Gyógyító potenciál Picrorhiza kurroa (Scrofulariaceae) rizóma ellen indometacin által okozott gyomorfekély: mechanisztikus exploration.

gyógyító potenciál Picrorhiza kurroa katalógusa (Scrofulariaceae) rizóma ellen indometacin által okozott gyomorfekély: mechanikus feltárása. Katalógusa Abstract
Háttér katalógusa jelen vizsgálatunk során áttekintjük az rizómák az indiai gyógynövény, Picrorhiza kurroa katalógusa gyógyulást indometacin által okozott heveny gyomor fekély egerekben, és megvizsgálja, hogy képes modulálni az oxidatív stressz és a szintek prosztaglandin (PGE 2), és az EGF a folyamat során.
módszerek
hím Swiss albínó egerekben, fekélyes indometacinnal (18 mg /kg, po, egyszeri dózis) kezeltünk legfeljebb 7 napig különböző dózisú a metanolos extraktumot P. kurroa katalógusa rizómák (kijelölt PK). A gyógyító kapacitása a leghatékonyabb dózis PK (20 mg /kg, p. O. × 3 d) hasonlították össze, hogy az omeprazol (Omez) (3 mg /kg, p. O. × 3 D). A hatások a kábítószer-kezelés egy és három nappal a biokémiai paraméterek értékelték összehasonlításával eredményeket a kezeletlen egerek a 1 ST és 3 RD napján fekélyesedés. A gyomor szöveteinek az egereket használtuk a biokémiai elemzés.
Eredmények
makroszkopikus indexek feltárta maximális fekélyesedés a 3 rd nap után indometacin adagolás, amelyet hatékonyan meggyógyult PK. Az optimalizált kezelési rendszer, PK és Omez csökkentette a fekély indexek által 45,1% (p
< 0,01), és 76,3% -kal (p
< 0,001), összehasonlítva a kezeletlen fekélyes egerekben.
összehasonlítva a fekélyes kezeletlen egerek kezelt betegek PK 3 napon azt mutatták, csökkent szintje tiobarbitursav reaktív anyagok (TBARS) (32,7%, p
< 0,05) és a fehérje-karbonil (37,7%, p
<0,001), és a megnövelt mucin (42,2%, P katalógusa < 0,01), a nyálkahártya PGE 2 (21.4%, P katalógusa < 0,05), és a kifejezések a COX-1 és 2 (26.9% és 18,5%, p
< 0,05), EGF (149,0%, P
< 0,001) és a VEGF (56,9%, p
< 0,01). Omez csökkentette a TBARS (29,4%, P katalógusa < 0,05), és a fehérje karbonil (38,9%, P katalógusa < 0,001), és a megnövekedett mucin (38,3%, P katalógusa < 0,01), anélkül, megváltoztatva a többi paraméter jelentősen.
Következtetés
PK (20 mg /kg, po × 3 nap) tudott hatékonyan gyógyítani indometacinnal indukált gyomor fekélyesedés egerekben az oxidatív stressz csökkentésével és elősegítik mucin szekrécióját, a prosztaglandin-szintézist, és hatásfokozó kifejezések ciklooxigenáz enzimek és a növekedési faktorok.
alapon
gastrointestinalis toxicitás kapcsolódó nem-szteroid gyulladásgátló gyógyszerek (NSAID-ok) fontos orvosi probléma ellenére utóbbi gyógyászati ​​előrelépések [1]. Emellett indukáló gyomorfekély, a NSAID-ok is megjelenik, hogy gátolja a fekély gyógyulását [2, 3]. Következésképpen, a megelőzés a gyomor-bélrendszeri betegsége továbbra is aggodalomra ad okot mind klinikai orvos és kutató. Annak ellenére, hogy hatékonysági kezelésében NSAID okozta gyomorfekély, a jelenleg rendelkezésre álló szintetikus fekélyellenes gyógyszerek ruházza mellékhatásokat, és drágák is, különösen a vidéki lakosság. Ebből a célból az általunk számolt ígéretes anti-fekélyt aktivitását számos növényi termékek [4-6]. Katalógusa Picrorhiza kurroa katalógusa (család: Scrofulariaceae, közönséges neve: Picrorhiza, katuka, kutki) egy kis évelő növény nő a dombos részein az észak-nyugat-himalájai régió Indiában és Nepálban. A levél, kéreg és a föld alatti növényi részek, főleg rizómák széles körben használják a hagyományos indiai (ájurvédikus) gyógyászati ​​rendszernek, ősidők óta. Bár ez azt mutatja, az anti-oxidáns, gyulladáscsökkentő, és immunmoduláns, arra a legnagyobb értékelik annak májvédő hatást. A keserű rizómája Picrorhiza katalógusa óta használják több ezer éves indiai kezelésére emberek emésztési [7], és a székrekedés elégtelensége miatt emésztési váladék [8]. Picrorhiza
minősül trophorestorative gyógynövény a máj, valamint egy potens immun stimuláns [9]. Alkotóelemeire, picroliv is beszámoltak, hogy rendelkeznek choleretic hatása [10], és megakadályozza a májkárosodás okozta etanol [11], a vegyi anyagok [12] és a mikroorganizmus [13].
Elsődleges célja ennek a vizsgálatnak az volt, hogy tanulmányozza a gyógyulás ingatlan a metanol kivonat P. kurroa katalógusa rizóma (kijelölt PK) ellen indometacin kiváltott akut gyomorfekély egerek szemközti katalógusa hogy a kereskedelemben kapható szerekkel, omeprazol (Omez). Indometacin, egy képviselője a nem-szteroid gyulladásgátló szer (NSAID) család, okozza a gyomorfekélyt a különböző folyamatok, beleértve generációs ROS, prosztaglandin szintézis gátlása, beszivárgó polimorfonukleáris leukociták, apoptózis indukálása, és iniciációs lipidperoxidáció [14, 15]. Ezért a fekély gyógyulását kapacitásainak gyógyszerek, értékelni kórszövettani, korrelált hatásukat csökkenteni a indometacin által okozott oxidatív stressz. Az antioxidáns aktivitást a vizsgálati minták vizsgáltuk szempontjából, hogy képesek megvédeni az oxidatív károsodások a lipidek, fehérjék, és tiol-függő antioxidáns védelmi gyomor szövetekben. Továbbá, a nem szteroid gyulladásgátlók által indukált gyomorbaj is tulajdonítható, hogy a csökkent szintézisét a prosztaglandinok [16]. Következésképpen a szerepe a vizsgálati minták növekvő nyálka szekréció, és kifejezése az epidermális növekedési faktor (EGF), valamint a felemelő PGE 2 szintézis is vizsgáltuk.
Módszerei
Növényi anyag
rizóma P. kurroa katalógusa (kijelölt PK) beszerzése a helyi piacon használtuk a jelen munka. A növény rendszertanilag azonosították (csatlakozás nélkül. 324.139) által Botanikus Survey of India, az indiai botanikus kert, Kokata, India. Katalógusa Chemicals katalógusa 2-tiobarbitursav (TBA), etanol, butanol és etil-acetátot beszerzett E. Merck (Mumbai, India), míg a triklór-ecetsav (TCA) volt: Thomas Baker (Mumbai, India). Alcián kék, indometacin, szarvasmarha-szérumalbumin (BSA), haematoxylene, timsó, eozin, butilezett hidroxi-toluolt (BHT), guanidin-hidroklorid, trifluor-ecetsav (TFA), omeprazol (Omez), 3,3 '-diaminobenzidine (DAB), nyúl anti -egér EGF és Trizma bázis kerültek beszerzésre a Sigma Chemicals (St. Louis, MO, USA). Egyéb alkalmazott reagensek 35% -os hidrogén-peroxidot (Lancaster, Morecambe, Egyesült Királyság), 2,4-dinitro-hidrazint (DNPH), dinátrium-hidrogén-foszfát és nátrium-dihidrogén-foszfát (BDH, Pool Dorset, Egyesült Királyság), a szacharóz és a 5,5'-ditio-bisz -2-nitrobenzioc sav (DTNB) (SRL, Mumbai, India), a ló és kecske szérummal (Banaglore Genie, Banaglore, India), PGE 2 metabolit kit (Cayman Chemical, Michigan, USA) és a peroxidáz konjugált kecske anti nyúl IgG-t (EMD Biosciences, San Diego, USA).
Instrumentation
Az abszorbanciát spektrofotometriával végeztük 25 ° C hőmérsékleten egy Jasco V-550 UV-VIS spektrofotométer. Hullámhossz vizsgál, és abszorbancia méréseket végeztük 1 ml kvarcküvettákban 1 cm út hossza.
Előállítása növényi kivonatok katalógusa A levegőn szárított gyökerének P. kurroa katalógusa (250 g) vágtuk finom darab, átitatott metanolban (1 liter) két napig, és a felülúszót dekantáljuk. Ismétlése után az egész folyamat három alkalommal, az egyesített extraktumokat leszűrtük nejlon háló, és vákuumban bepároljuk, és végül liofilizáljuk. A nyers extraktumot, kijelölt PK egész kézirat, tárolták vákuum exszikkátorban.
Előállítása A gyógyszerek
A gyógyszereket állítjuk elő: PK és Omez például vizes szuszpenziók a 2% -os akácmézga, mint a jármű, és a szabályozott az egereknek orálisan. katalógusa farmakológiai vizsgálatok katalógusa Állatok és kísérleti protokoll fekélyesedés katalógusa Férfi Swiss albínó egereket tenyésztettek Dr. BC Roy Posztgraduális Intézet Basic Medical Sciences, Kolkata, India és BARC Laboratory Animal House Facility , Mumbai, India. Ezeket beszerzett megszerzése után hézag (Post Graduate Institute of Basic Medical Sciences, Kolkata Állat Etikai Bizottság 507 /CPCSEA, Szankció No. IAEC /SB-2/2004 /UCM-16-én kelt 06.15.04 és BARC Állat Etikai Bizottság (BAEC) laboratóriumi állat lehetőség. szankcionálására sem. BAEC /03/05-án kelt 11.07.05) az illető állat etikai bizottságok a két központ és kezelték következő Nemzetközi állat-Etikai Bizottság iránymutatást. A 6-8 hetes egereket (25-30 g) nevelt kiegyensúlyozott étrend laboratórium, mint egy NIN, Hyderabad, India és adott csapvíz ad libitum. Úgy tartottuk 20 ± 2 ° C-on, 65-70% páratartalom és a nap /éjszaka ciklus (12 óra /12 óra). Az elején minden kísérlet, az összes állatot azonosítottunk tipikus rovátkákkal a fül és a végtagok, majd randomizált. Ez azért történt, hogy végre minden kísérlet vak módszerrel. Fekélyesedés az egerekben indukált beadásával indometacinnal (18 mg /kg, p. O.) Desztillált vízben oldunk, és szuszpendáljuk a vivőanyagban, akácmézga (2%), mint egy adag. Vizsgálataink 5, 10, 15, 18, 20, 25 és 30 mg /kg, p. o. indometacin kiderült, hogy a legalacsonyabb dózisban (5 és 10 mg /kg), feltéve kisebb fekélyesedés 6 óra eltelte után az adagolás, míg a magasabb dózisok (25 és 30 mg /kg) vezetett mortalitást. A kiválasztott dózis (18 mg /kg) az optimális fekélyesedés, a gyulladás és a nyálkahártya sértés, anélkül mortalitást az egerekben. Az állatokat táplálékot, de szabad hozzáférése volt a csapvíz előtt 24 órával fekély indukció. Katalógusa standardizálása gyógyszeradag katalógusa A szabványosítás a gyógyszerek adagolását, PK (5, 10, 20 és 40 mg /kg) adtuk egyetlen dózisban naponta akár hét napig. Az első adag PK és Omez kaptak 6 óra után indometacin beadása. Az ezt követő hat nap, a vizsgálati mintákat kaptak 9 órakor minden nap. Öt egérből vett minden egyes csoportban, és minden egyes kísérletet háromszor megismételjük. Az egereket feláldozott 1 st, 3 rd, 5 -án és 7 th nap, 4 óra után utolsó adag beadásával a PK. A mértéke a fekély gyógyulását értékelték a makroszkopikus sérüléssel pontszámok (MDS) a kezeletlen és a kezelt egerek fekélyes a megfelelő napon. Az optimalizált kezelési rezsim (gyógyszerek dózis és a kezelés időtartama) vizsgálatát az MDS csoportok kapó egerek a fenti kezelés. Katalógusa értékelése fekély és gyógyulás MDS
egereket leöltük túladagolása tiopentalt. A gyomor a normál és a kezelt csoportokat eltávolítjuk gyorsan, kinyitotta a nagyobb görbület mentén, és alaposan öblítjük normál sóoldattal. A fekélyes gyomor nyálkahártya területek tettük láthatóvá egy átlátszó lemez és egy boncoló mikroszkóp alatt. Az MDS értékelték [17] által osztályozás a gyomor sérülés a 0-4 skála alapján súlyossága vérbőséget és vérzéses elváltozások: 0 - majdnem normális nyálkahártya, 0.5 - vérbőség, 1 - egy vagy két léziók, 2 - súlyos sérülések 3 - nagyon súlyos sérülések, 4 - nyálkahártya teli elváltozások. (Léziók - vérzéses eróziót, vérbőség - érrendszeri torlódások). A kísérleteket két vizsgálók vak, hogy a csoport és állatok kezelésére. A metszeteket kódolva, hogy megszüntesse a megfigyelő torzítás. Az adatok elemzésével mutatjuk be, mint az átlag ± SEM felülvizsgálatát legalább három részből állatonként és öt állatot csoportonként. Katalógusa Tanulmányok a biokémiai paraméterek
MDS eredmények azt mutatták, maximális fekély gyógyulását három nap után gyógyszeres kezelés. A gyomor fekély a kezeletlen egerek is elérte csúcs a 3 rd nap után indometacin beadása. Ezért megvizsgáltuk az biokémiai paraméterek alapján az optimalizált kezelési rendszer [PK (20 mg /kg) és Omez (3 mg /kg)] egészen a 3 RD napján fekélyesedés csak. Ehhez a következő hét csoportba egyenként 5 egereket kiválasztott azoktól használt MDS assay és a megjelenített adatok származnak három ismétlésben:
Group I - normál kontroll egerek; Csoport II - elfekélyesednek egerek és leölt 10 óra (tekintendő egy nap); Csoport III - elfekélyesednek egerek és feláldozni a 3 rd nap; Csoport IV-V - elfekélyesednek egerek kezelt PK és Omez rendre 1 napig, és leöljük 4 órával a beadás után a vizsgálati minták; Csoport VI-VII - elfekélyesednek egerek kezelt PK és Omez illetve 3 napig, és feláldozta a 3 rd nap, 4 órával az utolsó adag vizsgálati minták. Katalógusa mennyiségi fehérje és lipid keletkezett károk fekély és gyógyító
gyomor mirigyes szöveteket gyűjtöttünk öt állatot minden szövetben, öblítjük megfelelő pufferben és használt biokémiai vizsgálatokban. A nedves súlyát a szöveteket rögzítettük, és a kísérleteket háromszoros ismétlésben. A mirigyes részeinek és a kontroll, fekélyes és a gyógyszerrel kezelt egerek hozott különböző időintervallumokban homogenizáljuk egy üveg-teflon homogenizáló cső egy 50 mM foszfát-puffer, pH = 7,4, és lecentrifugáltuk 1200 g-n, hogy megkapjuk a felülúszót. A fehérje mennyiségét karbonilok a szövet-homogenizátumot, meghatároztuk követően egy jelentett módszer [18]. DNPH (4 ml, 10 mmol) 2 M sósavoldatot adtunk hozzá, hogy a felülúszót (1,0 ml), amelyet 1 órán át inkubáltuk szakaszos rázással. Jéghideg 20% ​​-os vizes TCA-oldatot (5 ml) adunk hozzá, és az elegyet 15 percig inkubáljuk. A kicsapódott fehérjét 3-szor mostuk etanol és etil-acetát (1: 1), 1 ml oldatban, amely 6 M guanidin HCl, 20 mM kálium-foszfát (egybázisú) pH-ját 2,3-trifluor-ecetsav. Centrifugálás után a abszorbanciáját a felülúszót leolvastuk 362 nm-en (∈ = 2,2 × 10 4 M -1 cm -1).
Az elemzéshez lipidperoxidáció (szempontjából TBARS), 10% -os homogenizátumot minden a megfelelő minták állítunk elő a pufferben (320 mM szacharóz, 5 mM HEPES, 20 mM EDTA-t és 0,01% BHT). Ezeket vetettük alá differenciális centrifugálással (1200 × g, és 12000 g-n), hogy megkapjuk a mitokondriális pelletek, amelyek a pufferrel mossuk (150 mM KCI és 20 mM foszfát-puffer), és végül szuszpendáljuk 50 mM foszfát-puffer, pH = 7,4. A mitokondriális membrán frakció (1 ml) készült oldatát TCA-TBA-HCI-ot (2 ml, 15% -os TCA, 0,375% TBA, 0,25 n sósav), amely 0,01% BHT-t, melegítjük forrásban lévő vízfürdőn 15 percig, majd lehűtjük és centrifugáljuk . Az abszorbancia A felülúszó mértük 535 nm-en (∈ = 1,56 × 10 5 M -1 cm -1) [19].
Mérése nem fehérje tiol (NP-TSH )
követően jelentett módszer [20], a gyomor nyálkahártya NP-TSH mértük. Röviden, fundus gyomor homogenizátumokat a vezérlő, fekélyes, gyógyszerrel kezelt egereket készült 0,2 M Tris-HCl pufferben, pH = 8,2, amely 20 mM EDTA-t és centrifugáljuk. Egy aliquot részt a homogenizátum (1 ml) kicsapjuk jéghideg 20% ​​-os TCA-val (1 ml) és centrifugáltuk. A felülúszót (1 ml) adunk 2 ml 0,8 M Tris-HCl-pufferben, pH = 9, amely 20 mM EDTA-t és összekeverjük 0,1 ml, 10 mM DTNB. Az abszorpció a sárga kromogént 412 nm (∈ = 13,6 × 10 4 M -1 cm -1) volt olvasható. Katalógusa mucin assay katalógusa követően bejelentett módszer [21] , a szabad mucin a gyomor szövetekben becsültük. Röviden, a mirigyes részét a gyomor elválasztottuk a lumen a gyomor, lemérünk és azonnal 10 ml 0,1 tömeg /térfogat% Alcian kék (Ab) oldatot (0,16 M szacharóz-oldatban pufferolt 0,05 mM nátrium-acetát-oldattal, pH 5,8). Festés után 2 órán át, a felesleges festéket eltávolítjuk a szövetet két egymás utáni öblítést 10 ml 0,25 M szacharóz-oldatban. A festék komplexet képez a gyomor fal nyálka extraháljuk 10 ml 0,5 mólos vizes magnézium-klorid-szakaszos rázás (1 perc) 30 perces időközökben 2 órán át. A kék kivonat (2 ml) készült oldatát élénken összerázzuk azonos térfogatú dietil-éterrel. A kapott emulziót centrifugáljuk, 3600 rpm-en 10 percen keresztül, és az abszorbanciát a vizes fázist leolvastuk 580 nm-en. A mennyiség az Ab extraháljuk per g nedves mirigyszövet számítottuk standard görbe alkalmazásával állítjuk elő különböző koncentrációjú Ab.
COX-1 és COX-2-expresszió assay katalógusa 30 percen belül a betakarítás a fekélyes részei gyomor szövetek fixáltuk semleges pufferelt 10% formalin sóoldat és szekcionált. 24 óra eltelte után a rögzítés majd beágyazása egy paraffin blokk, azt szakaszokra vágjuk 5 mikronos ra egy üveg tárgylemezre, és a kifejezések a COX-1 és COX-2 mennyiségileg következő egy jelentett eljárás [22], kisebb módosításokkal. Miután deparaffinization xilolban, a metszeteket kezeljük egy fokozatos sorozat az alkohol és a későbbiekben rehidratált PBS-ben pH 7,5. A metszeteket egymás után kezeltük 3% -os hidrogén-peroxid-PBS-ben, és a fehérje-blokkolók (5% szarvasmarha szérum albumin, 5% normál kecske szérummal PBS-ben), és egy éjszakán át inkubáljuk 4 ° C hőmérsékleten a primer antitesttel (egér anti-COX-1 és COX 2, 1: 200). Inkubálás után 2 órán át szobahőmérsékleten peroxidázzal konjugált nyúl anti-egér szekunder antitesttel (1: 500), egy pozitív reakciót mutattunk való kitettség által stabil DAB 2-től 5 percig. A kontroll szakaszok, antitesteket kihagyjuk és csak PBS-t adunk hozzá. Miután counterstaining a csúszdákat Meyer hematoxilinnel intenzitását színes immunolocalized termékek alkalmazásával értékeltük Biovis MV500 szoftver. Öt területen minden részén voltak szkennelve és integrált optikai sűrűség (IOD) az egyes területeken számoltuk. A IOD a negatív kontroll kivontuk az IOD minden egyes kísérleti részben minden egyes állat az összes csoportban.
Prostaglandin assay
követően betakarítás a gyomor, a corpus (teljes vastagság) kimetszettük, lemértük (100 mg ), és szuszpendáljuk 10 mM nátrium-foszfát-puffer, pH 7,4 (1 ml). A szövetet darált finoman ollóval és inkubáljuk 37 ° C-on 20 percig. Centrifugálás után (

• Védő hatása (1- (4-hidroxi-fenil) -3-m-tolil-propenonnal kalkon in indometacinnal indukált gyomor eróziós károkat patkányokon
• Az emberi gyomor Helicobacter pylori kórokozó potenciállal rendelkezik aceton karboxiláz, amely fokozza a képességét, hogy gyarmatosítani egerek