Gastric cancer progression i samband med lokala humorala immunsvar

Gastric cancer progression i samband med lokala humorala immunsvar Bild Sammanfattning
Bakgrund
Även sambandet mellan H. och magcancer pylori
har väl beskriven, förändringarna studier är sällsynta i det humorala immunsvaret i specifik anatomiska områden av magen och under stadier av magcancer. Målet för denna studie var att bestämma påverkan av humorala immunsvar mot H. pylori
infektion på magcancer.
Metoder
vi valt 16 gastric cancerfall och cirka en matchade kontroll per fallet vid National Institute för medicinska vetenskaper och näringslära Salvador Zubirán (INCMNSZ); alla de fall som uppfyllde inklusionskriterierna för studien. Vi erhöll tre biopsier från varje patient och från var och en av de förutbestämda områdena av magsäcken: antrum
, vinkelparti
, Corpus,
och fundus
. Från patienter med magsäckscancer har ytterligare biopsiprover som erhållits från tumör mitten skada och tumör marginal, och ytterligare prover togs åtminstone 2 och 5 cm från tumören marginalen. Vi jämförde IgA nivåerna mot H. pylori
i varje område av magen mellan fall och kontroller samt mellan tidiga och avancerade stadier av magcancer.
Resultat
IgA värden slående förhöjda i cancerfall jämfört med kontroll ämnen; ett värde som var ännu högre i en avlägsen periferi tumör men anmärkningsvärt minskade mot cancer skada. Avancerade stadier av magcancer visat återfall av det humorala immunsvaret i mitten av skadan regionen av tumören jämfört med tumörmarginaler och angränsande icke-tumörvävnad. Sälja Slutsatser
Gastric cancer kännetecknas av progressiv ackumulering av en koncentrerad, specifik IgA-svar mot H. pylori,
börjar med en onormal ökning i hela magen, men i synnerhet i den intilliggande icke-tumörvävnad. Således är det möjligt att denna starkt immunsvar deltar också i någon grad i skadan och i utvecklingen av magcancer i viss utsträckning.
Nyckelord
magslemhinna Immunsvar Magcancer IgG och IgA Helicobacter pylori
bakgrund
Helicobacter pylori
är en human patogen som koloniserar magslemhinnan och drabbar ungefär hälften av världens befolkning [1]. H. pylori
infektion förvärvas huvudsakligen under de första levnadsåren och kvarstår i årtionden, vilket kronisk gastrit, duodenalsår och magsår, och är en betydande riskfaktor för utveckling av magcancer [2]. Arten av gastroduodenala patologier beror på den anatomiska plats av H. pylori
infektion i magsäcken. Vi visade tidigare att antrum
och corpus
är de stora anatomiska platserna koloniserade av H. pylori
hos patienter med magcancer [3]. Men bara en tredjedel av de gastriska biopsier var positiva för H. pylori
, och dess kolonisering var högre i tumören skada jämfört med den omgivande icke-tumörvävnad. Därför är det frestande att spekulera i att kraftiga onormala immunsvar på lokal nivå i samband med avslutandet av H. pylori
infektion och grov patologi. Gastric adenocarcinom utvecklas som en följd av kronisk inflammation i magslemhinnan som orsakas av ihållande infektion med H. pylori
[4]. Gastric cancer fortskrider genom en sekvens av preneoplastiska lesioner som manifesterar histologiskt som atrofisk gastrit, intestinal metaplasi och dysplasi [5]. Även om en minoritet av smittade människor utvecklar magsäckscancer, är denna sjukdom den näst vanligaste orsaken till cancerdöd worldwide, delvis på grund av patienter som inte diagnostiseras förrän sent stadium cancer är närvarande och en dålig prognos [2].
H. pylori
bakterier kvarstår trots aktivering av värdens medfödda och adaptiva immunsvaret [6]. Antikroppsproduktion och cellulära immunsvar inte är samstämmiga med immunologiskt minne mot H. pylori
infektion [7]. Dessutom bakterierna verkar aktivt dämpa T-hjälpar 1 (Th1) svar, som kännetecknas av T-cellsaktivering (CD8 och CD4-positiva T-celler) och IFN-γ produktion, vilket leder till avsevärd vävnadsskada [8, 9]. andra än H. pylori
infektion faktorer som kan predisponera en individ till magcancer har identifierats, bland dem är aklorhydri och oxyntic atrofi [10]. Emellertid är förhållandet mellan gastrisk cancerutveckling och styrkan i lokala humorala immunsvar mot H. pylori
dåligt kända.
IgA och IgG är de huvudsakliga effektorer av humorala immunsvar mot H. pylori
infektion i magslemhinnan [4, 11, 12]. Till skillnad från IgA är IgG inte aktivt utsöndras via magslemhinnan; sålunda sin skyddande funktion i magsäckens lumen är begränsad [13]. Även om IgA utsöndras aktivt till den gastriska lumen, där dess effektorer funktion uppnås, är det också närvarande i den systemiska cirkulationen [14, 15]. Tidigare studier har visat att förhöjda serumnivåer av anti-H. pylori
IgA är en känslig indikator på magcancer risken [16, 17].
För att bestämma påverkan av humorala immunsvar mot H. pylori
infektion på gastrisk karcinom, bedömde vi närvaron av anti-H . pylori
IgG och IgA nivåerna i magsäckscancerpatienter och patienter icke-cancer genom ELISA. Vi använde vävnadshomogenat av olika anatomiska områden i magen och i mitten av skadan och marginella områden av cancer lesioner samt närliggande tumörfria vävnad.
Metoder
Patienter och provtagning
Vi använde gastric prover från en tidigare studie [3], där patienterna genomgick gastrointestinal endoskopi för att utesluta cancer och dyspeptiska symptom. Fördes mellan november 2006 och november 2007 ingick trettiotvå patienter rekryteras på Endoskopisk Service på National Institute of Medical Sciences and Nutrition "Salvador Zubirán" (INCMNSZ) studien. Alla prover erhölls med skriftligt informerat samtycke av patienterna ges före till att ingå i studien och var i enlighet med Helsingforsdeklarationen. Studien godkändes av den etiska och utredningskommitté National Institute of Medical Sciences and Nutrition "Salvador Zubirán", registreringsnummer CIBH-1081. Ämnena rekryterade ingick i magsäckscancer eller kontroll (icke-cancer) grupper; endoskopisk diagnos bekräftades genom histologisk undersökning. En systematisk ordning biopsi provtagning användes för att erhållits högst tre biopsier per patient från varje förutbestämd regioner magen: antrum, vinkeldelen, corpus Mössor och ögonbotten
. Från patienter med möjlig magcancer ades ytterligare biopsiprover som erhållits från mitt lesionen av tumören, tumören marginalen, och åtminstone två och 5 cm från tumören marginalen. En del av varje prov var snabbfrystes och lagrades sedan vid -70 ° C fram till användning. Den andra delen fixerades i 10% formalin och bäddades in i paraffin för histopatologisk undersökning. Efter diagnoser bekräftades, var två patienter i cancer grupp uteslöts från studien eftersom de hade MALT-lymfom. Alla patienter med icke-ulcus dyspepsi och /eller gastroesofageal reflux ansågs kontrollgruppen (icke-cancer-grupp). Grupperna utgjordes såsom visas i tabell 1.Table 1 Egenskaper av studien groupsa
Gastric cancer (n
= 16) på
Icke-cancer (n
= 14)
Medelåldern åldern~~POS=HEADCOMP, år (± SD) Review 57,6 ± 16,7
47,2 ± 13,3
Kön (Man /Kvinna) Review 9/7
2/12
H. pylori
colonizationb
93,8% *
64,3%
tidigt stadium av cancer (i och II) katalog 5 -
framskridet stadium av cancer (III och IV)
11 -
Positivitet till H. pylori
av varje anatomisk plats
Fundus
50
35,7
Corpus
56,2
50
Vinkel del
50
35,7
Antrum
37,5 42,8
Från tumorc
Mid-tumör
68,8 -
Tumör marginal
68,8 -
minst 2 cm **
62,5 -
minst 5 cm **
56,3
-
AStarta vår tidigare rapport [3]
b H. pylori
identifierades antingen genom odling eller PCR
c H. pylori
-colonization i tumörplatser var 81,3%
* p Hotel < 0,05
** Minst 2 och 5 cm från tumörmarginal
Framställning av stammarna till belagda ELISA-plattorna
H.pylori
stammar 26695 och J99 (ATCC 700392 och 700824, respektive) var tillväxten på Casman agar (DIFCO) kompletterat med 10% defibrinerat hästserum (häst~~POS=TRUNC serum~~POS=HEADCOMP ATCC; Manassas, Va) och inkuberades vid 36 ± 1 ° C under 72 h i mikroaerofila förhållanden. En Gram-stam utfördes för att se till att mer än 90% av bakterierna var baciller. Stammarna skördades i steril isotonisk saltlösning (SISS), justerades till 0,5 McFarland rör (1,5 x 10 8 CFU /ml), och blandades 1: 1 (volym /volym
). Bakteriesuspensionen var formalin behandlad med en 0,6% -ig formaldehydlösning volym /volym under 48 timmar vid rumstemperatur. Sedan tillsattes bakteriesuspensionen centrifugerades vid 2500 rpm och tvättades med SISS. Detta förfarande upprepades en gång till; botten återsuspenderades i SISS. Bakteriesuspensionen kvantifierades medelst Bradford-metoden för att veta koncentrationen av ytproteiner.
Mätning av in situ
nivåer av IgG och IgA mot H. pylori
Vi jämförde anti-H . pylori
IgG och IgA nivåer, mätt med ELISA, i varje region mellan fall och kontroller och i början (I och II) och avancerade (III och IV) stadier av magcancer. Varje biopsiprov homogeniserades individuellt i 50 mikroliter av kall PBS (pH 7,4) med användning av en glasvävnadskvarn på is; provet därefter justeras till 500 mikroliter. Vi tog 100 mikroliter av provet och tillsattes 20 pl av en proteas-inhibitor cocktail (Complete, Roche Diagnostic GmbH, Mannheim, Tyskland) och 380 mikroliter av 2% saponin i PBS (JT Baker, Phillipsburg, NJ, USA). Efter över natt maceration vid 4 ° C, togs prover centrifugerades vid 13000 x g under 10 min. Proteinkoncentrationen bestämdes och justerades i samtliga prover. Ett hundra mikroliter av supernatanterna uppsamlades och individuellt testas för IgG- och IgA-nivåer genom en indirekt ELISA. Duplikat analys utfördes för varje testad immunglobulin. Plattorna (NUNC MaxiSorp; Rochester, NY, USA) belades med 100 mikroliter av 10

• Association of IL1B -511C /-31T haplotyp och Helicobacter pylori vacA genotyper med magsår och kronisk gastritis
• Utvärdering av akut toxicitet och magskyddande aktivitet av gurkmeja purpurascens BI. rhizom mot etanol-inducerade gastrointestinala skador i rats