Helande Potential Picrorhiza kurroa (Scrofulariaceae) rotstockar mot indometacin-inducerad magsår: en mekanistisk exploration.

helande Potential Picrorhiza kurroa
(Scrofulariaceae) rotstockar mot indometacin-inducerad magsår: a. Mekanistisk utforskning Bild Sammanfattning
bakgrund
den aktuella studien genomfördes för att utvärdera potentialen av rotstockar av den indiska medicinalväxt, Picrorhiza kurroa
läka indometacin-inducerad akut mage sår hos möss och undersöka dess förmåga att modulera oxidativ stress och nivåerna av prostaglandin (PGE 2) och EGF under processen.
metoder
manliga schweiziska albinomöss, såriga med indometacin (18 mg /kg, po, engångsdos) behandlades upp till 7 dagar med olika doser av metanolextrakt av P. kurroa
rotstockar (betecknad som PK). Läkningsförmågan av de mest effektiva dosen av PK (20 mg /kg, s. O. × 3 d) jämfördes med den hos omeprazol (Omez) (3 mg /kg, s. O. × 3 d). Effekterna av läkemedelsbehandling för en och tre dagar på biokemiska parametrar bedömdes genom att jämföra resultaten med den hos obehandlade möss i en st och 3 rd dag sår. Magen vävnader hos möss användes för biokemisk analys.
Resultat sälja The makroskopiska indexen visade maximal sår på 3 rd dagen efter indometacin administration, som effektivt har läkt av PK. Under optimerad behandlingskur, PK och Omez reducerade magsårsindex med 45,1% (P
< 0,01) och 76,3% respektive (P
< 0,001)., Jämfört med de obehandlade såriga möss
jämfört med de såriga obehandlade möss, som behandlades med PK under 3 dagar uppvisade minskad nivåerna av tiobarbitursyrareaktiva substanser (TBARS) (32,7%, P
< 0,05) och protein karbonyl (37,7%, P
<0,001), och ökade mucin (42,2%, P Hotel < 0,01), mucosal PGE 2 (21,4%, P Hotel < 0,05), och uttryck av COX-1 och 2 (26,9% och 18,5%, P
< 0,05), EGF (149,0%, P
< 0,001) och VEGF (56,9%, P
< 0,01). Omez reducerade TBARS (29,4%, P
< 0,05), och protein karbonyl (38,9%, P
< 0,001), och ökad mucin (38,3%, P
< 0,01), utan att ändra de andra parametrarna avsevärt.
Slutsats
PK (20 mg /kg, po × 3 dagar) kunde effektivt läka indometacin-inducerad mage sår hos möss genom att minska oxidativ stress och främja mucinutsöndring, prostaglandinsyntesen och utöka uttryck av cyklooxigenas enzymer och tillväxtfaktorer.
bakgrund
Gastrointestinal toxicitet i samband med icke-steroida antiinflammatoriska läkemedel (NSAID) är ett viktigt medicinskt problem trots den senaste tidens läkemedels framsteg [1]. Förutom att inducera magsår, NSAID verkar också hämma sårläkning [2, 3]. Följaktligen fortsätter förebyggande av gastrointestinal sjukdom att vara av intresse för både kliniska utövare och forskare. Trots deras effektivitet i hanteringen av sår NSAID inducerade gastrisk, de för närvarande tillgängliga syntetiska anti-magsårs läkemedel ger biverkningar och är också dyra, särskilt för landsbygdsbefolkningen. För detta ändamål har vi rapporterat lovande anti-ulcerogen aktivitet av flera växtprodukter [4-6]
Picrorhiza kurroa
. (Familj: Scrofulariaceae, allmänt namn: Picrorhiza, katuka, kutki) är en liten flerårig ört växer i de bergiga delarna av nordvästra Himalaya i Indien och Nepal. Bladet, bark och de underjordiska delarna av växten, främst rhizomer används ofta i traditionella indiska (ayurvediska) system för medicin sedan urminnes tider. Även om det visar antioxidant, antiinflammatoriska och immunmodulerande aktiviteter, är det mest uppskattad för sin lever effekt. De bittra rotstockar av Picrorhiza
har använts i tusentals år i Indien för att behandla personer med matsmältningsbesvär [7], och förstoppning på grund av otillräcklig matsmältningssekre [8]. Picrorhiza
betraktas som en trophorestorative ört för levern, såväl som ett potent immunstimulerande medel [9]. Sitt konstituerande är picroliv också rapporterats ha choleretic effekt [10], och förhindra leverskada orsakad av etanol [11], kemikalier [12] och mikroorganismer [13].
Det primära syftet med denna undersökning var att studera den helande egenskap hos metanolextrakt av P. kurroa
rhizom (betecknad som PK) mot indometacin-inducerad akut gastrisk ulceration av möss gentemot
den för den kommersiella läkemedlet, omeprazol (Omez). Indometacin, en företrädare för icke-steroida antiinflammatoriska läkemedel (NSAID) familj, orsakar magsår genom olika processer, inklusive generering av ROS, hämning av prostaglandinsyntesen och infiltration av polymorfonukleära leukocyter, induktion av apoptos, och initiering av lipidperoxidation [14, 15]. Därför såret läka kapacitet drogerna, bedöms av histopatologi, korrelerade med deras effekter på att minska indometacin-inducerad oxidativ stress. Antioxidantaktiviteten av testproverna analyserades med avseende på deras förmåga att skydda oxidativa skador på lipider, proteiner och tiol-beroende antioxidant försvar i mag vävnader. Vidare är NSAID-inducerad gastropati också tillskrivas den minskade syntesen av prostaglandiner [16]. Följaktligen roll testproverna för att öka slemsekretion och uttryck av epidermal tillväxtfaktor (EGF), samt höja PGE 2-syntes undersöktes också metoder
.
Växtmaterial
rhizom av P. kurroa
(betecknad som PK), anskaffas från den lokala marknaden användes för detta arbete. Anläggningen taxonomiskt identifieras (anslutning nr. 324.139) av den botaniska Survey of India, Indiska Botanical Garden, Kokata, Indien.
Kemikalier
2-tiobarbitursyra (TBA), etanol, butanol och etylacetat som köpts från E. Merck (Bombay, Indien), medan triklorättiksyra (TCA) var från Thomas Baker (Bombay, Indien). Alcian blue, indometacin, bovint serumalbumin (BSA), haematoxylene, alun, eosin, butylerad hydroxitoluen (BHT), guanidinhydroklorid, trifluorättiksyra (TFA), omeprazol (Omez), 3,3 '-diaminobenzidine (DAB), kanin-anti -mouse EGF och Trizma bas upphandlades från Sigma Chemicals (St. Louis, MO, USA). Andra reagens som användes var 35% väteperoxid (Lancaster, Morecambe, UK), 2,4-dinitrofenyl hydrazin (DNPH), dinatriumvätefosfat och natriumdivätefosfat (BDH, Pool Dorset, UK), sackaros och 5,5'-ditiobis -2-nitrobenzioc syra (DTNB) (SRL, Bombay, Indien), häst och getserum (Banaglore Genie, Banaglore, Indien), PGE 2 metaboliten kit (Cayman Chemical, Michigan, USA) och peroxidaskonjugerat get anti- kanin-IgG (EMD Biosciences, Sandiego, USA).
Instrumentation
absorbansen spektrofotometri utfördes vid 25 ° C med användning av en Jasco V-550 UV-Vis spektrofotometer. Våglängdsscanningar och absorbansmätningar gjordes en ml kvartsceller av en cm väglängd.
Beredning av växtextrakt
De lufttorkade rotstockar av P. kurroa
(250 g) skars i små bitar, indränkt i metanol (1 l) i två dagar och supernatanten dekanterades. Efter upprepning hela processen tre gånger, de kombinerade extrakten filtrerades genom ett nylonnät och indunstades i vakuum och lyofiliserades slutligen. Råextraktet, betecknad som PK hela manuskriptet, lagrades i en vakuumexsickator.
Framställning av läkemedlen
Läkemedlen framställdes från PK och Omez som vattenhaltiga suspensioner i 2% akaciagummi som fordonet, och administreras till mössen oralt.
Farmakologiska tester
Djur och försöksprotokoll för sårbildning
manliga schweiziska albino möss uppfödda på Dr. BC Roy Post Graduate Institute of Basic medicinska vetenskaper, Calcutta, Indien och BARC Laboratory Animal House Facility , Bombay, Indien. Dessa upphandlas efter att ha inhämtat godkännande (Post Graduate Institute of Basic medicinska vetenskaper, Kolkata Animal etikkommittén 507 /CPCSEA, Påföljd nr IAEC /SB-2/2004 /UCM-16, daterad 06.15.04 och BARC Animal etikkommitté (BAEC) , försöksdjursanläggning. sanktionera nr. BAEC /03/05 av den 11.07.05) från respektive Animal etiska kommittéer för de två centra och hanterades efter International Animal etikkommitté riktlinjerna. Den 6-8 veckor gamla möss (25-30 g) föddes upp på en balanserad laboratoriediet enligt NIN, Hyderabad, Indien och med tanke på kranvatten efter behag. De hölls vid 20 ± 2 ° C, 65-70% fuktighet, och dag /natt cykel (12 h /12 h). Vid början av varje experiment, var alla djur identifierades genom typiska skårorna i örat och lemmar och därefter randomiserad. Detta gjordes för att utföra alla de experiment i ett blint sätt. Sårbildning i möss inducerades genom administrering av indometacin (18 mg /kg, s. O.) Löst i destillerat vatten och suspenderas i bäraren, akaciagummi (2%) i form av en enda dos. Våra studier med 5, 10, 15, 18, 20, 25 och 30 mg /kg, s. o. indometacin visade att de lägsta doserna (5 och 10 mg /kg) gav mindre sår efter 6 h av dess administration, medan de högre doserna (25 och 30 mg /kg) ledde till dödlighet. Den valda dosen (18 mg /kg) gav optimal ulceration, med inflammation och mukosal insult, utan att orsaka någon dödlighet till möss. Djuren berövas mat men hade fri tillgång till kranvatten 24 timmar före sår induktion Standardisering av läkemedelsdosen Hus Till standardiseringen av läkemedelsdoser, PK.
(5, 10, 20 och 40 mg /kg) gavs som en enda dos per dag upp till sju dagar. Den första dosen av PK och Omez fick 6 timmar efter indometacin administration. I de efterföljande sex dagar, testproverna ges vid 09:00 varje dag. Fem möss i varje grupp och varje experiment upprepades tre gånger. Mössen avlivades på en st, 3 rd, 5 e och 7 th dagar, fyra timmar efter den sista dosen av PK. Omfattningen av sårläkning bedömdes från makroskopiska skador poäng (MDS) av de obehandlade och behandlade såriga möss på respektive dag. Den optimerade behandlingsmetoden (droger dos och behandlingsperioden) bedömdes från MDS av grupperna av möss som erhöll ovanstående behandling.
Bedömning av sår och helande från MDS
Mössen avlivades efter en överdos med tiopental. Magsäcken från de normala och behandlade grupper avlägsnades snabbt, öppnades längs den större krökningen och sköljdes noggrant med normal saltlösning. De såriga magslemhinnan områden visualiserades med hjälp av ett transparent ark och ett dissektionsmikroskop. MDS bedömdes [17] genom att gradera mag skada på en 0-4 skala, baserad på graden av Hyperemia och hemorragiska skador: 0 - nästan normal slemhinna, 0,5 - hyperemi, en - en eller två lesioner, 2 - allvarliga skador , 3 - mycket allvarliga skador, 4 - slemhinna full av skador. (lesioner - hemorragiska erosioner, Hyperemia - kärlöverbelastningar). Experimenten utfördes av två forskare förblindade till gruppen och behandling av djur. Sektionerna kodades för att eliminera en observatör bias. Data för analyserna presenteras som medelvärde ± SEM från granskningen av minst tre sektioner per djur och fem djur per Studier grupp.
På biokemiska parametrar sälja The MDS Resultaten visade maximal sårläkning efter tre dagar läkemedelsbehandling. Magen sår i de obehandlade mössen nådde också toppen på 3 rd dagen efter indometacin administration. Därför har vi bedömt biokemiska parametrar under den optimerade behandlingsregim [PK (20 mg /kg) och Omez (3 mg /kg)] upp till 3 rd dag endast sår. För detta användes följande sju grupper var och en innehållande 5 möss valda från de som användes för MDS-analysen och de data som visas härrör från tre replikat:
Grupp I - normala kontrollmöss; Grupp II - såriga möss, och avlivades efter 10 h (betraktas som en dag); Grupp III - såriga möss, och offras på 3 rd dag; Grupp IV-V - ulcerated möss, behandlades med PK och Omez respektive för en dag, och avlivades 4 h efter administrering av testprover; Grupp VI-VII -. Såriga möss, som behandlats med PK och Omez respektive 3 dagar, och offrade i 3 rd dag, fyra timmar efter den sista dosen av testproverna kvantifiering av protein och lipid skador
under sår och läkning
glandulärmagen vävnader slogs samman från fem djur för varje vävnad, sköljdes med lämplig buffert och användes för biokemiska studier. De våta vikter av vävnaderna registrerades och experimenten utfördes i triplikat. De glandulära delarna från kontrollades såriga och läkemedelsbehandlade möss tagna vid olika tidsintervall homogeniserades med en glas-teflon homogeniserande röret i en 50 mM fosfatbuffert, pH 7,4 och centrifugerades vid 1200 x g för att erhålla supematanten. Mängden protein karbonyler i vävnadshomogenatet, bestämdes efter en rapporterad metod [18]. DNPH (4 ml, 10 mM) i 2 M HCl tillsattes till supernatanten (1,0 ml), som inkuberades under 1 h med intermittent skakning. Iskall 20% vattenhaltig TCA-lösning (5 ml) tillsattes och blandningen inkuberades under 15 min. Det utfällda proteinet tvättades 3 gånger med etanol-etylacetat (1: 1), upplöst i 1 ml av en lösning innehållande 6 M guanidin HCl i 20 mM kaliumfosfat (monobasiskt) justerat till pH 2,3 med trifluorättiksyra. Efter centrifugering mättes absorbansen av supematanten avlästes vid 362 nm (∈ = 2,2 x 10 4 M -1 cm -1).
För analysen av lipidperoxidation (i termer av TBARS), en 10% homogenat från vart och ett av de respektive proven framställdes i en buffert (320 mM sackaros, 5 mM HEPES, 20 mM EDTA och 0,01% BHT). Dessa utsattes för differentiell centrifugering (1200 x g och 12.000 x g) för att erhålla de mitokondriella pellets, som tvättades med buffert (150 mM KCl och 20 mM fosfatbuffert) och slutligen suspenderade i en 50 mM fosfatbuffert, pH 7,4. Den mitokondriella membranfraktion (1 ml) behandlades med TCA-TBA-HCl (2 ml, 15% TCA, 0,375% TBA, 0,25 N HCl) innehållande 0,01% BHT, upphettades på ett kokande vattenbad i 15 min, kyldes och centrifugerades . Absorbansen av supematanten mättes vid 535 nm (∈ = 1,56 x 10 5 M -1 cm -1) [19] Mätning av icke-protein tiol.
(NP-TSH ) Review Efter en rapporterade metod [20], den gastrointestinala NP-TSH mättes. I korthet innebar detta fundic mage homogenat från kontroll, såriga, drog-behandlade möss gjordes i 0,2 M Tris-HCl-buffert, pH 8,2 innehållande 20 mM EDTA och centrifugerades. En alikvot av homogenatet (1 ml) fälldes ut med iskall 20% TCA (1 ml) och centrifugerades. Supernatanten (1 ml) sattes till 2 ml av 0,8 M Tris-HCl-buffert, pH 9, innehållande 20 mM EDTA och blandades med 0,1 ml av 10 mM DTNB. Absorbansen av den gula kromogen vid 412 nm (∈ = 13,6 × 10 4 M -1 cm -1) avlästes.
Mucin assay
Efter ett rapporterat förfarande [21] den fria mucin i magsäckens vävnader uppskattades. I korthet var den glandulära delen av magen separeras från lumen av magsäcken, vägdes och överfördes omedelbart till 10 ml av 0,1% vikt /vol Alcian blue (Ab) lösning (i 0,16 M sackaroslösning buffrade med 0,05 mM natriumacetatlösning, pH justerat till 5,8). Efter färgning under 2 timmar, avlägsnades överskottet färgämne avlägsnades från vävnaden med hjälp av två på varandra följande sköljningar med 10 ml 0,25 M sackaroslösning. Färgämnet komplexbunden med magväggen slem extraherades med 10 ml av 0,5 M magnesiumklorid genom intermittent skakning (1 min) vid 30 min intervall under 2 h. Den blå extraktet (2 ml) skakades kraftigt med en lika stor volym dietyleter. Den resulterande emulsionen centrifugerades vid 3600 rpm under 10 min, och absorbansen för det vattenhaltiga skiktet avlästes vid 580 nm. Den mängd Ab extraherades per g våt körtelvävnad beräknades från en standardkurva framställd med användning av olika koncentrationer av Ab.
COX-1 och COX-2-uttryck assay
Inom 30 min av skörd, de såriga partierna av magen vävnader fixerades i neutral buffrad 10% formalin saltlösning och sektioneras. Efter 24 h fixering följt av inbäddning i en paraffinblock skars det i sektioner av 5 mikron på en glasskiva och uttrycken av COX-1 och COX-2 kvantifierades efter en rapporterad förfarandet [22], med lätt modifiering. Efter avparaffinering i xylen, var sektionerna behandlades med en graderad serie av alkohol och därefter rehydratiseras i PBS vid pH 7,5. Snitten behandlades i följd med 3% väteperoxid i PBS, och protein blockerare (5% bovint serumalbumin, 5% normalt getserum i PBS) och inkuberades över natten vid 4 ° C med primär antikropp (mus-anti-COX-1 och COX 2, 1: 200). Efter inkubation under 2 h vid rumstemperatur med peroxidaskonjugerat kanin-anti-mus sekundär antikropp (1: 500), var en positiv reaktion detekteras genom exponering för stabil DAB i 2 till 5 minuter. I kontrollsektioner, var antikroppar utelämnas och endast PBS tillsattes. Efter motfärgning bilderna med Meyers hematoxylin, var intensiteten av färgade immunolocalized produkter utvärderas med hjälp BioVis MV500 programvara. Fem områden från varje avsnitt avsöktes och den integrerade optiska densiteten (IOD) i varje område har beräknats. Den IOD av den negativa kontrollen subtraheras från IOD varje experimentella delen för varje djur i alla grupper.
Prostaglandin analys
Efter skörd av magen, var corpus (full tjocklek) skars, vägdes (100 mg ) och suspenderades i 10 mM natriumfosfatbuffert, pH 7,4 (1 ml). Vävnaden hackades fint med sax och inkuberades vid 37 ° C under 20 min. Efter centrifugering (9000 x g), prostaglandin E 2 (PGE 2) nivåer i supernatanten mättes genom ELISA [23], och koncentrationerna är uttryckta som pg /mg protein.
EGF uttryck assay
immunofärgning av EGF utfördes [22] efter ett liknande metod som används med avseende på COX-1 och COX-2, med mindre modifieringar. I detta fall, efter att blockera endogent peroxidas och behandling med de proteinblockerare ades de vävnadssnitt inkuberades över natten vid 4 ° C med primär antikropp vid lämplig utspädning. I kontrollsektioner, endast PBS tillsattes utelämnande antikropparna. Efter inkubation under 1 h vid rumstemperatur med peroxidas-konjugerad get-anti-kanin-IgG, var en positiv reaktion detekteras genom exponering för DAB i 2 till 5 minuter. Efter motfärgning bilderna med Meyers hematoxylin, var intensiteten av färgade immunolocalized produkter kvantifieras med hjälp av BioVis MV500 programvara. Fem områden från varje avsnitt avsöktes och den integrerade optiska densiteten (IOD) i varje område har beräknats. Den IOD av den negativa kontrollen subtraheras från IOD varje experimentella delen för varje djur i alla grupper.
Analys av serum VEGF
serum VEGF mättes med hjälp av blodprov dras från den nedåtgående aorta, med kommersiellt tillgängliga ELISA-kit i enlighet med tillverkarens instruktioner.
gastric sekretorisk analys (pylorous ligering modell) Review för att studera effekterna av testläkemedlen på gastrisk sekretion, var pyloric ligering av magsäcken standardiserats i vårt laboratorium utförs. En grupp av möss (experimentell kontroll) erhöll 2% akaciagummi i destillerat vatten (0,2 ml per mus, po), medan de olika behandlingsgrupperna gavs PK (20 mg /kg x 3 d), Omez (3 mg /kg x 3 d), indometacin (18 mg /kg x 1 d) som sådan eller tillsammans med PK (20 mg /kg x 3 d), Omez (3 mg /kg x 3 d) respektive. På 3 rd dag då ett buken hos djuren öppnas under lätt eterbedövning för pyloric ligering (PL). Efter stängningen av buken djuren sätts i burar under lätt återhållsamhet och fick återhämta sig från narkosen. Efter 6 h, avlivades djuren, magen öppnades och en ligatur placerades runt matstrupen. Magen avlägsnades och innehållet tömdes i en graderad centrifugrör efter att ha gjort en liten nick längs den större krökningen i anslutning till pyloric ligering. Maginnehållet uppsamlades, mättes, centrifugerades, och utsattes för biokemisk analys.
Statistisk analys
Data presenteras som medelvärde ± SEM. Parametriska data som omfattar alla de biokemiska parametrar analyserades med en parad "t" test för parade data eller envägs variansanalys (ANOVA) följt av en Dunnet multipla jämförelser efter provet. Icke-parametriska data (makroskopisk scoring) analyserades med användning av Kruskal-Wallis test (icke-parametrisk ANOVA) följt av en Dunns multipla jämförelser efter provet. Ett sannolikhetsvärde P Hotel < 0,05 ansågs signifikant. IC 50 värde av PK uppskattades med hjälp av probitanalys och signifikansnivån av analyserna undersöktes av chitvåtest.
Resultat
Utvinning och phytochemical analys
utvinning process gav metanolextrakt, PK i 12,57% vikt /vikt utbyte. TLC-analys av PK avslöjade att det är en komplex blandning av ett stort antal organiska föreningar, de flesta av dessa är närvarande som glykosider såsom avslöjas genom Molisch test. Förekomst av apocynin, andorsin, picrosides I och II, och katukoside tillsammans med andra oidentifierade föreningar i PK bekräftades genom jämförelse av dess TLC profil med de hos autentiska prov.
Standardisering av dosen av PK för magsår läkning i möss
dosen av PK för effektiv sårläkning optimerades genom att utföra behandling med PK (5, 10, 20 och 40 mg /kg) upp till sju dagar och jämföra MDS värdena för de behandlade och obehandlade möss på de respektive dagarna . Tidsförloppet av omfattningen av magen sår (som uppenbarar sig från MDS-värden) och förebyggande av olika doser av PK visas i figur. 1. Mössen som fick vehikel uppvisade endast några slemhinneskador. Behandling av möss med indometacin (18 mg /kg) gav typiska tidsberoende akuta skador i magslemhinnan. Den sår nådde maximum på 3 rd dag sårbildning då MDS värde ökade med 162,1% jämfört med den första dagen (P Hotel < 0,001). Därefter skedde en gradvis återhämtning på grund av naturlig läkning, och den 7 e dagen efter sårbildning var MDS värde minskat med 49,2% jämfört med den första dagen (P Hotel < 0,01). Figur 1 tidsförloppet för magen sår och förebyggande av olika doser av PK. Magen ulceration hos möss inducerades genom oral administrering av indometacin (18 mg /kg kroppsvikt). Olika doser av PK användes för experimenten. Såret indexen uppmättes på olika dagar 4 timmar efter den sista dosen av PK och värdena är medelvärde ± S.E.M. (N = 15). AP Hotel < 0,01, BP Hotel < 0,001 jämfört med 1: a dagen såriga obehandlade möss; cP Hotel < 0,01, dP Hotel < 0,001 jämfört med gruppen III möss.
PK, vid alla de valda doser visade maximal sårläkning på 3 rd dag sår, och effekten var dosberoende. Jämfört med respektive såriga kontroller, de MDS minskningar (45,1% -52,9%, P Hotel < 0,01) av PK (20 och 40 mg /kg) var liknande, och betydligt bättre än vid dess lägre dos (10 mg /kg). Effekten av PK (5 mg /kg) var obetydlig. Under liknande förhållanden, behandling med Omez (3 mg /kg) under 3 dagar minskat MDS värde med 76,3% (P Hotel < 0,001) jämfört med den grupp III möss. Den helande observeras på att utvidga behandling upp till sju dagar med PK var bättre än den som observerades med den tre dagar långa behandlingsregimen. Emellertid en stor del av detta berodde på autohealing, med mindre bidrag från PK.
Sammantaget behandling med PK (20 mg /kg) och Omez (3 mg /kg) under 3 dagar efter sår induktion som tillhandahålls optimal sårläkning . Mot bakgrund av dessa var alla efterföljande experiment utfördes med samma behandlingsregimen. Den valda dosen Omez, vilket också är den rekommenderade terapeutiska dosen för människa har optimerats genom oss [6]. Idéer för obehandlade möss, var topp sår (max MDS) observerades på den tredje dagen av indometacin administration. Därför var denna tidpunkt väljs för att ta reda på IC 50 värde av PK. Med tanke på de MDS värdena för 3 rd dag ulcerated obehandlade möss som 100%, IC 50 värde på PK befanns vara 23,30 ± 3,50 mg /kg
Kvalitativ bedömning sälja The makroskopiska undersökningar. visade att indometacin administration ledde till en markant skada på körtel delen av mössen magslemhinnan. Inom sex timmar efter indometacin administration, ytlig erosion och mild inflammation i magsäcken observerades vilket tyder på akut sår. På dagen för magsår induktion, förlust av foveolar struktur längs med kryptisk arkitektur var den framträdande drag i de flesta av de obehandlade mössen. Dessutom var mild inflammatoriskt infiltrat innehållande neutrofiler observerades i lamina propria. Behandling med både PK och Omez även för en dag begränsat skadan med ojämna områden av blottade strukturella epitel.
Indometacin inducerad gastropati blev mycket uttalad på den tredje dagen visar stansas ut flera områden av ulceration med inflammatoriskt infiltrat innehållande neutrofiler och makrofager i slemhinna, sub-slemhinnan och muskelrock tillsammans med hemorragisk slemhinnorna. Ett stort antal av onormala celler med förändrad kärnan till cytoplasman förhållande märktes. Behandling med PK och Omez i 3 dagar ledde till minskat antal inflammatoriska celler tillsammans med ett ökat antal friska normala celler i den gastriska mukosan, såväl som submucosa, serosa och muskellager med minimal mukosal överbelastning.
Effekt av PK och Omez på lipidperoxidation och protein oxidation i magvävnad
effekterna av indometacin intag ensamma och efter administrering av PK och Omez på graden av lipidperoxidation (mätt i termer av TBARS), proteinoxidation (mätt i termer av protein karbonylhalt ), är den tiol-beroende försvarssystem (NP-TSH) och mucin halt i de gastriska vävnader hos möss visas i tabell 1 och tabell 2.Table 1 effekten av PK och Omez på nivåerna av TBARS, protein karbonyler, icke- protein tiol, och mucin i såriga gastric vävnad micea på dag ett av sår
Parametrar
grupp i-möss normala kontroll

Group II 1: a dagen såriga kontroll
grupp III PK-behandlade
grupp IV Omez behandlade
TBARS (nmol /mg protein) katalog 0,85 ± 0,03
1,18 ± 0.05c
0,94 ± 0.06d
0,89 ± 0.07d
protein karbonyler (nmol /mg protein) katalog 1,08 ± 0,05
1,62 ± 0.09b
1,49 ± 0,12
1,53 ± 0,07
NP-TSH (nmol /mg vävnad) Review 1,99 ± 0,09
1,66 ± 0.08b
1,86 ± 0,08
1,81 ± 0,09
mucin (| j, g /g vävnad) Review 335,03 ± 14,43
213,02 ± 0.59b
240,33 ± 20,49
253,33 ± 14.53d
aStomach ulceration hos möss inducerades genom oral administrering av indometacin (18 mg /kg) . PK (20 mg /kg /dag X 1 dag) och Omez (3 mg /kg /dag X 1 dag) användes som testproverna. Analyserna utfördes 4 h efter administrationen av testproverna. Värdena är medelvärde ± SEM (n = 15). bP Hotel < 0,05, cP Hotel < 0,01 jämfört med normala möss; dP Hotel < 0,05 jämfört med grupp II möss.
Tabell 2 Effekten av PK och Omez på nivåerna av TBARS, protein karbonyler, icke-protein tiol, och mucin i såriga gastric vävnad micea på dag tre av sår
Parametrar
grupp I normala kontroll
Grupp III 3: e dag såriga kontroll
grupp V PK-behandlade

grupp VI Omez behandlade
TBARS (nmol /mg protein)
1,02 ± 0,06
1,53 ± 0.06c
1,03 ± 0.09d
1,08 ± 0.05d
protein~~POS=TRUNC karbonyler (nmol /mg protein) Review 1,18 ± 0,07
2,61 ± 0.17c
1,62 ± 0.10f
1,59 ± 0.09f
NP-TSH (nmol /mg vävnad)
2,06 ± 0,09
1,73 ± 0,09
2,06 ± 0.14d
2,05 ± 0.1d
mucin (| ig /g vävnad) Review 343,30 ± 16,91
213,29 ± 17.91b
303,34 ± 17.4e
295,06 ± 15.62e
aStomach ulceration hos möss inducerades genom oral administrering av indometacin (18 mg /kg). PK (20 mg /kg /dag x 3 dagar) och Omez (3 mg /kg /dag x 3 dagar) användes som testproverna. Analyserna utfördes på dag tre av ulceration, 4 h efter den sista dosen av läkemedlet. Värdena är medelvärde ± SEM (n = 15). bP Hotel < 0,05, cP
0,001 jämfört med normala möss, dP Hotel < 0.05, EP Hotel < 0,01, FP Hotel < . 0,001 jämfört med gruppen III möss sälja Indomethacin administration markant stimulerade lipidperoxidation i mag vävnader, upphöja TBARS halten 38,8% (P Hotel < 0,01) och 53% (P Hotel < 0,001) respektive på en st och 3 rd dag sårbildning, jämfört med de normala kontrollmöss. Behandling med PK och Omez visade omedelbar verkan, vilket minskar TBARS innehåll med 20,3% och 24,6% respektive jämfört med gruppen II möss (P Hotel < 0,05). Behandling med PK och Omez tre dagar minskade den med 32,7% och 29,4% jämfört med grupp III möss (P Hotel < 0,05).
Jämfört med normalvärdet, innehållet i såriga möss protein karbonyl var högre (50%) på den första dagen (P Hotel < 0,05) som ökade med 120,3% vid topp sår (P Hotel < 0,001). Ingen av testläkemedlen visade omedelbar effekt på dag ett.

• Skyddande effekterna av (1- (4-hydroxi-fenyl) -3-m-tolyl-propenon chalkon i indometacin-inducerad gastrisk erosiv skada i råttor
• Den mänskliga gastric patogen Helicobacter pylori har en potentiell aceton karboxylas som förbättrar dess förmåga att kolonisera möss