ein mechanistisches exploration.

Heilpotenzial Picrorhiza kurroa
(Scrofulariaceae) Rhizome gegen Indometacin-induzierten Magengeschwürbildung: Magenulceration Heilpotenzial Picrorhiza kurroa (Scrofulariaceae) Rhizome gegen indomethacinvermittelten. mechanistische Exploration
Zusammenfassung
Hintergrund
die vorliegende Studie wurde das Potential der Rhizome der indischen Heilpflanze, Picrorhiza kurroa
bei der Heilung von Indometacin-induzierten akuten Magengeschwürbildung bei Mäusen zu bewerten durchgeführt und prüfen ihre Fähigkeit, oxidativen Stress und die Niveaus zu modulieren Prostaglandin (PGE 2) und EGF während des Prozesses.
Methoden
männlichen Swiss Albino-Mäuse, vereitert mit Indometacin (18 mg /kg, po, Einzeldosis) wurden zu 7 Tage mit verschiedenen Dosierungen behandelt aus der Methanol-Extrakt von P. kurroa
Rhizome (als PK bezeichnet). Der Heilungsfähigkeit der wirksamsten Dosis von PK (20 mg /kg, p. O. × 3 d) wurde mit der von Omeprazol (Omez) verglichen (3 mg /kg, p. O. × 3 d). Die Wirkung der Arzneimittel-Behandlung für ein bis drei Tage auf die biochemischen Parameter wurden durch Vergleich der Ergebnisse mit denen von unbehandelten Mäusen der 1 st und 3 dritten Tag der Ulzeration beurteilt. Die Magengewebe der Mäuse für die biochemische Analyse verwendet wurden.
Ergebnisse | Die makroskopische Indizes zeigten eine maximale Ulzerationen auf der 3 dritten Tag nach der Verabreichung Indometacin, die tatsächlich von PK geheilt wurde. Unter den optimierten Behandlungsregime, reduziert PK und Omez das Geschwür Indizes um 45,1% (P
< 0,01) und 76,3% (p
< 0,001)., Im Vergleich zu den unbehandelten Mäusen ulzeriert
Im Vergleich zu den vereitert unbehandelten Mäusen, die mit PK behandelt für 3 Tage zeigte verringerte den Gehalt an Thiobarbitursäure reaktiven Substanzen (TBARS) (32,7%, P
< 0,05) und Protein-Carbonyl (37,7%, P <
; 0,001) und erhöhte Mucin (42,2%, P
< 0,01), Schleimhaut PGE 2 (21,4%, P
< 0,05) und Ausdrücke von COX-1 und 2 (26,9% und 18,5%, P
< 0,05), EGF (149,0%, P
< 0,001) und VEGF (56,9%, P
< 0,01). Omez reduziert die TBARS (29,4%, P
< 0,05) und Protein carbonyl (38,9%, P
< 0,001) und erhöhte Mucin (38,3%, P
< 0,01), ohne dass ändern Sie die anderen Parameter signifikant.
Fazit
PK (20 mg /kg, po × 3 Tage) konnte effektiv durch die Reduzierung von oxidativem Stress und die Förderung der Mucinsekretion, Prostaglandin-Synthese und Vermehrung Ausdrücke indomethacinvermittelten Magengeschwürbildung bei Mäusen zu heilen von Cyclooxygenase-Enzyme und Wachstumsfaktoren.
Hintergrund
mit den nicht-steroidalen Antirheumatika (NSAR), die Magen-Darm-Toxizität ist ein wichtiges medizinisches Problem trotz der jüngsten pharmazeutischen Fortschritte [1]. Neben Magenulzeration induzieren, werden die NSAIDs auch die Heilung von Geschwüren [2, 3] zu hemmen. Folglich setzt Prävention von Magen-Darm-Erkrankung von Interesse sowohl für die klinische Praktiker und Forscher zu sein. Trotz ihrer Wirksamkeit bei der NSAID induzierten Magengeschwürbildung Verwaltung verleihen, die derzeit verfügbaren synthetischen Anti-Ulkus-Medikamente Nebenwirkungen und sind auch teuer vor allem für die ländliche Bevölkerung. Zu diesem Zweck haben wir vielversprechende Anti-ulcerogene Aktivität von mehreren pflanzlichen Produkten berichtet [4-6]
Picrorhiza kurroa
. (Familie: Scrofulariaceae, allgemeiner Name: Picrorhiza, katuka, kutki) ist eine kleine Staude wächst in den hügeligen Teilen der Nord-West-Himalaya-Region in Indien und Nepal. Das Blatt, Rinde und die unterirdischen Teile der Pflanze sind in erster Linie Rhizome in den traditionellen indischen (ayurvedischen) Systeme der Medizin seit der Antike weit verbreitet. Obwohl es Antioxidationsmittel zeigt, entzündungshemmende und immunmodulierende Aktivitäten ist es besonders geschätzt für die hepatoprotektive Wirkung. Die bitteren Rhizome von Picrorhiza
seit Tausenden von Jahren in Indien verwendet wurden, Menschen mit Verdauungsstörungen [7] und Verstopfung aufgrund unzureichender Verdauungssekret [8] zu behandeln. Picrorhiza
als trophorestorative Kraut für die Leber betrachtet, sowie eine potente Immunstimulans [9]. Seine konstituierenden wird picroliv auch choleretische Wirkung [10], und zu verhindern, Leberschädigung verursacht durch Ethanol [11], Chemikalien [12] und Mikroorganismen [13].
Das primäre Ziel dieser Untersuchung berichtet, besitzen war die Heilung zu studieren Eigenschaft des Methanolextraktes von P. kurroa
Rhizom (bezeichnet als PK) gegen Indomethacin-induzierten akuten Magen-Geschwüren von Mäusen gegenüber
die des kommerziellen Droge, Omeprazol (Omez). Indomethacin, ein Vertreter der nicht-steroide entzündungshemmende Arzneimittel (NSAID) -Familie, verursacht Magengeschwüren durch verschiedene Verfahren, einschließlich der Erzeugung von ROS, die Hemmung der Prostaglandin-Synthese, die Infiltration von polymorphkernigen Leukozyten, Induktion von Apoptose, und Initiierung der Lipidperoxidation [14, 15]. Daher beurteilt das Geschwür Heilungskräfte der Medikamente, die von der Histopathologie, wurde bei der Verringerung der Indometacin-induzierten oxidativen Stress mit ihren Auswirkungen korreliert. Die antioxidative Aktivität der Testproben wurde im Hinblick auf ihre Fähigkeit hin untersucht, um oxidative Schäden an Lipiden, Proteinen und Thiol-abhängige antioxidative Abwehr im Magengewebe zu schützen. Ferner wird die NSAIDs-induzierten Gastropathie auch auf die verringerte Synthese der Prostaglandine [16] zugeschrieben wird. Folglich wurden die Rolle der Testproben in zunehmenden Schleimabsonderung und die Expression des epidermalen Wachstumsfaktors (EGF), sowie Hebe PGE 2 Synthese untersucht.
Methods
Pflanzenmaterial
The Rhizom von P. kurroa
(bezeichnet als PK), aus dem lokalen Markt beschafft wurde für die vorliegende Arbeit verwendet. Die Anlage wurde taxonomisch identifiziert (Zugangs-Nr. 324139) durch den Botanischen Survey of India, Indian Botanischer Garten, Kokata, Indien.
Chemicals
2-Thiobarbitursäure (TBA), Ethanol, Butanol und Ethylacetat aus beschafft E. Merck (Mumbai, Indien), während Trichloressigsäure (TCA) wurde von Thomas Baker (Mumbai, Indien). Alcianblau, Indomethacin, Rinderserumalbumin (BSA), haematoxylene, Alaun, Eosin, butyliertes Hydroxytoluol (BHT), Guanidin-Hydrochlorid, Trifluoressigsäure (TFA), Omeprazol (Omez), 3,3 '-diaminobenzidine (DAB), Kaninchen-Anti -mouse EGF und Trizma Basis wurden von Sigma Chemicals (St. Louis, MO, USA) bezogen. Weitere Reagenzien verwendet wurden, waren 35% iges Wasserstoffperoxid (Lancaster, Morecambe, UK), 2,4-Dinitrophenylhydrazin (DNPH), Dinatriumhydrogenphosphat und Natriumdihydrogenphosphat (BDH, Pool Dorset, UK), Saccharose und 5,5'-Dithiobis -2-nitrobenzioc Säure (DTNB) (SRL, Mumbai, Indien), Pferd und Ziegenserum (Banaglore Genie, Banaglore, Indien), PGE 2 Metabolit-Kit (Cayman Chemical, Michigan, USA) und Peroxidase-konjugierter Ziege anti- Kaninchen-IgG (EMD Biosciences, Sandiego, USA).
Instrumentation
Die Extinktion Spektrophotometrie wurde bei 25 ° C unter Verwendung eines Jasco V-550 UV-Vis-Spektrophotometer. Wavelength-Scans und Absorptionsmessungen wurden in 1 ml Quarz-Zellen von 1 cm Weglänge hergestellt. Herstellung
von Pflanzenextrakten
Die luftgetrockneten Rhizome von P. kurroa
(250 g) wurden in feine Stücke gehackt, in Methanol (1 l) für zwei Tage durchtränkt und der Überstand dekantiert. Nach Wiederholung der gesamte Vorgang dreimal, die vereinigten Extrakte wurden durch ein Nylonnetz filtriert und im Vakuum eingeengt und schließlich lyophilisiert dampft. Der Rohextrakt, als PK im gesamten Manuskript bezeichnet, wurde in einem Vakuumexsikkator gelagert.
Herstellung der Medikamente
Die Medikamente von PK und Omez als wässrige Suspensionen in 2% Akaziengummi als Vehikel hergestellt wurden, und verwaltet oral an die Mäuse.
Pharmakologische Tests
Tiere und experimentelle Protokoll für Ulzerationen
männlichen Swiss Albino-Mäuse bei Dr. BC Roy Post Graduate Institute of Basic Medical Sciences, Kolkata, Indien und BARC Laboratory Animal House Einrichtung gezüchtet wurden , Mumbai, Indien. Diese wurden beschafft nach Freigabe zu erhalten (Post Graduate Institute of Basic Medical Sciences, Kolkata Tierethikkommission 507 /CPCSEA, Sanction Nr IAEC /SB-2/2004 /UCM-16 vom 06.15.04 und BARC Tierethikkommission (BAEC-) , Versuchstierhaltung. sanktionieren Nr. BAEC- /03/05 vom 11.07.05) von den jeweiligen Tierethikkommissionen der beiden Zentren und wurden nach Internationalen Tierethikkommission Richtlinien behandelt. Die 6-8 Wochen alten Mäusen (25-30 g) wurden als pro NIN, Hyderabad, Indien auf eine ausgewogene Ernährung Labor aufgezogen und Leitungswasser ad libitum gegeben. Sie wurden bei 20 ± 2 ° C, 65-70% Luftfeuchtigkeit, und Tag /Nacht-Zyklus (12 h /12 h) gehalten. Zu Beginn jedes Experiments wurden alle Tiere durch typische Einkerbungen im Ohr und Gliedmaßen identifiziert und dann randomisiert. Dies wurde getan, alle Experimente in verblindet durchzuführen. Ulzerationen in den Mäusen wurde durch Verabreichung von Indomethacin induzierte (18 mg /kg, p. O.) In destilliertem Wasser gelöst und in dem Fahrzeug, Akaziengummi (2%) als Einzeldosis ausgesetzt. Unsere Studien mit 5, 10, 15, 18, 20, 25 und 30 mg /kg, p. O. der Offenbarungs Indometacin, dass die niedrigsten Dosierungen (5 und 10 mg /kg) zur Verfügung gestellt kleinere Ulzerationen nach 6 h der Verwaltung, während die höheren Dosen (25 und 30 mg /kg) auf die Sterblichkeit geführt. Die gewählte Dosis (18 mg /kg) erzeugt optimale Geschwüre, die mit einer Entzündung und Schleimhaut Beleidigung, ohne dass die Sterblichkeit bei Mäusen verursacht. Die Tiere wurden von Nahrung entzogen, aber hatten freien Zugang Wasser 24 Stunden vor dem Geschwür Induktion zu erschließen.
Standardisierung der Medikamentendosis
für die Standardisierung von Arzneimitteldosen, PK (5, 10, 20 und 40 mg /kg) wurde als Einzeldosis pro Tag bis zu sieben Tagen. Die erste Dosis von PK und Omez wurden 6 h nach der Indomethacin-Verabreichung gegeben. In den folgenden sechs Tagen wurden die Testproben bei 09.00 Uhr an jedem Tag. Fünf Mäuse wurden in jeder Gruppe entnommen, und jeder Versuch wurde dreimal wiederholt. Die Mäuse wurden am 1. geopfert st, 3 rd, 5 th und 7 th Tage, 4 Stunden nach der letzten Dosis von PK zu verabreichen. Das Ausmaß der Heilung von Geschwüren wurde aus den makroskopischen Schäden Scores (MDS) der unbehandelten und behandelten vereitert Mäuse an den jeweiligen Tagen beurteilt. Die optimierte Behandlungsregime (Arzneimittel Dosis und Dauer der Behandlung) von der MDS der Gruppen von Mäusen beurteilt wurden die oben Behandlung.
Beurteilung von Geschwüren und Heilung von MDS
Die Mäuse nach einer Überdosis mit Thiopental geopfert wurden. Der Magen von den normalen und behandelten Gruppen wurden schnell entfernt, entlang der großen Kurvatur geöffnet und gründlich mit physiologischer Kochsalzlösung gespült. Die ulzeriert Magenschleimhaut Bereiche wurden unter Verwendung einer transparenten Folie und ein Binokular visualisiert. Der MDS wurde bewertet [17] durch die Schädigung des Magens auf einer Skala von 0-4 Benotungsskala, auf der Grundlage der Schwere der Hyperämie und hämorrhagische Läsionen: 0 - fast normale Schleimhaut, 0,5 - Hyperämie, 1 - ein oder zwei Läsionen, 2 - schwere Verletzungen , 3 - sehr schweren Läsionen, 4 - Schleimhaut voller Läsionen. (Läsionen - hämorrhagischen Erosionen, Hyperämie - Gefäßstauungen). Die Experimente wurden von zwei Forschern der Gruppe und Behandlung von Tieren blind durchgeführt. Die Schnitte wurden codiert ein Vorurteil des Beobachters auszuschließen. Die Daten für die Analysen sind als Mittelwert ± SEM aus der Überprüfung mindestens drei Abschnitte pro Tier präsentiert und fünf Tiere pro Gruppe.
Untersuchungen über die biochemischen Parameter
Die MDS Ergebnisse maximale Heilung von Geschwüren ergab nach drei Tagen medikamentöse Behandlung. Der Magen Ulzerationen bei den unbehandelten Mäusen auch Peak auf der 3 erreicht dritten Tag nach der Verabreichung Indometacin. Daher untersuchten wir die biochemischen Parameter unter der optimierten Behandlungsregime [PK (20 mg /kg) und Omez (3 mg /kg)] bis zum 3 dritten Tag der Ulzeration nur. Dazu werden die folgenden sieben Gruppen mit jeweils 5 Mäusen wurden aus den für die MDS-Assay verwendet werden, ausgewählt und die Daten werden von drei Replikaten gezeigt abgeleitet:
Gruppe I - normale Kontrollmäuse; Gruppe II - vereitert Mäuse und geopfert nach 10 h (gilt als ein Tag); Gruppe III - vereitert Mäuse und opferte auf dem 3 rd Tag; Gruppe IV-V - vereitert Mäuse, behandelt mit PK und Omez jeweils für 1 Tag und geopfert 4 Stunden nach der Verabreichung der Testproben; Gruppe VI-VII. - Vereitert Mäuse, behandelt mit PK und Omez jeweils für 3 Tage, und in der 3 rd Tag, 4 h nach der letzten Dosis der Testproben geopfert
Quantifizierung von Proteinen und Lipiden Schäden während Geschwüre und Heilung
Drüsenmagen Gewebe wurden von fünf Tieren, die für jedes Gewebe vereinigt, mit geeigneten Puffer gespült und für biochemische Untersuchungen verwendet. Die Nassgewichte der Gewebe wurden aufgezeichnet und die Experimente wurden in dreifacher Ausführung durchgeführt. Die Drüsenabschnitte von der Steuerung, ulzeriert und mit Arzneimittel behandelten Mäusen zu verschiedenen Zeitintervallen entnommen wurden, in einem 50 mM Phosphatpuffer, pH 7,4 und zentrifugiert bei 1200 × g zu erhalten, der Überstand mit einem Glasrohr mit Teflon Homogenisieren homogenisiert. Die Menge an Protein Carbonyle in dem Gewebehomogenat wurde nach einer beschriebenen Methode bestimmt [18]. DNPH (4 ml, 10 mM) in 2 M HCl wurde zu dem Überstand zugegeben (1,0 ml), die für 1 h unter intermittierendem Schütteln inkubiert. Eiskalter 20% iger wässriger TCA-Lösung (5 ml) wurde zugegeben und die Mischung 15 min inkubiert. Das ausgefällte Protein wurde 3 mal mit Ethanol-Ethylacetat (1: 1), in 1 ml einer Lösung gelöst, enthaltend 6 M Guanidin-HCl in 20 mM Kaliumphosphat (einbasischen), eingestellt auf pH 2,3 mit Trifluoressigsäure. Nach dem Zentrifugieren wurde die Absorption des Überstandes bei 362 nm (∈ = 2,2 x 10 4 M -1 cm -1) zu lesen. Für die Analyse der Lipidperoxidation (in Bezug auf
TBARS), eine 10% Homogenat aus jeder der entsprechenden Proben wurde in einem Puffer (320 mM Saccharose, 5 mM HEPES, 20 mM EDTA und 0,01% BHT) hergestellt. Diese wurden einer differenzielle Zentrifugation (1200 × g und 12000 × g), um die Mitochondrien-Pellets zu erhalten, die mit dem Puffer gewaschen (150 mM KCl und 20 mM Phosphatpuffer) und schließlich suspendiert in einem 50 mM Phosphatpuffer, pH 7,4. Die mitochondriale Membranfraktion (1 ml) mit TCA-TBA-HCl (2 ml, 15% TCA, 0,375% TBA, 0,25 N HCl), die 0,01% BHT, für 15 min auf einem siedenden Wasserbad erhitzt behandelt, abgekühlt und zentrifugiert . Die Absorption des Überstandes wurde bei 535 nm (∈ = 1,56 x 10 5 M -1 cm -1) gemessen [19].
Messung der Nicht-Protein-Thiol (NP-TSH )
berichteter Verfahren [20], die Magenschleimhaut NP-TSH wurde im Anschluss gemessen. Kurz gesagt, Fundus Magen Homogenate aus den Steuer, ulzeriert, Arzneimittel behandelten Mäuse wurden in 0,2 M Tris-HCl-Puffer, pH 8,2, enthaltend 20 mM EDTA und zentrifugiert hergestellt. Ein Aliquot des Homogenats (1 ml) wurde mit eiskalter 20% TCA (1 ml) ausgefällt und zentrifugiert. Der Überstand (1 ml) wurde zu 2 ml von 0,8 M Tris-HCl-Puffer, pH 9, enthaltend 20 mM EDTA und mit 0,1 ml 10 mM DTNB. Die Absorption des gelben Chromogens bei 412 nm (∈ = 13,6 x 10 4 M -1 cm -1) gelesen wurde.
Mucin-Test
eine gemeldete Methode Nach [21] wurde das freie Mucin im Magengewebe geschätzt. Kurz gesagt wurde der glandulären Teil des Magens aus dem Lumen des Magens getrennt, gewogen und sofort in 10 ml 0,1% w /v Alcianblau (Ab) -Lösung (in 0,16 M Saccharose-Lösung, gepuffert mit 0,05 mM Natriumacetat-Lösung überführt, pH-Wert auf 5,8 eingestellt). Nach 2 h Anfärben wurde das überschüssige Farbstoff von dem Gewebe durch zwei aufeinanderfolgende Spülungen mit 10 ml 0,25 M Sucrose-Lösung entfernt. Der Farbstoff mit der Magenwand Schleim komplexiert wurde von intermittierendem Schütteln mit 10 ml 0,5 M Magnesiumchlorid extrahiert (1 min) in 30 min-Intervallen für 2 h. Der blaue Extrakt (2 ml) wurde kräftig mit einem gleichen Volumen Diethylether geschüttelt. Die resultierende Emulsion wurde bei 3600 rpm für 10 min zentrifugiert und die Absorption der wässrigen Schicht wurde bei 580 nm abgelesen. Die Menge des Ab pro g nasse Drüsengewebe extrahiert wurde aus einer Standardkurve berechnet vorbereitet verschiedenen Konzentrationen von Ab verwenden.
COX-1 und COX-2-Expression Assay
Innerhalb von 30 Minuten nach der Ernte, die ulzeriert Teile der Magengewebe wurden in neutral gepufferte 10% Formol Saline und im Schnitt fixiert. Nach 24 h der Fixierung, gefolgt von in einem Paraffinblock einzubetten, wurde in Abschnitte von 5 Mikrometer geschnitten, auf einem Glasobjektträger und die Ausdrücke von COX-1 und COX-2 wurden nach einer berichteten Verfahren quantifiziert [22] mit geringfügigen Modifikationen. Nach Entparaffinierung in Xylol, wurden die Schnitte mit einer abgestuften Reihe von Alkohol behandelt und anschließend in PBS bei pH 7,5 rehydratisiert. Die Schnitte wurden der Reihe nach mit 3% Wasserstoffperoxid in PBS und Proteinblockern (5% Rinderserumalbumin, 5% normalem Ziegenserum in PBS) behandelt und über Nacht bei 4 ° C mit dem primären Antikörper (Maus-anti-COX-1 inkubiert und COX 2, 1: 200). Nach Inkubation für 2 h bei Raumtemperatur mit Peroxidase-konjugiertem Kaninchen-anti-Maus-Sekundärantikörper (1: 500), eine positive Reaktion wurde für 2 bis 5 min durch Bestrahlen mit stabilen DAB nachgewiesen. In Kontrollabschnitte wurden Antikörper weggelassen und nur wurde PBS zugegeben. Nach Gegenfärbung Hämatoxylin die Folien mit Meyer wurden die Intensitäten von farbigen immunolocalized Produkte mit Biovis MV500 Software ausgewertet. Fünf Bereiche von jedem Abschnitt wurden gescannt und die integrierte optische Dichte (IOD) in jedem Bereich berechnet. Der IOD der Negativkontrolle wurde von der IOD jeder experimentellen Teil für jedes Tier in allen Gruppen abgezogen.
Prostaglandin-Assay
das Corpus (volle Dicke) Nach der Ernte des Magens, wurde ausgeschnitten, gewogen (100 mg ) und in 10 mM Natriumphosphatpuffer, pH 7,4 (1 ml) suspendiert. Das Gewebe wurde zerkleinert fein mit einer Schere und für 20 min bei 37 ° C inkubiert. Nach Zentrifugation (9000 × g), das Prostaglandin E 2 (PGE 2) -Spiegel in dem Überstand wurden durch ELISA gemessen, [23], und die Konzentrationen werden als pg /mg Protein ausgedrückt.
EGF-Expression Assay
die Immunfärbung von EGF wurde durchgeführt [22] nach einem ähnlichen Verfahren verwendet für COX-1 und COX-2, mit geringen Modifikationen. In diesem Fall wird, nachdem die endogene Peroxidase und Behandlung mit den Protein-Blocker blockieren, wurden die Gewebeschnitte über Nacht bei 4 ° C mit dem primären Antikörper bei der geeigneten Verdünnung inkubiert. In Kontrollabschnitten wurde nur PBS hinzugefügt, um die Antikörper weggelassen wurde. Nach Inkubation für 1 h bei Raumtemperatur mit Peroxidase-konjugiertem Ziege-anti-Kaninchen-IgG, wurde eine positive Reaktion durch Belichtung detektiert für 2 bis 5 min nach DAB. Nach Gegenfärbung Hämatoxylin die Folien mit Meyer wurden die Intensitäten von farbigen immunolocalized Produkte mit Biovis MV500 Software quantifiziert. Fünf Bereiche von jedem Abschnitt wurden gescannt und die integrierte optische Dichte (IOD) in jedem Bereich berechnet. Der IOD der Negativkontrolle wurde von der IOD jeder experimentellen Teil für jedes Tier in allen Gruppen abgezogen.
Assay von Serum-VEGF
Das Serum VEGF wurde die Blutproben aus der absteigenden Aorta gezogen gemessen, mit kommerziell erhältlichen ELISA-Kits Anweisung folgenden Hersteller.
Gastric sekretorischen Test (pylorous Ligatur-Modell)
Um die Auswirkungen der Drogen-Test auf die Magensekretion studieren, die Pylorus Ligatur der in unserem Labor standardisiert Magen durchgeführt wurde. Eine Gruppe von Mäusen (experimentelle Kontrolle) erhielt 2% Akaziengummi in destilliertem Wasser (0,2 ml pro Maus, po), während die verschiedenen Behandlungsgruppen wurden PK gegeben (20 mg /kg × 3 d), Omez (3 mg /kg × 3 d), Indomethacin (18 mg /kg × 1 d) als solche oder zusammen mit PK (20 mg /kg x 3 d), Omez (3 mg /kg x 3 d) jeweils. Auf der 3 dritten Tag wurde das Abdomen der Tiere unter leichter Äthernarkose für Bindung pylori (PL) geöffnet. Nach dem Schließen des Bauches, wurden die Tiere in Käfigen unter Lichtzurückhaltung setzen und aus der Narkose zu erholen. Nach 6 h wurden die Tiere getötet, der Bauchraum geöffnet und eine Ligatur wurde um den Ösophagus plaziert. Magen wurde entfernt, und der Inhalt wurde in einen graduierten Zentrifugenröhrchen entleert nach entlang der großen Kurvatur benachbart Pylorus-Ligation ein kleiner nick machen. Die Mageninhalte wurden gesammelt, gemessen, zentrifugiert und zur biochemischen Analyse unterzogen.
Statistical analysis
die Daten als Mittelwert ± SEM dargestellt. Parametric Daten, die beinhaltet alle biochemischen Parameter analysiert wurden unter Verwendung eines gekoppelten 't' Test für die gepaarte Daten oder eine einfache Varianzanalyse (ANOVA), gefolgt von einem Dunnet multiple Vergleiche Nachtest. Nichtparametrische Daten (makroskopische Scoring) wurden unter Verwendung analysiert Kruskal-Wallis-Test (nichtparametrischer ANOVA), gefolgt von einer mehrfachen Vergleiche Dunn-Test schreiben. Ein Wahrscheinlichkeitswert von P
< 0,05 wurde als signifikant angesehen. Der IC 50 -Wert von PK geschätzt wurde die Probit-Analyse und das Signifikanzniveau der Analysen durch die Chi-Quadrat-Test untersucht werden.
Ergebnisse | Extraktion und Analyse phytochemical
der Extraktionsprozess gab der Methanol-Extrakt, PK in 12,57% w /w Ausbeute. Die TLC-Analyse von PK es offenbart ein komplexes Gemisch aus einer Vielzahl von organischen Verbindungen sein, die meisten von ihnen vorhanden als Glykoside sind, wie durch Molisch-Test ergab. Vorhandensein von Apocynin, andorsin, picrosides I und II und katukoside zusammen mit anderen nicht identifizierten Verbindungen in PK wurde durch Vergleich ihrer TLC-Profile mit denen der authentischen Proben bestätigt.
Standardization of Dosis von PK für die Heilung Magengeschwüren an Mäusen
die Dosis von PK für eine effektive Heilung von Geschwüren wurden durch die Durchführung der Behandlung mit PK optimiert (5, 10, 20 und 40 mg /kg) bis zu sieben Tage und den Vergleich der MDS-Werte der behandelten und unbehandelten Mäuse an den jeweiligen Tagen . Der Zeitverlauf des Ausmaßes der Magengeschwürbildung (von MDS-Werte ergab) und dessen Prävention durch verschiedene Dosen von PK sind in gezeigt. 1. Die Mäuse, die Fahrzeug zeigte nur keine Schleimhautläsionen. Behandlung von Mäusen mit Indomethacin (18 mg /kg) erzeugte typische zeitabhängige akute Läsionen der Magenschleimhaut. Die Ulzerationen erreichte Maximum auf der 3 rd Tag von Geschwüren, wenn die von 162,1% erhöht MDS Wert auf, dass im Vergleich zum ersten Tag (P
< 0,001). Danach gab es eine allmähliche Erholung aufgrund der natürlichen Heilung, und auf der 7 th Tag nach Ulzerationen wurde der MDS-Wert um 49,2% reduziert im Vergleich zu dem am ersten Tag (P
< 0,01). Figur 1 Der Zeitverlauf von Magengeschwüren und deren Verhinderung durch verschiedene Dosen von PK. Magengeschwürbildung bei Mäusen wurde durch orale Verabreichung von Indomethacin (18 mg /kg Körpergewicht) induziert. Verschiedenen Dosen von PK wurden für die Experimente verwendet. Die Ulcus Indizes wurden an verschiedenen Tagen gemessen 4 h nach der letzten Dosis von PK und die Werte sind Mittelwerte ± S.E.M. (N = 15). aP
< 0,01, Kp
< 0,001 im Vergleich zu ersten Tag unbehandelten Mäusen vereitert; cP
< 0,01, dP
< 0,001 im Vergleich zur Gruppe III-Mäusen.
PK bei allen gewählten Dosen zeigten maximale Heilung von Geschwüren auf der 3 dritten Tag der Ulceration, und die Wirkung war dosisabhängig. Im Vergleich zu entsprechenden Kontrollen ulzeriert die MDS Verringerungen (45,1% -52,9%, P
< 0,01) von PK (20 und 40 mg /kg) waren ähnlich und signifikant besser als die an seinem unteren Dosis (10 mg /kg). Die Wirkung von PK (5 mg /kg) war nicht signifikant. Unter ähnlichen Bedingungen, Behandlung mit Omez (3 mg /kg) für 3 Tage, um den MDS Wert von 76,3% reduziert (P
< 0,001) im Vergleich zu dem der Gruppe III-Mäusen. Die Heilung beobachtet auf der Behandlung mit PK bis sieben Tage nach oben erstreckt besser war als die mit dem Regime dreitägige Behandlung beobachtet. ein Großteil davon war jedoch aufgrund autohealing, mit weniger Beitrag von PK.
Insgesamt Behandlung mit PK (20 mg /kg) und Omez (3 mg /kg) für 3 Tage nach Geschwür Induktion optimale Heilung von Geschwüren zur Verfügung gestellt . Im Hinblick darauf, alle nachfolgenden Versuche wurden mit dem gleichen Behandlungsschema durchgeführt. Die gewählte Dosis Omez, die für den Menschen auch die empfohlene therapeutische Dosis wurde von uns optimiert [6].
Für die unbehandelten Mäusen, peak Ulzerationen (maximal MDS) wurde am dritten Tag der Verabreichung beobachtet Indomethacin. Daher wurde dieser Zeitpunkt die IC 50 -Wert von PK, um herauszufinden, ausgewählt. Unter Berücksichtigung der MDS-Werte der 3 rd Tag unbehandelten Mäusen als 100% vereitert, die IC 50 -Wert von PK gefunden wurde 23.30 ± 3,50 mg /kg.
Qualitative Bewertung
Die makroskopische Untersuchungen zeigten, dass Indomethacin Verabreichung zu einer deutlichen Schädigung des Drüsenteil der Mäuse Magenschleimhaut geführt. Innerhalb von 6 Stunden nach der Verabreichung Indometacin, oberflächliche Erosion und leichte Entzündung im Magen anzeigte akuten Ulzerationen beobachtet. Am Tag der Geschwür Induktion, Verlust von Becherzellhyperplasie Struktur zusammen mit kryptischen Architektur war das herausragende Merkmal in den meisten der unbehandelten Mäusen. Auch leichte entzündliche Infiltrat Neutrophilen enthielt, wurde in der Lamina propria beobachtet. Behandlung mit sowohl PK und Omez sogar für einen Tag den Schaden mit fleckige Bereiche von denudierten Struktur Epithel beschränkt.
Indomethacin induzierte Gastropathie wurde am dritten Tag viel ausgeprägter zeigend mehrere Bereiche der Ulzeration mit entzündlichen Infiltrat enthaltenden Neutrophilen und Makrophagen in das ausgestanzte Schleimhaut, sub-Schleimhaut und Muskelmantel zusammen mit hämorrhagischen serosa. Eine große Anzahl von abnormalen Zellen mit veränderten Zellkern zu Zytoplasma-Verhältnis wurden bemerkt. Behandlung mit PK und Omez für 3 Tage führte zu einer reduzierten Anzahl von Entzündungszellen zusammen mit einer erhöhten Anzahl von gesunden, normalen Zellen in der Magenschleimhaut, sowie submucosa, serosa und Muskelschichten mit mindestens Schleimhaut Staus.
Wirkung von PK und Omez auf die Lipidperoxidation und Proteinoxidation in Magengewebe
die Auswirkungen von Indometacin Aufnahme allein und nach der Verabreichung von PK und Omez über das Ausmaß der Lipidperoxidation (gemessen an der TBARS), Proteinoxidation (gemessen in Bezug auf Protein Carbonylgehalts ), die Thiol-abhängige Abwehrsystem (NP-TSH) und in den Magengewebe von Mäusen Mucin-Gehalt sind in Tabelle 1 und Tabelle 2.Table 1 die Wirkung von PK und Omez auf den Ebenen der TBARS, Protein Carbonyle, gezeigt nicht- Protein Thiol und Mucin in der ulzeriert Magen-Gewebe von micea am ersten Tag von Geschwüren
Parameter
Gruppe I Mäuse normale Steuerung

Gruppe II 1. Tag vereitert Kontrolle
Gruppe III PK-behandelten
Gruppe IV
TBARS-Omez behandelt (nmol /mg Protein)
0,85 ± 0,03
1,18 ± 0.05c
0,94 ± 0.06d
0,89 ± 0.07d
Proteincarbonyle (nmol /mg Protein)
1,08 ± 0,05
1,62 ± 0.09b
1,49 ± 0,12
1,53 ± 0,07
NP-TSH (nmol /mg Gewebe)
1,99 ± 0,09
1,66 ± 0.08b
1,86 ± 0,08
1,81 ± 0,09
Mucin (ug /g Gewebe)
335,03 ± 14,43 213,02 ± 0.59b

240,33 ± 20,49 253,33 ±
14.53d
aStomach Ulzerationen in Mäusen induziert wurde, durch orale Verabreichung von Indomethacin (18 mg /kg) . PK (20 mg /kg /Tag × 1 Tag) und Omez (3 mg /kg /Tag × 1 Tag) wurden als Testproben verwendet. Die Assays wurden durchgeführt, 4 h nach der Verabreichung der Testproben. Die Werte sind Mittelwerte ± SEM (n = 15). bP
< 0,05 cP
< 0,01 im Vergleich zu normalen Mäusen; dP
< 0,05 im Vergleich zur Gruppe II Mäusen.
Tabelle 2 Die Wirkung von PK und Omez auf den Ebenen der TBARS, Protein Carbonyle, Nicht-Protein-Thiol und in der ulzeriert Magengewebe micea am Tag drei der Ulzeration
Mucin Parameter
Gruppe I normale Steuerung Bei
Gruppe III 3. Tag vereitert Kontrolle
Gruppe V PK-behandelten
Gruppe VI
TBARS-Omez behandelt (nmol /mg Protein)
1,02 ± 0,06
1,53 ± 0.06c
1,03 ± 0.09d
1,08 ± 0,05 D
Protein Carbonyle (nmol /mg Protein)
1.18 ± 0.07 2.61 ± 0.17c

1.62 ± 1.59 ± 0.10f
0.09f
NP-TSH (nmol /mg Gewebe)
2,06 ± 0,09
1,73 ± 0,09
2,06 ± 0.14d
2,05 ± 0,1 D
Mucin (ug /g Gewebe)
343,30 ± 16,91
213,29 ± 17.91b
303,34 ± 295,06 ± 17.4e
15.62e
aStomach Ulzerationen bei Mäusen wurde durch orale Verabreichung von Indomethacin (18 mg /kg) induziert. PK (20 mg /kg /Tag x 3 Tage) und Omez (3 mg /kg /Tag x 3 Tage) wurden als Testproben verwendet. Die Tests wurden am Tag drei der Ulzeration durchgeführt, 4 h nach der letzten Dosis des Arzneimittels. Die Werte sind Mittelwerte ± SEM (n = 15). bP
< 0,05 cP
0,001 im Vergleich zu normalen Mäusen, dP
< 0,05, eP
< 0,01 fp
< . 0,001 im Vergleich zu der Gruppe III Mäuse
Indometacin Verwaltung deutlich Lipidperoxidation im Magengewebe stimuliert, um 38,8% der TBARS Inhalt erhebend (P
< 0,01) und 53% (P
< 0,001), die jeweils auf die 1 st und 3 dritten Tag der Ulceration, im Vergleich zu derjenigen der normalen Kontrollmäusen. Die Behandlung mit PK und Omez zeigte sofortiger Wirkung die TBARS-Gehalt von 20,3% und 24,6% zu reduzieren bzw. im Vergleich zu der Gruppe II-Mäuse (P
< 0,05). Die Behandlung mit PK und Omez für drei Tage es reduziert um 32,7% und 29,4% im Vergleich zu den Gruppe III-Mäuse (P
< 0,05).
Auf den Normalwert Im Vergleich war das Protein Carbonylgehalts der vereitert Mäuse höher (50%) am ersten Tag (P
< 0,05), die von 120,3% bei Spitzen Ulzeration erhöht (P
< 0,001). Keine der Testmedikamente zeigte sofortige Wirkung am ersten Tag.

• Schutzwirkungen von (1- (4-hydroxy-phenyl) -3-m-tolyl-propenon Chalcon in Indomethacin-induzierten Magen erosive Schäden in Ratten
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