Healing potentiaali Picrorhiza kurroa (Scrofulariaceae) juurakot vastaan ​​indometasiinia aiheuttamaa mahahaavan: mekanistinen etsintä.

Healing potentiaali Picrorhiza kurroa
(Scrofulariaceae) juurakot vastaan ​​indometasiinia aiheuttamaa mahahaavan: mekanistinen etsintä.
Tiivistelmä
tausta
Tämä tutkimus tehtiin arvioimaan mahdollisuuksia juurakoita Intian lääkkeiden kasvi, Picrorhiza kurroa
paranemista indometasiinin aiheuttamaa akuuttia mahalaukun haavaumia hiirillä ja tutkia sen kykyä moduloida oksidatiivista stressiä ja prostaglandiini (PGE 2) ja EGF prosessin aikana. Tool menetelmät
Mies sveitsiläinen albiino hiirillä, haavaumia kanssa indometasiinin (18 mg /kg, po, kerta-annos) hoidettiin korkeintaan 7 vuorokautta eri annoksilla metanoliuutetta P. kurroa
juurakot (nimetty PK). Parantavaa kapasiteetti tehokkain annos PK (20 mg /kg, s. O. X 3 d) verrattiin omepratsolin (Omez) (3 mg /kg, s. O. X 3 d). Vaikutukset huumeiden hoito yhden ja kolmen päivää biokemialliset parametrit arvioitiin vertaamalla tuloksia, jotka käsittelemättömän hiiristä 1 s ja 3 rd päivänä haavaumia. Vatsa kudoksissa hiiriä käytettiin biokemiallisia analyysi.
Tulokset
makroskopiassa indeksit paljastui mahdollisimman haavauman 3 rd päivänä indometasiinia annon, joka on tosiasiallisesti paransi PK. Alle optimoitu hoito-ohjelma, PK ja Omez vähensi haava indeksit 45,1% (P
< 0,01), ja 76,3% vastaavasti (P ​​
< 0,001), verrattuna käsittelemättömiin haavauma hiirillä.
verrattuna haavauma käsittelemättömän hiirillä, joita hoidettiin PK 3 päivää osoitti vähentynyt tasot tiobarbi- reagoivat aineet (TBARS) (32,7%, P
< 0,05) ja proteiini karbonyyli (37,7%, P
<0,001), ja lisääntynyt musiinin (42,2%, P
< 0,01), limakalvon PGE 2 (21,4%, P
< 0,05), ja ilmauksia COX-1 ja 2 (26,9% ja 18,5%, P
< 0,05), EGF (149,0%, P
< 0,001) ja VEGF (56,9%, P
< 0,01). Omez pienensi TBARS (29,4%, P
< 0,05), ja proteiini karbonyyli (38,9%, P
< 0,001), ja lisääntynyt musiinin (38,3%, P
< 0,01), ilman muuttamalla muut parametrit merkittävästi.
Päätelmä
PK (20 mg /kg, po x 3 päivää) voi tehokkaasti parantaa indometasiinin aiheuttamaa mahan haavaumat hiirillä vähentämällä oksidatiivisen stressin, ja edistää musiinieritystä, prostaglandiinisynteesiä ja lisäten ilmaisuja syklo entsyymien ja kasvutekijöitä.
Tausta
Gastrointestinaalinen toksisuus liittyvät steroideihin kuulumattomien tulehduskipulääkkeiden (NSAID) on tärkeä lääketieteellinen ongelma vaikka viime aikoina farmaseuttinen edistysaskeleet [1]. Lisäksi asiakkuutta mahahaava, NSAID myös näyttävät estävän haavojen paranemiseen [2, 3]. Niinpä estäminen ruuansulatushäiriö edelleen huolta sekä kliinisen lääkärin ja tutkijat. Huolimatta niiden tehokkuudesta hallinnassa NSAID aiheuttama mahahaava, tällä hetkellä saatavilla synteettinen vatsahaavalääkkeet antavat sivuvaikutuksia, ja ne ovat myös kalliita etenkin maaseutuväestön. Tätä varten olemme raportoitu lupaavia anti-ulcerogenic aktiivisuutta useiden kasvituotteiden [4-6].
Picrorhiza kurroa
(perhe: Scrofulariaceae, yleisnimi: Picrorhiza, katuka, kutki) on pieni monivuotinen yrtti kasvaa mäkinen osissa Pohjois-Länsi Himalajan alueella Intiassa ja Nepalissa. Lehtien, kuori ja maanalaisten kasvien osia, lähinnä juurakot käytetään laajalti perinteisessä Intian (Ayurvedic) järjestelmät lääketieteen muinaisista ajoista lähtien. Vaikka se näyttää antioksidantti, tulehdusta, ja immunomodulaarisia toimintaa, se on kaikkein arvostettu sen hepatoprotective vaikutus. Katkera juurakot Picrorhiza
on käytetty tuhansia vuosia Intiassa kohdella ihmisiä ruoansulatushäiriöt [7], ja ummetus johtuvat riittämättömästä ruoansulatus eritystä [8]. Picrorhiza
pidetään trophorestorative yrtti, maksan, sekä voimakas immuuni nautintoaine [9]. Sen osatekijä, picroliv on myös raportoitu olevan choleretic vaikutus [10], ja estää maksavaurio etanolin aiheuttamaa [11], kemikaalien [12] ja mikro-organismi [13].
Ensisijainen tavoite Tämän tutkimuksen tarkoituksena oli tutkia paranemista omaisuutta metanoliuutteessa P. kurroa
juurakko (nimetty PK) vastaan ​​indometasiinia aiheuttama akuutti mahahaava hiirien nähden suhteessa
että kaupallisen lääkkeen, omepratsoli (Omez). Indomethacin, edustaja tulehduskipulääkkeet (NSAID) perhe, aiheuttaa mahahaavan läpi erilaisia ​​prosesseja, kuten sukupolven ROS, estämällä prostaglandiinisynteesiä infiltraatio polymorfonukleaaristen leukosyyttien, apoptoosi ja aloittaminen lipidiperoksidaation [14, 15]. Täten haava parantavaa kapasiteettia huumeiden, arvioi histopatologisesti, korreloi niiden vaikutukset vähentämisessä indometasiinin aiheuttamaa oksidatiivista stressiä. Antioksidantti testinäytteiden määritettiin mitattuna niiden kyky suojata oksidatiivisen vahingot lipidejä, proteiineja ja tioli riippuva antioksidanttipuolustuksen mahan kudoksissa. Lisäksi NSAID-indusoidun gastropathy myös johtuvan vähentyneen synteesi prostaglandiinien [16]. Niinpä rooli testinäytteiden lisäämisessä liman eritystä, ja ilmentyminen epidermaalinen kasvutekijä (EGF), sekä nostamalla PGE 2 synteesi tutkittiin myös. Tool Menetelmät
Kasviaines
juurakosta P. kurroa
(nimetty PK), hankitaan paikallisilta markkinoilta käytettiin nykyinen työ. Tehdas taksonomi- tunnistettiin (tulonumero. 324139), jonka kasvit Survey of India, Indian kasvitieteellinen puutarha, Kokata, Intia.
Kemikaalit
2-tiobarbi- (TBA), etanoli, butanoli ja etyyliasetaattia hankitusta E. Merck (Mumbai, Intia), kun taas (TCA) oli Thomas Baker (Mumbai, Intia). Alcian sininen, indometasiini, naudan seerumin albumiinia (BSA), haematoxylene, aluna, eosiini, butyloitua hydroksitolueenia (BHT), guanidiinihydrokloridia, trifluorietikkahappoa (TFA), omepratsoli (Omez), 3,3 '-diaminobenzidine (DAB), kanin anti- -hiiri EGF ja Trizma- pohja hankittiin Sigma Chemicals (St. Louis, MO, USA). Muut käytetyt reagenssit olivat 35% vetyperoksidia (Lancaster, Morecambe, Iso-Britannia), 2,4-dinitrofenyyli hydratsiinia (DNPH), dinatriumvetyfosfaattia ja natriumdivetyfosfaatti (BDH, allas Dorset, UK), sakkaroosi ja 5,5'-ditiobis -2-nitrobenzioc (DTNB) (SRL, Mumbai, Intia), hevosen ja vuohen seerumia (Banaglore Genie, Banaglore, Intia), PGE 2 aineenvaihduntatuotteen kit (Cayman Chemical, Michigan, USA) ja peroksidaasiin konjugoitua vuohen anti kani-IgG (EMD Biosciences, Sandiego, USA).
Instrumentointi
absorbanssi spektrofotometrillä suoritettiin 25 ° C: ssa käyttäen Jasco V-550 UV-Vis-spektrofotometrillä. Aallonpituus skannaa ja absorbanssi mittaukset tehtiin 1 ml kvartsi solujen valotie 1 cm.
Valmistaminen kasviuutteita
ilmakuivattua juurakot P. kurroa
(250 g) hienonnettu ohuiksi paloiksi, liotetaan metanolissa (1 l) kaksi päivää ja supernatantti dekantoitiin. Jälkeen toistetaan koko prosessin kolme kertaa, yhdistetyt uutteet suodatettiin nylonverkon, ja haihdutettiin vakuumissa ja lopuksi lyofilisoidaan. Raakauute, joka on nimetty PK koko käsikirjoitus, säilytettiin vakuumieksikkaattorissa.
Valmistus lääkkeiden
lääkkeet valmistettiin PK ja Omez vesipitoisina suspensioina 2% arabikumia, kuten ajoneuvon, ja antaa hiirille suullisesti.
Farmakologiset kokeet
Eläimet ja kokeellista protokollaa haavauman
mies Sveitsin albiino hiiriä kasvatettiin Dr. BC Roy Post Graduate Institute of Basic Medical Sciences, Kolkata, Intia ja BARC Laboratory Animal House Facility , Mumbai, Intia. Nämä hankittiin saatuaan raivauksen (Post Graduate Institute of Basic Medical Sciences, Kolkata eläinten eettisen komitean 507 /CPCSEA, Sanction nro IAEC /SB-2/2004 /UCM-16, päivätty 15.6.04 ja BARC Eläinten eettisen komitean (BAEC) , koe laitokseen. seuraamuksia no. BAEC /03/05, päivätty 07.11.05) vastaavista eläinten eettisten komiteoiden kahden keskuksen ja käsiteltiin seuraavan kansainvälisen eläinten eettisen komitean suuntaviivat. 6-8 viikon ikäisiä hiiriä (25-30 g) kasvatettu tasapainoiseen laboratoriossa ruokavalio kohti NIN, Hyderabad, Intia ja annetaan vesijohtovettä mielin määrin. Ne pidettiin 20 ± 2 ° C, 65-70% kosteus, ja päivä /yö sykli (12 h /12 h). Alussa kunkin kokeen, kaikki eläimet tunnistettiin tyypilliset lovet korvaan ja raajojen ja sitten satunnaistettu. Tämä tehtiin suorittaa kaikki kokeet on sokkona. Haavaumat hiirillä indusoitiin antamalla indometasiinia (18 mg /kg, s. O.) Liuotetaan tislattuun veteen ja suspendoidaan vehikkeliin, akaasiakumi (2%) yhtenä annoksena. Tutkimustemme 5, 10, 15, 18, 20, 25 ja 30 mg /kg, s. o. indometasiinia paljasti, että pieninä annoksina (5 ja 10 mg /kg), joka on pieni haavauma 6 h kuluttua sen annon, kun taas suuremmat annokset (25 ja 30 mg /kg) johti kuolleisuutta. Valittu annos (18 mg /kg) tuotti optimaaliset haavauma, tulehdusta ja limakalvojen loukkaus, aiheuttamatta kuolleisuutta hiirillä. Eläimiä pidettiin ravinnotta mutta saivat vapaasti vesijohtovettä 24 tuntia ennen haava induktiota.
Standardointi lääkeannoksen
Jotta standardointi lääkeannoksia, PK (5, 10, 20, ja 40 mg /kg) annettiin kerta-annoksena päivässä enintään seitsemän päivää. Ensimmäinen annos PK ja Omez annettiin 6 h jälkeen indometasiinin annon. Myöhemmässä kuuden päivän testinäytteet annettiin klo 9 jokaisena päivänä. Viisi hiirtä otettiin kussakin ryhmässä, ja kunkin koe toistettiin kolme kertaa. Hiiret uhrattiin 1 st, 3 rd, 5 th ja 7 th päivää, 4 h kuluttua viimeinen annos PK. Laajuus haavojen paranemiseen arvioitiin makroskooppisista vahinko tulokset (MDS) käsittelemättömän ja käsitellyn haavaumia hiirten vastaaviin päivinä. Optimoitu hoito-(lääkkeitä annoksen ja hoitojakson) arvioitiin alkaen MDS ryhmien hiirten vastaanottamisesta edellä hoitoa.
Arviointi haavaumat ja paranemista MDS
Hiiret tapettiin yliannostuksen jälkeen tiopentaalilla. Vatsan normaalista ja käsiteltyjen ryhmien poistettiin nopeasti, avattiin suurempaa kaarta pitkin, ja huuhdeltiin perusteellisesti normaalia suolaliuosta. Haavaumia mahan limakalvon alueilla tehtiin näkyviksi käyttäen läpäisevän arkin ja preparointimikroskooppia. MDS arvioitiin [17] porrastamalla mahalaukun vahinko on 0-4 mittakaavassa, perustuu vakavuudesta hyperemia ja aivoverenvuotoon vauriot: 0 - lähes normaali limakalvo, 0,5 - hyperemian, 1 - yksi tai kaksi leesiot, 2 - vakavat vauriot , 3 - erittäin vakavia vaurioita, 4 - limakalvo täynnä vaurioita. (Vauriot - aivoverenvuotoon eroosiot, hyperemian - verisuonten ruuhkat). Kokeet suoritettiin kaksi tutkijaa sokaissut ryhmään ja eläinten kohtelu. Leikkeitä koodattu poistamiseksi tarkkailijan puolueellisuudesta. Tiedot analyysit esitetään keskiarvona ± SEM tarkistamista vähintään kolme leikettä eläintä kohti ja viisi eläintä ryhmää kohti.
Tutkimukset biokemialliset parametrit
MDS tulokset osoittivat enintään haavojen paranemiseen kolmen päivän jälkeen lääkehoitoa. Vatsa haavauma käsittelemättömän hiirillä pääsivät piikki 3 rd päivänä indometasiinia annon. Siksi arvioimme biokemialliset parametrit alla optimoitu hoito-ohjelma [PK (20 mg /kg) ja Omez (3 mg /kg)] asti 3 rd päivänä haavaumia vain. Tätä seuraavat seitsemän ryhmää, joista kukin sisältää 5 hiiret valittu niistä käytetään MDS määrityksen ja esitetyt tiedot ovat peräisin kolme toistoa:
ryhmä I - normaali valvonta hiirillä; Ryhmä II - haavaumia hiiret, ja tapettiin 10 h (pidettävä yksi päivä); Ryhmä III - haavaumia hiiret, ja uhrata 3 rd päivä; Ryhmä IV-V - haavaumia hiiriä, käsiteltiin PK ja Omez vastaavasti 1 päivä, ja uhrattiin 4 tuntia annon jälkeen testinäytteiden; Ryhmä VI-VII - haavaumia hiiriä, käsiteltiin PK ja Omez vastaavasti 3 päivää, ja uhrata 3 rd päivä, 4 h viimeisen annoksen jälkeen testinäytteiden.
Kvantifiointi proteiinin ja lipidin vahingot aikana haavaumat ja paranemista
rauhas mahassa kudokset yhdistettiin viidestä eläimistä kunkin kudoksen, huuhdellaan sopivaa puskuria ja biokemiallisissa tutkimuksessa käyttämättömien. Märkä painot kudosten kirjattiin ja kokeet suoritettiin kolmena rinnakkaisena. Rauhaskudoksen annoksia ohjaus, haavauma ja huumeiden-käsitellyistä hiiristä otettu eri aikavälein homogenoitiin lasi-teflon homogenisointi putki 50 mM fosfaattipuskuria, pH 7,4, ja sentrifugoitiin 1200 x g, jolloin saatiin supernatantti. Proteiinin määrä karbonyyleihin kudoshomogenaattia, määritettiin sen jälkeen, kun raportoitua menetelmää [18]. DNPH (4 ml, 10 mmol) 2 M HCI: a lisättiin supernatanttiin (1,0 ml), jota inkuboitiin 1 h ajoittain ravistellen. Jääkylmää 20%: ista TCA-liuosta (5 ml) lisättiin, ja seosta inkuboitiin 15 min. Saostunut proteiini pestiin 3 kertaa etanoli-etyyliasetaatti (1: 1), liuotettiin 1 ml: aan liuosta, joka sisälsi 6 M guanidiini-HCl: lla 20 mM kaliumfosfaattia (yksiemäksistä) säädettiin pH-arvoon 2,3 trifluorietikkahapolla. Sentrifugoinnin jälkeen supernatantin absorbanssi luettiin 362 nm (∈ = 2,2 × 10 4 M -1 cm -1).
Analysoimiseksi lipidiperoksidaation (mitattuna TBARS), 10% homogenaattia kunkin vastaavan näytteen valmistettiin puskuriin (320 mM sakkaroosi, 5 mM HEPES, 20 mM EDTA: a ja 0,01% BHT: tä). Nämä poikkeavalla tavalla sentrifugoimalla (1200 x g ja 12000 x g), jolloin saatiin mitokondrion pellettejä, jotka pestiin puskuri (150 mM KCI ja 20 mM fosfaattipuskuri) ja suspendoitiin lopuksi 50 mM fosfaattipuskuria, pH 7,4. Mitokondrion kalvon osa (1 ml), käsiteltiin TCA-TBA-HCI: a (2 ml, 15% TCA, 0,375% TBA, 0,25 N HCI), joka sisälsi 0,01% BHT: tä, kuumennettiin kiehuvassa vesihauteessa 15 minuutin ajan, jäähdytettiin ja sentrifugoitiin . Absorbanssi supernatanttia mitattiin 535 nm (∈ = 1,56 x 10 5 M -1 cm -1) [19].
Mittaaminen ei-proteiinin tiolia (NP-TSH ) B jälkeen raportoitu menetelmä [20], mahan limakalvon NP-TSH mitattiin. Lyhyesti, fundic vatsa homogenaateissa ohjaus, haavauma, lääkeaineella hoidettuja hiiriä tehtiin 0,2 M Tris-HCl-puskuria, pH 8,2, joka sisälsi 20 mM EDTA: ta ja sentrifugoitiin. Alikvootti homogenaattia (1 ml), saostettiin jääkylmällä 20% TCA: ta (1 ml) ja sentrifugoitiin. Supernatantti (1 ml) lisättiin 2 ml: aan 0,8 M Tris-HCl-puskuria, pH 9, joka sisälsi 20 mM EDTA: ta ja sekoitetaan 0,1 ml: lla 10 mM DTNB: tä. Absorbanssi keltaisen kromogeeniä 412 nm: ssä (∈ = 13,6 x 10 4 M -1 cm -1) luettiin.
Mucin määritys
jälkeen raportoidun menetelmän [21] vapaa musiini mahan kudoksissa arvioitiin. Lyhyesti, rauhasten osa vatsan erotettiin mahalaukun, punnittiin ja siirrettiin välittömästi 10 ml: aan 0,1% w /v Alcian-sini (AB) liuosta (0,16 M sakkaroosia, joka on puskuroitu 0,05 mM natriumasetaatilla liuosta, pH säädetty arvoon 5,8). Värjäyksen jälkeen 2 h, ylimääräinen väri poistettiin kudoksesta kaksi peräkkäistä huuhtelua 10 ml: lla 0,25 M sakkaroosiliuosta. Väriaine kompleksoituna mahalaukun seinämän limaa uutettiin 10 ml: lla 0,5 M magnesiumkloridia ajoittainen ravistamalla (1 min), 30 minuutin välein 2 tunnin ajan. Sininen uute (2 ml), ravisteltiin voimakkaasti yhtä suuren tilavuuden kanssa dietyylieetteriä. Saatu emulsio sentrifugoitiin 3600 rpm: llä 10 minuutin ajan, ja absorbanssi vesikerroksen luettiin 580 nm: ssä. Määrä Ab uutetaan per g märkää rauhaskudoksen laskettiin standardikäyrästä valmistettiin käyttämällä eri pitoisuuksia Ab.
COX-1 ja COX-2: n ilmentymisen määritystä
30 minuutin sisällä sadonkorjuun haavauma osat vatsa kudokset kiinnitettiin neutraalissa puskuroidussa 10% formol suolaliuosta ja leikattuna. 24 tunnin kiinnitysaika seurasi upottamalla on parafiiniblokkiin, se leikattiin osiin 5 mikronin päälle lasilevylle ja ilmauksia COX-1 ja COX-2: n määrät jälkeen raportoitu menettelyä [22], jossa on pienin muutoksin. Jälkeen deparaffinization ksyleenissä, leikkeet käsiteltiin luokiteltujen sarjojen alkoholia ja sen jälkeen niihin lisätään PBS pH: ssa 7,5. Leikkeet käsiteltiin peräkkäin 3% vetyperoksidilla PBS: ssä, ja proteiini-salpaajat (5% naudan seerumin albumiinia, 5% normaalia vuohen seerumilla PBS: ssä), ja inkuboitiin yön yli 4 ° C: ssa primaarisen vasta-aineen (hiiren anti-COX-1 ja COX 2, 1: 200). Kun oli inkuboitu 2 h huoneenlämpötilassa peroksidaasiin konjugoitu kaniinin anti-hiiri-vasta-ainetta (1: 500), joka on positiivisen reaktion havaittiin altistuksen stabiili DAB varten 2-5 min. Vuonna Ohjausosuudet, aineet jätettiin pois, ja vain PBS lisättiin. Jälkeen counterstaining levyt Meyer hematoksyliinillä, intensiteetit värillinen immunolocalized tuotteet arvioitiin käyttäen Biovis MV500 ohjelmistoa. Viisi alueita kunkin osan skannattiin ja integroitu optinen tiheys (IOD) kullakin alueella laskettiin. IOD negatiivisen kontrollin vähennettiin IOD jokaisen kokeellisen jakson jokaiselle eläimelle kaikissa ryhmissä.
Prostaglandiini määritys
jälkeen korjuu vatsaan, corpus (täysi paksuus) leikattiin, punnittiin (100 mg ) ja suspendoitiin 10 mM natriumfosfaattipuskuria, pH 7,4 (1 ml). Kudos hienonnettiin hienoksi saksilla ja inkuboitiin 37 ° C: ssa 20 min. Sentrifugoinnin jälkeen (9000 x g), prostaglandiini E 2 (PGE 2) tasot supernatantissa mitattiin ELISA: lla [23], ja pitoisuudet ilmaistaan ​​pg /mg proteiinia.
EGF ilmaisu määritys
immunovärjäys EGF suoritettiin [22] Noudattamalla samanlaista menetelmää, jota käytetään COX-1 ja COX-2, vähäisin muutoksin. Tässä tapauksessa, sen jälkeen estää endogeenisen peroksidaasin ja käsittely proteiinin salpaajat, kudoksen leikkeitä inkuboitiin yön yli 4 ° C: ssa primaarisen vasta-aineen on sopivaa laimennosta. Vuonna Ohjausosuudet ainoastaan ​​PBS lisättiin jättämällä vasta-aineita. Kun oli inkuboitu 1 tunnin ajan huoneenlämpötilassa peroksidaasiin konjugoitua vuohen anti-kani-IgG, positiivinen reaktio havaittiin altistuksen DAB varten 2-5 min. Jälkeen counterstaining levyt Meyer hematoksyliinillä, intensiteetit värillinen immunolocalized tuotteet kvantitoitiin käyttäen Biovis MV500 ohjelmistoa. Viisi alueita kunkin osan skannattiin ja integroitu optinen tiheys (IOD) kullakin alueella laskettiin. IOD negatiivisen kontrollin vähennettiin IOD jokaisen kokeellisen jakson jokaiselle eläimelle kaikissa ryhmissä.
Määritys seerumin VEGF
Seerumi VEGF mitattiin käyttäen verinäytteitä peräisin laskevassa aortassa, kaupallisesti käytettävissä ELISA seuraavat valmistajan ohjeiden.
mahalaukun eritys- määritys (pylorous ligation malli)
tutkimiseksi vaikutuksia koe huumeita mahahapon eritystä, mahanportin ligaatio mahalaukun standardoitu laboratoriossamme suoritettiin. Yksi ryhmä hiiriä (kokeellinen valvonta) saivat 2% arabikumia tislatussa vedessä (0,2 ml per hiiri, po), kun taas eri hoitoryhmään annettiin PK (20 mg /kg x 3 d), Omez (3 mg /kg x 3 d), indometasiini (18 mg /kg x 1 d) sellaisenaan tai yhdessä PK (20 mg /kg x 3 d), Omez (3 mg /kg x 3 d), vastaavasti. On 3 rd päivä, vatsan eläinten avattiin kevyessä eetteri anestesian pyloric ligation (PL). Sulkemisen jälkeen vatsan, eläimet pantiin häkkeihin kevyessä maltillisuutta ja annettiin toipua nukutuksesta. 6 tunnin kuluttua eläimet tapettiin, vatsan, avattiin ja sidelanka on sijoitettu noin ruokatorveen. Vatsa poistettiin ja sisältö tyhjennettiin asteikolla varustettuun sentrifugiputkeen tehtyään pieni lovi suurempaa kaarta pitkin lähellä mahanportin ligaatio. Mahan sisältö otettiin talteen, mitattiin, sentrifugoitiin, ja alistettiin biokemiallinen analyysi.
Tilastollinen analyysi
Tiedot esitetään keskiarvona ± SEM. Parametritietoja joka sisältää kaikki biokemialliset parametrit analysoitiin käyttämällä pariksi "t" testiä varten tulospareille tai yksisuuntaisella varianssianalyysillä (ANOVA), jota seurasi Dunnet monivertailuja lähettää testi. Nonparametric data (makroskooppiset pisteytys) analysoitiin käyttäen Kruskal-Wallisin testiä (nonparametric ANOVA), jota seurasi Dunn monivertai- lähettää testi. Todennäköisyys arvo P
< 0,05 pidettiin merkittävänä. IC 50-arvo PK arvioitiin käyttäen probittianalyysi ja merkitsevyystaso analyysien tutkittiin chi-neliö testi.
Tulokset
Extraction ja phytochemical analyysi
Poistaminen tuotti metanoliuute, PK 12,57% paino /paino tuotto. TLC-analyysi PK paljasti sen olevan monimutkainen seos, jossa on suuri määrä orgaanisia yhdisteitä, useimmat näistä on läsnä glykosidit joka ilmenee Molisch testi. Läsnäolo apocynin, andorsin, picrosides I ja II, ja katukoside yhdessä muiden tunnistamattomien yhdisteiden PK vahvistettiin vertaamalla sen TLC profiilin kanssa autenttisen näytteen.
Standardointi annoksen PK mahahaavan paranemista hiirillä
annos PK tehokas haavan paranemisessa optimoitu suorittamalla käsittely PK (5, 10, 20 ja 40 mg /kg) seitsemän vuorokautta ja vertaamalla MDS arvoja käsiteltyjen ja käsittelemättömien hiirten vastaaviin päivinä . Ajankulku laajuudesta mahalaukun haavaumia (kuten ilmestyy MDS-arvot) ja sen ehkäisy eri annoksia PK on esitetty kuvassa. 1. Hiiret vastaanottaa ajoneuvon vain ei näkynyt limakalvoleesioita. Hiirten käsittely indometasiinin (18 mg /kg) tuotettua tyypillinen aika-riippuvainen akuutti vaurioita mahan limakalvon. Haavaumat saavutti maksimi on 3 rd päivänä haavaumia jolloin MDS arvo kasvoi 162,1% verrattuna yksi päivä (P
< 0,001). Tämän jälkeen oli asteittainen elpyminen johtuu luonnon parantavaa, sekä 7 päivänä sen jälkeen, haavauma, MDS arvo väheni 49,2% verrattuna yksi päivä (P
< 0,01). Kuva 1 ajankulku mahan haavaumat ja sen ehkäisy eri annoksia PK. Vatsa haavaumat hiirillä indusoitiin antamalla suun kautta indometasiinia (18 mg /kg kehon painoa). Eri annoksilla PK käytettiin kokeissa. Haava indeksit mitattiin eri päivinä 4 tuntia viimeisen annoksen jälkeen PK ja arvot ovat keskiarvo ± SEM (N = 15). aP
< 0,01 BP
< 0,001 verrattuna ensimmäinen päivä haavaumia käsittelemättömiä hiiriä; cP
< 0,01, dP
< 0,001 verrattuna ryhmään III hiiret.
PK kaikilla valitun annoksilla osoitti maksimi haavojen paranemiseen on 3 rd päivänä haavaumia, ja vaikutus oli suhteessa annokseen. Verrattuna vastaaviin ulcerated valvontaa, MDS vähennykset (45,1% -52,9%, P
< 0,01) PK (20 ja 40 mg /kg) olivat samanlaiset, ja huomattavasti parempi kuin sen pienemmän annoksen (10 mg /kg). Vaikutus PK (5 mg /kg) oli merkityksetön. Samanlaisissa olosuhteissa hoito Omez (3 mg /kg) 3 päivän vähensi MDS arvo 76,3% (P
< 0,001) verrattuna ryhmään III hiirillä. Parantava havaittu laajentamisesta hoitoa jopa seitsemän päivää PK oli parempi kuin mitä havaittiin kolmen päivän hoito-ohjelman. Kuitenkin suuri osa tästä johtui autohealing, vähemmän osuus PK.
Kaiken hoidon PK (20 mg /kg) ja Omez (3 mg /kg) 3 päivän kuluttua haavauma induktion tarjotaan optimaalinen haavan paranemiseen . Näiden, kaikki myöhemmät kokeet suoritettiin samalla hoito-ohjelma. Valittu annos Omez, joka on myös suositeltu terapeuttinen annos ihmiselle optimoitiin meille [6].
Varten käsittelemättömät hiiret, huippu haavaumia (maksimi MDS) havaittiin kolmantena päivänä indometasiinin annon. Näin ollen tämä ajankohta valittiin selvittää IC 50 arvo PK. Ottaen huomioon MDS arvot 3 rd päivä haavaumia käsittelemättömien hiirten 100%, IC 50-arvo PK havaittiin olevan 23,30 ± 3,50 mg /kg.
Laadullinen arviointi
makroskopiassa tutkimukset paljasti, että indometasiini hallinto johti merkittävään vahinkoa rauhas osa hiirten mahalaukun limakalvon. Sisällä 6 h seuraavat indometasiinia annon, pinnallinen eroosio ja lievä tulehdus mahassa havaittiin osoittaa akuutti haavaumia. Päivänä haava induktion menetys foveolar rakenteen ohella arvoituksellisesti arkkitehtuuri oli piirre useimmissa käsittelemättömän hiirillä. Myös lievä tulehduskeräytymää sisältävä neutrofiilien havaittiin lamina propria. Hoito sekä PK ja Omez jopa yhden päivän rajoitti vahinkoja hajanaisia ​​alueita denuded rakenteellisia epiteelin.
Indomethacin aiheuttama gastropathy tuli paljon lausutaan kolmantena päivänä, joissa on näkyvissä meistetään useita alueita haavauman kanssa tulehdussuodoksen sisältävien neutrofiilien ja makrofagien limakalvon, sub-limakalvoa ja lihasten takki kanssa aivoverenvuotoon herakalvojen. Suuri määrä epänormaaleja soluja, joilla on muuttuneita tuma sytoplasmaan suhde havaittiin. Hoito PK ja Omez 3 päivää vähentänyt määrää tulehdussolujen sekä lisääntynyt määrä terveitä normaaleja soluja mahalaukun limakalvon, sekä submukoosan, herakalvon ja lihasten kerrokset pienellä limakalvon ruuhkia.
Vaikutus PK ja Omez on lipidiperoksidaatiota ja proteiinien hapettumista vatsassa kudosten
vaikutukset indometasiinia saannin yksin ja annon jälkeen PK ja Omez laajuudesta lipidiperoksidaation (mitattuna TBARS), proteiini hapetus (mitattuna proteiinin karbonyylipitoisuus ), tioli riippuvainen puolustusjärjestelmä (NP-TSH), ja musiinin sisältö mahan kudoksissa hiiret on esitetty taulukossa 1 ja taulukossa 2.Table 1 vaikutus PK ja Omez tasoista TBARS, proteiinin karbonyylejä, ei- proteiini tioli, ja musiinia että haavauma mahalaukun kudoksen micea päivänä yksi haavauman
Parametrit
ryhmän I hiiret normaali ohjaus

ryhmä II 1. päivä haavaumia ohjaus
ryhmä III PK-käsitellyn
ryhmä IV Omez saaneista
TBARS (nanomoolia /mg proteiinia) B 0,85 ± 0,03
1,18 ± 0.05c
0,94 ± 0,06D
0,89 ± 0.07d
proteiinia karbonyylien (nanomoolia /mg proteiinia) B 1,08 ± 0,05
1,62 ± 0.09b
1,49 ± 0.12
1,53 ± 0,07
NP-TSH (nanomoolia /mg kudosta) B 1,99 ± 0,09
1,66 ± 0.08b
1,86 ± 0,08
1,81 ± 0,09
musiini (ug /g kudosta) B 335,03 ± 14,43
213,02 ± 0.59b
240,33 ± 20,49
253,33 ± 14.53d
aStomach haavaumat hiirillä indusoitiin antamalla suun kautta indometasiinia (18 mg /kg) . PK (20 mg /kg /päivä x 1 päivä) ja Omez (3 mg /kg /päivä x 1 päivä) käytettiin testinäytteitä. Kokeet suoritettiin 4 h antamisen jälkeen testinäytteiden. Arvot ovat keskiarvo ± SEM (n = 15). bP
< 0,05, cP
< 0,01 verrattuna normaaleihin hiiriin; dP
< 0,05 verrattuna ryhmään II hiirillä.
Taulukko 2 vaikutus PK ja Omez tasoista TBARS, proteiinin karbonyylejä, ei-proteiini-tiolia, ja musiinin on haavaumia mahan kudoksessa micea päivänä kolme haavaumia
Parametrit
Ryhmä I normaaliin säätelyyn
ryhmä III 3. päivä haavaumia ohjaus
Ryhmä V PK-käsitelty

ryhmä VI Omez saaneista
TBARS (nanomoolia /mg proteiinia) B 1,02 ± 0,06
1,53 ± 0.06c
1,03 ± 0,09D
1,08 ± 0.05d
Protein karbonyyleiksi (nanomoolia /mg proteiinia) B 1,18 ± 0,07
2,61 ± 0.17c
1,62 ± 0.10f
1,59 ± 0.09f
NP-TSH (nanomoolia /mg kudosta)
2,06 ± 0,09
1,73 ± 0,09
2,06 ± 0.14d
2,05 ± 0.1d
mukiinia (ug /g kudosta) B 343,30 ± 16,91
213,29 ± 17.91b
303,34 ± 17.4e
295,06 ± 15.62e
aStomach haavaumat hiirillä indusoitiin antamalla suun kautta indometasiinia (18 mg /kg). PK (20 mg /kg /vrk x 3 päivää) ja Omez (3 mg /kg /vrk x 3 päivää) käytettiin testinäytteitä. Kokeet suoritettiin päivänä kolme haavaumia, 4 h viimeisen annoksen jälkeen lääkkeen. Arvot ovat keskiarvo ± SEM (n = 15). bP
< 0,05, cP
0,001 verrattuna normaaleihin hiiriin, dP
< 0,05 EP
< 0,01, fP
< 0,001 verrattuna ryhmään III hiiret.
Indomethacin hallinto selvästi kannustanut -lipidiperoksidaation mahan kudoksissa, ylentävä TBARS pitoisuus 38,8% (P
< 0,01) ja 53% (P
< 0,001) vastaavasti on 1 s ja 3 rd päivänä haavaumia, verrattuna normaalin valvonnan hiiriin. Hoito PK ja Omez osoitti välittömästi, vähentää TBARS pitoisuus 20,3% ja 24,6% verrattuna ryhmään II hiiret (P
< 0,05). Hoito PK ja Omez kolme päivää vähensi sitä 32,7% ja 29,4% verrattuna ryhmään III hiiret (P
< 0,05).
Verrattuna normaaliarvoon, proteiinin karbonyyli sisältöä haavaumia hiirillä oli korkeampi (50%) ensimmäisenä päivänä (P
< 0,05), joka kasvoi 120,3% ruuhka haavauma (P
< 0,001). Mikään koelääkkeiden osoitti välitön vaikutus päivästä.

• Suojaavia vaikutuksia (1- (4-hydroksi-fenyyli) -3-m-tolyyli-propenonin kalkoni in indometasiinin aiheuttaman mahalaukun syövyttävän vahinkoa rats
• Ihmisen mahalaukun taudinaiheuttaja Helicobacter pylori on potentiaalia asetonia boksylaasia joka parantaa sen kyvystä kolonisoida mice