Curación potencial de Picrorhiza kurroa (Scrofulariaceae) rizomas contra la úlcera gástrica inducida por indometacina: un exploration.

mecanicista potencial curativo de Picrorhiza kurroa gratis (Scrofulariaceae) rizomas contra la úlcera gástrica inducida por indometacina:. Una exploración mecánica
Resumen
Antecedentes Francia el presente estudio se realizó para evaluar el potencial de los rizomas de la planta medicinal india, Picrorhiza kurroa
en la curación de úlceras de estómago aguda inducida por indometacina en ratones y examinar su capacidad para modular el estrés oxidativo y los niveles de prostaglandina (PGE 2) y EGF durante el proceso.
Métodos
ratones albinos suizos machos, ulceradas con indometacina (18 mg /kg, por vía oral, dosis única) fueron tratados hasta 7 días con diferentes dosis de el extracto de metanol de P. kurroa
rizomas (designado como PK). La capacidad de curación de la dosis más eficaz de PK (20 mg /kg, p. O. × 3 d) se comparó con la de omeprazol (Omez) (3 mg /kg, p. O. × 3 d). Los efectos de la droga-tratamiento para uno y tres días en los parámetros bioquímicos se evaluaron mediante la comparación de los resultados con los de los ratones no tratados del 1 ª y 3 er día de ulceración. Los tejidos del estómago de los ratones fueron utilizados para el análisis bioquímico.
Resultados
los índices macroscópicos revelaron máxima ulceración en el día 3 rd después de la administración de indometacina, que había sido sanado de manera efectiva por PK. En el marco del régimen de tratamiento optimizado, PK y Omez redujeron los índices de úlcera por 45,1% (P
< 0,01), y 76,3% respectivamente (P
< 0,001)., En comparación con los ratones no tratados ulceradas
en comparación con los ratones no tratados ulceradas, los tratados con PK durante 3 días mostraron disminución de los niveles de sustancias reactivas al ácido tiobarbitúrico (TBARS) (32,7%, P
< 0,05) y carbonilo de proteínas (37,7%, P <
; 0,001), y el aumento de mucina (42,2%, P Hotel < 0,01), la mucosa PGE 2 (21,4%, P Hotel < 0,05), y la expresión de la COX-1 y 2 (26,9% y 18,5%, P
< 0,05), EGF (149,0%, P
< 0,001) y VEGF (56,9%, P
< 0,01). Omez reduce los TBARS (29,4%, P
< 0,05), y carbonilo de proteínas (38,9%, P
< 0,001), y el aumento de mucina (38,3%, P
< 0,01), sin la alteración de los otros parámetros de manera significativa.
Conclusión
PK (20 mg /kg, po × 3 días) podría efectivamente curar la ulceración inducida por indometacina estómago en ratones mediante la reducción del estrés oxidativo, y la promoción de la secreción, la síntesis de prostaglandinas de mucina y aumento de expresiones de las enzimas ciclooxigenasa y factores de crecimiento.
Antecedentes
toxicidad gastrointestinal asociada con los fármacos anti-inflamatorios no esteroideos (AINE) es un importante problema de salud a pesar de los recientes avances farmacéuticos [1]. Además de la inducción de la ulceración gástrica, los AINE también parecen inhibir la cicatrización de la úlcera [2, 3]. En consecuencia, la prevención del trastorno gastrointestinal sigue siendo motivo de preocupación tanto para practicante clínico y los investigadores. A pesar de su eficacia en la gestión de la ulceración gástrica inducida por AINE, los medicamentos anti-úlcera sintéticos actualmente disponibles confieren efectos secundarios, y también son caros, especialmente para la población rural. Con este fin, hemos reportado actividad anti-ulcerogénico prometedor de varios productos vegetales [4-6]
Picrorhiza kurroa
. (Familia: Scrofulariaceae, nombre común: Picrorhiza, katuka, kutki) es una pequeña hierba perenne que crece en las partes montañosas de la región noroeste del Himalaya en la India y Nepal. La hoja, corteza y la parte subterránea de la planta, principalmente rizomas son ampliamente utilizados en los sistemas tradicionales de la India (ayurvédica) de la medicina desde la antigüedad. A pesar de que muestra anti-oxidante, anti-inflamatorio, y actividades inmunomoduladoras, es más valorado por su efecto hepatoprotector. Los rizomas amargas de Picrorhiza
se han utilizado durante miles de años en la India para el tratamiento de personas con indigestión [7], y el estreñimiento debido a la secreción insuficiente digestivo [8]. Picrorhiza
se considera como una hierba trophorestorative para el hígado, así como un estimulante inmune potente [9]. Su constituyente, picroliv También se ha informado que poseen efecto colerético [10], y prevenir el daño hepático causado por el etanol [11], [12] productos químicos y microorganismos [13]. México La finalidad principal de esta investigación fue estudiar la curación propiedad del extracto de metanol de P. kurroa
rizoma (designado como PK) contra la úlcera gástrica aguda inducida por indometacina de los ratones vis-à-vis con descuento que del fármaco comercial, omeprazol (Omez). La indometacina, un representante de la familia antinflamatorio no esteroideo (AINE), causa úlceras gástricas a través de diversos procesos, incluyendo la generación de ROS, la inhibición de la síntesis de prostaglandinas, la infiltración de leucocitos polimorfonucleares, inducción de la apoptosis, y el inicio de la peroxidación de lípidos [14, 15]. Por lo tanto, la úlcera capacidades de las drogas, evaluados por histopatología de curación, se correlacionó con sus efectos en la reducción del estrés oxidativo inducido por indometacina. La actividad antioxidante de las muestras de ensayo se sometió a ensayo en cuanto a su capacidad para proteger a los daños oxidativos a los lípidos, las proteínas y de defensa antioxidante tiol-dependiente en los tejidos gástricos. Además, la gastropatía inducida por AINE también se atribuye a la disminución de la síntesis de las prostaglandinas [16]. En consecuencia, el papel de las muestras de prueba en el aumento de la secreción de moco, y la expresión del factor de crecimiento epidérmico (EGF), así como la elevación de PGE 2 síntesis fueron también investigados.
Métodos Material vegetal
Francia El rizoma de P. kurroa gratis (designado como PK), adquirido en el mercado local se utilizó para el presente trabajo. La planta fue identificada taxonómicamente (no la adhesión. 324.139) por el Estudio Botánico de la India, el Jardín Botánico de la India, Kokata, India.
Químicos
ácido (TBA) 2-tiobarbitúrico, etanol, butanol y acetato de etilo se obtienen de E. Merck (Mumbai, India), mientras que el ácido tricloroacético (TCA) era de Thomas Baker (Mumbai, India). azul Alcian, indometacina, albúmina de suero bovino (BSA), haematoxylene, alumbre, eosina, hidroxitolueno butilado (BHT), clorhidrato de guanidina, ácido trifluoroacético (TFA), omeprazol (Omez), 3,3 '-diaminobenzidine (DAB), anti conejo -mouse EGF y la base Trizma se adquirieron de Sigma Chemicals (St. Louis, MO, EE.UU.). Otros reactivos utilizados fueron 35% de peróxido de hidrógeno (Lancaster, Morecambe, Reino Unido), 2,4-dinitrofenilo hidrazina (DNPH), hidrógeno fosfato de disodio y fosfato dihidrógeno de sodio (BDH, piscina Dorset, Reino Unido), sacarosa y 5,5'-ditiobis -2-nitrobenzioc (DTNB) (SRL, Mumbai, India), caballo y suero de cabra (Banaglore Genie, Banaglore, India), PGE 2 kit de metabolito (Cayman Chemical, Michigan, EE.UU.) y conjugado con peroxidasa de cabra anti IgG de conejo (EMD Biosciences, San Diego, EE.UU.).
Instrumentación Francia El espectrofotometría de absorción se llevó a cabo a 25 ° C utilizando un Jasco V-550 UV-Vis. exploraciones de longitud de onda y medidas de absorbancia se realizaron en cubetas de cuarzo de 1 ml de 1 cm de espesor.
Preparación de extractos de plantas
Los rizomas secados al aire de P. kurroa gratis (250 g) fueron picados en trozos finos, empapado en metanol (1 l) durante dos días y el sobrenadante se decantó. Después de repetir todo el proceso tres veces, los extractos combinados se filtraron a través de una malla de nylon, y se evaporaron a vacío y finalmente se liofilizaron. El extracto crudo, designado como PK en todo el manuscrito, se almacenó en un desecador de vacío.
Preparación de los fármacos
Los fármacos se preparan a partir de PK y Omez en forma de suspensiones acuosas en 2% de goma de acacia como el vehículo, y se administra a los ratones por vía oral.
pruebas farmacológicas
Animales y protocolo experimental para la ulceración
ratones albinos suizos machos fueron criados en la calle Dr. BC Roy post Instituto Superior de Ciencias médicas básicas, Calcuta, India y Fondo para BARC Laboratory Animal House , Mumbai, India. Estos fueron adquiridos después de obtener la autorización (Post Instituto Superior de Ciencias Médicas Básicas, Comité de Ética Animal Calcuta 507 /CPCSEA, Sanción Nº AICE /SB-2/2004 /UCM-16, de fecha 15/06/04 y el Comité de Ética Animal BARC (BAEC) , instalación de animales de laboratorio. sancionar no. BAEC /03/05 de fecha 11.07.05) de los respectivos Comités de Ética Animal de los dos centros y fueron tratados de conformidad con las Directrices internacionales comité de ética animal. El 6-8 semanas de edad ratones (25-30 g) fueron criados en una dieta equilibrada de laboratorio como por NIN, Hyderabad, India y dado grifo de agua ad libitum. Se les mantuvo a 20 ± 2 ° C, ciclo de 65-70% de humedad, y de día /noche (12 h /12 h). Al comienzo de cada experimento, todos los animales se identificaron por muescas típicos en el oído y extremidades y luego aleatorizado. Esto se hizo para llevar a cabo todos los experimentos de una manera ciega. Ulceración en los ratones se indujo mediante la administración de indometacina (18 mg /kg, p. O.) Disuelto en agua destilada y se suspende en el vehículo, goma de acacia (2%) como una dosis única. Nuestros estudios con 5, 10, 15, 18, 20, 25 y 30 mg /kg, p. o. de indometacina revelaron que las dosis más bajas (5 y 10 mg /kg) presentó ulceración menor después de 6 h de su administración, mientras que las dosis más altas (25 y 30 mg /kg) dieron lugar a mortalidad. La dosis elegida (18 mg /kg) produce ulceración óptima, con la inflamación y la mucosa insulto, sin causar ninguna mortalidad a los ratones. Los animales fueron privados de comida, pero tuvieron libre acceso al agua del grifo 24 h antes de la inducción de la úlcera.
Normalización de dosis de drogas
Para la estandarización de las dosis del fármaco, PK (5, 10, 20 y 40 mg /kg) se administra en una sola dosis por día hasta siete días. La primera dosis de PK y Omez se les dio 6 h después de la administración de indometacina. En los siguientes seis días, las muestras de ensayo se les dio a las 9 de la mañana del día cada uno. Cinco ratones fueron tomadas en cada grupo y cada experimento se repitió tres veces. Los ratones fueron sacrificados en el 1 st, 3 er, 5 y 7 º días, 4 horas después de la administración de la última dosis de PK. El grado de cicatrización de la úlcera se evaluó a partir de las puntuaciones de daño macroscópico (MDS) de los ratones no tratados y tratados ulceradas en los respectivos días. El régimen optimizado tratamiento (dosis drogas y el período de tratamiento) fueron evaluados desde el MDS de los grupos de ratones que recibieron el tratamiento anterior.
Evaluación de la ulceración y cicatrización de los SMD México La ratones fueron sacrificados después de una sobredosis con tiopental. El estómago de los grupos normales y tratados se retiraron rápidamente, abierto a lo largo de la curvatura mayor, y a fondo enjuaga con solución salina normal. Las áreas de la mucosa gástrica ulceradas se visualizaron utilizando una lámina transparente y un microscopio de disección. El MDS se evaluó [17] por la clasificación de la lesión gástrica en una escala de 0-4, en base a la gravedad de las lesiones hiperemia y hemorrágicos: 0 - casi mucosa normal, 0,5 - hiperemia, 1 - una o dos lesiones, 2 - lesiones graves , 3 - lesiones muy graves, 4 - mucosa completa de las lesiones. (lesiones hemorrágicas, erosiones - hiperemia - congestiones vasculares). Los experimentos se realizaron por dos investigadores cegados al grupo y tratamiento de los animales. Las secciones fueron codificados para eliminar el sesgo del observador. Los datos de los análisis se presentan como la media ± SEM de la revisión de un mínimo de tres secciones por animal y cinco animales por grupo.
Los estudios sobre los parámetros bioquímicos
Los resultados revelaron MDS máxima curación de la úlcera después de tres días de tratamiento con fármacos. La ulceración del estómago en los ratones no tratados también alcanzó el pico en el día 3 rd después de la administración de indometacina. Por lo tanto, se evaluaron los parámetros bioquímicos en el marco del régimen de tratamiento optimizado [PK (20 mg /kg) y Omez (3 mg /kg)] hasta el día 3 rd de sólo el ulceración. Para esto, los siete grupos siguientes contienen cada uno 5 ratones fueron seleccionados de los que se utilizan para el ensayo de MDS y los datos mostrados se derivan de tres repeticiones:
Grupo I - ratones de control normales; Grupo II - ratones ulcerado, y se sacrificaron después de 10 h (considerados como un día); Grupo III - ratones ulcerado, y se sacrificaron en el 3 er día; Grupo IV-V - ratones ulcerado, se trató con PK y Omez respectivamente durante 1 día, y se sacrificaron 4 h después de la administración de muestras de ensayo; Grupo VI-VII -. Ulceradas, los ratones tratados con PK y Omez, respectivamente, durante 3 días, y se sacrificaron en el día 3 rd , 4 h después de la última dosis de las muestras de ensayo
cuantificación de proteínas y lípidos daños durante ulceración y cicatrización
Los tejidos del estómago glandular fueron reunidos a partir de cinco animales para cada tejido, se enjuagó con tampón apropiado y se utiliza para estudios bioquímicos. Los pesos húmedos de los tejidos se registran y los experimentos se llevaron a cabo por triplicado. Las porciones glandulares del control, los ratones ulceradas y tratados con fármaco tomadas en diferentes intervalos de tiempo se homogeneizaron con un tubo homogeneizador de vidrio-teflón en un tampón fosfato 50 mM, pH 7,4 y se centrifugaron a 1200 xg para obtener el sobrenadante. La cantidad de carbonilos de proteínas en el homogeneizado de tejido, se determinó siguiendo un método publicado [18]. DNPH se añadió (4 ml, 10 mM) en HCl 2 M al sobrenadante (1,0 ml), que se incubó durante 1 h con agitación intermitente. Se añadió hielo-frío solución de TCA acuosa al 20% (5 ml) y la mezcla se incubó durante 15 min. La proteína precipitada se lavó 3 veces con etanol-acetato de etilo (1: 1), disuelto en 1 ml de una solución que contiene 6 M de guanidina HCl en fosfato de potasio 20 mM (monobásico) ajustado a pH 2,3 con ácido trifluoroacético. Después de centrifugar, la absorbancia del sobrenadante se leyó a 362 nm (∈ = 2,2 × 10 4 M -1 cm -1).
Para el análisis de la peroxidación lipídica (en términos de TBARS), un homogeneizado al 10% de cada una de las respectivas muestras se preparó en una solución tampón (sacarosa 320 mM, HEPES 5 mM, EDTA 20 mM y 0,01% de BHT). Estos se sometieron a centrifugación diferencial (1200 x g y 12.000 × g) para obtener los pellets mitocondriales, que se lavaron con el tampón (tampón de fosfato KCl 150 mM y 20 mM) y finalmente en suspensión en un tampón de fosfato 50 mM, pH 7,4. La fracción de membrana mitocondrial (1 ml) se trató con TCA-TBA-HCl (2 ml, 15% de TCA, 0,375% de TBA, 0,25 N HCl) que contiene 0,01% de BHT, se calentó en un baño de agua hirviendo durante 15 minutos, se enfrió y se centrifugó . La absorbancia del sobrenadante se midió a 535 nm (∈ = 1,56 × 10 -1 cm -1 5 M) [19].
Medición de tiol no proteico (NP-TSH )
Siguiendo un método informado [20], se midió la mucosa gástrica NP-TSH. Brevemente, los homogeneizados de estómago fúndicas de los de control, ratones ulceradas, tratados con fármaco se hicieron en tampón 0,2 M Tris-HCl, pH 8,2 que contiene EDTA 20 mM y se centrifugó. Una parte alícuota del homogeneizado (1 ml) se precipitó con helado de 20% de TCA (1 ml) y se centrifugó. Se añadió el sobrenadante (1 ml) a 2 ml de tampón de 0,8 M Tris-HCl, pH 9 que contenía EDTA 20 mM y se mezcla con 0,1 ml de DTNB 10 mM. La absorbancia del cromógeno amarilla a 412 nm (∈ = 13,6 × 10 4 M -1 cm -1) fue leído ensayo de mucina.
Siguiendo un método publicado [21] , se estimó que la mucina libre en los tejidos gástricos. En pocas palabras, la porción glandular del estómago se separó de la luz del estómago, se pesa y se transfiere inmediatamente a 10 ml de 0,1% p /solución de azul de Alcian (Ab) v (en solución 0,16 M de sacarosa tamponadas con la solución de acetato de sodio 0,05 mM, pH ajustado a 5,8). Después de la tinción durante 2 h, el exceso de tinte se retiró del tejido mediante dos aclarados sucesivos con 10 ml de solución 0,25 M de sacarosa. El colorante complejo con el moco pared gástrica se extrajo con 10 ml de cloruro de magnesio 0,5 M por intermitente agitación (1 min) a intervalos de 30 min durante 2 h. El extracto azul (2 ml) se agitó vigorosamente con un volumen igual de éter dietílico. La emulsión resultante se centrifugó a 3.600 rpm durante 10 min, y la absorbancia de la capa acuosa se leyó a 580 nm. La cantidad de Ab extraída por g de tejido glandular húmeda se calcula a partir de una curva patrón preparada utilizando diversas concentraciones de Ab.
COX-1 y COX-2 expresión ensayo
a menos de 30 min de la recolección, las porciones del ulceradas tejidos del estómago se fijaron en formol salino tamponada neutra al 10% y se seccionaron. Después de 24 h de fijación, seguido de la incorporación en un bloque de parafina, se cortó en secciones de 5 micras en un portaobjetos de vidrio y las expresiones de COX-1 y COX-2 se cuantificó después de un procedimiento informado [22], con ligeras modificaciones. Después de la desparafinación en xileno, las secciones se trataron con una serie graduada de alcohol y posteriormente rehidratados en PBS a pH 7,5. Las secciones fueron tratadas secuencialmente con peróxido de hidrógeno al 3% en PBS, y bloqueadores de proteínas (5% de albúmina de suero bovino, 5% de suero de cabra normal en PBS), y se incubaron durante la noche a 4 ° C con el anticuerpo primario (de ratón anti-COX-1 y COX-2, 1: 200). Después de la incubación durante 2 h a temperatura ambiente con conjugado con peroxidasa anti-ratón anticuerpo secundario de conejo (1: 500), una reacción positiva se detectó por la exposición a DAB estable durante 2 a 5 min. En las secciones de control, se omitieron los anticuerpos, y sólo se añadió PBS. Después counterstaining las diapositivas con hematoxilina de Meyer, las intensidades de productos immunolocalized de color se evaluaron usando el software BIOVIS MV500. Cinco áreas de cada sección se escanearon y se calculó la densidad óptica integrada (IOD) en cada área. El IOD del control negativo se resta de la IOD de cada sección experimental para cada animal en todos los grupos.
Ensayo prostaglandina
Después de la cosecha del estómago, el corpus (espesor total) se extirpó, se pesaron (100 mg ) y se suspendieron en tampón de fosfato sódico 10 mM, pH 7,4 (1 ml). El tejido se troceó finamente con tijeras y se incubó a 37 ° C durante 20 min. Después de la centrifugación (9000 x g), la prostaglandina E 2 (PGE 2) los niveles en el sobrenadante se midieron por ELISA [23], y las concentraciones se expresan como proteína pg /mg.
EGF expresión ensayo
La inmunotinción de EGF se llevó a cabo [22] siguiendo un método similar al utilizado para la COX-1 y COX-2, con modificaciones menores. En este caso, después de bloquear la peroxidasa endógena y el tratamiento con los bloqueantes de proteínas, las secciones de tejido se incubaron durante la noche a 4 ° C con el anticuerpo primario a la dilución apropiada. En las secciones de control, solamente se añadió PBS omitiendo los anticuerpos. Después de incubación durante 1 h a temperatura ambiente con IgG de cabra conjugado con peroxidasa anti-conejo, una reacción positiva se detectó por la exposición a DAB durante 2 a 5 min. Después counterstaining las diapositivas con hematoxilina de Meyer, las intensidades de productos immunolocalized de colores se cuantificaron utilizando el software BIOVIS MV500. Cinco áreas de cada sección se escanearon y se calculó la densidad óptica integrada (IOD) en cada área. El IOD del control negativo se resta de la IOD de cada sección experimental para cada animal en todos los grupos.
Ensayo de VEGF en suero Francia El VEGF en suero se midió usando las muestras de sangre extraídas de la aorta descendente, con comercialmente kits ELISA disponibles siguientes instrucciones del fabricante.
ensayo de secreción gástrica (modelo de ligadura pylorous): perfil Para estudiar los efectos de los fármacos de ensayo sobre la secreción gástrica, se realizó la ligadura pilórica del estómago estandarizado en nuestro laboratorio. Un grupo de ratones (control experimental) recibió 2% goma de acacia en agua destilada (0,2 ml por ratones, po), mientras que los diferentes grupos de tratamiento se les dio PK (20 mg /kg x 3 d), Omez (3 mg /kg x 3 d), indometacina (18 mg /kg x 1 d) como tal o junto con PK (20 mg /kg x 3 d), Omez (3 mg /kg x 3 d), respectivamente. En el día 3 rd , el abdomen de los animales se abrió bajo anestesia ligera con éter para la ligadura del píloro (PL). Tras el cierre del abdomen, los animales se pusieron en jaulas bajo restricción luz y les permitió recuperarse de la anestesia. Después de 6 h, se sacrificaron los animales, se abrió el abdomen y una ligadura se colocó alrededor del esófago. Estómago se retiró y se drena el contenido en un tubo de centrífuga graduado después de hacer una pequeña incisión a lo largo de la curvatura mayor adyacente a la ligadura del píloro. Los contenidos gástricos se recogieron, miden, se centrifuga y se sometieron a análisis bioquímico.
El análisis estadístico
Los datos se presentan como media ± SEM. datos paramétricos que incluye se analizaron todos los parámetros bioquímicos utilizando una prueba pareada 't' para los datos pareados o análisis de varianza de una sola vía (ANOVA) seguido de un Dunnet múltiples comparaciones post prueba. (datos no paramétricos de puntuación macroscópica) se analizaron mediante la prueba de Kruskal-Wallis (no paramétrico ANOVA) seguido de comparaciones múltiples de Dunn publicar una prueba. Un valor de probabilidad de P Hotel < 0,05 fue considerado significativo. El IC 50 valor de PK se estimó mediante el análisis Probit y el nivel de significación de los análisis fue investigado por la prueba de chi-cuadrado.
Resultados
Extracción y análisis fitoquímico Francia El proceso de extracción produjo la extracto de metanol, PK de 12,57% w /w de rendimiento. El análisis de TLC de PK reveló que era una mezcla compleja de un gran número de compuestos orgánicos, la mayoría de estos estar presente como glucósidos como se revela por el test de Molisch. Presencia de apocinina, andorsin, picrosides I y II, y katukoside junto con otros compuestos no identificados en PK se confirmó por comparación de su perfil de TLC con los de las muestras auténticas.
Normalización de dosis de PK para la curación de la úlcera gástrica en ratones
la dosis de PK para la curación de la úlcera eficaz se optimiza mediante la ejecución del tratamiento con PK (5, 10, 20 y 40 mg /kg) hasta siete días y comparando los valores de MDS de los ratones tratados y no tratados en los respectivos días . El curso temporal de la extensión de la ulceración del estómago (tal como se revela a partir de valores MDS) y su prevención por diferentes dosis de PK se muestran en la Fig. 1. Los ratones que recibieron vehículo solamente no mostraron lesiones de la mucosa. El tratamiento de ratones con indometacina (18 mg /kg) produjo lesiones agudas dependientes del tiempo típicos en la mucosa gástrica. La ulceración alcanzó el máximo en el día 3 rd de ulceración cuando el valor MDS incrementado en un 162,1% en comparación con el que en el primer día (P Hotel < 0,001). A partir de entonces, hubo una recuperación gradual debido a la curación natural, y en el 7 º día después de la ulceración, el valor MDS se redujo en un 49,2% en comparación con el primer día (P Hotel < 0,01). Figura 1 El curso temporal de la ulceración de estómago y su prevención por diferentes dosis de PK. ulceración del estómago en ratones fue inducida por la administración oral de indometacina (18 mg /kg de peso corporal). Diferentes dosis de PK se utilizaron para los experimentos. Los índices de úlcera se midieron en diferentes días 4 h después de la última dosis de PK y los valores son media ± S.E.M. (N = 15). aP Hotel < 0,01, BP Hotel < 0,001 en comparación con el 1er día ulcerado ratones no tratados; cP Hotel < 0,01, dP Hotel < 0,001 en comparación con el grupo de ratones III.
PK, a todas las dosis escogida fue máxima curación de la úlcera en la 3 er día de la ulceración, y el efecto fue dependiente de la dosis. En comparación con los controles respectivos ulceradas, las reducciones MDS (45,1% -52,9%, P
< 0,01) por PK (20 y 40 mg /kg) fueron similares, y significativamente mejor que en su dosis más baja (10 mg /kg). El efecto de PK (5 mg /kg) fue insignificante. En condiciones similares, el tratamiento con Omez (3 mg /kg) durante 3 días redujo el valor MDS por 76,3% (P
< 0,001) en comparación con la del grupo de ratones III. La curación observada en extender el tratamiento hasta siete días con PK era mejor que el observado con el régimen de tratamiento de tres días. Sin embargo, una parte importante de esto era debido a autocuración, con menos contribución de PK.
En general, el tratamiento con PK (20 mg /kg) y Omez (3 mg /kg) durante 3 días después de la inducción de la úlcera presentó cicatrización de la úlcera óptima . En vista de estos, todos los experimentos posteriores se llevaron a cabo con el mismo régimen de tratamiento. La dosis elegida de Omez, que es también la dosis terapéutica recomendada para los seres humanos se optimizó por nosotros [6]. Opiniones de los ratones no tratados, se observó ulceración pico (máximo MDS) en el tercer día de la administración de indometacina. Por lo tanto, se seleccionó este punto de tiempo para averiguar el CI 50 valor de PK. Teniendo en cuenta los valores de ATM del día 3 er ulcerada ratones no tratados como 100%, el IC se encontró 50 valor de PK ser 23.30 ± 3.50 mg /kg.
Evaluación cualitativa
Los exámenes macroscópicos reveló que la administración de indometacina dio lugar a un daño notable a la parte glandular de la mucosa gástrica ratones. Se observó dentro de 6 horas después de la administración de indometacina, la erosión superficial y una leve inflamación en el estómago que indica ulceración aguda. En el día de la inducción de la úlcera, pérdida de la estructura foveolar junto con la arquitectura críptico era el rasgo prominente en la mayoría de los ratones no tratados. Además, se observó infiltrado inflamatorio suave que contiene neutrófilos en la lámina propia. El tratamiento con ambos PK y Omez siquiera por un día limita el daño a las áreas de parches de epitelio denudado estructural.
Gastropatía inducida por indometacina se hizo mucho pronunciado en el tercer día mostrando sacabocados múltiples áreas de ulceración con neutrófilos inflamatorios que contiene infiltrado y macrófagos en el mucosa, submucosa y muscular capa serosa, junto con hemorrágica. se notó un gran número de células anormales con núcleo alterado para citoplasma. El tratamiento con PK y Omez durante 3 días dirigidos a la reducción del número de células inflamatorias a lo largo con un mayor número de células normales sanas en la mucosa gástrica, así como las capas de submucosa, serosa y de músculo con una mínima congestión de la mucosa.
Efecto de PK y Omez sobre la peroxidación de los lípidos y la oxidación de proteínas en el tejido del estómago
los efectos de la ingesta de indometacina sola y después de la administración de PK y Omez de la extensión de la peroxidación lipídica (medida en términos de TBARS), la oxidación de proteínas (medido en términos de contenido de proteínas carbonilo ), el sistema tiol dependiente de defensa (NP-TSH) y mucina contenido en los tejidos gástricos de ratones se muestra en la Tabla 1 y la Tabla 2.Table 1 el efecto de PK y Omez sobre los niveles de TBARS, carbonilos de proteínas, no tiol de proteínas, y mucina en el tejido gástrico ulcerado de Micea en el primer día de la ulceración
Parámetros
ratones del grupo de control normal de I
Control ulcerada II 1er día
Grupo
Grupo III PK-tratada
Grupo IV-Omez tratada
TBARS (nmoles /mg de proteína)
0,85 ± 0,03
1,18 ± 0,94 ± 0.05C
0.06d
0,89 ± 0.07d
carbonilos proteicos (nmoles /mg de proteína)
1,08 ± 0,05 1,62 ±
0.09b
1,49 ± 0,12 1,53 ± 0,07

NP-TSH (nmoles /mg de tejido)
1,99 ± 0,09 1,66 ±
0.08b
1,86 ± 0,08 1,81 ± 0,09

mucina (g /g de tejido)
335,03 ± 14,43 213,02 ±
0.59b
240.33 ± 20.49 253.33 ±
14.53d
ulceración aStomach en ratones fue inducida por la administración oral de indometacina (18 mg /kg) . PK (20 mg /kg /día x 1 día) y Omez (3 mg /kg /día x 1 día) se usaron como las muestras de ensayo. Los ensayos se llevaron a cabo 4 h después de la administración de las muestras de ensayo. Los valores son la media ± SEM (n = 15). bp Hotel < 0,05, CP Hotel < 0,01 en comparación con los ratones normales; dP Hotel < 0,05 en comparación con el grupo de ratones II.
Tabla 2 El efecto de PK y Omez sobre los niveles de TBARS, carbonilos de proteínas, tiol no proteico, y de mucina en el tejido gástrico ulcerado de Micea en día tres de ulceración
Parámetros
Grupo I
normales de control
Grupo III 3er día de control ulcerada
Grupo V PK-tratada
Grupo VI Omez-tratada
TBARS (nmoles /mg de proteína)
1,02 ± 0,06 1,53 ±
0.06c
1,03 ± 1,08 ± 0.09d
0,05D carbonilos
proteína (nmol /mg de proteína)
1,18 ± 0,07 2,61 ±
0.17c
1,62 ± 1,59 ± 0.10f
0.09f
NP-TSH (nmoles /mg de tejido)
2,06 ± 0,09 1,73 ± 0,09

2,06 ± 2,05 ± 0.14d
0,1d
mucina (mg /g de tejido)
343,30 ± 16,91
213.29 ± 17.91b
303,34 ± 17.4e
295,06 ± 15.62e
aStomach ulceración en ratones se indujo por la administración oral de indometacina (18 mg /kg). PK (20 mg /kg /día x 3 días) y Omez (3 mg /kg /día x 3 días) se utilizaron como las muestras de ensayo. Los ensayos se llevaron a cabo en el día tres de ulceración, 4 h después de la última dosis del fármaco. Los valores son la media ± SEM (n = 15). bp Hotel < 0,05, CP
0,001 en comparación con los ratones normales, dP Hotel < 0,05, eP Hotel < 0,01, FP Hotel < . 0,001 en comparación con el grupo III ratones
Administración indometacina marcadamente estimularon la peroxidación lipídica en los tejidos gástricos, elevando el contenido de TBARS por 38,8% (P
< 0,01) y 53% (P
< 0,001), respectivamente en el 1 st y 3 rd día de la ulceración, en comparación con la de los ratones de control normales. El tratamiento con PK y Omez mostró efecto inmediato, reducir el contenido de TBARS por 20,3% y 24,6%, respectivamente, en comparación con los ratones del grupo II (P
< 0,05). El tratamiento con PK y Omez durante tres días redujo en 32,7% y 29,4% en comparación con los ratones del grupo III (P
< 0,05).
En comparación con el valor normal, el contenido de proteínas carbonilo de los ratones era ulcerada más alta (50%) en el primer día (P Hotel < 0,05) que aumentó en un 120,3% a ulceración pico (P Hotel < 0,001). Ninguno de los fármacos de ensayo mostró un impacto inmediato en el primer día.

• Los efectos protectores de (1- (4-hidroxi-fenil) -3-chalcona m-tolil-propenona en daños erosiva gástrica inducida por indometacina en ratas
• El patógeno gástrico humano Helicobacter pylori tiene un potencial carboxilasa acetona que mejora su capacidad para colonizar ratones