametern zu korrelieren. Alle P
Werte waren zweiseitig und P
< . 0,05 wurde als statistisch signifikant angesehen
Ergebnisse | Clinicopathological Eigenschaften und ihre Verbindung mit HER2 endgültigen Status und IHC-Scores sind in Tabelle 1 Patientenalter bei der Diagnose von 28 bis 92 Jahren (Median: 62,33 Jahre) lag im Bereich gezeigt, und es waren 64 Männer (51,6%) und 60 Frauen (48,4%) bei 124 Patienten in die Studie eingeschlossen. Die Tumore wurden vorzugsweise am distalen Magen (80,6%) im Vergleich mit Tumoren entstehen in der Kardia oder von der GEJ identifiziert. Die Tumorgröße variiert zwischen 0,5 und 14,0 cm (durchschnittlich 5,31 cm) und fortgeschrittenen Tumoren (pT2, pT3 und pT4 Kategorien) entfielen 107 Fälle (86,3%). Nach histologischen Grading, 13 Fälle (10,5%) wurden gut differenzierte, 45 Fälle (36,3%) mäßig differenzierten und 66 Fällen (53,2%) schlecht differenzierten Tumoren. Laurens intestinalen histologischen Subtyp wurde die am häufigsten diagnostizierte, für 61 Fälle aus (49,2%). Diffuse und gemischte Subtypen wurden in 21 (16,9%) und 33 (26,6%) Fälle beobachtet. Die neun übrigen Fällen (7,3%) wurden als unbestimmt eingestuft. Lymphovascular Invasion wurde in 94 Fällen (75,8%) und 85 Patienten (68,5%) hatten Lymphknotenmetastasen bei der Diagnose, mit einem Durchschnitt von 9,27 positiven Knoten pro Fall (Bereich 1 bis 63 positiven Knoten) .Tabelle 1 Assoziation zwischen HER2 gefunden Status und klinisch-pathologischen Parameter Bei
HER2-positivem
HER2 negativen
P
Wert
HER2 (3 +) Insgesamt

HER2 (2+)
HER2 (0, 1+) ​​
P
Wert
n =
124 ( %)
13 (10.5)
111 (89,5)
13 (10.5)
10 (8.1)

101 (81,4)
Alter bei Diagnose
0.803
0.590
≥60 Jahre
82 (66,1)
9
73
9
8 65
< 60 Jahre
42 (33,9)
4 38
4
2 36
Geschlecht
0,865
0.459
Male
64 (51,6)
7
57
7
7
50
Weiblich
60 (48,4)
6
54
6 3
51
Tumor Topographie
0.720
0.709
Distal Magen
100 (80,6) 10
90
10
9
81
proximale Magen /GEJ
24 (19,4)
3
21
3 seite 1 von 20
Histologische Subtyp
0,048
0,009
Intestinale
61 (49,2)
11
50
11
9
41
Diffuse
21 (16,9)
0
21
0
0
21
Mixed
33 (26,6)
2
31
2 1 | 30
Unditermined
9 (7.3)
0
9
0
0
9
Grading
0,004
< 0,001
Nun
13 (10.5)
4 9
4 1
8 Mäßig
45 (36,3)
7
38
7
8 30
Poorly
66 (53,2) 2
64
2 1 | 63
lymphovascular Invasion
0,031
0.060
Positive
94 (75,8)
13
81
13
6 75
Negative
30 (24,2)
0
30
0
4 26
Blutgefäßinvasion
0.395
0.170
Positive
44 (35,5)
6 38
6 seite 1 von 37
Negative
80 (64,5)
7
73
7
9
64
pT Status
0.271
0.165
pT1
17 (13,7)
0
17
0 seite 1 von 16
pT2
32 (25,8)
3
29
3
2 27
pT3
69 (55,6) 10
59 10
5
54
pT4
6 (4.9)
0
6 0 2
4
pN-Status
0.453
0,762
pN0
39 (31.5) 2
37
2 4
33
pN1
46 (37,1)
7
39
7
4
35
pN2
24 (19,3)
3
21
3 seite 1 von 20
pN3
15 (12.1)
1
14 seite 1 von 1 | 13
pM Status
0.548
0.705
pM0
121 (97,6)
13
108
10
98
pM1
3 (2.4)
0
3
0
0
3
Bold Zahlen stellen P
Werte mit statistischer Signifikanz
immunhistochemischen Analyse ergab 13 positive Fälle (3+; 10,5%) für HER2-Protein-Überexpression (Fig 1a), 10 zweideutigen Fällen (2+;.. 8,1%) (Fig 1b) und 101 negative Fälle (81,4%), 7 von denen erzielt wurden 1+ (5,6%) (Fig . 1c). Das mittlere Alter bei der Diagnose eher nach HER2-Status zu erhöhen (negativ, 61,76 Jahre, zweideutig, 66,3 Jahre, und positiv, 68,58 Jahre), obwohl diese keine statistische Signifikanz erreicht. Keiner der Patienten in der IHC 3+ Kategorie waren jünger als 46 Jahre alt und der älteste Patient in der Serie (eine 92-jährige Frau) war unter ihnen. Es gab keinen Zusammenhang zwischen HER2-Expression und Geschlecht der Patienten. Feige. 1 Immunhistochemische Analyse von HER2-Expression in Magenkarzinomen des 4B5-Antikörper in Vollgewebeschnitten verwenden. (A) ein HER2-positiver Fall (3+); (B) ein HER2-zweideutige Fall (2+); (C) eine HER2-negativen Fall (1+); (D) intratumorale Protein Heterogenität in einem HER2-positiven Fall (3+). (AC: x400 Feld Vergrößerung; D: x200 Feld Vergrößerung)
Es gab eine positive Assoziation zwischen HER2-Protein-Expression und gut zu moderatly differenzierten Tumoren (P
< 0,001), sowie mit Laurens Darm-Subtyp (P
= 0,009).
Tumoren im distalen Magen entstehen, entfielen 76,9% der IHC 3+ Fälle, während 23,1%, wo in der Kardia oder in der GEJ gefunden, aber diese Veränderung war statistisch nicht signifikant. Kein IHC 3+ Tumor zeigte eine diffuse oder unbestimmte Morphologie und nur zwei (15,4%) waren schlecht differenzierten Karzinomen angesehen. Jeder IHC 3+ Tumor zeigte lymphovascular Invasion und sie waren alle in einem fortgeschrittenen Stadium der Erkrankung diagnostiziert, vor allem in der pT3 Kategorie (76,9%). Elf Fälle (84,6%) waren für Lymphknotenmetastasen positiv, mit einem Durchschnitt von 7,5 positiven Knoten pro Fall. Es wurde jedoch keine statistische Signifikanz zwischen Protein HER2-Überexpression und pT, pN oder pM Status beobachtet.
Im Vergleich zu IHC 3+ Fällen HER2-zweideutig Tumoren (2+) präsentiert eine etwas ähnliches Profil, wenn morphologische Daten berücksichtigt wurde. Kein Fall zeigte diffuse oder unbestimmte Histologie, mit einer Dominanz der Darm-Subtyp (9 Fälle, 90,0%) und mäßig differenzierten Tumoren (8 Fälle, 80,0%). Die Mehrzahl der Tumoren in dieser Einstellung beeinträchtigt auch den distalen Magen und wurden in einem fortgeschrittenen Stadium der Krankheit (9 Fälle, 90,0%) diagnostiziert. Allerdings gab es eine Abnahme im Anteil der Fälle lymphovascular Invasion und Lymphknotenmetastasen (6 Fälle, 60,0%) im Vergleich mit den Zahlen unter IHC gefunden 3+ Fällen zeigt (13 Fälle, 100,0% und 11 Fälle, 84,6%, respectively) HER2-negativen Karzinome (Noten 0 und 1 +) aggregiert Diagnose
bei allen Tumoren mit einer diffusen oder unbestimmte Morphologie sowie die Mehrheit der mit einem schlecht differenzierten histologischen Grad und frühen Stadium der Krankheit..
IHC 2+ Fälle wurden eingereicht sish aber kein Gen-Amplifikation nachgewiesen wurde. Daher Fälle mit einer abschließenden HER2-positiven Status komponiert wurden ausschließlich von IHC 3+ Tumoren, was 10,5% aller GC in dieser Serie. HER2-Positivität wurde mit Darm-Subtyp (P
= 0,048) zugeordnet ist, gut zu mäßig differenzierten Tumoren (P
= 0,004) und das Vorhandensein von lymphovascular Invasion (P
= 0,031).
In Bezug auf die intratumorale HER2-Protein Heterogenität, die Ausdehnung der IHC 3+ Bereiche lag im Bereich von 10 bis 99% der positiven neoplastischen Zellen (Fig. 1d). Es gab auch eine Variation in der Verlängerung des HER2 immunoreaktiv Bereiche in der zweideutigen Bereich von 10 bis 40% der Tumorzellen hin. In beiden Kategorien wurde intratumorale Protein Heterogenität meist in Mischtyp Karzinome gesehen, bei dem HER2-Expression stark mit Darm-Typ Bereichen korreliert.
Neben ihrer HER2-Score zeigten viele Fälle eine zytoplasmatische Immunreaktivität in normalen Magenschleimhaut Zellen (87 Fälle , 70,2%), metaplastischen Epithel (30 Fälle, 24,2%) und Foci
der Dysplasie (24 Fälle, 19,4%) (Fig. 2). Dieses Expressionsmuster wurde in beiden metaplastischen und dysplastische Epithel trotz der Art des Metaplasie oder dem Grad der Dysplasie gesehen. Nuclear-Expression wurde unter diffusen Typ Karzinome häufig gesehen, aber alle diese immunhistochemisch Bereiche wurden nicht berücksichtigt für die Wertung des HER2-immunhistochemischen Profil übernommen. Feige. 2 Mögliche Gefahren bei der immunhistochemischen Analyse von HER2-Protein-Expression unter Verwendung des 4B5-Antikörper. Zytoplasmatischen nicht spezifische Färbung in normalen Becherzellhyperplasie Magenschleimhaut (links) und in einem Fokus
von Magen hochgradigen Dysplasien (rechts) (x200 Feld Vergrößerung)
Diskussion
In unserer Studie fanden wir eine endgültige HER2- positiven Status von 10,5%. Die Gesamt-HER2-Positivität Rate in der ToGA Studie fand heraus, war 810 von 3665 Patienten (22,1%) [6]. Diese Zahlen stellen eine der größten Mengen von HER2 Testdaten in GC-Proben, erhalten von Patienten aus 24 verschiedenen Ländern in Asien, Europa und Lateinamerika. Obwohl 22,1% für mehr als die doppelte Menge von positiven Tumoren wir in unserer Serie zu finden, enthalten die Toga-Studie HER2-Positivität Screening-Kriterien in allen Fällen mit der Proteinexpression mittels IHC (3+ und 2 + Fälle) oder Gen-Amplifikation von allein ISH. Detailliertere HER2-Tests in der Studie ToGA über die Daten, die genau 610 Fälle von 3.665 Tumorproben (16,6%) waren in der Tat als HER2-positivem, entweder durch Scoring IHC 3+ oder IHC 2+ mit Genamplifikation durch Fluoreszenz enthüllt vor kurzem veröffentlicht wurde, in situ
Hybridisierung (FISH) [30]. Eine Post-hoc-
explorative Analyse ergab, dass Patienten in diesen Kategorien diejenigen waren, die ganz und gar die am meisten von der Behandlung profitierten mit TZB [6]. So war% 16.6 der genaue Prozentsatz der Patienten, die für eine Behandlung mit TZB gemäß HER2-Screening auf der ToGA Studie durchgeführt und, wenn IHC Ergebnisse allein betrachtet werden, nur 398 Fälle (10,9%) waren tatsächlich HER2-positivem (3+) [30 ]. In unserer Studie, da durch SISH no IHC 2+ Fällen Gen-Amplifikation zeigte, fanden wir eine IHC 3+ Rate und eine endgültige positive HER2-Status von 10,5%.
GC in der brasilianischen Patienten in der Kieferhöhle entstehen neigt, im Zusammenhang mit Helicobacter pylori
chronische Infektion daher unsere Serie in erster Linie von Karzinomen des distalen Magen zusammengesetzt ist (80,6%). Da HER2-Expression mit GC der Cardia und GEJ stark assoziiert ist [17, 30-33], erwarten wir eine noch niedrigere Positivitätsrate unter unseren Fällen zu finden. ToGA Studienergebnisse zeigten einen Unterschied in der HER2-Positivität Raten zwischen Europa /Asien und Mittel- /Südamerika (23,8 bzw. 16,1%, einschließlich aller FISH-positiv und IHC 3+ Fälle). Die Autoren die gegensätzlichen Ergebnisse als aufgrund der geringeren Anzahl von Patienten gescreent in Lateinamerika (484 von 3665 Patienten) statt einer möglichen Variation in der Tumorbiologie [30] verbunden. Leider konnten wir keine Informationen speziell in Bezug auf HER2-Expression in GC finden brasilianischen Patienten in der ToGA Studie aufgenommen. Wenn Quer Daten zwischen Tumor Topographie und Patientenherkunftsländern abgerufen werden konnte, könnte es auch divergent helfen HER2-positivem GC Raten in Lateinamerika erklären.
Ähnlich wie unsere Ergebnisse in einer letzten großen europäischen Serie [34], sowie in einer japanischen Kohorte von 1461 Patienten [35], gibt es keinen Unterschied in HER2-Positivität zwischen proximalen und distalen Magentumoren. Jedoch sind zwei große chinesische Serie [17, 33] vor kurzem zeigten signifikant höhere HER2-Expression in proximalen GC im Einvernehmen mit ToGA Studienergebnisse [30] und mit Ergebnissen aus einer Reihe von 2.798 südkoreanischen Patienten [32]. Die Autoren haben angedeutet, dass Darm-Typ Krebserkrankungen sind in der Regel häufiger in der GEJ und als unterschiedliche Ursachen eine Rolle bei der Krebsentstehung von Tumoren, die von diesen beiden Standorten spielen kann, könnte dies zum Teil unterschiedliche Raten HER2-Expression nach Tumor Topographie rechtfertigen [30]. Neben der genetischen Herkunft gemäß der ethnischen Zugehörigkeit, können mehrere Magen Karzinogenese Wege stark von Ernährungsgewohnheiten und chronische Helicobacter-pylori-Infektion
beeinflusst werden [3]. Obwohl dies wahrscheinlich auch einen gewissen Einfluss auf HER2-Positivität Raten in verschiedenen Populationen mit GC gefunden hat, bleibt die Beziehung zwischen diesen Faktoren und HER2-Expression unbekannt, mit wenigen Papiere veröffentlicht [36, 37].
Die Zahl der IHC 3+ Fälle gefunden in unserer Studie teil werden könnte durch die Tatsache erklärt, dass ganze Gewebeschnitte ausschließlich für HER2 Bewertung verwendet wurden, anstelle der endoskopischen Biopsien. Eine aktuelle Studie gepaart primäre gastrectomies und ihre endoskopische Biopsien HER2-Expression-Scores zu vergleichen und fand eine Konkordanzrate von nur 57%, vor allem aufgrund intratumorale HER2 Heterogenität [38]. HER2 genetische Heterogenität von ISH wurde auf Brustkrebs zuvor gezeigt, aber es scheint ein komplexeres Problem auf GC Proben zu sein [39]. Die Proteinexpression Heterogenität von IHC, in der Regel als Variabilität bezeichnet in immunhistochemischen Intensität und Erweiterung von HER2-positiven Bereichen, ist auch ein Problem, das sich stark auf die Stichprobenauswahl für HER2-Tests in GC auswirken könnte. In der Tat, Heterogenität HER2-Expression wurde durch unsere Studie zeigte, nicht nur, aber auch von anderen Autoren [39, 40], einschließlich einer Studie an 2727 gastrectomies [32]. Als Ergebnis können ganze Gewebeschnitte von reseziert primären Magentumoren erhalten bieten eine größere Darstellung verschiedener Teilpopulation klonalen Krebszelle, die negative falsch-Ergebnisse aufgrund HER2 Heterogenität vermeiden helfen könnte. Da bei Patienten mit lokal fortgeschrittenem oder metastasiertem GC nicht primär Gastrektomie unterzogen werden könnten, sind ganze Gewebeschnitte nicht immer zur Verfügung und andere GC-Proben sollte stattdessen verwendet werden, was die Frage aufwirft, wie auf die die am besten geeignet für HER2-Tests sind: endoskopische Biopsien im Vergleich zu
metastatischen Läsionen. Für endoskopische Biopsien, ist die Empfehlung, eine brauchbare Anzahl von repräsentativen Tumorfragmente (idealerweise 6-8) und, wenn möglich, sollte der Pathologe auch HER2-Tests auf einer anderen Probe durchführen, wenn ein negatives Ergebnis auf einem Tumor endoskopische Biopsie gefunden wird [40].
Außerdem GC-Proben aus dem ToGA Studie wurden für HER2-Expression mit dem HercepTest Kit getestet, die polyklonalen ein Kaninchen verwendet anti-HER2-Antikörper [6], während ein Kaninchen monoklonale Antikörper (4B5) in unserer Studie eingesetzt wurde. Andere Studien haben eine geringere Empfindlichkeit Raten berichtet für HercepTest im Vergleich mit 4B5-Klon für den Nachweis von HER2-Protein-Expression [15, 41, 42]. Dies könnte auch die Ursache für die ähnliche IHC 3+ Prozentsatz der Fälle in unserer Reihe und auf der ToGA Studie festgestellt, trotz der Dominanz von Tumoren aus dem distalen Magen unter unseren Patienten.
Daten auf HER2-Expression in der brasilianischen Patienten mit GC sind sehr begrenzt und es gibt eine große Variation veröffentlichten Ergebnissen. Die ersten beiden Studien, die je in Brasilien durchgeführte Untersuchung ergab eine HER2-Überexpression Rate von 12 und 5,4%, einschließlich IHC 3+ und 2 + Fälle addiert [23, 24]. Allerdings wurde die Einstufungsbewertung für Brustkrebs für HER2-Status Beurteilung verwendet wird, bei dem die gesamte Zellmembran gefärbt werden sollten, und nicht nur seitlich oder basolateralen Wände, die Unterschätzung von HER2-Positivität vermuten lässt. In der neueren Forschung spezifischen HER2 Bewertungskriterien für GC, reichte IHC 3+ Fälle von 0,8% auf 11,6% [19-22, 25, 26]. Studien, die die niedrigsten Raten (0,8%, 3% und 6%) zeigt, die verwendet Tumorgewebe-Mikroarrays (TMA) von chirurgischen Proben und anderen anti-HER2-Antikörper statt 4B5 erhalten [19, 20, 22]. Diese Ergebnisse sind schwer zu vergleichen mit unseren aufgrund methodischer Unterschiede, vor allem, wenn TMAs und tumorale Proteinexpression Heterogenität konfrontiert sind. So könnte TMAs Proben repräsentieren ähnlicher endoskopische Biopsien und nicht zu größeren Ganzen-Gewebeschnitte von primären gastrectomies, die in unserer Studie verwendet wurden.
Unsere Ergebnisse aktuellen Literaturerkenntnisse über die brasilianischen Patienten mit GC für HER2-Expression getestet erhärten ein mit hochempfindlichen Antikörper anti-HER2 in ganzen Gewebe Tumorschnitten. Wie in der Tat, im Vergleich eine aktuelle Analyse von einem brasilianischen Krebszentrum die Leistung von HercepTest, SP3 und 4B5 Antikörper zwischen Ganzgewebeschnitten und TMAs in einer Reihe von 199 gastrectomies [21]. Die Autoren fanden die höchste HER2 Positivitätsrate die gleichen Parameter unserer Studie mit: 4B5 Antikörper in Voll Gewebe Tumorschnitte (11,6%), wobei ein Wert am ähnlichsten unserer Erkenntnis (10,5%). Die niedrigste HER2-Positivität Rate unter TMAs und HercepTest Kit (3%) [21] identifiziert wurde. Trotz der höheren Empfindlichkeit mit dem 4B5 Antikörper, einige Autoren haben auch berichtet, umfangreiche zytoplasmatische Hintergrundfärbung der Magen Becherzellhyperplasie Schicht und Brennpunkte gefunden

intestinaler Metaplasie /Dysplasie, wie in unserer Studie gesehen, die eine intrinsische klonalen Charakteristik spricht eher als ein methodisches Problem [15, 21, 41, 42]. Tatsächlich HER2-Färbung von dysplastische Epithel wurde auf Genamplifikation durch ISH korreliert worden [43]. Obwohl es bei der Unterscheidung HER2-positiven Tumorzellen aus diesen Gebieten keine Schwierigkeiten waren, betonen wir, dass die Färbung der letzteren müssen nicht berücksichtigt werden, wenn Ausdruck HER2 Scoring.
Bis das Schreiben des Manuskripts die Autoren konnten nur abrufen drei weitere Studien zur ISH für Genamplifikation Erkennung in GC-Proben aus brasilianischen Patienten [19, 21, 25]. Begnami et al. eine Gesamtverstärkungsrate von 8% gefunden FISH, aber der Prozentsatz der IHC 2+ verstärkt Fälle wurde nicht erwähnt [19]. Ähnlich wie unsere Ergebnisse, hat eine andere Gruppe keine verstärkten Fälle unter den IHC 2+ Tumoren finden, obwohl FISH die verwendete Methode [25] war. Neben unserer Studie nur angewendet, eine weitere Silber-Hell Dual ISH in IHC 2+ Fällen [21]. Die Ergebnisse zeigten eine Vielzahl von Verstärkungsraten (von Null bis 100%), nach dem primären Antikörper für IHC und Gewebeproben (Vollgewebeschnitten gegenüber
TMAs) verwendet. 4B5-Antikörper auf 198 Ganzgewebeschnitten ergab 20 Fälle mit einem zweideutigen HER2-Score (10,1%), von denen nur 6 Fällen (30%) Genamplifikation durch SISH zeigte [21]. Der Prozentsatz der Fälle mit einer endgültigen HER2 positiven Status war 14,6%, eine etwas höhere Geschwindigkeit als die, die wir aufgedeckt, die an der unteren Frequenz des distalen GC (43,2%) in der Reihe teilweise zurückzuführen sein könnte. Sie haben festgestellt, dass die genaueste IHC Verfahren zur Auswertung HER2-Expression in GC die 4B5-Antikörper auf Vollgewebeschnitte zu verwenden war [21], die genau war die Methode in unserer Studie beschäftigt.
Außerdem fanden wir eine Verbindung zwischen HER2-positiven Tumoren und einige pathologische Parameter, wie Laurens Darm-Subtyp (P
= 0,048), gut bis mäßig differenzierten Tumoren (P
= 0,004) und das Vorhandensein von lymphovascular Invasion (P
= 0,031). Der Darm-Subtyp ist nachgewiesen worden, das pathologische Merkmal zu sein, die meisten immer mit HER2-Positivität assoziiert in mehreren Studien [17, 32, 34, 35, 44, 45], einschließlich der ToGA-Studie [30] und einige mit brasilianischen Patienten [19, 22 , 23, 26]. Da HER2-Positivität erwartet wird, auf die Darmtyp-Tumoren gefunden werden, empfehlen wir dringend, dass, wenn sie mit einem Mischtyp-Tumor handelt, Bereiche eine Darm-Morphologie zeigen sollte für HER2-Scoring ausgewählt werden.
Verband der HER2-Positivität mit histologischen Grad und das Vorhandensein von lymphovascular invasion wurde auch von einigen Autoren berichtet worden [19, 25, 31, 46], aber nicht von anderen [20, 47].

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