Genezing Potentieel van Picrorhiza kurroa (Scrofulariaceae) wortelstokken tegen-indomethacine geïnduceerde maagzweren: a. Mechanistische exploratie

Genezing Potentieel van Picrorhiza kurroa
(Scrofulariaceae) wortelstokken tegen-indomethacine geïnduceerde maagzweren: a. Mechanistische exploratie
Abstract achtergrond
De huidige studie werd uitgevoerd om het potentieel van de wortelstokken van de Indiase geneesmiddelen te evalueren plant, Picrorhiza kurroa
in het helen-indomethacine geïnduceerde acute maag zweren bij muizen en onderzoekt zij de capaciteit om oxidatieve stress moduleren en de niveaus van prostaglandine (PGE 2) en EGF tijdens het proces.
Methods
mannelijke Zwitserse albino muizen, zweren met indomethacine (18 mg /kg, po, enkele dosis) werden tot 7 dagen met verschillende doseringen van de methanol extract van P. kurroa
wortelstokken (aangeduid als PK). Het herstellend vermogen van de meest effectieve dosis PK (20 mg /kg, p. O. X 3 d) werd vergeleken met die van omeprazol (Omez) (3 mg /kg, p. O. X 3 d). De effecten van de drug-behandeling voor één en drie dagen van de biochemische parameters werden beoordeeld door vergelijking van de resultaten met die van onbehandelde muizen van de 1 e en 3 rd dag ulceratie. De maag weefsels van muizen werden gebruikt voor de biochemische analyse.
Resultaten
de macroscopische indices onthuld maximale zweren op de 3 e dag na toediening van indomethacine, die effectief is genezen PK. Onder de optimale behandelwijze, PK en Omez verminderde de zweer indices met 45,1% (P
< 0,01) en 76,3% respectievelijk (P
< 0,001)., Vergeleken met de onbehandelde muizen zweren
In vergelijking met de onbehandelde muizen zweren, patiënten behandeld met PK gedurende 3 dagen vertoonden verlaagde niveaus van thiobarbiturinezuur reactieve substanties (TBARS) (32,7%, P
< 0,05) en eiwit carbonyl (37,7%, P
<0,001), en verhoogde mucine (42,2%, P Restaurant < 0,01), mucosale PGE 2 (21,4%, P Restaurant < 0,05), en uitingen van COX-1 en 2 (26,9% en 18,5%, P Restaurant < 0,05), EGF (149,0%, P Restaurant < 0,001) en VEGF (56,9%, P Restaurant < 0,01). Omez verminderde de TBARS (29,4%, P Restaurant < 0,05), en eiwit carbonyl (38,9%, P Restaurant < 0,001), en verhoogde mucine (38,3%, P Restaurant < 0,01), zonder veranderen van de andere parameters significant.
Conclusie
PK (20 mg /kg, po x 3 dagen) effectief kan genezen indomethacine geïnduceerde maag verzwering in muizen door het verminderen van oxidatieve stress, en het bevorderen mucine secretie prostaglandinesynthese en verhogen uitdrukkingen van cyclooxygenase enzymen en groeifactoren. achtergrond
gastrointestinale toxiciteit geassocieerd met niet-steroïdale anti-inflammatoire geneesmiddelen (NSAIDs) is een belangrijk medisch probleem ondanks recente ontwikkelingen farmaceutische [1]. Naast het induceren van maagzweren, de NSAIDs blijken ook de genezing van maagzweren remmen [2, 3]. Bijgevolg voorkomen van maagdarmstoornis blijft van belang voor zowel behandelaar en onderzoekers zijn. Ondanks hun werkzaamheid bij het beheer van de NSAID-geïnduceerde maagzweren, de momenteel beschikbare synthetische anti-ulcus drugs verlenen bijwerkingen, en zijn ook duur in het bijzonder voor de plattelandsbevolking. Daartoe hebben we gemeld veelbelovende anti-ulcerogene activiteit van verschillende plantaardige producten [4-6]
Picrorhiza kurroa
. (Familie: Scrofulariaceae, gangbare naam: Picrorhiza, katuka, kutki) is een klein overblijvend kruid groeit in de heuvelachtige delen van de regio Noord-West-Himalaya in India en Nepal. Het blad, schors en de ondergrondse delen van de plant, vooral wortelstokken worden op grote schaal gebruikt in de traditionele Indiase (ayurvedische) systemen van de geneeskunde sinds de oudheid. Hoewel het anti-oxidant, anti-inflammatoire en immunomodulerende activiteiten toont, is het zeer gewaardeerd om de hepatoprotectieve werking. De bittere wortelstokken van Picrorhiza
zijn gebruikt voor duizenden jaren in India om mensen met een indigestie [7], en constipatie te behandelen als gevolg van onvoldoende spijsvertering secretie [8]. Picrorhiza
wordt beschouwd als een trophorestorative kruid voor de lever en een krachtige immuunstimulerend middel [9]. De samenstellende, wordt picroliv ook gemeld om choleretic effect [10] bezitten, en het voorkomen van leverschade veroorzaakt door ethanol [11], chemische stoffen [12] en micro-organismen [13].
Het primaire doel van dit onderzoek was om de genezing te bestuderen eigendom van de methanol extract van P. kurroa
wortelstok (aangeduid als PK) tegen door indomethacine geïnduceerde acute maagzweer muizen ten opzichte
die van de commerciële geneesmiddel, omeprazol (Omez). Indomethacine, een vertegenwoordiger van de NSAID (NSAID) familie, veroorzaakt maagzweren door een aantal mechanismen, waaronder vorming van ROS remming van prostaglandinesynthese, infiltratie van polymorfonucleaire leukocyten, inductie van apoptose, en initiatie van lipideperoxidatie [14, 15]. Vandaar dat de zweer genezen capaciteiten van de drugs, beoordeeld door histopathologie werd gecorreleerd met hun effect doordat de aan indomethacine geïnduceerde oxidatieve stress. De antioxiderende activiteit van de testmonsters werd bepaald in termen van hun vermogen om oxidatieve beschadigingen beschermen lipiden, eiwitten en thiol-afhankelijke antioxidant gastrische weefsels. Verder wordt het NSAID-geïnduceerde gastropathy ook toegeschreven aan de verminderde synthese van prostaglandinen [16]. Bijgevolg is de rol van de testmonsters in toenemende slijmsecretie en expressie van epidermale groeifactor (EGF), en het opheffen PGE 2 synthese werden eveneens onderzocht.
Methods
Plantmateriaal
wortelstok van P. kurroa
(aangeduid als PK), verkregen uit de lokale markt werd gebruikt voor de huidige werk. De fabriek werd taxonomisch geïdentificeerd (toetreding no. 324139) van de Botanische Survey of India, de Indiase Botanische Tuin, Kokata, India.
Chemicals verhuur 2-Thiobarbituurzuur (TBA), ethanol, butanol en ethylacetaat werden verkregen uit E. Merck (Mumbai, India), terwijl trichloorazijnzuur (TCA) was van Thomas Baker (Mumbai, India). Alcian blauw, indomethacine, runderserumalbumine (BSA), haematoxylene, aluin, eosine, gebutyleerd hydroxytolueen (BHT), guanidine hydrochloride, trifluorazijnzuur (TFA), omeprazool (Omez), 3,3 '-diaminobenzidine (DAB), konijn anti -mouse EGF en Trizma base werden verkregen van Sigma Chemicals (St. Louis, MO, USA). Andere reagentia waren 35% waterstofperoxide (Lancaster, Morecambe, UK), 2,4-dinitrofenyl hydrazine (DNPH), dinatriumwaterstoffosfaat en natriumdiwaterstoffosfaat (BDH, Pool Dorset, UK), sucrose en 5,5'-dithiobis -2-nitrobenzioc zuur (DTNB) (SRL, Mumbai, India), paard en geit serum (Banaglore Genie, Banaglore, India), PGE 2 metaboliet kit (Cayman Chemical, Michigan, USA) en peroxidase geconjugeerd geit anti- konijn IgG (EMD Biosciences, San Diego, USA).
Bezetting
De absorptie-spectrometrie werd uitgevoerd bij 25 ° C uitgevoerd met behulp van een Jasco V-550 UV-Vis spectrofotometer. Golflengte scans en de absorptie metingen werden uitgevoerd in 1 ml kwarts cellen met een lengte van 1 cm pad.
Voorbereiding van plantenextracten
aan de lucht gedroogde wortelstokken van P. kurroa
(250 g) werden gehakt in fijne stukjes, geweekt in methanol (1 l) gedurende twee dagen en de bovenstaande vloeistof gedecanteerd. Na driemaal herhalen van het gehele proces, werden de gecombineerde extracten werden gefiltreerd door een nylon gaas en in vacuo ingedampt en tenslotte gevriesdroogd. Het ruwe extract, aangeduid als PK gehele manuscript, werd in een vacuümexsiccator.
Bereiding van de drugs Ondernemingen De geneesmiddelen werden bereid uit PK en Omez waterige suspensies in 2% acaciagom als drager en toegediend aan de muizen oraal.
Farmacologische testen
Dieren en experimentele protocol voor zweren
Mannelijke Zwitserse albino muizen bij Dr. BC Roy Post Graduate Institute of Basic Medische Wetenschappen, Kolkata, India en BARC Laboratory Animal House Facility werden gefokt , Mumbai, India. Deze werden verkregen na het behalen van de klaring (Post Graduate Institute of Basic Medische Wetenschappen, Kolkata Animal Ethics Committee 507 /CPCSEA, Sanctie No. IAEC /SB-2/2004 /UCM-16, gedateerd 06.15.04 en BARC Animal Ethics Committee (BAEC) , proefdier faciliteit. sanctioneren no. BAEC /03/05 dd 11.07.05) uit de respectievelijke Animal ethische commissies van de twee centra en werden behandeld volgende internationale richtlijnen Comité Animal Ethics. De 6-8 weken oude muizen (25-30 g) werden gekweekt op een evenwichtige voeding laboratorium als per NIN, Hyderabad, India en gezien kraanwater ad libitum. Ze werden bij 20 ± 2 ° C, 65-70% luchtvochtigheid en dag /nachtcyclus (12 h /12 h) gehouden. Aan het begin van elk experiment werden alle dieren geïdentificeerd door typische inkepingen in het oor en ledematen en vervolgens gerandomiseerd. Dit werd gedaan om alle experimenten op een blinde wijze uitgevoerd. Zweren in de muizen werd geïnduceerd door toediening van indomethacine (18 mg /kg, p. O.), Opgelost in gedestilleerd water en gesuspendeerd in het voertuig, acaciagom (2%) als een enkele dosis. Onze studies met 5, 10, 15, 18, 20, 25 en 30 mg /kg, p. O. indomethacine bleek dat de laagste doses (5 en 10 mg /kg) leverde kleine ulceratie na 6 uur van de toediening, terwijl hogere doses (25 en 30 mg /kg) tot sterfte. De gekozen dosis (18 mg /kg) produceerde optimale zweren, met ontsteking en mucosale belediging, zonder enige sterfte aan muizen. De dieren werden beroofd van voedsel, maar hadden vrije toegang tot leidingwater 24 uur voor maagzweer inductie.
Standaardisatie van dosis drug
Voor de standaardisatie van de drug doses, PK (5, 10, 20, en 40 mg /kg) werd toegediend als een enkele dosis per dag tot zeven dagen. De eerste dosis van PK en Omez waren 6 uur na de toediening indomethacine. In de daaropvolgende zes dagen werden de testmonsters uitgebracht op 09:00 op elke dag. Vijf muizen werden in elke groep en elk experiment werd driemaal herhaald. De muizen werden opgeofferd op de 1 st, 3 rd, 5 e en 7 e dagen, 4 uur na toediening van de laatste dosis PK. De mate van genezing van zweren werd beoordeeld vanuit de macroscopische schade scores (MDS) van de onbehandelde en behandelde muizen zweren op de betreffende dag. De geoptimaliseerde behandeling regime (drugs dosering en duur van de behandeling) werden beoordeeld vanuit het MDS van de groepen van muizen die de bovengenoemde behandeling.
Beoordeling van zweren en genezing van MDS Ondernemingen De muizen werden na een overdosis van thiopental opgeofferd. De maag van de normale en de behandelde groepen werden snel verwijderd, geopend langs de grotere kromming en grondig gespoeld met fysiologische zoutoplossing. De zweren maagslijmvlies gebieden werden gevisualiseerd met behulp van een transparante plaat en een dissectie microscoop. MDS werd vastgesteld [17] rangschikt de gastrische schade op een schaal van 0-4, gebaseerd op de ernst van hyperemie en hemorrhagische laesies: 0 - bijna normale mucosa, 0,5 - hyperemie, 1 - een of twee laesies, 2 - ernstige beschadigingen , 3 - zeer ernstige letsels, 4 - slijmvlies vol laesies. (Laesies - hemorragische erosies, hyperemie - vasculaire congesties). De experimenten werden uitgevoerd door twee onderzoekers verblind de groep en de behandeling van dieren. De plakjes werden gecodeerd om een ​​waarnemer voorspanning te elimineren. Gegevens voor de analyse worden weergegeven als het gemiddelde ± SEM van de evaluatie van ten minste drie secties per dier en vijf dieren per groep.
Onderzoek naar de biochemische parameters Ondernemingen De MDS resultaten lieten maximum ulcus genezing na drie dagen behandeling met geneesmiddelen. De maag zweren in de onbehandelde muizen bereikte ook piek op de 3 rd dag na indomethacine toediening. Daarom onderzochten we de biochemische parameters onder de geoptimaliseerde behandelingsregime [PK (20 mg /kg) en Omez (3 mg /kg)] tot de 3 rd dag slechts ulceratie. Hiervoor werden de volgende zeven groepen die elk 5 muizen gekozen uit die welke voor de MDS test en de getoonde gegevens zijn afkomstig van drie replicaten:
Groep I - normale controlemuizen; Groep II - zweren muizen, en opgeofferd na 10 uur (beschouwd als een dag); Groep III - zweren muizen, en geofferd op het 3 rd dag; Groep IV-V - zweren muizen, die werden behandeld met PK en Omez respectievelijk voor 1 dag, en opgeofferd 4 uur na toediening van de monsters; Groep VI-VII -. Zweren muizen, behandeld met PK en Omez respectievelijk 3 dagen, en opgeofferd in het 3 rd dag, 4 uur na de laatste dosis van de testmonsters
Kwantificering van eiwitten en lipiden schade tijdens ulceratie en genezing
voormaag weefsels werden samengebracht uit vijf dieren per weefsel gespoeld met geschikte buffer en gebruikt voor biochemische studies. Het natte gewicht van de weefsels werden geregistreerd en de experimenten werden in drievoud uitgevoerd. De glandulaire gedeelten van de controle, zweren en geneesmiddel behandelde muizen genomen op verschillende tijdstippen werden gehomogeniseerd met een glazen teflon buis homogeniseren in een 50 mM fosfaatbuffer, pH 7,4 en gecentrifugeerd bij 1200 xg om het supernatant te verkrijgen. De hoeveelheid eiwit carbonylen in het weefsel homogenaat werd bepaald volgens een methode gerapporteerd [18]. DNPH (4 ml, 10 mM) in 2 M HCl werd de supernatant (1,0 ml), hetgeen werd gedurende 1 uur met onderbroken schudden toegevoegd. Ijskoud 20% 's TCA-oplossing (5 ml) werd toegevoegd en het mengsel gedurende 15 min. (1: 1) het neergeslagen eiwit werd 3 maal met ethanol-ethylacetaat gewassen, opgelost in 1 ml van een oplossing die 6 M guanidine HCl in 20 mM kaliumfosfaat (monobasisch) op pH 2,3 met trifluorazijnzuur. Na centrifugeren, werd de absorptie van de supernatant afgelezen bij 362 nm (∈ = 2,2 x 10 4 M -1 cm -1).
Voor de analyse van lipideperoxidatie (qua TBARS), een 10% homogenaat van elk van de respectieve monsters werd bereid in een buffer (320 mM sucrose, 5 mM HEPES, 20 mM EDTA en 0,01% BHT). Deze werden gecentrifugeerd (1200 x g en 12.000 xg) differentiële de mitochondriale pellets die werden gewassen met de buffer (150 mM KCl en 20 mM fosfaatbuffer) en tenslotte gesuspendeerd in een 50 mM fosfaatbuffer, pH 7,4 te verkrijgen. De mitochondriale membraan fractie (1 ml) werd behandeld met TCA-TBA-HCl (2 ml, 15% TCA, 0,375% TBA, 0,25 N HCl) bevattende 0,01% BHT, verwarmd op een kokend waterbad gedurende 15 minuten, gekoeld en gecentrifugeerd . De absorptie van het supernatant werd gemeten bij 535 nm (∈ = 1,56 x 10 5 M -1 cm -1) [19]. Meet- van niet-eiwit thiol (NP-TSH )
Na een methode gerapporteerd [20], het maagslijmvlies NP-TSH gemeten. Kort samengevat, maag fundus homogenaten van de controle, zweren, met geneesmiddel behandelde muizen werden in 0,2 M Tris-HCl buffer, pH 8,2 bevattende 20 mM EDTA en gecentrifugeerd. Een portie van het homogenaat (1 ml) werd geprecipiteerd met ijskoude 20% TCA (1 ml) en gecentrifugeerd. De supernatant (1 ml) werd toegevoegd aan 2 ml van 0,8 M Tris-HCl-buffer, pH 9 met 20 mM EDTA toegevoegd en gemengd met 0,1 ml 10 mM DTNB. De absorptie van de gele chromogeen bij 412 nm (∈ = 13,6 x 10 4 M -1 cm -1) werd gelezen.
Mucine assay
Na een gerapporteerde methode [21] de vrije mucine in de gastrische weefsels werd geschat. Kort samengevat, de glandulaire gedeelte van de maag werd gescheiden van het lumen van de maag, gewogen en onmiddellijk overgebracht in 10 ml 0,1% w /v alcianblauw (Ab) -oplossing (in 0,16 M sucrose oplossing gebufferd met 0,05 mM natriumacetaat-oplossing, pH ingesteld op 5,8). Na kleuren gedurende 2 uur werd het overtollige verf uit het weefsel verwijderd door twee opeenvolgende spoelingen met 10 ml 0,25 M sucrose-oplossing. De kleurstof gecomplexeerd met de maagwand mucus werd met 10 ml 0,5 M magnesiumchloride geëxtraheerd door intermitterende schudden (1 min) bij 30 minuten intervallen gedurende 2 uur. De blauwe extract (2 ml) werd krachtig geschud met een gelijk volume diëthylether. De resulterende emulsie werd gecentrifugeerd bij 3600 rpm gedurende 10 min en de absorptie van de waterige laag werd afgelezen bij 580 nm. De hoeveelheid Ab gewonnen per gram natte klierweefsel werd berekend uit een standaardcurve bereid met verschillende concentraties van Ab.
COX-1 en COX-2 expressie assay
Binnen 30 min na de oogst, de gedeelten van de zweren maag weefsels werden gefixeerd in neutraal gebufferde 10% formol zoutoplossing en coupes. Na 24 h fixatie gevolgd door inbedden in paraffine blok werd gesneden in secties van 5 urn op een glasplaatje en de uitingen van COX-1 en COX-2 werd gekwantificeerd na een gerapporteerde procedure [22], met een lichte modificatie. Na deparaffinisatie in xyleen werden de coupes behandeld met een gegradeerde reeks van alcohol en vervolgens gerehydrateerd in PBS bij pH 7,5. De secties werden achtereenvolgens behandeld met 3% waterstofperoxide in PBS en eiwit blokkers (5% runderserum albumine, 5% normaal geit serum in PBS) en gedurende de nacht geïncubeerd bij 4 ° C met primair antilichaam (muis anti-COX-1 en COX 2, 1: 200). Na incubatie gedurende 2 uur bij kamertemperatuur met peroxidase geconjugeerd konijn anti-muis secundair antilichaam (1: 500), werd een positieve reactie gedetecteerd door blootstelling aan stabiele DAB gedurende 2 tot 5 minuten. In controlesecties werden antilichamen weggelaten, en alleen PBS toegevoegd. Na tegenkleuring de dia's met hematoxyline Meyer's, werden de intensiteiten van gekleurde immunolocalized producten geëvalueerd met behulp van BIOVIS MV500 software. Vijf gebieden van elke sectie werden gescand en de geïntegreerde optische dichtheid (IOD) in elk gebied berekend. De IOD van de negatieve controle werd afgetrokken van de IOD van elke experimentele gedeelte voor elk dier in alle groepen.
Prostaglandine assay
Na oogsten van de maag, het corpus (volledige dikte) werd uitgesneden, gewogen (100 mg ) en gesuspendeerd in 10 mM natriumfosfaatbuffer, pH 7,4 (1 ml). Het weefsel werd fijngehakt met een schaar en geïncubeerd bij 37 ° C gedurende 20 min. Na centrifugeren (9000 x g), prostaglandine E 2 (PGE 2) niveaus in de supernatant gemeten door ELISA [23], en de concentraties worden uitgedrukt in pg /mg eiwit.
EGF uitdrukking assay
De immunokleuring van EGF werd [22] volgens een vergelijkbare methode voor COX-1 en COX-2, met ondergeschikte modificaties uitgevoerd. In dit geval, na blokkeren van de endogene peroxidase en behandeling met het eiwit blokkers, de weefselsecties werden overnacht geïncubeerd bij 4 ° C met primair antilichaam in de geschikte verdunning. In control gedeelten worden alleen PBS toegevoegd weglaten van de antilichamen. Na incubatie gedurende 1 uur bij kamertemperatuur met peroxidase geconjugeerd geit anti-konijn IgG, werd een positieve reactie gedetecteerd door blootstelling aan DAB gedurende 2 tot 5 minuten. Na tegenkleuring de dia's met hematoxyline Meyer's, werden de intensiteiten van gekleurde immunolocalized producten gekwantificeerd met behulp van BIOVIS MV500 software. Vijf gebieden van elke sectie werden gescand en de geïntegreerde optische dichtheid (IOD) in elk gebied berekend. De IOD van de negatieve controle werd afgetrokken van de IOD van elke experimentele gedeelte voor elk dier in alle groepen.
Assay van VEGF serum
VEGF serum werd gemeten met de bloedmonsters getrokken uit de aorta descendens, met commercieel verkrijgbare ELISA kits volgende instructies van de fabrikant.
maag secretoire assay (pylorous ligatie model) Belgique Om het effect van de testgeneesmiddelen op maagzuurafscheiding bestuderen de pylorus van de maag ligatie gestandaardiseerd in ons laboratorium werd uitgevoerd. Eén groep muizen (experimentele controle) kreeg 2% acaciagom in gedestilleerd water (0,2 ml per muis, po), terwijl de verschillende behandelingsgroepen PK kregen (20 mg /kg x 3 d), Omez (3 mg /kg x 3 d), indomethacine (18 mg /kg x 1 d) als zodanig of samen met PK (20 mg /kg x 3 d), Omez (3 mg /kg x 3 d). Op de 3 rd dag, de buik van de dieren werd geopend onder lichte verdoving met ether voor pyloric ligatie (PL). Na sluiting van de buik, werden de dieren in kooien onder licht onderdrukt worden en om te herstellen van de anesthesie. Na 6 uur werden de dieren gedood, de buik werd geopend en een ligatuur werd geplaatst rond de slokdarm. Maag werd verwijderd en de inhoud werd afgevoerd in een maatkolf centrifugebuis na een kleine inkeping langs de grote curvatuur naast pylorus ligatie. De maaginhoud werden verzameld, gemeten, gecentrifugeerd en onderworpen aan biochemische analyse.

Statistische analyse De gegevens worden weergegeven als gemiddelde ± SEM. Parametrische data waaronder alle biochemische parameters werden geanalyseerd met een gepaarde 't' test voor de gepaarde gegevens of een variantieanalyse (ANOVA) gevolgd door een Dunnet meervoudige vergelijkingen na de test. Parametrische data (macroscopische scoring) werden geanalyseerd met behulp van Kruskal-Wallis-test (niet-parametrische ANOVA), gevolgd door meerdere vergelijkingen een Dunn's na de test. Een waarschijnlijkheid waarde van P Restaurant < 0,05 werd significant geacht. De IC 50 waarde van PK werd geschat met behulp van de Probit analyse en de betekenis niveau van de analyses werd onderzocht door de chikwadraattoets.
Resultaten
Extraction en fytochemische analyse
Het extractieproces leverde het methanol extract, PK in 12,57% w /w opbrengst. De TLC-analyse van PK geopenbaard een complex mengsel van een groot aantal organische verbindingen, de meeste van deze zijn aanwezig als glycosiden zoals blijkt uit proef Molisch's. Aanwezigheid van apocynin, andorsin, picrosides I en II, en katukoside samen met andere geïdentificeerde verbindingen PK werd bevestigd door vergelijking van zijn TLC profiel met die van de bekende oplossingen.
Standaardisatie van dosis PK voor maagzweren genezing in muizen
de dosis PK effectieve genezing van maagzweren werden geoptimaliseerd door het uitvoeren van de behandeling met PK (5, 10, 20 en 40 mg /kg) tot zeven dagen en vergelijken van de MDS waarden van de behandelde en onbehandelde muizen op de betreffende dag . Het tijdsverloop van de mate van ulceratie maag (zoals geopenbaard van MDS waarden) en de preventie van verschillende doses PK zijn getoond in Fig. 1. De muizen die vehikel alleen toonde geen mucosale letsels. Behandeling van muizen met indomethacine (18 mg /kg) die typisch tijdsafhankelijke acute laesies in het maagslijmvlies. De zweren bereikte maximum op de 3 rd dag van zweren bij de MDS waarde steeg met 162,1% ten opzichte van die op de eerste dag (P Restaurant < 0,001). Daarna werd er geleidelijk herstel door natuurlijke genezing, en de 7 e dag na ulceratie, werd de MDS verminderd met 49,2% vergeleken met die op de eerste dag (P
< 0,01). Figuur 1 Het tijdsverloop van maag ulceratie en preventie daarvan door verschillende doses PK. Maag zweren bij muizen werd geïnduceerd door orale toediening van indomethacine (18 mg /kg lichaamsgewicht). Verschillende doses PK werden gebruikt voor de experimenten. De zweer indices werden gemeten op verschillende dagen 4 uur na de laatste dosis van PK en de waarden zijn gemiddelde ± S.E.M. (N = 15). aP Restaurant < 0,01 BP Restaurant < 0.001 in vergelijking met 1 dag zweren onbehandelde muizen; cP Restaurant < 0,01, dP Restaurant < 0,001 vergelijking met de groep III muizen.
PK, naar alle gekozen doses vertoonden maximum genezing van de zweer op de 3 rd dag van ulceratie en het effect was dosisafhankelijk. In vergelijking met respectieve controles zweren, MDS reducties (45,1% -52,9%, P
< 0,01) van PK (20 en 40 mg /kg) waren vergelijkbaar en significant beter dan bij de lagere dosis (10 mg /kg). Het effect van PK (5 mg /kg) was significant. Onder soortgelijke omstandigheden, behandeling met Omez (3 mg /kg) gedurende 3 dagen verminderde de MDS waarde met 76,3% (P
< 0,001) vergeleken met die van de groep III muizen. De genezing waargenomen op de uitbreiding van de behandeling tot zeven dagen met PK was beter dan die waargenomen met de drie-daagse behandeling regime. Echter, een belangrijk deel daarvan was te wijten aan autohealing, met minder bijdrage van PK.
Algemeen behandeld met PK (20 mg /kg) en Omez (3 mg /kg) gedurende 3 dagen na inductie zweer ontvangen optimale genezing van ulcera . Gezien deze werden alle daaropvolgende experimenten met hetzelfde behandelingsregime uitgevoerd. De gekozen dosis Omez, die ook de aanbevolen therapeutische dosis voor de mens geoptimaliseerd door ons [6].
Voor de onbehandelde muizen, piek ulceratie (maximum MDS) werd waargenomen op de derde dag van indomethacine toediening. Daarom werd dit tijdstip gekozen om uit te vinden de IC 50 waarde van PK. Gezien de waarden van de MDS 3 rd dag zweren onbehandelde muizen als 100%, de IC 50 waarde van PK bleek 23,30 ± 3,50 mg /kg.
Kwalitatieve beoordeling
macroscopisch onderzoek gebleken dat indomethacine toediening tot een duidelijke schade aan het glandulaire gedeelte van de muizen maagslijmvlies. Binnen 6 uur na toediening indomethacine, oppervlakkige erosie en lichte ontsteking in de maag werd waargenomen wijzen op een acute zweren. Op de dag van inductie zweer, verlies van foveolar structuur met cryptische architectuur was prominente eigenschap in de meeste van de onbehandelde muizen. Ook milde ontstekingsinfiltraat met neutrofielen werd waargenomen in de lamina propria. Behandeling met zowel PK en Omez zelfs voor één dag beperkt schade met fragmentarisch gebieden beroofd structurele epitheel.
Indomethacine geïnduceerde gastropathy werd veel uitgesproken op de derde dag het tonen doorgestoken meerdere gebieden van ulceratie met inflammatoire infiltraat dat neutrofielen en macrofagen in de slijmvlies, sub-slijmvlies en spieren jas, samen met hemorragische serosa. Een groot aantal abnormale cellen met veranderde kern naar het cytoplasma verhouding werden opgemerkt. Behandeling met PK en Omez gedurende 3 dagen tot verminderd aantal ontstekingscellen samen met een verhoogd aantal gezonde normale cellen in het maagslijmvlies, en submucosa, serosa en spierlagen minimale mucosale congestie.
Effect van PK en Omez op lipideperoxidatie en eiwit oxidatie in de maag weefsel
de effecten van indomethacine inname alleen en na toediening van PK en Omez over de omvang van lipideperoxidatie (gemeten in termen van TBARS), eiwit oxidatie (gemeten in termen van eiwit carbonylgehalte ), de thiol-afhankelijke afweersysteem (NP-TSH) en mucine gehalte in de gastrische weefsels van muizen worden weergegeven in Tabel 1 en Tabel 2.Table 1 het effect van PK en Omez op het niveau van TBARS, eiwit carbonylen, niet- eiwit thiol, en mucine in de zwerende maag weefsel van micea op de eerste dag van de zweren
parameters
Groep I muizen normale controle

groep II 1 dag zweren controle
Group III PK-behandelde
Group IV Omez behandeld
TBARS (nmol /mg eiwit)
0,85 ± 0,03
1.18 ± 0.05c
0.94 ± 0.06d
0.89 ± 0.07d
eiwit carbonylen (nmol /mg eiwit)
1,08 ± 0.05
1.62 ± 0.09b
1,49 ± 0.12
1.53 ± 0.07
NP-TSH (nmol /mg weefsel)
1.99 ± 0.09
1,66 ± 0.08b
1.86 ± 0.08
1.81 ± 0.09
mucine (ug /g weefsel)
335,03 ± 14,43
213,02 ± 0.59b
240,33 ± 20,49
253,33 ± 14.53d
aStomach zweren bij muizen werd geïnduceerd door orale toediening van indomethacine (18 mg /kg) . PK (20 mg /kg /dag x 1 dag) en Omez (3 mg /kg /dag x 1 dag) werden gebruikt als testmonsters. De testen werden 4 uur na de toediening van de testmonsters uitgevoerd. De waarden zijn gemiddelden ± SEM (n = 15). bP Restaurant < 0.05, cP Restaurant < 0,01 vergeleken met normale muizen; dP Restaurant < 0,05 vergeleken met II muizen.
Tabel 2 Het effect van PK en Omez op het niveau van TBARS, eiwit carbonylen, niet-eiwit thiol, en mucine in de zwerende maagweefsel van micea op dag drie van ulceratie
parameters
Groep I normale controle
groep III 3e dag zweren controle
groep V PK-behandeld

Group VI Omez behandeld
TBARS (nmol /mg eiwit)
1.02 ± 0.06
1,53 ± 0.06c
1,03 ± 0.09d
1,08 ± 0.05d
Protein carbonylen (nmol /mg eiwit)
1,18 ± 0,07
2,61 ± 0.17c
1.62 ± 0.10f
1.59 ± 0.09f
NP-TSH (nmol /mg weefsel)
2.06 ± 0.09
1,73 ± 0,09
2,06 ± 0.14d
2,05 ± 0.1d
mucine (ug /g weefsel)
343,30 ± 16,91
213,29 ± 17.91b
303,34 ± 17.4e
295,06 ± 15.62e
aStomach zweren bij muizen werd geïnduceerd door orale toediening van indomethacine (18 mg /kg). PK (20 mg /kg /dag x 3 dagen) en Omez (3 mg /kg /dag x 3 dagen) werden gebruikt als testmonsters. De testen werden uitgevoerd op dag drie ulceratie, 4 uur na de laatste dosis van de drug. De waarden zijn gemiddelden ± SEM (n = 15). bP Restaurant < 0,05, cP
0.001 in vergelijking met normale muizen, dP Restaurant < 0.05 EP Restaurant < 0,01, fP Restaurant < . 0,001 vergelijking met de groep III muizen
Indomethacin toediening sterk gestimuleerd lipideperoxidatie gastrische weefsels, verhogen van de TBARS gehalte 38,8% (P
< 0,01) (
&P lt; 0,001) en 53% respectievelijk op de 1 e en 3 rd dag ulceratie, vergeleken met die van de normale controlemuizen. Behandeling met PK en Omez toonde onmiddellijk effect, waardoor de TBARS gehalte 20,3% en 24,6% respectievelijk vergelijking met de groep II muizen (P
< 0,05). Behandeling met PK en Omez drie dagen verminderd door 32,7% en 29,4% in vergelijking met de groep III muizen (P
< 0,05).
Vergelijking met de normale waarde, het eiwit carbonylgehalte van de zweren muizen hoger (50%) op de eerste dag (P Restaurant < 0,05), die met 120,3% op de piek zweren verhoogd (P Restaurant < 0,001). Geen van de testgeneesmiddelen toonde onmiddellijk effect op dag één.

• Beschermende effecten van (1- (4-hydroxy-fenyl) -3-m-tolyl-propenon chalcon in indomethacine geïnduceerde gastrische erosieve schade rats
• De menselijke maag-pathogeen Helicobacter pylori heeft een potentieel aceton carboxylase dat haar vermogen om mice