La guérison potentielle de Picrorhiza kurroa (Scrofulariaceae) rhizomes contre l'ulcération gastrique induite par l'indométhacine: un exploration.

mécaniste guérison potentielle de Picrorhiza kurroa
(Scrofulariaceae) rhizomes contre l'ulcération gastrique induite par l'indométacine-:. Une exploration mécanique
Résumé
Contexte
la présente étude a été entreprise pour évaluer le potentiel des rhizomes de la plante médicinale indienne, Picrorhiza kurroa
dans la guérison induite indométacine estomac aiguë ulcération chez la souris et d'examiner sa capacité à moduler le stress oxydatif et les niveaux de prostaglandines (PGE 2) et EGF au cours du processus.
Méthodes
souris albinos Swiss mâles, ulcérées par indométacine (18 mg /kg, po, dose unique) ont été traités jusqu'à 7 jours avec différentes doses de l'extrait de méthanol de P. kurroa
rhizomes (désigné comme PK). La capacité de guérison de la dose la plus efficace de PK (20 mg /kg, p. O. X 3 d) a été comparée à celle de l'oméprazole (Omez) (3 mg /kg, p. O. X 3 d). Les effets de la drogue pour le traitement d'un à trois jours sur les paramètres biochimiques ont été évalués en comparant les résultats avec celle de souris non traitées du 1 er et 3 e jour d'ulcération. Les résultats des tissus de l'estomac des souris ont été utilisés pour l'analyse biochimique.
Les indices macroscopiques ont révélé une ulcération maximale sur la 3 e jour après l'administration d'indométacine, qui a été effectivement guéri par PK. Sous le régime de traitement optimisé, PK et Omez réduit les indices d'ulcère de 45,1% (P
< 0,01), et 76,3%, respectivement (P
< 0,001)., Par rapport aux souris non traitées ulcérées
par rapport aux souris non traitées ulcérées, ceux traités avec PK pendant 3 jours ont montré une diminution des niveaux de substances réactives à l'acide thiobarbiturique (TBARS) (32,7%, P
< 0,05) et la protéine carbonyle (37,7%, P
<0,001), et une augmentation de la mucine (42,2%, P
< 0,01), la muqueuse PGE 2 (21,4%, P
< 0,05), et les expressions de la COX-1 et 2 (26,9% et 18,5%, P
< 0,05), EGF (149,0%, P
< 0,001) et le VEGF (56,9%, P
< 0,01). Omez réduit les TBARS (29,4%, P
< 0,05), et la protéine carbonyle (38,9%, P
< 0,001), et une augmentation de la mucine (38,3%, P
< 0,01), sans modifier les autres paramètres de manière significative.
Conclusion
PK (20 mg /kg, po x 3 jours) pourrait effectivement guérir induite indométacine-ulcération de l'estomac chez les souris en réduisant le stress oxydatif, et la promotion de la sécrétion de mucine, la synthèse des prostaglandines et d'augmenter les expressions des enzymes de cyclooxygénase et facteurs de croissance.
Contexte
toxicité gastro-intestinale associée à des médicaments anti-inflammatoires non stéroïdiens (AINS) est un problème médical important, malgré les progrès récents pharmaceutiques [1]. En plus de l'induction des ulcères gastriques, les AINS semblent également inhiber la cicatrisation des ulcères [2, 3]. Par conséquent, la prévention des troubles gastro-intestinaux continue d'être une préoccupation pour les praticiens et les chercheurs cliniques. En dépit de leur efficacité dans la gestion de l'ulcération gastrique induite par les AINS, les médicaments anti-ulcéreux synthétiques actuellement disponibles confèrent des effets secondaires, et sont aussi cher, surtout pour la population rurale. À cette fin, nous avons signalé une activité anti-ulcérogène prometteur de plusieurs produits végétaux [4-6]
Picrorhiza kurroa
. (Famille: Scrofulariaceae, nom commun: Picrorhiza, Katuka, kutki) est une petite plante herbacée vivace dans les régions montagneuses de la région nord-ouest de l'Himalaya en Inde et au Népal. La feuille, l'écorce et les parties souterraines de la plante, principalement rhizomes sont largement utilisés dans les systèmes (ayurvédique) traditionnels indiens de la médecine depuis les temps anciens. Bien qu'il montre anti-oxydant, anti-inflammatoire, et les activités immunomodulatrices, il est le plus apprécié pour son effet hépatoprotecteur. Les rhizomes amères de Picrorhiza
ont été utilisés pour des milliers d'années en Inde pour traiter les gens avec l'indigestion [7], et la constipation due à l'insuffisance de la sécrétion digestive [8]. Picrorhiza
est considéré comme une plante trophorestorative pour le foie, ainsi que d'un stimulant immunitaire puissante [9]. Son constituant, picroliv est également signalé à posséder effet cholérétique [10], et de prévenir les lésions hépatiques causées par l'éthanol [11], les produits chimiques [12] et micro-organismes [13].
L'objectif principal de cette enquête était d'étudier la guérison propriété de l'extrait de méthanol de P. kurroa
rhizome (désigné comme PK) contre l'ulcération gastrique aiguë induite par l'indométhacine de souris vis-à-vis
celle du médicament commercial, oméprazole (Omez). Indométacine, un représentant du médicament anti-inflammatoire non stéroïdien (AINS) de la famille, provoque des ulcères gastriques par divers procédés, y compris la production de ROS, l'inhibition de la synthèse des prostaglandines, l'infiltration des leucocytes polynucléaires, l'induction de l'apoptose, et l'initiation de la peroxydation lipidique [14, 15]. Par conséquent, l'ulcère de guérison capacités des médicaments, évalués par histopathologie, était en corrélation avec leurs effets dans la réduction du stress oxydatif induit indométacine. L'activité antioxydante des échantillons d'essai a été analysée en termes de leur capacité à protéger des dommages oxydatifs des lipides, des protéines et anti-oxydant défense thiol-dépendante dans les tissus gastriques. En outre, la gastropathie induite par les AINS, est également attribuée à la diminution de la synthèse des Prostaglandines [16]. Par conséquent, le rôle des échantillons d'essai en augmentant la sécrétion de mucus, et l'expression du facteur de croissance épidermique (EGF), ainsi que l'élévation de la PGE 2 synthèse ont également été étudiés du matériel végétal de méthodes de The. rhizome de P. kurroa
(désigné comme PK), achetés sur le marché local a été utilisé pour le présent travail. L'usine a été taxonomiquement identifié (no. 324139) par la Botanical Survey of India, Indian Botanical Garden, Kokata, Inde.
Chemicals
acide (TBA) 2-thiobarbiturique, l'éthanol, le butanol et d'acétate d'éthyle ont été obtenus à partir de E. Merck (Mumbai, Inde), tandis que l'acide trichloracétique (TCA) était de Thomas Baker (Mumbai, Inde). Bleu alcian, l'indométhacine, l'albumine sérique bovine (BSA), haematoxylene, l'alun, l'éosine, le butylhydroxytoluène (BHT), le chlorhydrate de guanidine, d'acide trifluoroacétique (TFA), l'oméprazole (Omez), 3,3 '-diaminobenzidine (DAB), de lapin anti -mouse EGF et la base Trizma ont été achetés auprès de Sigma Chemicals (St. Louis, MO, USA). D'autres réactifs utilisés étaient 35% de peroxyde d'hydrogène (Lancaster, Morecambe, UK), le 2,4-dinitrophényl hydrazine (DNPH), du phosphate disodique et de phosphate monosodique (BDH, Piscine Dorset, Royaume-Uni), le saccharose et le 5,5'-dithiobis -2-nitrobenzioc (DTNB) (SRL, Mumbai, Inde), le cheval et le sérum de chèvre (Banaglore Genie, Banaglore, Inde), PGE 2 kit de métabolite (Cayman Chemical, Michigan, États-Unis) et conjugué à la peroxydase de chèvre anti IgG de lapin (EMD Biosciences, Sandiego, États-Unis).
Instrumentation
La spectrophotométrie d'absorbance a été effectuée à 25 ° C en utilisant un Jasco V-550 spectrophotomètre UV-Vis. balayages de longueur d'onde et des mesures d'absorbance ont été faites dans 1 ml de cellules de quartz de 1 cm de trajet.
Préparation d'extraits de plantes
Les rhizomes séchés à l'air de P. kurroa
(250 g) ont été coupés en petits morceaux, trempé dans du methanol (1 litre) pendant deux jours, et le surnageant décanté. Après avoir répété le processus trois fois, les extraits combinés ont été filtrés à travers un tamis en nylon, et on évapore sous vide et finalement on lyophilise. L'extrait brut, désignée comme PK tout au long du manuscrit, a été stocké dans un dessiccateur à vide. Le plus Préparation des médicaments
Les médicaments ont été préparés à partir de PK et Omez sous forme de suspensions aqueuses à 2% de gomme arabique en tant que véhicule, et administré aux souris par voie orale.
essais pharmacologiques
Animaux et protocole expérimental d'ulcérations
souris albinos suisse mâles ont été élevés au Dr BC Roy Poster Institut universitaire des sciences médicales de base, Kolkata, Inde et Facility BARC Laboratory animal House , Mumbai, Inde. Ceux-ci ont été achetés après obtention de l'autorisation (post Institut universitaire des sciences médicales de base, Comité d'éthique animale Kolkata 507 /CPCSEA, Sanction No. AIVE /SB-2/2004 /UCM-16, en date du 15/06/04 et du Comité d'éthique animale BARC (CEAB) , installation des animaux de laboratoire. sanctionner non. CEAB /03/05 en date du 11.07.05) des comités d'éthique respectifs animaux des deux centres et ont été traitées suivant les lignes directrices du Comité d'éthique international pour les animaux. Le 6-8 semaines des souris (25-30 g) ont été élevées à un régime de laboratoire équilibré par NIN, Hyderabad, Inde et donné robinet de l'eau ad libitum. Ils ont été maintenus à 20 ± 2 ° C, cycle de 65-70% d'humidité, et jour /nuit (12 h /12 h). Au début de chaque expérience, tous les animaux ont été identifiés par des encoches typiques de l'oreille et des membres, puis à répartition aléatoire. Cela a été fait pour réaliser toutes les expériences en aveugle. Ulcération chez les souris a été induite par l'administration d'indométhacine (18 mg /kg, p. O.) Dissous dans de l'eau distillée et mis en suspension dans le véhicule, la gomme arabique (2%) sous forme d'une dose unique. Nos études avec 5, 10, 15, 18, 20, 25 et 30 mg /kg, p. o. d'indométacine ont montré que les doses les plus faibles (5 et 10 mg /kg) ont fourni une ulcération mineure après 6 h de son administration, alors que les doses plus élevées (25 et 30 mg /kg) a conduit à la mortalité. La dose choisie (18 mg /kg) a produit une ulcération optimale, avec une inflammation muqueuse et insulte, sans causer de la mortalité chez la souris. Les animaux ont été privés de nourriture, mais ont eu libre accès à l'eau du robinet 24 h avant l'ulcère de l'induction. La normalisation de la dose de médicament
Pour la normalisation des doses de médicaments, PK (5, 10, 20 et 40 mg /kg) a été donné en une seule dose par jour jusqu'à sept jours. La première dose de PK et Omez ont reçu 6 h après l'administration indométacine. Dans les six jours suivants, les échantillons d'essai ont été donnés à 9 heures chaque jour. Cinq souris ont été prélevés dans chaque groupe et chaque expérience a été répétée trois fois. Les souris ont été sacrifiées sur le 1 er, 3 e, 5 e et 7 e jours, 4 heures après l'administration de la dernière dose de PK. L'étendue de la cicatrisation de l'ulcère a été évaluée à partir des dommages macroscopiques scores (SMD) des souris ulcérées non traitées et traitées sur les jours respectifs. Le régime optimisé de traitement (dose de médicaments et de la période de traitement) ont été évalués à partir de la MDS des groupes de souris recevant le traitement ci-dessus. De l'évaluation de l'ulcération et la guérison de MDS
Les souris ont été sacrifiées après un surdosage de thiopental. L'estomac des groupes normaux et traités ont été retirés rapidement, ouvert le long de la grande courbure, et rincée avec une solution saline normale. Les zones ulcérées de la muqueuse gastrique ont été visualisées en utilisant une feuille transparente et d'un microscope à dissection. MDS a été évaluée [17] en classant les lésions gastriques sur une échelle de 0 à 4, en fonction de la sévérité des lésions hémorragiques et hyperhémie: 0 - près de la muqueuse normale, 0,5 - hyperémie, 1 - une ou deux lésions, 2 - lésions sévères , 3 - lésions très graves, 4 - muqueuse complète des lésions. (lésions - érosions hémorragiques, hyperhémie - congestions vasculaires). Les expériences ont été effectuées en aveugle par deux chercheurs dans le groupe et le traitement des animaux. Les sections ont été codées pour éliminer un biais de l'observateur. Les données pour les analyses sont présentées comme la moyenne ± SEM de l'examen d'un minimum de trois sections par animal et cinq animaux par des études de groupe. Sur les paramètres biochimiques
Les résultats MDS ont révélé la guérison de l'ulcère maximum après trois jours de traitement médical. L'ulcération de l'estomac chez les souris non traitées a également atteint pic du 3 e jour après l'administration d'indométacine. Par conséquent, nous avons évalué les paramètres biochimiques sous le régime optimisé de traitement [PK (20 mg /kg) et Omez (3 mg /kg)] jusqu'à la 3 e jour d'ulcération seulement. Pour cela, les sept groupes suivants contiennent chacun 5 souris ont été choisies parmi celles utilisées pour le dosage de MDS et les données présentées proviennent de trois expériences identiques:
Groupe I - souris témoins normaux; Groupe II - souris ulcérée, et sacrifiés après 10 h (considérés comme un jour); Groupe III - souris ulcérée, et sacrifié sur la 3 ème journée; Groupe IV-V - souris ulcérée, traitées avec PK et Omez respectivement 1 jour et sacrifiées 4 h après l'administration des échantillons d'essai; Groupe VI-VII -. Souris ulcérées, traités avec PK et Omez respectivement pendant 3 jours, et se sont sacrifiés dans la 3 e jour, 4 h après la dernière dose des échantillons d'essai de quantification des dommages de protéines et de lipides au cours ulcération et la guérison
Les tissus de l'estomac glandulaire ont été regroupées à partir de cinq animaux pour chaque tissu, rincé avec un tampon approprié et utilisé pour les études biochimiques. Le poids humide des tissus ont été enregistrés et les expériences ont été réalisées en triple exemplaire. Les portions glandulaires provenant du contrôle, des souris ulcérées et traités par le médicament pris à des intervalles de temps différents ont été homogénéisés avec un tube homogénéisateur en verre Teflon dans un tampon phosphate 50 mM, pH 7,4 et centrifugés à 1200 x g pour obtenir le surnageant. La quantité de protéine dans carbonyles l'homogénat tissulaire, a été déterminée selon une méthode décrite [18]. DNPH (4 ml, 10 mM) dans du HCl 2 M a été ajouté au surnageant (1,0 ml), qui a été mis en incubation pendant 1 h avec agitation intermittente. On a ajouté une solution glacée de TCA aqueux à 20% (5 ml) et le mélange est mis en incubation pendant 15 min. La protéine précipitée a été lavée 3 fois avec de l'éthanol-acétate d'éthyle (1: 1), dissous dans 1 ml d'une solution contenant 6 M de guanidine-HCl dans 20 mM de phosphate de potassium (monobasique), ajusté à pH 2,3 avec de l'acide trifluoroacétique. Après centrifugation, l'absorbance du surnageant a été lue à 362 nm (∈ = 2,2 × 10 4 M -1 cm -1).
Pour l'analyse de la peroxydation lipidique (en termes de TBARS), un homogénat de 10% par rapport à chacun des échantillons respectifs a été préparé dans un tampon (saccharose 320 mM, HEPES 5 mM, EDTA 20 mM et 0,01% de BHT). Ceux-ci ont été soumises à une centrifugation différentielle (1200 x g et 12 000 x g) pour obtenir les pastilles mitochondriales, qui ont été lavées avec le tampon (tampon phosphate KCl 150 et 20 mM) et finalement mises en suspension dans un tampon phosphate 50 mM, pH 7,4. La fraction de la membrane mitochondriale (1 ml) a été traitée avec du TCA-TBA-HCl (2 ml, 15% de TCA, 0,375% TBA, HCl 0,25 N) contenant 0,01% de BHT, on chauffe au bain-marie bouillant pendant 15 minutes, on le refroidit et on le centrifuge . L'absorbance du surnageant a été mesurée à 535 nm (∈ = 1,56 × 10 5 M -1 cm -1) [19] de. Mesure de la non-protéine thiol (NP-TSH )
Suite à une méthode décrite [20], la muqueuse gastrique NP-TSH a été mesurée. En bref, les homogénats fundique de l'estomac des souris témoins, ulcérées, traités par le médicament ont été faites dans 0,2 M de tampon Tris-HCl, pH 8,2 contenant 20 mM d'EDTA et centrifugées. Une aliquote de l'homogénat (1 ml) a été précipité avec glacé TCA à 20% (1 ml) et on centrifuge. Le surnageant (1 ml) a été ajouté à 2 ml de 0,8 M de tampon Tris-HCl, pH 9 contenant 20 mM d'EDTA et on mélange avec 0,1 ml de 10 mM de DTNB. L'absorbance du chromogène jaune à 412 nm (∈ = 13,6 x 10 4 M -1 cm -1) a été lu le test de mucine de.
Après une méthode rapportée [21] , la mucine libre dans les tissus gastriques a été estimé. En bref, la partie glandulaire de l'estomac a été séparée de la lumière de l'estomac, pesé et transféré immédiatement à 10 ml de 0,1% p /v bleu Alcian (Ab) solution (en solution 0,16 M de saccharose tamponnée avec une solution d'acétate de sodium 0,05 mM, pH ajusté à 5,8). Après coloration pendant 2 h, l'excès de colorant a été éliminé du tissu par deux rinçages successifs avec 10 ml d'une solution 0,25 M de saccharose. Le colorant complexé avec le mucus gastrique de paroi a été extraite avec 10 ml de 0,5 M de chlorure de magnésium en agitant par intermittence (1 min) à intervalles de 30 minutes pendant 2 h. L'extrait bleu (2 ml) a été vigoureusement agitée avec un volume égal d'éther diéthylique. L'émulsion résultante a été centrifugée à 3600 tpm pendant 10 minutes et l'absorbance de la phase aqueuse a été lue à 580 nm. La quantité de Ab extrait par g de tissu glandulaire humide a été calculé à partir d'une courbe standard préparée en utilisant diverses concentrations de Ab.
COX-1 et COX-2 expression test
à moins de 30 min de la récolte, les parties ulcérées de la tissus de l'estomac ont été fixés au neutre tamponné 10% solution de formol et sectionnés. Après 24 h de fixation, suivi par encastrement dans un bloc de paraffine, elle a été coupée en sections de 5 micromètres sur une lame de verre et les expressions de la COX-1 et COX-2 ont été quantifiés selon une procédure décrite [22], avec de légères modifications. Après déparaffinage dans du xylène, les coupes ont été traitées avec une série graduée d'alcool et ensuite réhydratées dans du PBS à pH 7,5. Les sections ont été séquentiellement traitées avec 3% de peroxyde d'hydrogène dans du PBS, et les inhibiteurs protéiques (5% d'albumine de sérum bovin, 5% de sérum de chèvre normal dans du PBS) et incubées pendant une nuit à 4 ° C avec l'anticorps primaire (anticorps de souris anti-COX-1 et COX 2, 1: 200). Après incubation pendant 2 h à température ambiante avec de la peroxydase conjuguée à un anticorps de lapin anti-souris secondaire (1: 500), une réaction positive a été détectée par exposition à un DAB stable pendant 2 à 5 minutes. Dans les sections de contrôle, des anticorps ont été omis, et seulement du PBS ont été ajoutés. Après contre les diapositives avec l'hématoxyline de Meyer, les intensités des produits immunolocalized colorés ont été évalués en utilisant le logiciel Biovis MV500. Cinq zones de chaque section ont été numérisées et la densité optique intégrée (IOD) dans chaque zone a été calculée. Le IOD du contrôle négatif a été soustrait du IOD de chaque section expérimentale pour chaque animal dans tous les groupes.
Test de prostaglandine
Après la récolte de l'estomac, le corpus (pleine épaisseur) a été excisé, pesé (100 mg ) et mis en suspension dans un tampon phosphate de sodium 10 mM, pH 7,4 (1 ml). Le tissu a été haché finement avec des ciseaux et on fait incuber à 37 ° C pendant 20 min. Après centrifugation (9000 x g), de la prostaglandine E 2 (PGE 2), les niveaux dans le surnageant ont été mesurés par ELISA [23], ainsi que les concentrations sont exprimées en pg /mg de protéine.
Expression d'EGF test
Le immunocoloration de l'EGF a été réalisée [22] suivant une méthode similaire à celle utilisée pour la COX-1 et COX-2, avec des modifications mineures. Dans ce cas, après blocage de la peroxydase endogène et le traitement avec les inhibiteurs des protéines, les coupes de tissu ont été incubées pendant une nuit à 4 ° C avec l'anticorps primaire à la dilution appropriée. Dans les sections de contrôle, uniquement du PBS a été ajouté en omettant les anticorps. Après incubation pendant 1 h à température ambiante avec de la peroxydase de chèvre conjugué IgG anti-lapin, une réaction positive a été détectée par exposition à la DAB pendant 2 à 5 min. Après contre les diapositives avec l'hématoxyline de Meyer, les intensités des produits immunolocalized colorés ont été quantifiés en utilisant un logiciel Biovis MV500. Cinq zones de chaque section ont été numérisées et la densité optique intégrée (IOD) dans chaque zone a été calculée. IOD du témoin négatif a été soustrait du IOD de chaque section expérimentale pour chaque animal dans tous les groupes.
Dosage du VEGF dans le sérum The VEGF sérique a été mesurée en utilisant les échantillons de sang prélevés à partir de l'aorte descendante, avec le commerce kits ELISA disponibles suivant les instructions du fabricant.
test sécrétoire gastrique (modèle de ligature pylorous)
Pour étudier les effets des médicaments d'essai sur la sécrétion gastrique, la ligature du pylore de l'estomac normalisé dans notre laboratoire a été réalisée. Un groupe de souris (contrôle expérimental) ont reçu 2% de gomme d'acacia dans de l'eau distillée (0,2 ml par souris, po), alors que les différents groupes de traitement ont reçu PK (20 mg /kg x 3 d) Omez (3 mg /kg × 3 d), l'indométhacine (18 mg /kg x 1 d) en tant que tel ou avec PK (20 mg /kg x 3 d) Omez (3 mg /kg x 3 d). Sur la 3 ème jour, l'abdomen des animaux a été ouvert sous anesthésie légère à l'éther pour la ligature du pylore (PL). Après la fermeture de l'abdomen, les animaux ont été placés dans des cages sous la contrainte et la lumière a permis de récupérer de l'anesthésie. Après 6 h, les animaux ont été sacrifiés, l'abdomen a été ouvert et une ligature a été placée autour de l'oesophage. L'estomac a été enlevé et le contenu a été drainé dans un tube à centrifuger gradué après avoir effectué une petite incision le long de la grande courbure adjacente à la ligature du pylore. Le contenu de l'estomac ont été collectés, mesurés, centrifugés et soumis à une analyse biochimique.
Analyse statistique
Les données sont présentées sous forme de moyenne ± SEM. les données paramétriques qui comprend tous les paramètres biochimiques ont été analysées à l'aide d'un test apparié 't' pour les données appariées ou analyse de la variance à un facteur (ANOVA) suivie d'un Dunnet multiples comparaisons post test. des données non paramétriques (de notation macroscopique) ont été analysées en utilisant le test de Kruskal-Wallis (nonparametric ANOVA) suivie par de multiples comparaisons d'un Dunn poster test. Une valeur de probabilité de P
< 0,05 a été considérée comme significative. L'Extraction: Résultats de l'IC 50 valeur de PK a été estimée en utilisant l'analyse Probit et le niveau des analyses de signification a été étudiée par le test du chi carré. et l'analyse phytochimique
Le processus d'extraction ont donné le extrait au méthanol, PK à 12,57% p /p du rendement. L'analyse par CCM du PK révélé être un mélange complexe d'un grand nombre de composés organiques, la plupart d'entre eux étant présent en tant que glycosides tel que révélé par le test de Molisch. Présence de apocynine, andorsin, picrosides I et II, et katukoside ainsi que d'autres composés non identifiés dans PK a été confirmée par la comparaison de son profil TLC avec ceux des échantillons authentiques.
Normalisation de la dose de PK pour la guérison de l'ulcère gastrique chez la souris
la dose de PK pour la guérison d'un ulcère efficace ont été optimisées en effectuant le traitement avec PK (5, 10, 20 et 40 mg /kg) jusqu'à sept jours et en comparant les valeurs de MDS des souris traitées et non traitées les jours respectifs . Le décours temporel de l'étendue de l'ulcération gastrique (comme l'a révélé des valeurs MDS) et sa prévention par différentes doses de pharmacocinétique sont représentés sur la Fig. 1. Les souris recevant uniquement le véhicule ne présentaient pas de lésions des muqueuses. Le traitement des souris avec l'indométhacine (18 mg /kg) a produit des lésions aiguës dépendant du temps typique de la muqueuse gastrique. L'ulcération atteint au maximum sur la 3 e jour d'ulcération lorsque la valeur MDS a augmenté de 162,1% par rapport à ce que le premier jour (P
< 0,001). Par la suite, il y a eu une reprise progressive en raison de la guérison naturelle, et le 7 e jour après l'ulcération, la valeur MDS a été réduite de 49,2% par rapport à celui du premier jour (P
< 0,01). Figure 1 Le décours temporel de l'ulcère de l'estomac et sa prévention par différentes doses de PK. Ulcération gastrique chez la souris a été induite par l'administration orale d'indométhacine (18 mg /kg de poids corporel). Différentes doses de PK ont été utilisés pour les expériences. Les indices de l'ulcère ont été mesurés sur différents jours 4 h après la dernière dose de PK et les valeurs sont la moyenne ± S.E.M. (N = 15). aP
< 0,01, bP
< 0,001 par rapport au 1er jour ulcérée souris non traitées; cP
< 0,01, dP
< 0,001 par rapport au groupe III chez la souris.
PK, à toutes les doses choisies ont montré la cicatrisation des ulcères maximale à la 3 ème jour de l'ulcération et l'effet est dose-dépendante. Par rapport aux contrôles ulcérées respectifs, les réductions MDS (45,1% -52,9%, P
< 0,01) par PK (20 et 40 mg /kg) étaient similaires, et nettement meilleure que celle à sa dose plus faible (10 mg /kg). L'effet de PK (5 mg /kg) était négligeable. Dans des conditions similaires, le traitement avec Omez (3 mg /kg) pendant 3 jours a réduit la valeur MDS de 76,3% (P
< 0,001) par rapport à celle du groupe III chez la souris. La guérison observée sur l'extension du traitement jusqu'à sept jours avec PK était meilleure que celle observée avec le régime de traitement de trois jours. Cependant, une grande partie de cela est dû à autohealing, avec moins de contribution par PK.
Dans l'ensemble, le traitement avec PK (20 mg /kg) et Omez (3 mg /kg) pendant 3 jours après l'ulcère induction fourni la guérison de l'ulcère optimal . Compte tenu de ces derniers, toutes les expériences ultérieures ont été réalisées avec le même régime de traitement. La dose choisie Omez, qui est aussi la dose thérapeutique recommandée pour les humains a été optimisée en nous [6].
Pour les souris non traitées, des ulcères pic (maximum MDS) a été observée au troisième jour de l'administration d'indométhacine. Par conséquent, ce point de temps a été choisi pour trouver le IC 50 valeur de PK. Considérant les valeurs MDS du 3 e jour ulcérée souris non traitées à 100%, l'IC 50 valeur de PK a été jugée 23,30 ± 3,50 mg /kg. Évaluation
qualitative
Les examens macroscopiques a révélé que l'administration d'indométhacine a conduit à un endommagement notable de la portion glandulaire de la muqueuse gastrique chez la souris. Dans 6 h après administration indométacine, l'érosion superficielle et légère inflammation dans l'estomac a été observée, indiquant une ulcération aiguë. Le jour de l'ulcère de l'induction, la perte de la structure fovéolaire avec l'architecture cryptique est la caractéristique importante dans la plupart des souris non traitées. En outre, infiltrat inflammatoire légère contenant des neutrophiles a été observée dans la lamina propria. Le traitement à la fois avec PK et Omez même pour un jour limité les dégâts avec des zones éparses de l'épithélium structurel dénudé.
Indomethacin gastropathie induite est devenu beaucoup plus prononcé le troisième jour montrant découpées dans de multiples domaines de l'ulcération avec infiltrat contenant les neutrophiles et les macrophages inflammatoires dans le muqueuse, sous-muqueuse et le muscle manteau long avec hémorragique séreuse. Un grand nombre de cellules anormales avec un noyau modifié au rapport de cytoplasme ont été remarqués. Le traitement avec PK et Omez pendant 3 jours a conduit à la réduction du nombre de cellules inflammatoires avec un nombre accru de cellules normales en bonne santé dans la muqueuse gastrique, ainsi que la sous-muqueuse, séreuse et musculaires couches à la congestion de la muqueuse minimum. Effet de PK et Omez sur la peroxydation lipidique et de l'oxydation des protéines dans les tissus de l'estomac
les effets de la prise indométacine seule et après l'administration de PK et Omez sur l'étendue de la peroxydation lipidique (mesurée en termes de TBARS), l'oxydation des protéines (mesurée en termes de teneur en protéine carbonyle ), le système de défense thiol-dépendante (NP-TSH) et la teneur en mucine dans les tissus gastriques des souris sont présentées dans le tableau 1 et le tableau 1 2.Table l'effet de la PK et Omez sur les niveaux de TBARS, carbonyles des protéines, non protéines thiol et mucine dans le tissu gastrique ulcérée de Micea le premier jour de l'ulcération
Paramètres
souris du groupe I normale contrôle

Groupe contrôle ulcérée II 1er jour
Groupe III PK-traitée
Groupe IV Omez-traitée
TBARS (nmol /mg de protéine)
0,85 ± 0,03
1,18 ± 0,05C
0,94 ± 0.06d
0,89 ± 0.07d
carbonyles protéines (nmoles /mg de protéine)
1,08 ± 0,05 ± 1,62
0.09b
1,49 ± 0,12
1,53 ± 0,07
NP-TSH (nmol /mg de tissu)
1,99 ± 0,09 ± 1,66
0.08b
1,86 ± 0,08
1,81 ± 0,09
mucine (pg /g de tissu)
335,03 ± 14,43
213,02 ± 0.59b
240,33 ± 20,49
253.33 ± 14.53d
aStomach ulcération chez la souris a été induite par l'administration orale d'indométacine (18 mg /kg) . PK (20 mg /kg /jour x 1 jour) et Omez (3 mg /kg /jour x 1 jour) ont été utilisés comme échantillons d'essai. Les essais ont été effectués 4 heures après l'administration des échantillons d'essai. Les valeurs sont la moyenne ± SEM (n = 15). bP
< 0,05, cP
< 0,01 par rapport aux souris normales; dP
< 0,05 par rapport au groupe de souris II.
Tableau 2 L'effet des PK et Omez sur les niveaux de TBARS, carbonyles des protéines, des protéines non thiol et la mucine gastrique dans le tissu ulcéré Micea sur trois jours d'ulcération
Paramètres
normales de contrôle du Groupe I
Groupe III 3e jour contrôle ulcérée
Groupe V PK-traitée
Groupe VI Omez-traitée
TBARS (nmol /mg de protéine)
1,02 ± 0,06 ± 1,53
0.06c
1,03 ± 0.09d
1,08 ± 0.05d
Protein carbonyles (nmol /mg de protéine)
1,18 ± 0,07 ± 2,61
0.17c
1,62 ± 0.10f
1,59 ± 0.09f
NP-TSH (nmol /mg de tissu)
2,06 ± 0,09 1,73 ± 0,09

2,06 ± 0.14d
2,05 ± 0,1d
mucine (pg /g de tissu)
343,30 ± 16,91
213,29 ± 17.91b
303,34 ± 17.4e
295,06 ± 15.62e
aStomach ulcération chez la souris a été induite par l'administration orale d'indométacine (18 mg /kg). PK (20 mg /kg /jour x 3 jours) et Omez (3 mg /kg /jour x 3 jours) ont été utilisés comme échantillons d'essai. Les essais ont été effectués sur trois jours d'ulcération, 4 h après la dernière dose du médicament. Les valeurs sont la moyenne ± SEM (n = 15). bP
< 0,05, cP
0,001 par rapport à des souris normales, dP
< 0,05, eP
< 0,01, fP
< . 0,001 par rapport au groupe III souris
administration Indomethacin nettement stimulé la peroxydation des lipides dans les tissus gastriques, l'élévation de la teneur en TBARS de 38,8% (P
< 0,01) et 53% (P
< 0,001) respectivement le 1 er et 3 ème jour de l'ulcération, par rapport à celle des souris témoins normales. Le traitement avec PK et Omez a montré un effet immédiat, réduire la teneur en TBARS de 20,3% et 24,6% respectivement par rapport aux souris du groupe II (P
< 0,05). Le traitement avec PK et Omez pendant trois jours l'a réduit de 32,7% et 29,4% par rapport aux souris du groupe III (P
< 0,05).
Par rapport à la valeur normale, la teneur en protéines de carbonyle de la souris ulcérée était plus élevé (50%) le premier jour (P
< 0,05) qui a augmenté de 120,3% à l'ulcération de pointe (P
< 0,001). Aucun des médicaments d'essai a montré un impact immédiat sur le premier jour.

• Les effets protecteurs de (1- (4-hydroxy-phényl) -3-m-tolyl-propénone dans la chalcone induite par l'indométhacine-gastrique lésions érosives dans les effets protecteurs de rats
• L'agent pathogène gastrique humain Helicobacter pylori a une carboxylase acétone potentiel qui améliore sa capacité à coloniser souris