Liječenje Potencijal Picrorhiza kurroa (Scrofulariaceae) rizoma protiv indometacin izazvanog želučanog ulkusa. Mehanički istraživanje

Liječenje potencijal Picrorhiza kurroa pregled (Scrofulariaceae) rizoma protiv indometacin izazvanog želučanog ulkusa. Mehanističkog istraživanja
Abstract
Pozadina pregled Ova studija je provedena za procjenu potencijala rizoma indijske ljekovitim biljka, Picrorhiza kurroa pregled u liječenju indometacin-inducirana akutna želučane ulceracije na miševima i ispitati svoju sposobnost da moduliraju oksidativnog stresa i razine prostaglandina (PGE 2) i EGF tijekom procesa.
Metode pregled muški Swiss albino miševa, s čirevima s indometacin (18 mg /kg, po, jedne doze) bili tretirani do 7 dana s različitim dozama ekstrakta metanol P. kurroa
rizoma (označeno kao PK). Ozdravljenje sposobnost vrlo učinkovite doze PK (20 mg /kg, p. O. × 3 d) je uspoređena s omeprazola (Omez) (3 mg /kg, p. O. × 3 d). Učinci droge tretman za jedne i tri dana na biokemijskih parametara određuje se usporedbom rezultata s onima netretiranim miševima od 1 st i 3 III dan ulceracija. Želučanog tkiva miševa su korištene za biokemijske analize. Pregled Rezultati
makroskopski indeksa pokazala maksimalnu ulceracije na 3 dan III nakon indomethacin upravu, koja je uspješno izliječio PK. Pod optimiziranim režim tretiranja, PK i Omez smanjuje indeksa čirom za 45,1% (p pregled < 0,01) i 76,3% respektivno (P pregled < 0,001)., U usporedbi s netretiranim miševima čirevima pregled u usporedbi s čirevima neliječenih miševa tretiranih s PK 3 dana pokazale smanjenu razinu thiobarbituric kiselih reaktivnih tvari (TBARSa) (32.7%, P pregled i 0.05) i protein karbonil (37,7%, P pregled <0.001), a povećana mucina (42,2%, P izvoznici < 0,01), za sluznicu PGE 2 (21,4%, P izvoznici < 0,05), a izrazi COX-1 i 2 (26,9% i 18,5%, P pregled i 0.05), EGF (149,0%, P pregled < 0,001) i VEGF (56,9%, P pregled < 0,01). Omez smanjila TBARSa (29,4%, P pregled i 0.05) i protein karbonil (38,9%, P pregled < 0.001), i povećana mucina (38,3%, P pregled < 0,01), bez mijenjanja ostalih parametara značajno. pregled Zaključak
PK (20 mg /kg, po x 3 dana) može djelotvorno liječiti indometacin izazvanog želučane ulceracije kod miševa smanjuje oksidativni stres i promicanje lučenje mucina, sintezu prostaglandina i dogradnje izraze ciklooksigenaze enzima i faktora rasta. pregled Pozadina pregled, gastrointestinalne toksičnosti povezane s nesteroidnim protuupalnim lijekovima (NSAID) važan je medicinski problem, unatoč nedavnim farmaceutskih napredak [1]. Osim izazivanja želučane čireve, a NSAR i čini se da inhibiraju zarastanja čira [2, 3]. Slijedom toga, prevencija poremećaja gastrointestinalnog i dalje biti od važnosti za obje kliničke medicine i istraživača. Unatoč njihovoj učinkovitosti u upravljanju NSAID inducirani želučane čireve, sada dostupni sintetička anti-ulkus lijekovi daju nuspojave, a također su skupi, posebno za seoskog stanovništva. U tu svrhu, mi smo izvijestili obećavajuću anti-ulcerogenu aktivnost nekoliko biljnih proizvoda [4-6] pregled Picrorhiza kurroa pregled. (Obitelj: Scrofulariaceae, uobičajeni naziv: Picrorhiza, katuka, kutki) je mala višegodišnja biljka raste u brdskim dijelovima Sjeverozapadna himalajskoj regiji u Indiji i Nepalu. List, kore i podzemnim dijelovima biljke, uglavnom rizoma su naširoko koristi u tradicionalnim indijskim (Ayurvedski) sustava medicine od davnina. Iako to pokazuje antioksidans, protuupalno i imunomodulacijskih aktivnosti, to je najviše cijenjena zbog svoje hepatoprotektivni učinak. Gorke rizoma iz Picrorhiza pregled su se tisućama godina u Indiji za liječenje osobe s probavnim smetnjama [7], i zatvor zbog nedovoljne probavnog sekreta [8]. Picrorhiza pregled smatra trophorestorative biljka za jetra, kao moćan imunološki [9] stimulans. Njegov sastojak picroliv je također izvijestio da posjeduje choleretic učinak [10], te spriječiti ozljedu jetre uzrokovane etanolom [11], kemikalije [12] i mikroorganizam [13].
Primarni cilj ovog istraživanja bio je proučiti ozdravljenje vlasništvo ekstrakta metanol P. kurroa
gomoljasto (označeno kao PK) protiv indometacin izazvanu akutnog želučanog ulkusa miševa vis-a-vis
da komercijalnog lijeka, omeprazola (Omez). Indometacin, predstavnik (NSAID) obitelji nesteroidni protuupalni lijekovi, uzrokuje želučanog ulkusa kroz različite procese, uključujući generacije ROS, inhibicije sinteze prostaglandina, infiltracija polimorfonuklearnih leukocita, indukcije apoptoze i pokretanje lipidne peroksidacije [14, 15]. Dakle, ulkus ozdravljenja kapacitete lijekova, procijenjene histopatologijom, bio je u korelaciji s njihovim učincima na smanjenje indometacin izazvanog oksidativnog stresa. Antioksidans djelovanje ispitnih uzoraka ispitano je u pogledu njihove sposobnosti da zaštiti oksidativnih oštećenja na lipida, proteina i tiol-ovisne antioksidacijske obrane u želučanom tkivu. Nadalje, NSAID inducirani gastropatija također pripisuje smanjenja sinteze prostaglandina [16]. Prema tome, uloga ispitnih uzoraka u povećanju izlučivanja sluzi i ekspresiju epidermalnog faktora rasta (EGF), kao i podizanje PGE 2 sinteza su također istraživali. Pregled metoda
biljnog materijala
gomoljasto P. kurroa
(označen kao PK), nabavljena iz lokalnog tržišta se koriste u ovom radu. Biljka taksonomski je identificiran (pristupni br. 324139) je Botanički Survey of India, Indijski Botanički vrt, Kokata, Indija.
Kemikalije pregled 2-Thiobarbituric kiseline (TBA), etanol, butanol i etil acetat su nabavljeni iz E. Merck (Mumbai, Indija), dok trikloroctena kiselina (TCA) bio je Thomas Baker (Mumbai, Indija). Alcian blue, indometacin, goveđi serumski albumin (BSA), haematoxylene, alaun, eozinom, butilirani hidroksitoluen (BHT), gvanidin hidroklorid, trifluoroctene kiseline (TFA), omeprazola (Omez), 3,3 'diaminobenzidinu (DAB), anti zečjim -mouse EGF i Trizma baza su nabavljeni iz Sigma Chemicals (St. Louis, MO, USA). Drugi reagensi su korišteni 35% vodikov peroksid (Lancaster, Morecambe, UK), 2,4-dinitrofenil hidrazina (DNPH), dinatrijev hidrogen fosfat i natrij dihidrogen fosfat (BDH, Bazen Dorset, UK), saharoza i 5,5'-ditiobis -2-nitrobenzioc kiselina (DTNB) (SRL, Mumbai, Indija), konj i kozji serum (Banaglore Genie, Banaglore, Indija), PGE 2 metabolita kit (Cayman Chemical, Michigan, SAD) i peroksidaza konjugirani kozji anti zečji IgG (EMD Biosciences, San Diego, USA). pregled Instrumentation pregled apsorbancije spektrofotometrijski je provedeno na 25 ° C pomoću Jasco V-550 UV-Vis spektrofotometru. Valna duljina skenira i mjerenja apsorbancije su u 1 ml kvarca stanicama duljina 1 cm.
Priprema biljnih ekstrakata pregled zraku osušene rizoma iz P. kurroa pregled (250 g) su sjeckani u fine komadiće, namočen u metanolu (1 l) tijekom dva dana, a supernatant dekantiran. Nakon ponavljanja cijeli proces tri puta, kombinirani ekstrakti filtrirani su kroz najlonsku mrežu, te je uparena u vakuumu, a na kraju liofiliziran. Sirovi ekstrakt, označen kao PK tijekom rukopisa je pohranjena u vakuumskom sušilu.
Priprema lijekovi
Lijekovi su pripravljeni iz PK i Omez kao vodene suspenzije u 2% akacija kao nosač, te primijeniti na miševima oralno. pregled i farmakološka ispitivanja
životinja i eksperimentalni protokol za ulceracija pregled muški Swiss albino miševa uzgajaju na dr BC Roy Post Graduate Institute of temeljnih medicinskih znanosti, Kolkata, Indija i Barc Laboratorij Animal House Facility , Mumbai, Indija. To su bili nabavljeni nakon dobivanja klirens (Post Graduate Institute of temeljnih medicinskih znanosti, Kolkata životinja Etičko povjerenstvo 507 /CPCSEA, Sankcija br IAEC /SB-2/2004 /UCM-16, od 06.15.04 i Barc životinja Etičko povjerenstvo (BAEC) , objekt laboratorijska životinja. sankcionirati br. BAEC /5/3, od 11.07.05) iz dotičnih životinja etičkih povjerenstava dviju centara i su obrađene sljedeće međunarodnim smjernicama odbora za etiku životinja. Stare 6-8 tjedana miševi (25-30 g) su uzgajane na uravnoteženom laboratorijske prehrani kao i po NIN, Hyderabad, Indija i dati vodu iz slavine ad libitum. Se čuva na 20 ± 2 ° C, 65-70% vlage, i dnevno /noćnim ciklusom (12 h /12 h). Na početku svakog eksperimenta, sve životinje su identificirani tipičnim ureze u uhu i udova, a zatim nasumična. To je učinjeno kako bi se obavljati sve eksperimente na slijepi način. Ulceracija u miševa bila je izazvana primjenom indometacin (18 mg /kg, p. O.) Koji je otopljen u destiliranoj vodi i suspendira u nosaču, akacija (2%) kao jednu dozu. Naša istraživanja s 5, 10, 15, 18, 20, 25 i 30 mg /kg, str. o. od indometacina su pokazale da su najniže doze (5 i 10 mg /kg) dala je manji ulceracije nakon 6 sati njegove primjene, a veće doze (25 i 30 mg /kg) dovodi do smrtnosti. Odabrani doza (18 mg /kg) je proizveo optimalno ulceracije, s upalom i sluznice inzulta, bez uzrokovanja bilo uginuća za miševe. Životinje su lišeni hrane, ali je imao slobodan pristup do vode 24 sata prije ulkus indukcije. Pregled, standardizacija doze lijeka Netlogu za standardizaciju doze, PK (5, 10, 20 i 40 mg /kg) je bio dan kao jednostruka doza po danu do sedam dana. Prva doza PK i Omez dobili 6 h nakon primjene indometacina. U narednim šest dana, ispitni uzorci su dobili u 9 sati svakog dana. Pet miševa uzeti su u svakoj skupini, a svaki eksperiment je ponovljen tri puta. Miševi su žrtvovani na 1. st, 3 rd, 5 og i 7 og dana, 4 sata nakon primjene posljednje doze PK. Opseg zarastanja čira procijenjena je od makroskopskog oštećenja rezultate (MDS) netretiranih i tretiranih s čirevima miševa na pojedinim danima. Optimizirani režim liječenja (lijekova dozu i trajanje liječenja) su ocijenjeni od MDS od grupa miševa koji su primali metodu liječenja. Pregled Procjena ulceracija i ozdravljenja od MDS
Miševi su žrtvovani nakon predoziranja s tiopental. Želudac od normalnih i tretirane skupine su brzo uklonjeni, otvoreni uzduž veće zakrivljenosti i temeljito isprana s normalnom otopinom soli. U čirevima želučane sluznice područja vizualizirani koristeći prozirni list i mikroskopa. MDS procijenjena je [17] stupnjevanjem želučani ozljede na 0-4 razmjera, na temelju težine hiperemije i hemoragične lezije: 0 - gotovo normalna sluznica, 0,5 - hiperemiju, 1 - jedan ili dva lezija, 2 - teške ozljede , 3 - vrlo teške ozljede, 4 - sluznica puna lezija. (lezije - hemoragične erozije, hiperemija - vaskularne zagušenja). Eksperimenti su provedeni pomoću dva ispitivača slijepim skupini i tretman životinja. Sekcije su kodirani otkloniti utjecaj promatrača. Podaci za analize su prikazani kao srednja vrijednost ± SEM iz pregleda od najmanje tri dijela po životinji i pet životinja po skupini. Pregled istraživanja o biokemijskih parametara
Rezultati MDS otkrila najveću zacjeljivanje ulkusa nakon tri dana liječenje lijekovima. Želudac ulceracije u netretiranih miševa također postignut vrh na 3 dan III nakon indomethacin uprave. Stoga, procjenjuje biokemijskih parametara pod optimiziranim režim liječenja [PK (20 mg /kg) i Omez (3 mg /kg)] do 3 III dan samo ulkusa. Za to, da slijedećih sedam skupina od kojih svaka sadrži 5 miševa su odabrani od onih koji se koriste za ispitivanje MDS i podaci prikazani su dobiveni iz tri ponavljanja: pregled skupina I - normalnih kontrolnih miševa; Grupa II - ulcerated miševi i žrtvovani nakon 10 h (smatra kao jedan dan); Grupa III - ulcerated miševi i žrtvuju na 3 rd dana; Skupina IV-V - ulceriran miševa tretirani s PK i Omez odnosno 1 dan i žrtvovani 4 sata nakon primjene ispitivanih uzoraka; Grupa VI-VII. - Čirevima miševi tretirani s PK i Omez odnosno tijekom 3 dana, te žrtvovani u 3 dana rd, 4 sata nakon posljednje doze testiranih uzoraka pregled kvantifikaciju proteina i lipida oštećenja tijekom ulceracije i ozdravljenja pregled žljezdanog želuca tkivima odvojene su od pet životinja za sva tkiva, ispire s odgovarajućim puferom i koriste za biokemijske studije. Vlažni Težine tkiva su zabilježeni i pokusi su provedeni u triplikatu. Žljezdanog udjeli iz kontrole, čirevima i lijekovima-tretiranih miševa uzeti u različitim vremenskim intervalima se homogenizira s homogenizacije cijevi stakleno-teflonskom u 50 mM fosfatnog pufera, pH 7.4 i centrifugirane na 1200 x g da se dobije supernatant. Količina proteinskih karbonila u homogenatu tkiva određena je nakon iskazanog postupkom [18]. DNPH (4 ml, 10 mM) u 2 M HCl se doda u supernatant (1,0 ml), koji se inkubira 1 h uz povremeno miješanje. Ledeno hladnom 20% vodenom otopinom TCA (5 ml) je dodan i smjesa je inkubirana 15 min. Istaloženi protein se ispere 3 puta s etanol-etil acetat (1: 1), otopljen u 1 ml otopine koja sadrži 6 M gvanidin HCl u 20 mM kalijevog fosfata (monobazični), podešenog na pH 2,3 s trifluoroctenom kiselinom. Nakon centrifugiranja, apsorbancija supernatanta je očitana na 362 nm (∈ = 2.2 × 10 4 M 1 cm 1).
Za analizu lipidne peroksidacije (u smislu znača), 10% homogenat iz svakog od pojedinih uzoraka je pripravljen u puferu (320 mM saharoze, 5 mM HEPES, 20 mM EDTA i 0,01% BHT). Oni su podvrgnuti diferencijalnim centrifugiranjem (1200 × g i 12.000 × g) da bi se dobila mitohondrijske kuglica, koje se ispere s puferom (150 mM KCl i 20 mM fosfatnog pufera) i konačno suspendiran u 50 mM fosfatnog pufera, pH 7,4. Mitohondrijska membranske frakcije (1 ml) obrađena je s TCA-TBA-HCl (2 ml, 15% TCA, 0,375% TBA, 0.25 N HCl), koji sadrže 0.01% BHT, grije na vodenoj kupelji 15 min vrenja, ohladi i centrifugira , Apsorbancija supernatantu je izmjerena pri 535 nm (∈ = 1.56 × 10 5 M 1 cm 1) [19]. Pregled Mjerenje bez proteina tiolom (NP-TSH ) pregled Nakon prijavljen metode [20] je želučane sluznice NP-TSH bio mjeren. Ukratko, fundusa želuca Homogenati iz kontrolnih, čirevima, miševi, lijekom tretiranim su u 0.2 M Tris-HCl pufera, pH 8,2 koji sadrži 20 mM EDTA i centrifugirani. Alikvot homogenata (1 ml) se istaloži s ledeno hladnom 20% TCA (1 ml) i centrifugira. Supernatant (1 ml) doda se 2 ml 0,8 M Tris-HCl puferu, pH 9 koji sadrži 20 mM EDTA i miješa se sa 0,1 ml 10 mM DTNB. Apsorpcija žutom kromogena na 412 nm (∈ = 13,6 × 10 4 M 1 cm -1) je čitati. Pregled, stvaranje mucina testa pregled Nakon prijavljeno metode [21] , slobodna sluzi u želučanog tkiva procijenjen. Ukratko, žljezdane dio želuca se odvaja od lumen želuca, izvagane i odmah prebačen u 10 ml 0,1% w /v Alcian plavim (ab) otopina (u 0.16 M otopine saharoze puferirane s 0,05 mM otopine natrij acetata, pH se namjesti na 5,8). Nakon bojenja 2 sata, višak boje je uklonjena iz tkiva pomoću dva uzastopna ispiranja s 10 ml 0,25 M otopine saharoze. Boja kompleks s želučanu stijenku sluz se ekstrahira s 10 ml 0.5 M magnezij klorid isprekidano miješanje (1 minuta) u intervalima od 30 minuta tijekom 2 sata. Plavo ekstrakt (2 ml) snažno se mućka s jednakim volumenom dietiletera. Nastala emulzija se centrifugira na 3600 okretaja u minuti tijekom 10 minuta, a apsorbancija vodenog sloja je očitana na 580 nm. Količina Ab ekstrahira po g vlažnog žljezdanog tkiva izračunata je iz standardne krivulje pripraviti primjenom različitih koncentracija protutijelom.
COX-1 i COX-2 ekspresije testu
Unutar 30 minuta sakupljanja, čirevima dijelove slijeda želudac tkiva su fiksirane u neutralno-bufferom 10% formolu fiziološkom otopinom i sekcije. Nakon 24 sata fiksacije, nakon čega slijedi ugradnja u parafinskom bloku, je izrezan u dijelove od 5 mikrona na staklenu pločicu i izrazi COX-1 i COX-2 su kvantificirani nakon opisanim postupkom [22], sa malim modifikacijama. Nakon deparaffinization ksilena, sekcije su tretirane sa stupnjevanim niza alkohola, a potom rehidriraju u PBS na pH 7,5. Sekcije su uzastopno obradi s 3% -tnim vodikovim peroksidom u PBS-u, te proteina blokatori (5% goveđeg serumskog albumina, 5% normalnom kozjem serumu u PBS), te inkubirano preko noći na 4 ° C s primarnim antitijelom (mišji anti-COX-1 i COX 2, 1: 200). Nakon inkubacije od 2 sata na sobnoj temperaturi s peroksidaza konjugirani anti-mišji sekundarnim protutijelom (1: 500), što je dobro je određena reakcija izlaganjem stabilno DAB tijekom 2 do 5 minuta. U kontrolnim odjeljcima antitijela su ispušteni i dodana je samo PBS. Nakon counterstaining slajdova s ​​Meyer hematoksilinom, intenzitet boje immunolocalized proizvoda su procijenjene pomoću Biovis MV500 softvera. Pet područja iz svake sekcije su skenirani i izračunata je integrirani optička gustoća (IOD) u svakom području. IOD negativne kontrole se oduzme od IOD svakog eksperimentalnom dijelu za svaku životinju u svim skupinama. Pregled prostaglandin Test pregled Nakon berbe želuca, corpus (pune debljine) je izrezani, izvagani (100 mg ) i suspendiran u 10 mM natrij-fosfatnog pufera, pH 7,4 (1 ml). Tkivo je mljevenog fino škarama i inkubira na 37 ° C tijekom 20 min. Nakon centrifugiranja (9000 × g), prostaglandin E 2 (PGE 2) razina u supernatantu je mjerena ELISA testom [23], a koncentracije su izražene kao pg /mg proteina. Pregled EGF ekspresije test pregled The imunobojanju EGF je provedena [22] uz sličan način korišten za COX-1 i COX-2, uz manje modifikacije. U tom slučaju, nakon blokiranja endogene peroksidaze i liječenje proteina blokatora, sekcije tkiva su inkubirani preko noći na 4 ° C s primarnim antitijelima na odgovarajućem razrjeđenju. U kontrolnim odjeljcima PBS dodan je samo izostavljajući antitijela. Nakon inkubacije od 1 sat na sobnoj temperaturi sa peroksidaza konjugirani kozji anti-zečjim IgG, pozitivan je određena reakcija izlaganjem DAB 2 do 5 minuta. Nakon counterstaining slajdova s ​​Meyer hematoksilinom, intenzitet boje immunolocalized proizvoda su utvrđene pomoću Biovis MV500 softvera. Pet područja iz svake sekcije su skenirani i izračunata je integrirani optička gustoća (IOD) u svakom području. IOD negativne kontrole se oduzme od IOD svakog eksperimentalnom dijelu za svaku životinju u svim skupinama. Pregled Test VEGF serumskog
seruma VEGF mjerena je pomoću uzoraka krvi dobivenih iz silaznog aorte s komercijalno dostupnih ELISA kitova sljedeća instrukcija proizvođača.
želučane sekrecije testa (pilorus podvezivanje model)
za proučavanje učinaka testiranih lijekova na želučane sekrecije, pilorisa podvezivanja želuca normirani u našem laboratoriju je izvršena. Jedna skupina miševa (eksperimentalno kontrola) primila je 2% gumu akaciju u destiliranoj vodi (0,2 ml po miševa, po), dok su različite skupine liječenja daje PK (20 mg /kg × 3 d), Omez (3 mg /kg × 3 d), indometacin (18 mg /kg × 1 d) kao takav ili zajedno s PK (20 mg /kg 3 × d), Omez (3 mg /kg × 3 d), pojedinačno. Na 3 dan III, trbuh životinja otvoren je pod svjetlom anestezijom za pyloric podvezivanja (PL). Nakon zatvaranja trbuha, životinje su stavili u kavezima pod suzdržanost svjetlo i ostavi da se oporavi od anestezije. Poslije 6 sati, životinje su žrtvovane, Otvori se abdomen i ligatura je postavljena oko jednjak. Želudac je uklonjen i sadržaj se odvodi u graduiranu epruveti za centrifugiranje nakon što malog zareza uzduž veće zakrivljenosti susjedstvu piloričkog podvezivanja. Želučani sadržaj se skupljaju, mjereno, centrifugirani i podvrgnuti biokemijske analize.
Statistička analiza pregled su podaci prikazani kao srednja vrijednost ± SEM. Parametarska podaci koji uključuje analizirani su svi biokemijski parametri pomoću uparene 't' test za uparene podatke ili Jednosmjerna analiza varijance (ANOVA), a zatim Dunnet višestruke usporedbe objaviti test. Neparametrijski podaci (makroskopski bodovanja) su analizirani Kruskal-Wallis ANOVA (neparametrijskim), a zatim Dunnov višestruke usporedbe postavljanje testa. Vrijednost vjerojatnosti od p
< 0.05 je smatrana značajnom. IC 50 vrijednost PK procijenjena je korištenjem vjerojatnosti analiza i razine važnosti analize istražena je hi-kvadrat testom.

• Zaštitno djelovanje (1- (4-hidroksi-fenil) -3-m-tolil-propenona kalkona u indometacin inducirane želučane erozivnog oštećenja rats
• Ljudski želuca patogen Helicobacter pylori ima potencijal aceton karboksilazu koji povećava svoju sposobnost da koloniziraju mice